乳品中抗生素的检测方法
乳中抗生素的检验
不显色 显色者 阴性 不显色者 36°cห้องสมุดไป่ตู้浴30min 阳性
红色
抗生素阴性
报告
报告
（1）菌液的制备 将菌种移至脱脂乳中，经 36°c培养15h后已灭菌乳1：1稀释。 （2）检 验 取 检样9ml置于试管。 80°c水浴加热5min，取出冷却至37°c,加菌液1ml， 36°c水浴培养2h 加TTC0.3ml 36°c 水浴培养30min，观察如为阳性，再于水浴培养 30min，作第二次观察。每份检样做二份另外再做 阴性和阳性对照各一份阳性对照管用无抗生素的乳 8ml加抗生素及菌液和TTC,阴性对照管用无抗生素 乳9ml加菌液和TTC
抗生素产生的与原因
• 为了预防和治疗奶牛的乳房炎，成注射大量的抗 生素，例如 青霉素 庆大霉素 卡那霉素 等， 这些霉素的半衰期较长，会残留在乳中。为了保 证饮用者的安全和实际的生产需要，对鲜乳中抗 生素的残留检验很有必要。TTC试验是用来检验鲜 乳中是否含有抗生素的简单方法
细菌进行生物氧化有三种方式： 加氧 脱氢脱电子 ，相反即还原。当乳中 加入嗜热链球菌是乳中无抗生素，嗜热链球菌就繁殖在新陈代谢中进行生物 氧化。其中脱出的氢可以和乳中的氧化型TTC结合而成还原型TTC.氧化TTC 无色 ，还原型TTC红色，所以可以使乳变红色。相反 ，如中存在抗生素， 嗜热链球菌不生长。没有氢的释放，TTC不变色乳汁也无色
阴性 阳性
显色状态
判断
显色状态
判断
未显色者 微红色着
阳性 可疑
桃红色至红色
阴性
抗生素的名称
最低检出量
抗生素的名称
最低检出量
青霉素 链霉素
0.004IU 0.5IU
庆大霉素 卡那霉素
奶粉氯霉素检测实验报告
一、实验目的本次实验旨在通过液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）对奶粉中的氯霉素残留进行定量检测，以确保奶粉的安全性，为消费者提供安全放心的乳制品。
二、实验原理氯霉素是一种广谱抗生素，主要用于治疗细菌感染。
但由于其潜在的毒副作用，我国对食品中氯霉素残留量有严格的限制。
液相色谱-串联质谱法是一种高效、灵敏、准确的检测方法，能够对奶粉中的氯霉素进行定量分析。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）市售奶粉；（2）氯霉素标准品（纯度≥99%）；（3）甲砜霉素标准品（纯度≥99%）；（4）氟甲砜霉素标准品（纯度≥99%）；（5）氯霉素氘代同位素内标（CAP-D5）标准溶液（浓度100微克/毫升）；（6）甲醇、乙腈（色谱纯）；（7）HLB固相萃取柱（200毫克，6毫升）；（8）0.22微米/13毫米尼龙针式滤头；（9）YP5002电子天平；（10）XEVO-TQ Scronos串联质谱联用仪；（11）Multi Vortex多样品涡旋混合器；（12）FV64全自动智能样品处理仪。
2. 实验仪器：（1）高效液相色谱仪（HPLC）；（2）串联质谱仪（MS/MS）；（3）超声波清洗器；（4）旋转蒸发仪；（5）固相萃取装置；（6）涡旋混合器；（7）电子天平；（8）高压恒温水浴锅。
四、实验方法1. 样品前处理（1）称取5.0g奶粉样品，加入10mL甲醇溶液，涡旋混合5min，超声提取30min；（2）过滤，取滤液5.0mL，加入2.0mL乙腈溶液，涡旋混合5min；（3）加入1.0g无水硫酸钠，涡旋混合1min；（4）过滤，取滤液，过0.22微米滤膜；（5）用HLB固相萃取柱净化，依次用5mL水和5mL甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；（6）旋转蒸发至近干，用1.0mL甲醇溶液复溶解，涡旋混合5min，过0.22微米滤膜。
