应用MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异
乙肝病毒常见耐药位点突变高通量检测方法的建立与应用
乙肝病毒常见耐药位点突变高通量检测方法的建立与应用虞闰六;任绪义;王敏【期刊名称】《实用检验医师杂志》【年(卷),期】2010(002)003【摘要】目的建立准确、快速、灵敏、高通量的检测常见乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)耐药位点突变的临床检测方法.方法设计针对聚合酶YMDD区及其附近常见耐药突变区域和基本核心启动子区(basic core promoter, BCP)1762、1764双突变区域的扩增引物,经PCR扩增及磁珠分离,制备焦磷酸测序单链模板,并在PyroMark ID遗传分析系统上进行焦磷酸测序,批量检定300例临床血清标本,与目前常用的YMDD试剂盒和Sanger测序法测序结果进行比较.结果将PCR扩增得到HBV P区和BCP区产物经琼脂糖凝胶电泳显示:HBV定量结果阳性(拷贝数≥10<'3>)的标本均能得到清晰地PCR产物条带.焦磷酸测序进行突变频率检测具有极高的准确性,且能够进行低频率(<5%)的突变检测.焦磷酸测序法和Sanger测序法检测突变位点得到的结果一致,匹配率达100%,而YMDD荧光定量检测法检测突变位点与上述两法匹配率仅为75%.结果本文成功建立了基于焦磷酸测序技术的HBV常见耐药突变检测平台,实现了临床血清标本的高通量检测.该方法具有较好的灵敏度、特异性和准确性,且能进行低频率(<5%)突变检测.该测序系统比Sanger测序具有更高的通量、更准确的结果及快速简便的操作,是一种适用临床常见HBV耐药突变位点分析的检测技术,易于在临床推广应用.【总页数】6页(P137-142)【作者】虞闰六;任绪义;王敏【作者单位】310030,浙江省,杭州迪安医学检验中心;310030,浙江省,杭州迪安医学检验中心;310030,浙江省,杭州迪安医学检验中心【正文语种】中文【中图分类】R5【相关文献】1.核苷(酸)类似物治疗引起乙肝病毒耐药相关基因位点突变的总结分析2.A（H3N2)亚型流感病毒R292K和N294S突变位点TaqMan-MGB探针检测方法的建立3.乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用4.乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用5.检测乙肝病毒preS基因常见突变位点的反向斑点杂交技术的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基因芯片技术在乙型肝炎病毒分型和耐药突变检测中的应用
基因芯片技术在乙型肝炎病毒分型和耐药突变检测中的应用单万水;徐六妹;吴驰;李兵;韩红星;周伯平【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2008(029)012【摘要】目的通过基因芯片检测系统,快速检测临床样品中乙型肝炎病毒的基因亚型和耐药突变情况.方法用基因芯片法检测352例临床样品,对慢性乙型肝炎患者感染的HBV亚型及耐药情况进行分析.结果在352例临床病例中,共检出耐药突变病例124例,检出率为35.7%.发现3种基因亚型,其中B型222例,占63.8%;C型115例,占33.0%;D型1例,占0.3%;B、C混合感染9例,占2.6%;型别未分1例,占0.3%.结论 PCR与膜芯片杂交技术可检测乙型肝炎病毒基因亚型及耐药突变类型,并具有快速、高通量、敏感的特点,适合各临床医院开展应用.【总页数】3页(P1069-1071)【作者】单万水;徐六妹;吴驰;李兵;韩红星;周伯平【作者单位】518020,深圳市东湖医院检验科;518020,深圳市东湖医院检验科;518020,深圳市东湖医院检验科;518020,深圳市东湖医院检验科;518020,深圳市东湖医院检验科;518020,深圳市东湖医院检验科【正文语种】中文【中图分类】R446.61;R512.62【相关文献】1.DNA芯片技术在宜昌地区乙型肝炎病毒分型和耐药情况监测中的应用 [J], 韩宇;向启云;李沫;乔亚丽2.基因芯片技术在乙型肝炎病毒耐药和分型检测中的价值 [J], 黄文瑶;张水兰;周敏;陈进宇3.基因芯片技术在乙肝病毒分型和耐药突变检测中的应用 [J], 李延武;李卓成4.基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨 [J], 杨光;崔金环;司建华5.基因芯片技术在慢性HBV感染者病毒基因分型和耐药基因检测中的应用及临床意义 [J], 周冬青;王骥;赵娴;陈辉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基因芯片检测乙肝病毒分型和耐药突变的准确度灵敏度分析
