猪传染性胃肠炎病毒Sa基因的克隆与序列分析
猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装
猪传染性胃肠炎病毒M、sM基因重组杆状病毒的构建及病毒样颗粒的组装冷勇;宋振辉;卿家超;翟少华;买买提·艾孜子【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2013(044)009【摘要】利用RT-PCR方法扩增猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M和sM结构蛋白基因,将其分别克隆入载体pFastBacTM Dual,获得转移质粒pFastBacTM Dual-M 和pFastBacTMDual-M-sM,将重组质粒转化至DH10Bac感受态细胞,经抗性与蓝白斑筛选,获得杆状病毒重组质粒Bacmid-M和Bacmid-M-sM,在Cellfection作用下,将杆状病毒重组质粒转染昆虫细胞sf9,获得重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM.通过Western Blot、间接免疫荧光试验(IFA)进行检测,结果显示:重组蛋白在杆状病毒感染的sf9昆虫细胞中获得正确表达.将重组杆状病毒rBac-M和rBac-M-sM分别感染sf9昆虫细胞,进行TGEV病毒样颗粒(VLPs)的体外组装试验.结果表明,M蛋白在sf9细胞内单独表达,M蛋白和sM在sf9细胞内共同表达,都可形成TGEV病毒样颗粒,而且病毒粒子大小不等,直径在61～101 nm.试验结果为进一步研究TGEV结构蛋白在病毒装配过程中的作用提供了理论依据.【总页数】6页(P1432-1437)【作者】冷勇;宋振辉;卿家超;翟少华;买买提·艾孜子【作者单位】西南大学荣昌校区动物医学系,重庆402460;西南大学荣昌校区动物医学系,重庆402460;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;西南大学荣昌校区动物医学系,重庆402460;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052;新疆农业大学动物医学学院,乌鲁木齐830052【正文语种】中文【中图分类】S852.659.6【相关文献】1.猪传染性胃肠炎病毒S基因杆状病毒/昆虫细胞表达系统重组质粒的构建 [J], 任晓峰;李一经;李广兴;刘宝全2.杆状病毒多基因表达系统介导的轮状病毒样颗粒表达与组装 [J], 龙虎;姚伦广;王姗姗;陈士新;谭佩婵;孙京臣3.重组杆状病毒的构建及其产生HPV4病毒样颗粒 [J], 张卫东;杨泓;甄宏韬;王泽华;黄庆华;曹雪芹4.猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S蛋白5'端基因重组腺病毒的构建及其免疫特性 [J], 唐芳;何孔旺;侯继波;姜平5.用杆状病毒表达系统构建携带JEV E蛋白的逆转录病毒样颗粒 [J], 张富泉;马文煜;姜绍谆;任君萍因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪传染性胃肠炎病毒S基因植物表达载体的构建