2. 标准曲线绘制（1）取氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准品，分别用甲醇溶液配制浓度为 1.0、5.0、10.0、20.0、50.0、100.0ng/mL的标准溶液；（2）取氯霉素氘代同位素内标标准溶液，用甲醇溶液配制浓度为1.0ng/mL的内标溶液；（3）将标准溶液与内标溶液按比例混合，涡旋混合5min；（4）取混合溶液，过0.22微米滤膜，按实验方法进行HPLC-MS/MS分析；（5）以氯霉素浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
鲜乳中抗生素残留检测
1.原理 细菌生物氧化有三种方式，即加氧、脱氢和脱电子。 当样品中加入嗜热链球菌后，如果样品中没有抗生素残 留，嗜热链球菌就生长繁殖，在新陈代谢过程中进行生 物氧化，其中脱出的氢可以和加在样品中的氧化型TTC 结合而成为还原型TTC，氧化型TTC是无色的，还原型 TTC是红色的，所以可以使样品变红色。相反，如果样
鲜乳中抗生素残留检测
注：嗜热链球菌的筛选方法
（1）培养 培养基配方：酵母膏7.5g 、蛋白胨7.5g、葡萄糖10g 、KH2PO4 2g、西红柿 汁100mL 、吐温80 0.5mL、 蒸馏水900mL pH 7.0 ★ 西红柿汁的制作方法： 将新鲜番茄洗净，去皮切碎（切勿捣碎），放入锥形瓶，置4℃冰箱8~12h，取 出后用纱布过滤。如一次使用不完，可将其置入0℃冰箱，可保存四个月。使 用时让其在常温下自然溶解。 制法：将上述各成分加热溶解，校正pH，分装于灭菌锥形瓶中，在115℃下高 压灭菌20min。取适量酸奶（3~5mL）接种于培养基，进行培养分离。
品中存在抗生素，嗜热链球菌就不能生长繁殖不变色。
鲜乳中抗生素残留检测
2.设备与材料
水浴锅 恒温培养箱
温度计
试管架 灭菌10mL吸管
灭菌1mL吸管
灭菌15×150mm试管 杀菌锅
鲜乳中抗生素残留检测
3.培养基和试剂
菌种：嗜热链球菌 脱脂乳：脱脂奶粉按10%含量（W/V）加蒸馏水调
鲜乳中抗生素残留检测
5. 判断方法
准确培养30min，观察结果，如为阳性，再继续培养30min做第二次观 察。在观察时要迅速，避免光照过久干扰，乳中有抗生素存在，则在向 检样中加入菌液培养时细菌不增殖，此时由于加入的指示剂TTC不还原， 所以不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即进行增殖， TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，成红色为阴 性。
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法
牛奶中抗生素残留的几种常用检测方法1.高效液相色谱法（HPLC）：高效液相色谱是一种基于溶剂流动的液相色谱方法，具有灵敏度高、分离能力强等特点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品经过样品前处理，去除干扰物，然后使用适当的洗脱液将抗生素从固相萃取柱中洗脱出来，最后用高效液相色谱对抗生素进行分离和定量。
2.毛细管电泳法（CE）：毛细管电泳法是一种基于电场作用下溶液中离子迁移速度的分析方法。
该方法具有高分离能力、快速分析速度等特点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品进行前处理，然后通过毛细管电泳仪器进行分析。
该方法不仅可以同时检测多种抗生素，而且样品准备过程相对简单。
3.气相色谱法（GC）：气相色谱法是一种基于色谱柱分离原理的分析方法，通过适当的蒸发和衍生反应可以将抗生素样品转换为易于气相色谱分析的衍生化物。
该方法具有高度选择性、高灵敏度等优点。
在牛奶中检测抗生素残留时，通常需要进行样品前处理。
首先将牛奶样品中的脂肪物质去除，然后使用适当的溶剂将抗生素从样品中提取出来，并通过气相色谱进行分离和定量分析。
4.酶联免疫吸附法（ELISA）：酶联免疫吸附法是一种基于抗原-抗体反应原理的免疫学方法。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先利用适当的蛋白质工程技术制备特异性抗生素抗体，然后将牛奶样品中的抗生素与抗体结合，通过酶标记的二抗或亲和素染色法对特异性抗体进行检测。