62安全、有效的抗病毒治疗对于延缓乙型病毒性肝炎病情进展具有重要意义[1]。
然而，HBV 包括多种基因型，不同基因型耐药特点存在差异，耐药严重影响了抗病毒治疗效果[2]。
当前临床明确HBV 耐药突变检测的金标准为DNA 直接测序法，但存在成本高、耗时久等弊端，无法满足快速诊断、大规模推广要求[3]。
本研究就基因芯片检测HBV 分型及耐药突变的准确度及灵敏度进行分析，旨在评估该技术的临床应用价值。
1 资料与方法1.1 一般资料以我院2014年5月—2016年9月参照2010年全国传染病与寄生虫病学术会议拟定的《病毒性肝炎防治方案》确诊的乙型病毒性肝炎患者为研究对象。
入组患者乙肝表面抗原（HBsAg ）及HBV DNA 检测均为阳性（HBV DNA ≥1×103 IU/mL ），排除合并其他类型肝炎及免疫性肝病、胆汁型肝硬化患者及基因芯片检测无信号者[4]共351例入选。
其中男189例，女162例，年龄17～71岁，平均年龄（48.42±10.58）岁。
351例患者均有长期（≥48周）核苷类抗病毒药物使用史，其中208例接受拉米夫定治疗，143例接受阿德福韦酯治疗。
本研究已征得我院医学伦理委员会批准，患者均知情同意并签署知情同意书。
1.2 研究方法1.2.1 标本采集 抽取患者入组次日空腹静脉血4 mL ，分装于4支抗凝管内，分别用于基因芯片法HBV 基因分型、耐药突变检测及基因测序法HBV 基因分型、耐药突变检测。
1.2.2 标本检测 基因芯片：HBV 基因分型及耐药突变检测试剂均购自深圳亚能生物技术有限公司，使用Biomctra基因扩增仪及FYY-3型分子杂交仪（兴化市分析仪器厂），操作均严格按照试剂使用说明书。
扩增循环条件：95℃ 10 min →94℃ 34 s →56℃ 30 s →72℃ 30 s ，重复循环50次。
结果分析使用光学扫描仪[5]。
HBV 膜条探针排列顺序设计见表1。
乙型肝炎病毒核苷(酸)类似物耐药的检测
利用错配引物使 PCR产物中产生 特异的酶切位点
结果: 酶切片段长、短变化和多、少变化
限制性内切核酸酶的作用
PCR-RFLP检测HBV YMDD变异
PCR 错配引物设计
PCR-RFLP检测HBV YMDD变异
PCR-RFLP检测HBV YMDD变异
日本Kobayashi等检测18例无症状HBV携带者,发现5例YMDD变异,占27.78%。
YMDD自然变异的几组数据
1
196例CHB患者中，检出存在YMDD变异毒株者共21例，检出率为10.7%。其中YVDD阳性20例，YIDD阳性1例，YVDD和YIDD同时阳性者0例。
2
183例CHB患者中，检出存在YMDD突变毒株者共40例，检出率为21.86%。其中YVDD阳性36例，YIDD阳性3例，YVDD和YIDD同时阳性者1例。
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)原理
MALDI-TOF MS检测 HBV YMDD变异的原理
酶切分子量.JPG
优点：
01
高灵敏度、准确度、分辨率
02
能发现相对比例小于1%的变异株。
03
局限性：
04
设备昂贵，目前国内难以用于临床检测。
05
基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALD I-TOF MS)
三、需要重视的几个问题
Akarsu M等采用InnoLipa 法检测71例未经抗病毒的成年慢性乙肝携带者，结果有13例检测到YMDD变异株。
Lee CZ等采用引物末端碱基定点突变扩增技术对28例拉米夫定治疗前的CHB患者血清进行了YMDD变异毒株检测，发现有16例（57.1%）存在YMDD自然变异毒株。
直接测序法
massarray 系统的检测原理
massarray 系统的检测原理MassArray系统是一种用于基因分型和突变分析的生物技术工具。
它采用基于质谱分析的原理，能够快速、准确地识别和测量DNA序列中的单核苷酸多态性（SNP）和突变。
下面是对MassArray系统检测原理的详细解释：1. 原理介绍：MassArray系统基于基因质谱分析技术，利用基因特定引物将待分析的DNA片段扩增成大量的复制品。