猪传染性胃肠炎病毒S基因植物表达载体的构建王龙涛;葛晨霞;高雯雯;付永平;王丕武;胡桂学【期刊名称】《吉林农业大学学报》【年(卷),期】2010(032)006【摘要】应用RT-PCR技术克隆了猪传染性胃肠炎病毒TGEV-JL株S基因全序列,将其连接到pMD18-T载体.经SacⅠ和BamHⅠ酶切鉴定,其产物全长4 320 bp.测序后与TH-98等8个TGEV毒株的S基因序列进行比对,同源性为97.6%～99.8%.将该基因插入植物表达载体pBI121的CaMV35S启动子下游,构建高效植物表达载体,转入根癌农杆菌EHA101中.结果表明:成功构建了重组植物表达载体pBI121-S,获得农杆菌工程菌.【总页数】5页(P670-674)【作者】王龙涛;葛晨霞;高雯雯;付永平;王丕武;胡桂学【作者单位】吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118;吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118;吉林农业大学生物技术中心,长春,130118;吉林农业大学生物技术中心,长春,130118;吉林农业大学生物技术中心,长春,130118;吉林农业大学动物科学技术学院,长春,130118【正文语种】中文【中图分类】S855.3;S858.28【相关文献】1.马尾松GGPPS基因cDNA序列克隆及正义、反义植物表达载体的构建 [J], 陈博雯;覃子海;王鹏良;贾婕;陈虎;刘海龙2.RS基因的植物表达载体和酵母表达载体构建 [J], 方珊茹;阙友雄;林剑伟;陈如凯3.猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C位点的克隆及原核表达载体的构建 [J], 张春叶;沈红;李焕荣;路苹4.大豆GmGolS基因植物表达载体构建及烟草遗传转化 [J], 张军;翟莹;邱爽;何佳琦;周雨明;邬长乐;袁洪淼;刘嘉仪;尹珺伊;史同瑞5.猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点的克隆及原核表达载体的构建 [J], 张春叶;沈红;张莉;李焕荣;路苹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪传染性胃肠炎病毒s基因b、c抗原位点的原核表达与免疫活性
3 小结和讨论（1）通过对哺乳仔猪腹泻样品中TGEV抗原的连续检测，证实在TGE非流行季节，母猪舍的环境中没有TGEV的存在。
（2）通过2个年度对7—10月份连续4个月的育肥猪血清中TGEV抗体的检测，证实在TGE非流行季，保育舍和育肥舍的环境中没有TGEV的存在。
（3）由于TGE和PED的临床症状非常相似，临床上很难区分；因此我们建立了能够区分TGE V和PEDV的多重RT-PCR方法对腹泻粪便进行检测，其得出的结果是可信的。
（4）由于TGEV和PRCV的抗体有交叉反应，因此我们选择了能够区分这二种抗体的鉴别ELI SA方法进行TGE母源抗体和感染抗体的检测，其得出的结果是可信的。
（5）终上所述，在TGE流行过后，TGEV不会在感染猪群中持续存在；TGE的每年季节性流行是由于外界病原的传入所致。
有关TGEV感染后在猪体内的带毒持续时间有待进一步研究。
（6）鉴于目前我国使用的TGE商品化疫苗均为肌肉或穴位注射，很难产生较好的胃肠道局部粘膜免疫，而且母猪接种后母源抗体的维持时间仅为1-2周，所以单纯依靠疫苗预防常常会出现免疫失败的现状。
根据TGEV感染后不会在猪体内长期带毒、形成持续感染的特点，我们建议规模化猪场对TGE的预防主要应做好车辆、人员进出等生物安全措施。
从我们调查的5个猪场中有1个已连续3年多没有发生过TGE、有2个场已2年多没有发生过TGE的事实证明：通过加强生物安全措施完全可以有效地预防TGE的发生。
这也是国外在推行TGE净化的理论依据（1）。