该方法具有灵敏度高、操作简单等特点。
5.高分辨质谱法（HRMS）：高分辨质谱法是一种基于质荷比检测的方法，具有高灵敏度、高分辨率等优点。
在牛奶中检测抗生素残留时，首先将牛奶样品经过适当的前处理，然后通过质谱仪对抗生素进行定性和定量分析。
该方法不仅可以同时检测多种抗生素，而且可以准确测定其残留量。
总结起来，牛奶中抗生素残留的检测方法包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、气相色谱法、酶联免疫吸附法和高分辨质谱法等。
这些方法具有不同的优点和适用范围，可以根据具体需求选择合适的方法进行检测。
乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留
乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留乳酸菌抑制法检测牛乳中抗生素残留近年来，人们对食品安全问题越来越关注，其中牛乳作为人们日常饮用的重要食品之一，其安全性备受关注。
然而，由于牛乳生产过程中可能存在抗生素的使用，其中的抗生素残留对人体健康造成潜在的威胁。
因此，开发一种有效的方法检测牛乳中抗生素残留显得尤为重要。
传统的检测方法中，高效液相色谱法（HPLC）是应用最为广泛的一种技术。
然而，该方法通常需要复杂的设备和专业操作，且对操作环境要求较高，给检测工作带来一定的难度和限制。
为了克服这些问题，乳酸菌抑制法应运而生。
乳酸菌抑制法基于乳酸菌对抗生素的敏感性。
乳酸菌属于一类有益菌，其作用是通过产生乳酸、醋酸等有机酸，使环境呈酸性，进而抑制其他微生物的生长。
研究发现，抗生素具有破坏乳酸菌作用的能力，因此可以利用乳酸菌的生长状态来间接推测抗生素在牛乳中的残留情况。
乳酸菌抑制法的实施步骤如下：首先，将乳酸菌培养液均匀涂布在含有津液的平板上；然后，在培养液固化前，将含有不同浓度抗生素的牛乳样品加入到涂布的乳酸菌平板上；最后，在恒温条件下培养一段时间，观察乳酸菌的生长情况。
如果抗生素浓度低于一定阈值，乳酸菌能够正常生长并产生酸性物质，呈现出固定的酸化效果；相反，如果抗生素残留量超过阈值，乳酸菌的生长将受到抑制，无法产生足够的酸性物质，导致涂布的乳酸菌平板呈现中性或碱性。
乳酸菌抑制法具有操作简单、处理时间短、不需要复杂设备等优点。
同时，该方法对抗生素种类的适应性较强，可以检测多种抗生素的残留情况，如青霉素、四环素等。
另外，由于该方法的检测结果直观可见，对于不具备专业知识的人员也较易理解和判断。
不过，乳酸菌抑制法也存在一些局限性。
首先，该方法无法准确测量抗生素残留的具体浓度，只能得出残留的有无和超过阈值与否的结果。
其次，由于牛乳中含有多种成分，这些成分对乳酸菌的生长也可能产生一定影响，因此在使用乳酸菌抑制法时需要对牛乳样品进行预处理，如去除脂肪、蛋白质等。
乳品中抗生素的检测方法
上海千测标准技术服务有限公司乳品中抗生素的检测方法乳品中抗生素的检测方法经多年的实践，人们认识到抗生素可以增强牲畜抗病能力、提高养殖业产投比。
但过量使用，将降低畜牧产品品质，影响乳品发酵。
而含有抗生素残留的动物性产品，进入人类食物链，会使体内菌株产生抗生素抗性，扰乱机体内环境平衡，菌群失调而不利于健康；也会对易感人群产生过敏反应、激素障碍变态反应。
因此，FAO及WHO早在1969年就提出应规定各种动物性食品中的抗生素残留允许标准，WHO于1979年规定原料奶及消毒牛奶中不得有抗生素。
近年来，国内对奶制品中的抗生素残留也非常关注，无抗奶（Antibiotic-FreeMilk）的生产和消费已成为大势所趋。
但我们对奶制品中抗生素的检测缺乏必要的研究，检测技术还十分落后。
本文旨在对抗生素的检测方法进行总结，为在我国开展相关工作奠定基础。
我国关于奶制品中抗生素检测的国家标准方法最早出现在《牛乳检验方法——GB5409—85》中，采用TTC法。
1994年制订的《食品卫生微生物学检验？鲜乳中抗生素残留量检验——GB/T？4789.27—1994》，也采用TTC法。