然后，通过一系列的离子化和分离步骤，将DNA片段分离为单个的DNA链。
接下来，通过激光脱附质谱（LDI-MS）技术将DNA片段中的碱基逐个离子化，并根据其质量/电荷比（m/z）进行质谱分析。
2. 引物设计：为了准确识别和测量SNP和突变，MassArray系统需要使用特异性引物。
这些引物通常包含一个与待测DNA片段匹配的区域和一个质谱分析所需的引物序列。
通过这种方式，引物可以在扩增反应和质谱分析过程中特异性地识别和测量待测的SNP和突变。
3. 扩增和净化：在MassArray系统中，待测的DNA片段通常通过聚合酶链反应（PCR）进行扩增。
PCR是一种能够产生大量DNA复制品的技术。
扩增后，通过一系列的净化步骤，去除引物和其他杂质，保证样品的纯度和质量。
4. 质谱分析：在质谱分析步骤中，单个DNA链片段被离子化，并通过飞行时间质谱仪（TOF-MS）进行分析。
LDI-MS技术使用激光将DNA片段中的碱基逐个离子化，并通过其离子质量进行质谱分析。
通过与已知的SNP 和突变参考质谱进行比较，系统可以准确识别和测量待测的SNP和突变。
5. 数据分析：MassArray系统生成的质谱数据可以通过专用的数据分析软件进行解读和分析。
这些软件能够将质谱数据与已知的SNP和突变信息进行比对，并生成相应的分型和突变结果。
此外，还可以通过统计学方法和图表来分析和解释数据，以支持进一步的研究和应用。
总结起来，MassArray系统是一种利用基因质谱分析技术进行基因分型和突变分析的工具。
乙型病毒性肝炎患者检测HBV基因分型、耐药变异的价值和意义
乙型病毒性肝炎患者检测HBV基因分型、耐药变异的价值和意义作者：陈海雁张桂花等来源：《中国实用医药》2013年第19期【摘要】目的通过一体化鉴定探讨乙肝病毒肝炎患者HBV基因分型和耐药变异的临床价值与意义。
方法选取本院收治的73例乙肝病毒肝炎患者，以拉米夫定为首选治疗药物，以阿德福韦酯和恩替卡韦为耐药患者替代治疗药物；所有患者均取清晨空腹静脉血，利用MassARRAYAssay和实时定量PCR技术进行基因分型和耐药变异测定，对其用药情况进行为期3年的追踪分析。
结果基因分型：本组病例包括B型40例（54.79%）、C型32例（43.84%）、及D型1例（1.37%），未见其他基因分型患者。
耐药变异：在为期3年的追踪治疗中，共发生耐药变异33例（45.21%），其中B型变异率27.5%（11/40），C型变异率68.75%（22/32），D型无变异，各基因型之间差异有统计学意义（P【关键词】HBV基因分型；耐药变异；MassARRAYAssay；核苷（酸）类似物乙型病毒性肝炎为我国发病率较高的传染病之一，基于乙肝病毒传播途径广泛，其传染率居于各类传染病前列。
研究结果显示[1]，乙型病毒性肝炎病情迁延，无有效根治手段，随着发病程度的加深，可发展为肝硬化、肝癌等严重器质性病变，给家庭、社会造成沉重的经济负担。
目前，抗病毒治疗是控制其病情进行性扩展的主要手段，以干扰素类和核苷（酸）类似物为其两大主治药物。
基于干扰素的适用面窄，治疗效率相对偏低，临床多以核苷（酸）类似物为主。
研究表明，病毒耐药性变异为制约核苷（酸）类似物临床疗效的主要障碍，惠州市惠阳区人民医院以MassARRAYAssay技术为依托，对本地区常见乙肝病毒的基因分型和耐药位点做鉴定分析，以期为抗病毒疗效评价和用药方案的调整提供依据。
1资料与方法1.1一般资料①研究对象：选取本院2008年1月至2009年12月收治的73例乙型病毒性肝炎患者为研究对象；其中男47例，女26例，年龄34～51岁，平均（41.7±6.4）岁。
乙型肝炎抗病毒治疗中的耐药基因突变检测技术
乙型肝炎抗病毒治疗中的耐药基因突变检测技术
张树永;陈琛;马庆伟;曲芬
【期刊名称】《传染病信息》
【年(卷),期】2016(029)005
【摘要】中国是乙型肝炎（乙肝）的高发国家，抗病毒治疗药物耐药突变的早期发现对于接受抗病毒治疗的乙肝患者至关重要。
理想的临床检测方法应具有灵敏度高、特异性高、重复性好、检测结果准确、操作简单、通量高、价格适中以及能定量检测等特点，并可检出样本中的多种混合突变。
本文根据上述临床需求，就近年来出现的一些乙肝耐药突变检测技术进行讨论，并介绍一种基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法的新检测技术。
【总页数】4页(P311-314)
【作者】张树永;陈琛;马庆伟;曲芬