（7）从2010年开始流行全国的猪流行性腹泻（PED），其流行规律与TGE相似（1）；在我们调查的5个猪场中同样有1个已连续3年多没有发生过PED的流行、有2个场已2年多没有发生过PE D的流行。
参考文献（略）猪传染性胃肠炎病毒S基因B、C抗原位点的原核表达与免疫活性汪洋阳 1，黄小波1,2*，曹三杰1,2，文心田1,2，张鑫淼1，段素芬1，阳酉萍1，张丹1，张小会1，（1. 四川农业大学动物医学院，动物传染病与基因芯片实验室，四川雅安，625014；2．四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心，四川成都，611130）摘要本研究开展了猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）S基因的B、C抗原位点区域的原核表达与免疫活性研究。
猪传染性胃肠炎诊断与治疗
猪传染性胃肠炎诊断与治疗猪传染性胃肠炎（PED）是一种严重的猪类传染病，主要发病于婴幼猪，常引起猪群的大规模死亡，并严重影响养猪业的发展。
病因主要是由猪传染性胃肠炎病毒引起，该病毒对肠道有强烈侵袭性，在感染猪只后可引起严重的肠道疾病，表现为腹泻、脱水、厌食等症状。
本文将针对猪传染性胃肠炎的诊断和治疗进行详细介绍。
一、诊断1. 临床表现猪传染性胃肠炎主要表现为腹泻、呕吐、脱水、厌食、体重下降等症状，严重时可导致幼猪死亡。
在病猪中，最常见的表现是水样便，有时伴有泡沫，粪便浓度较高，颜色较淡。
病猪出现厌食、消瘦，精神萎靡，毛色暗淡等现象。
2. 病理变化肠道病理学检查是诊断PED的重要依据之一。
感染PED病毒后，肠道上皮细胞受到破坏，小肠黏膜变薄，结肠极度水肿，并伴有病变黏液的积聚。
在镜检中可以观察到肠道黏膜上皮的脱脱落和脱屑，并有大量淋巴细胞、浆细胞和嗜酸性粒细胞浸润。
3. 实验室检查通过病毒学检测方法，包括逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等，可以从病猪粪便、肠道组织中检测到PED病毒。
对血清标本进行抗体检测也是一种诊断PED的方法。
二、治疗1. 对症治疗治疗PED的关键是对症治疗，主要措施包括防止脱水和电解质紊乱、恢复食欲和营养摄取、控制并发感染等。
病猪应得到充分的休息，保持环境卫生，定期清洁病栏，并适时更换干净的饲料和饮水。
2. 药物治疗在对症治疗的基础上，可以使用一些药物来帮助病猪尽快康复。
可以使用抗菌药物来控制并发感染，如氟哌酸、庆大霉素等。
对于出现严重腹泻和脱水的病猪，可以使用补液盐溶液和氨基酸溶液来纠正脱水和电解质失衡。
3. 预防控制在治疗的也需要加强对PED病毒的预防控制工作。
在饲养管理上，应严格做好猪只的隔离和消毒工作，避免病原菌的传播。
养殖场应每日对粪便、饮水、饲料等进行检查，及时发现异常情况并采取相应措施。
对于久经流行的养殖场，也可以考虑接种疫苗来预防PED的发生。
猪传染性胃肠炎的诊治和防控策略
2023年第05期猪传染性胃肠炎是发病率较高的一种猪病,仔猪感染的致死率较高。
为了避免该病造成的仔猪死亡问题,养殖场应重视提升养殖人员防治疾病的业务能力,确保在临床上能及时准确快速辨别病症类型,及时采取有效的针对性防治措施,降低疾病的发生率,全面保障生猪的健康生长。
1病原特征猪传染性胃肠炎是由猪胃肠炎病毒感染导致的,该病毒会对消化系统的机能产生不良影响。
该病毒属于冠状病毒类,在显微镜下以圆形、椭圆形为主,也有少量的呈多边形。
病毒的直径大约为90 nm以上,繁殖能力比较强。
另外,该病毒在寒冷气候可长时间生存,但不耐热,该病毒在56℃以上,超过30m i n即可失去活性。
因此,高温是消灭该病毒的最好方式之一。
2流行特点猪传染性胃肠炎没有明显的季节性,任何季节都可感染发生。