2001年9月，农业部发布的《无公害食品生鲜牛乳》行业标准中，检测方法同《GB5409—85》，并不得检出。
《绿色食品消毒牛乳标准》也做了类似规定。
可看出，我国还未将抗生素纳入常规检测，作为必检项目；所采用的TTC法精确性和时效性都比较差。
展望新世纪的乳制品工业，为了保障人体健康，适应WTO的要求，增强国内乳制品业的国际竞争力，必须将抗生素的检测纳入议事日程。
首先是要制定相应的法规和检测程序，将乳制品中抗生素的检测、报告、处罚和管理等纳入法制化轨道，适应市场经济就是法制经济的要求。
其次是要修订、制订乳制品标准，将抗生素的检测纳入国标体系。
解决国内标准混乱，与国际标准冲突的问题，加大采用国际标准的比例，同国际标准接轨。
再次是要进行抗生素检测方法筛选工作，提高国产试剂盒的研制能力。
鲜乳中抗生素的检验
TTC检测法操作步骤
菌液制备:将菌种移种脱脂乳,经36±1℃培养15h后,以灭 菌脱脂乳1:1稀释待用。 检验：取检样9mL,置15mm×150mm试管内,80℃水浴加热 5min冷却37℃以下,加菌液1mL,36±1℃水浴培养2h,加 TTC0.3mL,36±1℃水浴培养30min,观察如为阳性,再于水 浴中培养30min作第二次观察,每份检样作二份,另外再作 阴性和阳性对照各一份,阳性对照管用无抗生素的乳8mL 加抗生素及菌液和TTC。阴性对照管用无抗生素乳9mL加 菌液和TTC。 判断方法：准确培养30min观察结果,如为阳性,再继续培 养30min作第二次观察。观察时要迅速,避免光照过久发 生干扰。乳中有抗生素存在,则检样中虽加菌液培养物, 但因细菌的繁殖受到抑制,因此指示剂TTC不还原,不显色。 与此相反,如果没有抗生素存在,则加入菌液即行增 殖,TTC被还原而显红色,也就是说检样呈乳的原色时为阳 性,呈红色为阴性，见表1，检测各种抗生素的灵敏度见 表2 。
表1 显色状态判断标准
显色状态 未显色者 徽红色者 桃红色至红色者 判断 阳性 可疑 阴性
表2 检测各种抗生素的灵敏度
抗生素名称 青霉素 链雹素 庆大霉素 卡那霉素 最低检出量 0.004单位 0.5单位 0.4单位 5单位
注意事项
• 1、配制培养基应注意的问题 • 2、嗜热链球菌的保存
TTC检测法
TTC法，即氯化三苯基四氮唑法( tripheye tetrazolium chloride)，是目前我国食品卫 生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的 检测方法(GB5409—85)。该法简便、快 速，无需特殊设备，3～4h可见报告，很 适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部养基和试剂 菌种:嗜热乳酸链球菌。 脱脂乳:经113℃灭菌20min。 4%2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:称取 1gTTC,溶于5mL灭菌蒸馏水中,装褐色瓶内于7℃ 冰箱保存,临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如 遇溶液变为玉色或淡褐色,则不能再用。 • 仪器 水浴锅、培养箱、不锈钢锅、温度计、蜡笔、 试管架、1ml和10ml的灭菌吸管、灭菌试管
鲜奶的抗生素检验
实验三、鲜奶中抗菌素残留检验（TTC法）我国《食品卫生法》中规定，奶牛在应用抗菌素期间和停药后5天内的乳汁不得销售。
牛奶中抗菌素残留的最主要原因有两点，一是奶牛患某些疾病如乳房炎时大量应用抗菌素治疗；二是为保证群体饲养奶牛的健康，饲养人员在饲料中广泛添加抗菌素。
牛奶中抗菌素残留不仅会引起某些特殊人群的过敏反应；而且由于人们长期间接吸收低剂量的抗菌素，可引起病原菌对多种抗菌素产生耐药性。
因此，检测牛乳中的抗菌素残留已成为一项急需开展的常规检验工作。
(一)原理乳中有抗菌素存在，则检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制而使指示剂TTC不还原，不显色。
与此相反，如果没有抗菌素存在，则加入菌液即行增殖，TTC被还原而显红色。
