水稻品种DNA指纹检测及其应用
植物品种鉴定dna指纹方法总则
植物品种鉴定dna指纹方法总则【实用版3篇】篇1 目录一、植物品种鉴定 dna 指纹方法总则的概述二、植物品种鉴定 dna 指纹方法的具体步骤三、植物品种鉴定 dna 指纹方法的应用案例四、植物品种鉴定 dna 指纹方法的优点与局限性篇1正文一、植物品种鉴定 dna 指纹方法总则的概述植物品种鉴定 DNA 指纹方法是一种基于分子生物学技术的植物品种鉴定方法。
通过从植物中提取 DNA，并分析其特定基因序列的变异，可以获得植物的 DNA 指纹，从而实现对植物品种的准确鉴定。
这种方法具有高度的准确性和可靠性，已经成为植物品种鉴定的重要手段。
二、植物品种鉴定 dna 指纹方法的具体步骤植物品种鉴定 DNA 指纹方法的具体步骤可以分为以下几个步骤：1.提取植物 DNA：从植物的叶片、茎或者种子中提取 DNA。
2.扩增特定基因序列：通过 PCR 技术，扩增植物 DNA 中的特定基因序列，如 ITS、trnH-psbA 等。
3.获得 DNA 指纹：通过电泳技术，将扩增后的 DNA 片段进行分离，形成 DNA 指纹。
4.分析 DNA 指纹：通过比对 DNA 指纹的差异，进行植物品种的鉴定。
三、植物品种鉴定 dna 指纹方法的应用案例植物品种鉴定 DNA 指纹方法已经被广泛应用于各种植物品种的鉴定中，例如水稻、小麦、玉米等。
例如，我国科学家通过对水稻的 DNA 指纹进行分析，成功鉴定出了大量的水稻品种。
四、植物品种鉴定 dna 指纹方法的优点与局限性植物品种鉴定 DNA 指纹方法具有以下优点：1.高度准确：基于 DNA 序列的差异，可以实现对植物品种的准确鉴定。
2.可靠性高：DNA 指纹具有稳定性，可以在不同时间和地点进行鉴定。
3.效率高：通过 PCR 技术，可以快速扩增 DNA 片段，提高鉴定效率。
然而，植物品种鉴定 DNA 指纹方法也存在一些局限性：1.需要专业知识和设备：提取 DNA、扩增基因序列和分析 DNA 指纹需要专业的生物学知识和设备。
水稻基因组序列的生物信息学分析
水稻基因组序列的生物信息学分析水稻是全球最重要的粮食作物之一，为了更好地理解水稻的基因组和基因功能，水稻基因组序列的生物信息学分析在近年来成为了研究的热点。
同时，水稻的基因组序列数据也为水稻育种和改良提供了更广泛的基础。
水稻基因组序列数据源对于生物信息学分析而言，首先需要收集数据。
水稻基因组序列的数据可以来源于GenBank、Ensembl Plants、Gramene等数据库，这些数据库中收录的水稻基因组数据具有较高的准确性和可靠性。
基因组注释基因组注释是指将序列上的信息以可识别的形式进行描述和标注，其中包括基因定位、基因结构、启动子区域、编码序列和非编码序列等。
水稻基因组注释早已有较为完善的结果，并且此外，大量的转录组数据也为基因功能识别和分析提供了更多的信息。
目前，水稻是全球拥有最齐全和全面的基因组注释和基因功能信息的农作物之一。
基因家族分析基因家族是指具有相似序列和保守功能的基因集合。
水稻基因组中大量的基因家族的分析对于理解水稻基因功能及其演化，以及水稻与其他物种基因组之间的关系具有关键作用。
例如NBS-LRR家族被广泛研究并被归属于水稻抗病基因家族之一。
基因家族的分析可以为水稻品种改良提供指导，从而增加其抗病性和生产力。
微卫星和SNP分析微卫星和单核苷酸多态性（SNP）是常见的分子标记方式，它们被普遍用于物种分类、进化和基因定位。
其中，微卫星序列在水稻中比较常见，并作为生物的DNA指纹来应用。
同时，SNP可以对现代育种和种质资源管理提供帮助。
微卫星和SNP分析可以用于水稻种质资源的变异程度评估和亲缘关系分析。