但以冬季、春季的发病率更高。
各品种、日龄、性别的猪都可感染,以仔猪更易感。
狗、猫等动物也有一定感染率。
因此,这些动物都能成为病菌的携带者。
另外,带毒猪的排泄物含有大量病毒,是造成养猪场内部暴发疾病的主要原因。
已知的传播途径有呼吸道、消化道传播。
该病猪污染的空气、圈舍、饲料、饮水及用具都可列为传播媒介。
该病的致死率较高,养殖人员要掌握该病的临床辨别方法,及时做好该病预防和诊疗工作。
3临床症状仔猪的免疫力较低,感染后会在1d以内出现呕吐症状,严重的仔猪还会出现腹泻。
因此,养殖人员在清理猪圈时,通过观察仔猪的排泄物可初步判断。
一般病猪排泄物呈黄色水样,内有部分未消化的食物,并有恶臭味。
此外,腹泻会导致仔猪脱水体重减轻,并在发病后2~7d内死亡。
成年猪感染的死亡率较小,临床症状也较轻,会出现腹泻、体温上升、采食量减少、精神状态不佳及营养不良等症状,需引起重视。
4病理变化解剖病死猪可见其内脏器官的病变情况。
由于该病毒主要侵害消化道,应重点观察病死猪胃部、肠道是否存在病变。
通常肉眼可见胃部有大量没有消化的乳白色凝块,还有黏膜充血、肿胀等。
小肠充血膨胀,小肠上的绒毛明显萎缩,坏死率较高。
猪传染性胃肠炎的诊断与防治
猪传染性胃肠炎的诊断与防治
猪传染性胃肠炎（Porcine Epidemic Diarrhea，PED）是一种由猪传染性胃肠炎病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Virus，PEDV）引起的急性胃肠炎，主要表现为猪只的急性腹泻和呕吐。
本文将介绍猪传染性胃肠炎的诊断和防治方法。
诊断方法：
1. 病情观察：猪传染性胃肠炎通常表现为急性腹泻和呕吐。
养殖户可以观察猪只的排便情况，如果发现大量稀水样便便和呕吐现象，可能是猪传染性胃肠炎的症状。
2. 病毒检测：可以通过PCR或ELISA等方法对猪只的粪便、胃肠道组织等样本进行病毒检测，以确定是否感染了猪传染性胃肠炎病毒。
3. 病理检查：可以通过对猪只的胃肠道组织进行病理学检查，观察组织病变和病毒感染情况，进一步确诊猪传染性胃肠炎。
防治方法：
1. 强化消毒：对猪舍、饮水设备、饲料槽等进行定期消毒，以防止病毒传播和感染。
2. 隔离感染猪只：对发病猪只进行及时隔离，以防止病毒的扩散。
对新引进的猪只进行隔离和观察，确保其健康状况符合要求后再放入养殖环境中。
3. 提高猪只免疫力：可以通过合理饲养和营养，提高猪只的免疫力，减少感染猪传染性胃肠炎的风险。
4. 疫苗接种：目前已有部分PEDV疫苗可供使用，可以根据养殖户的需求和疫情情况进行疫苗接种，以预防和控制猪传染性胃肠炎的发生。
总结：
猪传染性胃肠炎的诊断主要通过观察猪只的症状、病毒检测和病理学检查等方法来确定。
防治方法包括强化消毒、隔离感染猪只、提高猪只免疫力和疫苗接种等措施，旨在预防和控制猪传染性胃肠炎的发生和传播。
猪传染性胃肠炎的治疗方法
猪传染性胃肠炎的治疗方法猪传染性胃肠炎，通常缩写为PED，是一种由猪传染性胃肠炎病毒引起的急性传染病。
这种病毒主要影响幼猪，尤其是出生后不久的幼猪。
猪传染性胃肠炎对母猪产仔期间和幼猪的健康和生长产生了严重的影响，因此及早发现和治疗是十分重要的。
除了干预控制病毒的传播，治疗也是非常关键的一部分。
下面将介绍关于猪传染性胃肠炎的治疗方法。
1. 控制传染病毒传播猪传染性胃肠炎是一种急性传染病，主要通过粪-口途径传播。
防止和控制病毒的传播是非常重要的。
养殖场应该遵循严格的生物安全措施，限制外部人员、车辆和设备进入养殖场，以减少病毒的传播机会。
对于患有PED病毒的猪只，应该立即隔离治疗以防止病毒继续传播。