【作者单位】100039 北京，解放军第三○二医院临床检验中心;100853 北京，解放军总医院临床检验科;102206，北京毅新博创生物科技有限公司;100039 北京，解放军第三○二医院临床检验中心
【正文语种】中文
【中图分类】R51
【相关文献】
1.拉米夫定在慢性乙型肝炎抗病毒治疗中耐药的预防与对策 [J], 连晓明
2.慢性乙型肝炎患者预存耐药和抗病毒治疗后耐药情况分析 [J], 饶友义;寇国先;马
庆阳;杨敏
3.慢性乙型肝炎抗病毒治疗中耐药问题的处理策略 [J], 施军平
4.核苷(酸)类药物在慢性乙型肝炎抗病毒治疗中耐药问题的探讨 [J], 郭航
5.拉米夫定在慢性乙型肝炎抗病毒治疗中耐药的预防与对策 [J], 连晓明
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异
应用MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异摘要：目的探讨MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异性。
方法利用MassARRAY技术软件设计iPLEX引物，根据说明书要求完成PCR扩增、SAP反应、引物延伸，并且利用MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应获得的相关数据，完成基因变异位点的确定。
选择2014年12月-2017年3月到医院接受治疗的慢性乙型肝炎患者138例，采集多重耐药血清标本，将MALDI-TOF-MS检测获得的HBV基因变异位点区域完成DNA测序，并且将结果与MALDI-TOF-MS结果进行比较。
结果拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等单药耐药或多重耐药有关的基因位点主要包括：rtL180M、rtA181M、rtT184G及rtN236T。
根据MassARRAY Assay Design软件设计的延伸引物，MALDI-TOF-MS同时检测、分析上述位点，结果相符。
取PCR反应获得的产物2uL，在1%琼脂糖电泳下可见扩增产物为800bP；利用MALDI-TOF-MS技术高通量同时完成33份标本测定，10份标本出现与DNA测序结果不一致，2份标本MALDI-TOF-MS技术高通量未能检测到，1份存在2个检测位点不同。
结论将MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药性效果理想，具有灵敏度高、准确度高，能为临床诊断、治疗及疾病监测提供依据。
关键词：MassARRAY技术；高通量；乙肝病毒；耐药基因；变异性乙型肝炎病毒属于是一种逆转录病毒，属于HBV的一个显著特点。
从大的角度来说，HBV结构为环状双股DNA，由于逆转录复制过程中需要RNA聚合酶并且依赖RNA的DNA聚合酶作为其主要工具，导致该两种酶均无法对碱基的配对正误进行鉴别，自身也无法完成纠正，导致核苷酸错配率相对较高，将会造成HBV蛋白表达、表型发生变异[1]。
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MassARRAY）技术是一种软电离技术，检测时由基质吸收激光能量，并将其传递给生物分子，使得生物分子发生电离，能实现混合物、生物大分子的检测[2]。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
应用MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异
发表时间：2017-11-16T13:29:15.827Z 来源：《航空军医》2017年第18期作者：陈清林1 吴卉卉2 骆时木2 [导读] 将MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药性效果理想，具有灵敏度高、准确度高，能为临床诊断、治疗及疾病监测提供依据。
（1泉州市第一医院检验科福建泉州 362000；2泉州市第一医院检验科；泉州市第一医院检验科）摘要：目的探讨MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异性。
方法利用MassARRAY技术软件设计iPLEX引物，根据说明书要求完成PCR扩增、SAP反应、引物延伸，并且利用MALDI-TOF-MS采集、分析iPLEX反应获得的相关数据，完成基因变异位点的确定。