差异表达基因分析差异表达基因（DEGs）是指在不同生物学状态下，在两个或多个组织或物种中表达量不同的基因。
对于水稻而言，如未受到逆境处理的基因表达模式与受到逆境处理后的差异表达模式将会不同。
由于DEGs分析有助于识别水稻中与逆境响应相关的基因，因此可作为提高水稻逆境抗力的重要依据。
植物品种鉴定dna指纹方法总则
植物品种鉴定dna指纹方法总则（原创版2篇）篇1 目录一、引言二、植物品种鉴定 DNA 指纹方法的背景和意义三、DNA 指纹方法的基本原理四、DNA 指纹方法的步骤五、DNA 指纹方法的优点和局限性六、结论篇1正文一、引言随着科技进步和生物技术的发展，植物品种鉴定方法也在不断更新。
其中，DNA 指纹方法作为一种高效、准确的鉴定手段，已经广泛应用于植物品种鉴定领域。
本文将对植物品种鉴定 DNA 指纹方法的总则进行详细介绍。
二、植物品种鉴定 DNA 指纹方法的背景和意义植物品种鉴定是指通过一定的方法来判断植物品种的真伪和亲缘关系。
在传统的植物品种鉴定中，主要依靠植物的形态特征和生长习性等表型特征。
然而，由于表型特征具有不稳定性和易受环境影响等特点，使得传统的鉴定方法存在较大的局限性。
20 世纪 80 年代，随着分子生物学技术的发展，DNA 指纹方法应运而生。
DNA 指纹方法通过分析植物 DNA 序列的变异，从而判断植物品种的亲缘关系和真实性。
相比于传统的表型鉴定方法，DNA 指纹方法具有更高的准确性和可靠性，为植物品种鉴定提供了新的技术支持。
三、DNA 指纹方法的基本原理DNA 指纹方法的基本原理是利用植物 DNA 序列的多态性和特异性，通过分析不同植物品种的 DNA 序列变异，从而判断植物品种之间的亲缘关系和真实性。
DNA 指纹方法通常选择具有高度多态性和稳定性的 DNA 片段进行分析，例如核糖体 DNA、质体 DNA 等。
四、DNA 指纹方法的步骤DNA 指纹方法主要包括以下几个步骤：1.提取植物样品的 DNA：通过常规方法从植物组织中提取 DNA，并进行纯化。
2.PCR 扩增特定 DNA 片段：根据预先设计的引物，对 DNA 样品进行 PCR 扩增，获得特定 DNA 片段。
3.酶切分析：将 PCR 产物进行酶切，获得具有特定序列变异的 DNA 片段。
4.电泳分析：将酶切产物进行电泳分析，根据条带图案判断植物品种的亲缘关系和真实性。
水稻品种48对dna指纹鉴定标准
水稻品种是指由一定的亲本配制而成的有一定遗传特点和明显区别的具有稳定遗传特性的品种。
水稻品种的鉴定对于种植业具有非常重要的意义，可以根据不同品种的特性选择适合当地种植的水稻品种，提高产量和质量。
DNA指纹鉴定是一种通过检测DNA序列的方法来鉴定生物的遗传信息的技术。
而对于水稻品种48，其DNA指纹鉴定标准是非常重要的，下面将从多个方面来介绍水稻品种48对DNA指纹鉴定标准的重要性和相关内容。
1. DNA指纹鉴定技术在水稻品种鉴定中的作用DNA指纹鉴定技术是根据DNA序列的差异来鉴定不同品种之间的遗传差异性的方法，是一种高度准确的技术。
在水稻品种鉴定中，DNA指纹鉴定可以准确、快速地鉴定不同水稻品种的遗传差异，对于水稻品种48的鉴定也是非常有帮助的。
通过水稻品种48对DNA指纹鉴定标准的建立和应用，可以更好地辨别出品种特征，促进水稻的良种繁育和品种改良。
2. 水稻品种48对DNA指纹鉴定标准的内容水稻品种48对DNA指纹鉴定标准包括了多个方面的内容，主要包括以下几个方面：(1) DNA提取和纯化：通过有效的DNA提取和纯化技术，可以获得高质量的DNA样本，保证后续的DNA指纹鉴定的准确性和可靠性。
(2) DNA引物选择：选择合适的DNA引物对水稻品种48进行PCR 扩增，保证PCR产物的特异性和可再现性，提高DNA指纹鉴定的准确性。