2. 给予患者充分的饮食和水源患有猪传染性胃肠炎的幼猪往往会出现腹泻、呕吐和食欲不振等症状，严重影响它们的生长和发育。
在治疗过程中，要确保患者有充分的饮食和水源供给。
可以通过增加饲料的营养价值和口感，以刺激幼猪的食欲，同时要确保水源的清洁和新鲜。
3. 使用抗生素治疗在治疗猪传染性胃肠炎的过程中，抗生素通常被用于控制并发的细菌性感染。
根据兽医的指导，可以选择适当的抗生素进行治疗，常用的抗生素包括土霉素、氧氟沙星等。
在使用抗生素的过程中，要根据抗生素的使用说明正确使用，并遵循兽医的指导和监督。
4. 支持性治疗在治疗中，支持性治疗也是很重要的一部分。
比如使用电解质补液、止泻药物、止吐药物等对症治疗。
同时还要密切监测患者的健康状况，确保其正常的生命体征和行为活动。
5. 提高日常管理水平除了治疗方法，日常的管理也对猪传染性胃肠炎的治疗起着重要作用。
合理的环境温度、空气湿度、饲养密度，以及维生素和矿物质的供给等，都会影响猪只的免疫力和健康状况。
在治疗过程中，需要加强对养殖场的管理工作，确保猪只生活在一个干净、卫生和适宜的环境中。
在治疗猪传染性胃肠炎的过程中，综合利用各种方法是非常重要的。
除了药物治疗之外，合理的控制传染病毒传播、充足的饮食和水源供给、支持性治疗以及良好的日常管理都是非常关键的。
猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用
猪传染性胃肠炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用李子祥;邵春艳;徐琦;孙静;姜胜;何海建;吴媛;王晓杜;宋厚辉【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2017(046)003【摘要】针对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因的保守序列设计引物,以TEGV疫苗毒株为模板,克隆S基因,并构建重组阳性质粒,优化反应体系和扩增条件,建立基于SYBR Green Ⅰ染料的实时荧光定量PCR检测方法,并对其特异性、重复性和灵敏度进行分析.结果显示:建立的检测方法灵敏度可达10拷贝/μL,标准曲线线性关系良好 (r=0.997),扩增效率高,具有良好的特异性和重复性.使用该方法对124份临床疑似TGEV病料进行检测,阳性样本有17份,检测样本的阳性率为13.7%.该方法可用于兽医临床上TGEV的快速检测和流行病学分析.【总页数】5页(P129-133)【作者】李子祥;邵春艳;徐琦;孙静;姜胜;何海建;吴媛;王晓杜;宋厚辉【作者单位】浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安 311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安 311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300;金华职业技术学院农业与生物工程学院,浙江金华 321007;金华职业技术学院农业与生物工程学院,浙江金华 321007;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安 311300;浙江农林大学动物科技学院,浙江临安 311300;浙江农林大学动物健康检测中心,浙江临安311300【正文语种】中文【中图分类】S855.3【相关文献】1.猪传染性胃肠炎病毒SYBR GreenⅡ荧光定量PCR检测方法的建立及在初乳检测上的应用 [J], 龚双燕;李小璟;李幽幽;陈瑛琪;蔡瑶;李雨濛;徐逸飞;徐志文;朱玲2.猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和猪A群轮状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用 [J], 张坤;何启盖3.猪传染性胃肠炎病毒与猪呼吸道冠状病毒荧光RT-PCR鉴别检测方法建立与应用[J], 王慧珊;高志强;王金宝;张鹤晓;乔彩霞;吴亚琼;邢佑尚;朱淑芬4.猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒一步法双重RT-PCR 检测方法的建立与应用 [J], 胡鸿惠;南文金;黄健强;吴静波;彭国良5.猪传染性胃肠炎病毒S基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用[J], 王建中因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗使用说明书
猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗使用说明书[兽用名称]猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒三联活疫苗商品名：无英文名：Swine Transmissble Gastroenteritis,Porcine Epidemic Diarrhea and Porcine Rotavirus Vaccine，live汉语拼音：Zhu Chuanranxing Weichangyan、Zhu Liuxingxing Fuxie yu Zhu Lunzhuangbingdu Sanlian Huoyimiao【主要成分与含量】疫苗含猪传染性胃肠炎病毒弱毒化毒株和猪流行性腹泻病毒弱毒CV777株病毒和猪轮状病毒NX株，每头份疫苗病毒含量≥105.0TCID50。
【性状】为黄白色或微粉色海绵状疏松团块，易与瓶壁脱离，加稀释液后迅速溶解，无异物。
【作用与用途】用于预防猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻与猪轮状病毒感染。
主动免疫接种后7日产生免疫力，免疫期为6个月。
仔猪被动免疫的免疫期至断奶后7日。
【用法与用量】每瓶疫苗稀释至5ml或10ml（根据头份数），妊娠母猪与产仔前40日后海穴位（即尾根与肛门中间凹陷的小窝部位）接种，20日后二免，每次1头份（1ml）；其所生仔猪与断奶后7-10日内接种疫苗1头份。
未免疫母猪所产3日龄以内仔猪接种1头份；进针深度：3日龄仔猪为1.5cm，随猪龄增大而加深，成猪为4cm。
【不良反应】无。
【注意事项】1. 产品仅用于控制这三种病毒引起的腹泻，对于细菌、寄生虫和其他因素引起的腹泻无效。
2. 疫苗运输过程中应防止高温和阳光照射。
3. 妊娠母猪接种疫苗时要适当保定，以免引起机械性流产。
4. 疫苗稀释后，限1小时内用完。
5. 进行抗体检测，在抗体水平较低（TGE、PED中和抗体效价≤1:8，PRV中和抗体效价≤1:16）的情况下使用。
6. 后海穴位接种时，针头保持与脊柱平行或者稍偏上，以免将疫苗注入直肠内。
两种猪腹泻冠状病毒基因组克隆及载体构建的开题报告
两种猪腹泻冠状病毒基因组克隆及载体构建的开题报告
题目：两种猪腹泻冠状病毒基因组克隆及载体构建
背景和意义：
猪腹泻冠状病毒是一种广泛存在于全球各地的猪类肠道疾病病原体，具有高度传染性和致病性。
当前已知的猪腹泻冠状病毒主要分为两种亚型：SADS-CoV和PEDV。