也就是说检样呈乳的原色时为阳性，呈红色为阴性。
(二)试剂与器材1．水浴锅2．100℃温度计3．灭菌吸管(10ml、1ml)，灭菌试管(15mm×150mm)。
4．脱脂乳(经113℃灭菌20min)5．4% TTC (2,3,5-氯化三苯基四氮唑)水溶液,配制时先用95%乙醇溶解后，再用蒸馏水配成4% TTC浓度。
6．菌种：嗜热乳酸链球菌。
(三)操作步骤1．菌液制备将菌种移种脱脂乳，经36±1℃培养15h后，以灭菌脱脂乳1：1稀释待用。
2．取检样9ml，置无菌试管内，80℃水浴加热5min。
3．冷却至37℃以下，加菌液1ml后36±1℃水浴培养2h，加入TTC 0.3ml 指示剂，室温培养30min。
4．结果观察：乳中有抗菌素存在时，加入指示剂TTC后牛乳不显色，即抗菌素阳性；相反，如果没有抗菌素存在，则加入TTC后显红色，即抗菌素阴性。
抗菌素阳性者，再于水浴中培养30min第二次观察（见表26）。
表26 显色状态判断标准(GB 4789.27－94)显色状态判断未显色者阳性微红色者可疑桃红色～红色阴性。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
乳品中抗生素的检测方法
引言：
抗生素是一种用于治疗和预防疾病的药物，但在食品中的残留量超标
可能对人体健康造成负面影响。
乳制品是人们日常生活中常见的食品之一，因此对乳品中抗生素残留的检测方法至关重要。
本文将介绍几种常用的乳
品中抗生素检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）
高效液相色谱法是一种常见的用于检测乳制品中抗生素残留的方法。
该方法能够在短时间内对多种抗生素进行分离和定量。
具体操作步骤如下：
1.准备样品：将待测乳制品样品样品加入适量的提取剂中，经过摇晃
和离心等操作，获得样品提取液。
2.样品的制备：将样品提取液进行蒸发浓缩，得到浓缩样品。
3.高效液相色谱分离：将浓缩样品溶解于适量的溶剂中，并通过高效
液相色谱仪器进行分离，获得不同抗生素的峰。
4.定量分析：通过标准曲线法，根据峰的面积或高度进行定量分析，
得出样品中抗生素的浓度。
优点：高效液相色谱法能够同时检测多种抗生素，具有较高的定量精
度和分辨率。
二、酶联免疫吸附试验法（ELISA）
酶联免疫吸附试验是一种利用抗生素与酶标记物结合来检测乳制品中
抗生素残留的方法。
具体操作步骤如下：
1.制备测定板：首先将具有抗生素特异性的抗体固定在微孔板上。
2.加样：将待测样品加入微孔板中，经过一定的反应时间，让样品中的抗生素与抗体结合。
3.洗涤：用洗涤缓冲液清洗微孔板，去除未结合的物质。
4.酶标记：加入酶标记抗体，使其与结合到微孔板上的抗生素形成复合物。
5.底物溶液：加入底物溶液，通过底物的催化反应，将其转变为有颜色的产物。
6.测定：通过酶标仪器测定样品中产生的颜色和强度，得出抗生素的浓度或者阳性相关性结果。
优点：酶联免疫吸附试验法具有操作简便、快捷、敏感性高等优点，能够检测到低浓度的抗生素残留。
三、质谱法（MS）
质谱法是一种通过对乳品样品中的物质进行化学分析的方法，它能够精确地分析样品中的抗生素成分。
该方法结合了质谱仪和色谱仪的特点，具体步骤如下：
1.样品制备：将待测乳制品样品加入适量的提取剂中，经过摇晃和离心等操作，获得样品提取液。
2.样品提取：将样品提取液进行蒸发浓缩，得到浓缩样品。
3.色谱分离：将浓缩样品溶解于适量的溶剂中，通过色谱分离获得不同抗生素的纯化物。
4.质谱分析：将纯化的样品进行质谱分析，通过质谱仪器分析样品中的抗生素组分和含量。
优点：质谱法能够同时分析多种抗生素成分，具有高分辨率和高灵敏度的优势。
结论：
乳品中抗生素的残留问题对人体健康造成了一定的威胁，因此采用适当的检测方法来保证乳品质量的安全是非常重要的。
高效液相色谱法、酶联免疫吸附试验法和质谱法是常用的乳品中抗生素检测方法，它们在不同的场景下具有各自的优势和适用性。
为了保护消费者的健康，相关部门和生产企业应该加强对乳品中抗生素残留的监测与管理，确保产品的质量安全。