(3) PCR扩增条件：通过优化PCR扩增条件，包括反应体系、温度和时间等因素，保证PCR扩增反应的高效性和稳定性。
(4) 电泳条件和分析：在DNA指纹鉴定中，电泳条件的选择和分析方法的建立是非常关键的步骤，可以通过优化电泳条件和分析方法，准确、快速地分析水稻品种48的DNA指纹。
(5) 数据分析和结果解读：对DNA指纹鉴定得到的数据进行合理的分析和结果解读，可以得到准确的水稻品种48的DNA指纹图谱，对品种进行鉴定和区分。
3. 水稻品种48对DNA指纹鉴定标准的意义通过建立水稻品种48对DNA指纹鉴定标准，可以实现以下几个方面的意义：(1) 促进水稻良种繁育和品种改良：通过准确、快速地鉴定水稻品种48的遗传特性，可以为水稻的良种繁育和品种改良提供科学依据。
SSR分子标记在水稻品种鉴定和遗传育种中的应用
SSR分子标记在水稻品种鉴定和遗传育种中的应用作者：管敏来源：《硅谷》2014年第17期摘要我国最早的引入分子标记技术是在20世纪的80年代，经过近几十年的不断发展，分子标记法也取得了较快进步，不仅应用领域在不断拓展，应用成果也非常显著。
作为世界上最重要粮食作物之一的水稻，对于人类的生存与发展起到了十分关键性的作用，而如何更好的运用生物技术全面提高水稻亩产量，提升水稻品质已经成为了国际社会共同关注的焦点话题。
经过多年的技术研究和发展，遗传标记在识别生物群体的多态性的过程中逐渐充当着重要的角色，通过形态标记可以对生物的形态差异进行比较，分子标记直接检测出生物DNA分子结构上的变化，进而更好的将好的品种和遗传特性保留下来。
在这种情况下，对于SSR分子标记在水稻品种鉴定和遗传育种中的应用进行分析和研究具有重要的现实意义。
关键词 SSR分子标记；水稻；品种鉴定；遗传育种；应用中图分类号：S336 文献标识码：A 文章编号：1671-7597（2014）17-0071-02在水稻品种鉴定和遗传育种以及水稻的遗传作图中，SSR分子标记一直都充当着重要的角色。
以往的育种主要依赖的是植株的表现型进行品种的鉴定和选择的，这对于育种者的经验具有很高的要求，而且需要进行多次技术测定，不仅耗时而且费力，因此需要在此基础上去寻求更好更加准确的标记方式，以此来提高项目育种的质量和效率。
而自从SSR分子标记的出现和发展，对于水稻育种工作和品种的鉴定具有重要的促进作用。
和普通的标记方法相比，SSR 标记是不受到周围的环境条件以及相关的因素影响的，因此具有很好的发展前景。
本文也将从SSR标记的基本原理出发，对于SSR分子标记在水稻品种鉴定和遗传育种中的应用进行了分析和论述，希望给读者一定的启示。
1 SSR标记的基本原理分析无论是水稻还是其他的生物作物都是由特定的基因组组成的，但是由于每一个SSR序列的存在单元存在一定的差异性，因此基因的座位也存在多态性。
SSR荧光标记毛细管电泳检测法在水稻DNA指纹鉴定中的应用
Ｓ Ｒ 荧 光标 记 毛 细 管 电泳检 测 法在 水 稻 Ｄ Ａ 指 纹鉴 定 中 的应 用 Ｓ Ｎ
程 本 义 夏俊 辉 龚俊 义 杨 仕 华
（ 国 水 稻研 究 所 ，浙 江 杭 州 ３ ０ ０ ； 讯 联 系 人 ， ｉ ａｇ ｈｈ ａ ３ ８ １ ３ ｃｒ） 中 １ ０ ６ 通 Ｅ ｍａｌ ｎ ｓｉｕ６ ０ ＠ ６ ．ｏ ：ｙ ｎ