其中，PEDV是一种新兴的病毒，于2010年在中国广东省首次发现，随后迅速传播至
其他地区，引起严重的猪类疾病损失。
虽然PEDV目前已通过疫苗和治疗措施得到一
定程度的控制，但仍然存在病例的发生和病毒的变异。
因此，掌握PEDV病毒的基础
研究、疫苗开发和治疗策略对于保障猪类养殖产业的健康和经济发展至关重要。
研究思路：
本研究旨在克隆和构建PEDV和SADS-CoV基因组的载体，为后续的病毒相关研究提供重要的实验基础。
具体步骤包括：
1. 提取PEDV和SADS-CoV的RNA样品，通过RT-PCR方法扩增全长基因组。
2. 将扩增得到的基因组克隆到适当的质粒载体中，获得完整的基因组克隆构建物。
3. 对所克隆的基因组进行序列鉴定和验证，并通过特异性限制酶切、PCR扩增和序列分析等方法进行检验和分析。
预期结果：
最终将得到PEDV和SADS-CoV完整的基因组克隆构建物，这将对进一步的病毒相关研究提供有效的实验基础。
例如，可用于病毒的生物学特性研究、疫苗开发、抗
体产生和治疗试验等方面。
此外，基因组克隆构建技术也有助于加深对病毒遗传学和
致病机制等方面的研究。
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据Ｇ ｎ ａｋ ｅ Ｂ ｎ ￣已发表 的猪传 染性 胃肠 炎病毒ｓ 因的序 列，设计合成 了ｌ 基 对扩增ｓ 因包含Ａ抗原位 ． ７４ ｐ 因片段（ａ的 基 ￣ ２ｂ基 ， Ｓ）
引物 ，引物 两端 分别有Ｂ ｍＨ Ｉ ａ 和胁ｎ Ⅱ 的酶切 位点 。以感 染 细胞提 取的 病毒 Ｒ ｄＩ ＮＡ为模板 ，经Ｒ ．ｃ 扩增得 到 目的片 ＴＰ Ｒ 段 ，然后将其克ｌ ＪＭＤ１－载体上 ，经蓝 白斑筛选和 酶切鉴定选择 阳性克隆进行序 列测定，构 建成 功的重组质粒命名 ￣ ｔ ｐ ８Ｔ
的研 制 奠 定 基 础 。
均 易感，尤其 以仔猪最 易感，２ 龄 以内的仔猪致死 率高 周
达 １０ ０ ％， 以呕 吐 、 腹 泻 、脱 水 、 高 死 亡 率 为 典 型症 状 ，
１ 材料 与方法
１１ 试 剂 与 材 料 ． １４ 培 养 基 （ 自美 ￣Ｈｙ ｌｎ 公 司 ） ６０ 购 Ｃｏｅ ，
Ｅｃ ｌ Ｈ５ 、猪 传染 性 胃肠 炎 病毒均 有传 染病 实验 室保 ． ｉ ａ ｏＤ
存 ，ｐ ＭＤ１． ｅｔｒ 自大连 宝 生 物 工 程 有 限 公 司 。 ８ＴＶ ｃｏ￣ ｌ １ 引 物 的 设 计 与合 成 ． ２ 根 据 ＧｅＢ ｎ 中 己发 表 Ｔ ＥＶ Ｓ ｎ ａｋ Ｇ
Ｔ ＡＲ ＮＡ Ｆａｍｅ ｔＰ ｒ ｃｔ ｎ Ｋｔ 、Ｄ ＡＫ ＡＤ ｒｇ ｎ ｕ ｆ ａｉ ｉ ｉ ｉ ｏ ＮＡ 分 子 量
标 准 ＤＬ ０ ０ 限 制 性 内 切 酶Ｂ ｍ 和 Ｈｉ ｌ 、ＴＤＮ ２０ 、 ａ ＨＩ ｎ Ｉ ４ Ａ ｄＩ 连 接 酶 、胶 回 收 纯 化 试 剂 盒 购 自大 连 宝 生 物 工 程 有 限公 司 ， Ｘ ｇ ｌ ＩＴ —ａ、 Ｐ Ｇ购 自Ｍｅｋ 公 司 、 Ｄ Ｐ ｒ Ｅ Ｃ购 自Ｓｇ 公 ｉｍａ
为ｐ ＭＤ１．－ａ ８ＴＳ 。用Ｄ ｓ ｒ 件将其 与ＧｅＢ ｎ ． 的序 列进行 同源性比较 ，结 果表 明，核 苷酸 同源性 为９ ％以上 ，氨基 ＮＡ ｔ 软 ａ ｎ ａｋ． Ｅ ７
酸同源性 为９ ％以上 。根据 猪传染性 胃肠 炎病毒Ｓ 基 因核苷 酸序 列绘制 的系统进化 树，结果表 明，试验株 与Ｔ ．８ 亲 ３ ａ Ｈ９株
成 年猪死 亡率较低 ，但 是会造 成机体 消瘦 ，降低饲 料利 用率等【。 目前该病 已遍布全世 界各国，给养猪业造成 了 Ｉ ｊ
巨大 的经 济 损 失 。