选择2014年12月-2017年3月到医院接受治疗的慢性乙型肝炎患者138例，采集多重耐药血清标本，将MALDI-TOF-MS检测获得的HBV基因变异位点区域完成DNA测序，并且将结果与MALDI-TOF-MS结果进行比较。
结果拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等单药耐药或多重耐药有关的基因位点主要包括：rtL180M、rtA181M、rtT184G及rtN236T。
根据MassARRAY Assay Design软件设计的延伸引物，MALDI-TOF-MS同时检测、分析上述位点，结果相符。
取PCR反应获得的产物2uL，在1%琼脂糖电泳下可见扩增产物为800bP；利用MALDI-TOF-MS技术高通量同时完成33份标本测定，10份标本出现与DNA测序结果不一致，2份标本MALDI-TOF-MS技术高通量未能检测到，1份存在2个检测位点不同。
结论将MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药性效果理想，具有灵敏度高、准确度高，能为临床诊断、治疗及疾病监测提供依据。
关键词：MassARRAY技术；高通量；乙肝病毒；耐药基因；变异性
乙型肝炎病毒属于是一种逆转录病毒，属于HBV的一个显著特点。
从大的角度来说，HBV结构为环状双股DNA，由于逆转录复制过程中需要RNA聚合酶并且依赖RNA的DNA聚合酶作为其主要工具，导致该两种酶均无法对碱基的配对正误进行鉴别，自身也无法完成纠正，导致核苷酸错配率相对较高，将会造成HBV蛋白表达、表型发生变异[1]。
基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MassARRAY）技术是一种软电离技术，检测时由基质吸收激光能量，并将其传递给生物分子，使得生物分子发生电离，能实现混合物、生物大分子的检测[2]。
因此，本课题以2014年12月-2017年3月到医院接受治疗的慢性乙型肝炎患者138例作为研究对象，探讨MassARRAY技术高通量检测乙肝病毒耐药基因变异性，报道如下。
1.资料与方法
1.1临床资料
选择2014年12月-2017年3月到医院接受治疗的慢性乙型肝炎患者138例，男83例，女55例，年龄（18-62）岁，平均（34.51±5.93）岁，病程（1-6）年，平均（3.25±0.81）年。
入选患者均符合2010年慢性乙型肝炎防治指南中关于乙型肝炎临床诊断标准者，均对拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等单药耐药或多重耐药。
本课题在伦理委员会批准下完成，患者对检测方法等知情同意。
1.2 仪器与试剂
本课题所需仪器、试剂包括：MassARRAY Assay Design软件设计引物、Viriti384热循环仪、Nanodrop ND-100、MALDI-TOF-MS 仪、DL2000 DNA Maker等，具体厂家见表1。
1.3 方法
（1）标本的采集。
入组患者入院后次日早晨空腹抽取3mL静脉血，静置后放置在抗凝管中，10min离心，速度为3000rpm，取上层清液放入1.5mL离心管中，放入4℃冰箱中备用[3]。
（2）MassARRAY技术高通量分析。
根据iPLEX反应操作说明书完成PCR扩增、SAP反应、引物延伸、脱盐、点样等操作步骤，利用MALDI-TOF-MS仪完成有关数据的采集、分析，从而判读基因变异的位点。
（3）HBV P基因扩增。
根据每一例标本不同设置相关反应体系，2.5uL 10×PCR Buffer，1.0uLdNTPs。
上游产物0.5uL，浓度为100umol/L；下游产物0.5uL，浓度为100umol/L。
0.1uL HotStar Tag DNA Polymerase，2.5uL模板DNA，18uL dH2O，整个反应体系总共25.0uL。
设置反应条件：95℃下连续15min反应，95℃下连续40s反应，57℃下连续40s反应，72℃下连续1min反应，连续进行35个循环，最后在72℃进行10min反应，获得800bp PCR产物。
（4）琼脂糖凝胶回收。
根据AxyPreP DNA Gel Extraction kit说明书完成琼脂糖凝胶回收，并且利用DL2000 DNA Maker完成PCR产物序列的测定和分析[4-5]。
1.3统计分析