ｔ ｅｈ ｉｈｆｕ ｒ ｓ ｅ Ｒ ｒ ｅ ｓｉ ｉｅｗａ ｉ ａ ｉｙｄ ｖ ｌｐ ｄ Ｔｈ ｃ ｕ ａｅ ｓｚ ｆＤＮ Ａ ｒ ｇ ｅ ｔｃ ｕ ｄｂｅｄｅｅ — ｉ ｍ ｔ ｏｄｗ ｔ ｌ ｏ ｅ ｃｎｔＳＳ ｍａ ｋ ｒ ｎ ｒｃ ｓｐｒｍ ｒｌ ｅ ｅｏ ｅ ． ｏｎ ｅａ ｃ ｒ ｔ ｉｅｏ ｆａ ｍ ｎ ｏ ｌ ｔｃ ｔｄ ｂｙ ｔ ａ ｌ ｒ ｌｃｒ ｐｈ ｒ ｓｓｄｅｅ ｔｏｎｍ ｅ ｈ ｄ ｗｉｈ ｆｕ ｒ ｓ ｅ ｔＳＳＲ ｒ ｅ ｓ Ｔｈ ａ ｌａ ｙｅｅ ｔ０ ｏ ｅ ｉ ｔ ｃｉ ｓ ｅ ｈｅｃ ｐｉａ ｙ ｅｅ ｔ０ ｏ ｅ ｉ ｔ ｃｉ ｔ ｏ ｔ ｌ ｏ ｅ ｃ ｎ ｌ ｍａ ｋ ｒ． ｅｃ ｐｉ ｒ ｌｃｒ ｐｈ ｒ ｓｓｄｅｅ ｔｏｎｈａ ｌ ｔ ｄ ａ ｔ ｇ ｓｏ ａ ａａ ｃ ｒ ｃ ｎｄ ｅｆｃｅ ｙ ｃ ｍ ｐ ｒ ｄｗ ｉｈ ｐ ｌ ａ ｒ ｌ ｍｉ ｅ ｌｃｒ Ｄｈ ｒ ｓｓｄ ｔｃ ｉｎ Ｉ ｏ ｉｅ ｅ ｓ— ｈｅａ ｖ ｎ ａ ｅ ｆｄ ｔ ｃ ｕ ａ ｙ ａ ｆｉｉｎｃ ｏ ａ ｅ ｔ ｏ ｙ ｃ ｙ ａ ｄｅｇ ｌｅｅ ｔｏ ｏ ｅｉ ｅｅ ｔｏ ． ｔｐｒ ｖｄ ｓａ ｆａ ｉ ｂｌ ｎｄ ｒ ｌ ｂｌ ｔ ｏ ｏ ｉｅ ＤＮ Ａ ｉｇ ｒ ｒｎ ｄ ｎ ｉｉａｉｎ． ｅ ａ ｅｉ ｅ ｍｅ ｈ ｄ ｆ ｒｒｃ ａ ｆｎ ｅ ｐ ｉｔｉｅ ｔｆｃ ｔ ｏ
DNA分子标记及其在作物遗传育种中的应用
DNA分子标记及其在作物遗传育种中的应用摘要：本文对四种DNA分子标记技术的原理和特点，以及不同DN A分子标记在作物亲缘关系与遗传多样性、指纹图谱的建立、遗传图谱的构建与基因定位、及分子标记辅助选择育种等方面所取得的应用效果进行了较为详尽的论述，充分展示这项技术的发展具有巨大的应用潜力和广阔的应用前景。
关键词：DNA分子标记；遗传育种；应用伴随着人们对生命认识的不断加深以及遗传学的发展，遗传标记（genetic marker）的种类和数量越来越多，主要分为四种类型：形态学标记、细胞学标记、生化标记和DNA 分子标记。
前三种标记都是以基因表达的结果(表现型)为基础，是对基因的间接反映；而DNA分子标记则是DNA水平遗传变异的直接反映。
1.分子标记（molecular marker）广义的分子标记是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。
狭义的分子标记只是指DNA标记。
DNA分子标记是以生物DNA的多态性为基础的遗传标记，与其他遗传标记相比，它具有以下优点：（1）直接以DNA的形式表现，在生物各个组织，各个发育时期都可检测到，不受季节、环境限制；（2）数量极多，遍及整个基因组；（3）多态性高，并且自然存在许多的等位变异，不需专门创造特殊的变异材料；（4）表现“中性”，即不影响目标性状的表达，与不良性状也没有必然的连锁；（5）许多分子标记表现为共显性，能够鉴别纯合基因型与杂合基因型，提供完整遗传信息。
因此，DNA分子标记已广泛地应用于种质资源研究、目的基因定位、遗传图谱构建和分子标记辅助选择等各个方面。
根据检测手段的不同，DNA标记技术综合起来可分为以DNA杂交为基础的、以PCR 技术为基础的、以串联重复的DNA序列为基础的以及基于单核苷酸多态性的DNA标记四种类型。
不同的DNA分子标记之间既有共性又有各自的特点，这里就常用的几种标记技术作简要介绍。
1.1 以DNA杂交为基础的分子标记该标记是利用限制性内切酶酶解不同生物体的DNA分子后，用经标记过的特异DNA 探针与之进行Southern杂交，通过放射自显影或同位素显色技术来揭示DNA多态性，主要包括RFLP标记和VNTR标记。
水稻育种中的分子标记辅助选择技术
水稻育种中的分子标记辅助选择技术水稻是我国的主要粮食作物之一，也是世界上最为重要的粮食作物之一。
为了满足人们的需求，不仅需要增加产量，还需要提高水稻的抗病性、耐旱性等方面的性状，从而提高稻米的质量和产量。
为了实现水稻优良性状的选育，目前的育种工作中，分子标记辅助选择技术被广泛应用，成为水稻育种的重要手段。
一、什么是分子标记辅助选择技术分子标记辅助选择技术是指利用分子标记技术对水稻种群进行筛选和选择，以实现快速、高效、精准的选育。