Ｔ Ｖ由４ 结 构 蛋 白 和 ３ 非 结 构 蛋 白构 成 ， 其 中 Ｓ ＧＥ 种 种
新 生 牛 血 清 购 自上 海 华 美 公 司 、Ｔ ｑ Ｄ ａ ＮＡ聚 合 酶 、
司 、胰 蛋 白胨 和 酵 母 提 取 物 购 自Ｏ ＯＩ 司 ，Ｓ 细 胞 、 Ｘ Ｄ公 Ｔ
蛋 白 为大 的糖 蛋 白， 形 成 病 毒 突 起 ，携 带 主 要 的Ｂ淋 巴细 胞 抗 原 决 定 簇 ， 是 唯 一 能 诱 导 机 体 产 生 中 和 抗 体 和 提 供 免 疫 保 护 作 用 的 结 构 蛋 白 ； 含 有 宿 主 细 胞 氨 肽 酶 受 体
缘性最近。
关键词 胃肠炎病毒
Ｓ 基因 克 隆 序列分析 ａ
文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １０ ．７ ３２ １）４０ ０．３ ０ ７１３ （０ １０ ．０ １０
中图 分 类 号 ： ￥ ５ ．５９ ８２６ ＋． ４
猪 传 染 性 胃 肠 炎 病 毒 （ｒｎｍｉ ｉｌ ａｔ ｅｔｒｉ Ｔａｓ ｓ ｂｅ ｓ ｏｎｅｉｓ ｓ ｇ ｒ ｔ ｖｒｓ ｆｗｉｅ Ｇ Ｖ 隶属 于 冠 状 病 毒 科 冠 状 病 毒 属 ，是 引 ｉ ｎ． Ｅ ） ｕｏｓ Ｔ 起 仔 猪 病 毒 性 腹 泻 的 重 要 病 原 ， 由其 引 起 的 猪 传 染 性 胃 肠 炎（ｒ ｓ ｓｉｌ ｇｓ ｏ ｎｅｉｓｏ ｗ ｎ ，Ｇ ） 一 种 急 Ｔａ ｍｉ ｂｅ ａｔ ｅｔ ｔ ｆｓ ｉｅＴ Ｅ 是 ｎ ｓ ｒ ｒｉ 性 、高度接触性 肠道传染病 ，是世 界动物卫 生组织（Ｉ） Ｏ Ｅ 法 典 中Ｂ 疫病 中 必 检 的 猪 传 染 病 。不 同年 龄 和 品 种 的 猪 类
力 的 同时 又 有 毒 力 返 强 的 可 能 。 而 灭 活 疫 苗 接 种 后 虽 能 诱 导 机 体 产 生 比 弱 毒 疫 苗 更 高 的 循 环 抗 体 ，但 因 机 体 缺 乏 局 部 的黏 膜 免 疫 ， 不 能 有 效 地抵 抗 外 界野 毒 的侵 袭 ［。 ６ 】 鉴 于 此 ， 本 研 究 对 猪 传 染 性 胃肠 炎 病 毒 Ｓ 基 因进 行 克 隆 ａ 与 序 列 分 析 ，为 猪 传 染 性 胃肠 炎 病 毒 新 型 基 因 工 程 疫 苗
２ １ 年第 ４期 （ ０１ 总第 １ １期 ） ７
研
试 验 研 究
猪 传 染 性 胃肠 炎病 毒 Ｓ ａ基 因的 克 隆 与序 列 分 析
温 海 燕 （ 菏泽摘要 将猪传 染性 胃 炎病毒接种ｓ 细胞进行增殖 ，待 细胞 出现明显的病 变后 ，将 细胞反 复冻融３ 收获 病毒 。根 肠 Ｔ 次
（ＡＰ 的识别位 点 ，在 决定宿 主细胞 亲嗜性 方面起 关键 Ｐ Ｎ）
作 用 。ｓ 因 长 度 为４３ ｘ０ｂ ， 包 括 Ａ、Ｂ、 Ｃ、Ｄ４ 基 ．５ １ ｐ 个
位 点 ，其 中 Ａ 点又 可 分 为 Ａ 、Ａ 、Ａｃ３ 亚 位 点 ，Ａ 位 ａ ｂ 种 位 点暴 露 于 病 毒 的表 面 ，主 要 诱 导 中 和 抗 体 的产 生 ， 并 且 不 同分 离 株 的Ａ位 点保 守 性 强 ［ 】 ３。 ， ４ 目前 国 际 上 已培 育 多 种 弱 毒 疫 苗 ，有 德 国 的Ｂ ．０ Ｉ 疫 ３ 苗 株 ，匈 牙 利 的Ｃ Ｐ 毒 株 ，美 国 的Ｔ Ｅ Ｖ ｃ 等等 ， 国 Ｋ 弱 Ｇ ．ａ株 内哈 尔 滨 兽 医 研 究 所 也 培 育 成 功 华 株 弱 毒 疫 苗 【。 弱 毒株 ５ 】 大 多 是 经 不 同 方 式 的 人 工 致 弱 而 成 ， 一 般 的 弱 毒 疫 苗 均 有 一 定 的 残 余 毒 力 与 致 病 性 ，在 动 物 体 内增 殖 诱 发 免 疫