采用SPSS18.0软件处理，计数资料行检验，采用n（%）表示，计量资料行t检验，采用（）表示，P<0.05差异有统计学意义。
2结果
2.1 MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒基因变异位点
拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等单药耐药或多重耐药有关的基因位点主要包括：rtL180M、rtA181M、rtT184G及rtN236T。
根据MassARRAY Assay Design软件设计的延伸引物，MALDI-TOF-MS同时检测、分析上述位点，结果相符。
2.2 HBV P基因测序
取PCR反应获得的产物2uL，在1%琼脂糖电泳下可见扩增产物为800bP，见图1。
2.3 MALDI-TOF-MS技术高通量与测序结果比较
利用MALDI-TOF-MS技术高通量同时完成33份标本测定，10份标本出现与DNA测序结果不一致，2份标本MALDI-TOF-MS技术高通量未能检测到，1份存在2个检测位点不同。
3.讨论
近年来，MALDI-TOF-MS技术高通量在乙肝病毒耐药基因变异性中得到应用，且效果理想[6]。
MALDI-TOF-MS技术高通量是近年来发展起来的一种新型的软电离生物质谱技术，其检测时主要利用激光照射样品与基质形成共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量并且将其传递给生物分子。
电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子中获得相应的质子，使得生物分子实现电离，而电离后的离子在电场作用下加速飞行飞过管道，根据达到检测器的飞行时间不同获得测定离子的质荷比与离子飞行时间之间成正比，从而能在质谱仪上获得不同的峰值[7]。
本研究中，拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦等单药耐药或多重耐药有关的基因位点主要包括：rtL180M、rtA181M、rtT184G及rtN236T。
根据MassARRAY Assay Design软件设计的延伸引物，MALDI-TOF-MS同时检测、分析上述位点，结果相符。
MALDI-TOF-MS 技术高通量具有灵敏度高、准确度高及分辨率高等优点，为生命科学领域提供一种强有力的分析手段，能为临床治疗提供依据和参考[8]。
本研究中，利用MALDI-TOF-MS技术高通量同时完成33份标本测定，10份标本出现与DNA测序结果不一致，2份标本MALDI-TOF-MS技术高通量未能检测到，1份存在2个检测位点不同。
提示：MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药性诊断符合率较高，能满足临床需要。
综上所述，将MALDI-TOF-MS技术高通量检测乙肝病毒耐药性效果理想，具有灵敏度高、准确度高，能为临床诊断、治疗及疾病监测提供依据。
参考文献
[1]田红霞，张绪超，王震，等.MassARRAY质谱分析肺癌多基因突变方法的建立与应用[J].中国肿瘤临床，2015，42（17）：856-861.
[2]李伟佳，张志宏，郭巍，等.利用高通量测序技术快速解析草莓病毒基因组序列[J].沈阳农业大学学报，2016，47（05）：536-540.
[3]陈丁莉，李守霞，郭丽丽，等.冀南地区646例新生儿脐带血常见耳聋基因突变的高通量筛查[J].中国妇幼保健，2016，31（19）：4004-4008.
[4]陈瑶，苏跃青，周进福，等.Mass-array芯片技术在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因突变位点检测中的应用[J].中华检验医学杂志，2015，38（12）：822-826.
[5]林壹明，林卫华，余科，等.八例原发性肉碱缺乏症SLC22A5基因突变分析[J].中华医学遗传学杂志，2017，34（1）：35-39.
[6]王志剑，黄志东，邝永辉，等.河源地区乙肝病毒分型和耐药突变基因检测的应用[J].现代诊断与治疗，2016，27（10）：1837-1838.
[7]王志剑，郭振华.HBeAg 转阴前后慢性乙肝患者 HBV cccDNA 荧光定量检测的意义[J]. 国际检验医学杂志，2015，（6）：806-807，810.
[8]付艳玲，余祖江. 核苷类似物治疗慢性乙型肝炎耐药现状及进展[J]. 中国实用内科杂志，2015，35（4）：370-373.。