分子标记是一种基于DNA序列的分析方法，是利用分子生物学技术分析和鉴定生物体间或同一生物体内不同基因型的分析方法。
通过在DNA序列上标记其不同的基因型，可以识别水稻种群中存在的不同基因型，从而实现对水稻的选育。
二、分子标记辅助选择技术的应用分子标记辅助选择技术在水稻育种中应用广泛。
主要包括四个方面：1.遗传多样性鉴定水稻遗传多样性是指不同地域、不同种类、不同品种水稻之间的遗传变异。
通过分子标记技术可以对水稻的遗传多样性进行鉴定，研究水稻种群之间的亲缘关系，为水稻遗传资源的保护和利用提供重要的科学依据。
2.形态指标筛选水稻的形态指标是指生长发育各阶段的形态特征，包括穗长、穗粒数、茎粗、叶片长度等。
通过分子标记技术，在水稻种群中寻找与形态指标相关的分子标记，可以快速、高效、精准地筛选出拥有优良形态性状的杂交种。
3.抗病性状筛选水稻的抗病性状是指抵御外界环境压力的能力，包括对病害菌的抵御能力、对病害环境的适应能力等。
通过分子标记技术，在水稻种群中寻找与抗病性状相关的分子标记，可以快速、高效、精准地筛选出拥有优良抗病性状的杂交种。
4.耐旱性状筛选水稻的耐旱性状是指适应干旱环境的能力，包括耐旱、耐盐碱、耐寒等。
通过分子标记技术，在水稻种群中寻找与耐旱性状相关的分子标记，可以快速、高效、精准地筛选出拥有优良耐旱性状的杂交种。
三、分子标记辅助选择技术的优点1.快速高效分子标记技术可以快速、高效地对水稻种群进行筛选和鉴定，可以在很短时间内筛选出具有优良性状的水稻种群。
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3、琼脂糖凝胶电泳
1）制胶：用1×TAE液配制4%琼脂糖凝胶70 ml+10 ul GoldViewer 2）点样：每管加入2ul溴酚兰加样缓冲液，瞬时离心。
取10ul 扩增产物点样 (请注意点样顺序)
3）电泳：稳压（100V），电泳1.5h 4）观察：紫外灯下观察电泳结果
4、实验结果分析 多态性标记的筛选
6个多态性标记构建的水稻品种SSR指纹图谱
RM587 RM264 RM278 RM228 RM202 RM17
红莲优6号A
A
A
A
A
A
两优培九 B
B
A
A
A
B
P1 A
B
A
A
B
B
P2 A
A
B
B
B
A
P3 AB AB AB AB AB AB
P4 A
AB A
A
AB AB
请利用不同品种的SSR指纹图谱判断P5、P6杂交种的亲本来源
1、ddH2O 2、10×buffer
10*72=720 ul 2.0*72=144 ul
1500 ul 180 ul
3、25mM MgCl2 4、10mM dNTPs
1.8*72=130 ul 1.0*72=72 ul
150 ul 100 ul
5、10uM primer
2.0*12*6=24 ul*6 30 ul*6 (每对正反引物混合)
1、ddH2O
10.0
2、10×buff
2.0
90.0 18.0
3、25mM MgCl2
1.8
16.2
4、10mM dNTPs 1.0
9.0
5、5uM primer
2.0
18.0
6、5 U/ul Taq 酶 0.2
1.8 (分装前先离心)
7、DNA模板
3.0
每个标记分别在1个0.5 ml离心管中配制反应混合液
面优越性）
3、DNA指纹图谱（条码技术）能有效鉴别不同生物物种或同一物种
的不同基因型。
4、 常用的几种DNA分子标记：
1）RFLP 2）AFLP 3）RAPD
5）SCAR：sequence characterized amplified region 6）CAPS ：cleaved amplified polymorphic sequence 7）InDel
水稻品种SSR指纹图谱及其应用
实验目的
ห้องสมุดไป่ตู้学习SSR指纹图谱的构建原理与方法 应用SSR指纹图谱进行水稻品种的鉴别
实验原理
1、生物具有丰富的遗传多样性，并在个体形态上表现出千姿百态。
2、DNA分子标记技术的发展，使得在DNA分子水平揭示生物的遗传
多样性成为可能。（稳定性好、不受环境和发育时期限制等多方
应用SSR指纹图谱鉴定杂交稻真假杂种的实例
SSR标记RM 17 对杂交稻“两优培九”100 粒单种子的扩增结果
(M分子量Marker，A不育系，R恢复系，2轮点样）
Ref：彭锁堂、庄杰云、颜启传、郑康乐. 我国主要杂交水稻组合及其亲本SSR 标记和纯度鉴 定.中国水稻科学, 2003,17(1): 1～5
实验材料
1、 2个杂交稻品种及其4个亲本品种 1）红莲优6号（粤泰A/扬稻6号） 2）两优培九（培矮64S/93-11） 3） P1 4） P2 5） P3
Chr. Chr.1 Chr.2 Chr.7 Chr.2 Chr.7 Chr.2
标记 RM212 RM263 RM505 RM525 RM234 RM202
特别提示 实验报告务必有图片
PCR试剂准备
1、每3个小组（12人）共用1套试剂（实际反应数36个） （PCR试剂各提供72个反应需用量，6对引物各提供12个反应需用量）
2、4个班合计173人，共提供16套PCR试剂 3、每套PCR试剂提供量（见下表）
PCR试剂
72个反应需用量 每套试剂实际提供量
6、5 U/ul Taq 酶
0.2*72=14.4 ul
25 ul
标记编号 标记1 标记2 标记3 标记4 标记5 标记6
6） P4
2、 6个 SSR标记（见右表）
3、分组：1）4人一组，用2个标记分别对6个水稻品种进行PCR扩增
2）每3个小组的实验结果整合到一起，用于实验报告的撰写
实验方法
1、PCR反应体系配制：在0.5 ml离心管中配制反应混合液
反应因子
单个反应体积（µl） 9个反应用量（µl）
P1 P2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24
1A 2B A3B 2B3AB 1A …………
标记等位基因的识别与标识
RM522 单态性标记
AB C
RM552 多态性
ABDC
RM267 多态性
表1 不同基因型SSR指纹图谱示例
4） SSR
SSR分子标记的原理：
SSR序列特征： 如：————(AG)n————
(AG)n, n=36
(AG)n, n=75
(AG)n, n=112
SSR的 PCR扩增及电泳检测
一般为共显性，在F2群体中，理论上[A]：[AB]：[B] = 1：2：1
Parents
F2 individuals
标记
基 因
… M 1 M 2 M 3 M 4 M 5 M 6 M 7 M 8 M 9
型
P1 A B B A B C A B F
P2 C B A A D D B A C
P3 B B A D C F E B A
P4 E B A D C B B A B
影响指纹图谱特异性的主要因素： 1、生物内在的遗传多样性 2、标记的多态性 3、标记的数目
1) 先按9个反应所需量配制因子1-6的混合液，瞬时离心混匀 2) 将混合液分装到6个反应管中，每管17 µl 3) 向每管分别添加6个水稻品种的DNA模板， 4) 再向每管各加1小滴矿物油，瞬时离心 5) 按标记（每标记1列）将反应管安放到PCR仪上
2、PCR扩增程序
① 94℃ 预变性 5min ② 94℃ 变性 1min ③ 55℃ 退火 1min ④ 72℃ 延伸 1min ⑤ 重复步骤② - ④ 35次 ⑥ 72℃ 延伸 10min