纤维素降解菌的分离与鉴定..
高温纤维素降解细菌的筛选与鉴定
ｄ ｉ １ ３ ６ ／ ．ｓｎ １ ０ ｏ ：０． ９ ９ ｊｉｓ ． ０ ７—０ ３ ． ０ ２ ０ ． ０ ８ ４ ２ １ ．３ ０ ２
高 温 纤 维 素 降解 细 菌 的筛 选 与鉴 定
常慧萍 ， 张 红 ， 杨 雪 ， 鸿鹏 ， 青梅 ， 文玲 韩 郝 毛
细菌， 为堆肥 菌 剂 的制作 提供 高效 菌株 ．
１ 材 料 与 方 法 １ １ 样 品 ．
堆腐 的牛粪 发酵 基 质 ， 自郑 州市 惠 济 区某 奶 牛养 殖场 ． 采
１ ２ 培 养 基 ．
赫 奇逊 培养 基 （ ／ ０ ） ： Ｍ ｇ １０ ０ｍＬ Ｃ Ｃ—Ｎ ， Ｈ Ｐ ４１ ０ Ｍ Ｓ ４・ Ｈ Ｏ ０ ３ Ｎ Ｃ ． ， ａ １ ６ ２ ａ５ Ｋ ２ Ｏ ． ， ｇ Ｏ ７ ２ ． ， ａ １０ １ Ｃ Ｃ２ Ｈ Ｏ
（ 南教 育 学 院 生 态学 重 点 学科 组 ， 南 郑 州 ４ ０ ４ ） 河 河 ５０ ６
摘要： 以堆 腐 的发 酵 牛 粪 为 原 料 筛选 高 温 纤 维 素 降 解 细 茵 ． 过 纤 维 素 刚 果 红 培 养 基 初 筛 、 定发 酵 液 的 Ｃ 通 测 Ｍ—
Ｃｓ ａｅ和 Ｆ Ａ ｓ Ｐ ａ ｅ活 力 的 复 筛 ， 筛选 出 四株 酶 活较 高 的 茵 株 ， 别 是 １ ０ 、 １ ５ １ ０ 分 １ １ １ ０ 、 １６和 １ ０ ． 茵 落 特 征 、 １８ 从 茵体 形 态 、
０ １ Ｆ Ｃ３ ． １ Ｎ Ｎ ３ ． ， 脂 ２ ， １ ０ ，Ｈ ７ ０～ ． ． ． ，ｅ １ ０ ０ ， ａ Ｏ ５ 琼 ２ Ｏ 水 ０ｍＬ ｐ ． ７ ２ ０
纤 维素 刚果 红培 养基 （／ ０ Ｌ ： 晶纤维 素 １ ８ ， Ｈ２Ｏ ． ， Ｓ ・ Ｈ２ ．５ 刚果 红 ０ ２ 明 ｇ １０ ０ｍ ） 微 ．８ Ｋ Ｐ ４ ５ Ｍｇ Ｏ ７ Ｏ ０ ２ ， ０ ．，
实验一 纤维素的微生物降解
实验一纤维素的微生物降解一、实验目的1、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。
2、了解纤维素分解的基本理论，并掌握有关纤维素好氧和厌氧分解的一些基本实验技术。
二、实验原理1、从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化2、常用的分离纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法等。
稀释涂布平板法的步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法的步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。
3、测定纤维素分解酶，可观察其对提供的唯一碳源滤纸纤维的分解情况确定。
如果滤纸溃烂，说明有纤维素分解菌的作用。
4、纤维素分解微生物可根据需氧的与否分为两大类：好氧分解微生物和厌氧分解微生物。
三、实验材料1. 培养基A. 赫奇逊液固体培养基（好氧）：KH2PO4 1.0g，MgSO4٠7H2O 0.3g，FeCl3 0.01g，CaCl2 0.1g，NaNO3 2.5g，蒸馏水1000ml，pH值为7.2～7.3，0.1MPa灭菌20min。
B. 厌氧液体培养基：牛肉膏1.5g，蛋白胨2.5g，水1000ml，CaCO3 2.0g；0.1MPa 灭菌20min。
2. 器材A.近3mm粒度菜园土。
B.镊子，无淀粉滤纸，1ml和10ml无菌吸管，无菌水，天平。
3、土样：格物楼西，小树根部约10cm，地表覆盖较多枯叶、枯草，取土深度约15cm。
四、方法步骤1. 土粒法分离纤维素的好氧分解微生物⏹采土方式：在选好适当地点后，用小铲子除去表土，取离地面5～15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好、标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
⏹将赫奇逊培养基趁热倒入培养皿，冷却后加直径近于培养皿的滤纸一张，用少量培养液润湿。
高效纤维素降解细菌的分离鉴定及酶学特性
１ 材 料 与 方 法
１ ． １ 供 试材 料
粮食短缺 、 能源危机和环境污染等问题的巨大潜力 。在我 国 ， 大部分秸秆和林副产品被用作燃 料或在 田间被直接烧 掉 ， 不
但破坏 了生态平衡 ， 而且污染环境 、 存在火灾隐患 ； 同时 ， 由于 秸秆燃烧热能利用 率较低 （ １ ０ ％以下 ） ， 直接燃烧 秸秆是一 种 浪费 。因此 ， 如何有效地开 发利用纤维 素资源 已筛选优 良菌种是提高纤维素 酶活性 ， 从而提高纤维 素降解效率的关键 ， 可使板栗苞壳纤维 素在生 物堆肥 中得到有效的降解 ， 提高生物堆肥 的利用价值 。 但 是板栗苞壳纤维素降解菌的相关研究至今鲜有报道 。本研
究 通过 富集培养 ， 利用纤维素为唯一碳源的平板分离法 ， 从板 栗苞壳 中分离 出了高效降解纤 维素 的细菌 ， 并对其 酶活性进 行 测定 ， 经形态观察、 生 理生化试 验并结合 １ ６ Ｓ ｒ Ｄ Ｎ Ａ 序 列分 析对其进行鉴定 ， 对该 菌生长和产纤 维素酶动力学 行为做 了
江苏农 业科学
２ ０ １ ３年第 ４ １ 卷第 ３期
． － — —３ ０ ５． － — —
思 斯， 王明月， 刘 绍雄， 等．高效纤维素降解细菌的分 离鉴定及酶 学特性 ［ Ｊ ］ ．江苏农 业科 学， ２ ０ １ ３ ， ４ １ （ ３ ） ： ３ ０ ５ — ３ ０ ８
高效纤维素 降解 细菌 的分离鉴定及酶学特性
１ ． ３ 培 养基 种 子 培养 基 ： ２ ０ ｇ ／ Ｌ羧 甲基纤 维 素 钠 （ Ｃ Ｍ Ｃ— Ｎ ａ ） 、 １ ． ５ ｇ ／ Ｌ （ Ｎ Ｈ ４ ） ２ Ｓ Ｏ ４ 、 ２ ． ５ ｇ ／ Ｌ Ｎ ａ ２ Ｈ Ｐ ０ ４ 、 １ ． ５ ｇ ／ Ｌ Ｋ Ｈ ２ Ｐ Ｏ ４ 、 ０ ． ３ ｇ ／ Ｌ Ｍｇ Ｓ ０ ４・ ７ Ｈ ２ Ｏ 、 ０ ． ３ ｇ ／ Ｌ Ｃ ａ Ｃ １ ２・ ２ Ｈ ２ Ｏ 、 ０ ． １ ｇ ／ Ｌ Ｆ ｅ Ｓ Ｏ ４ 、 ０ ． １ ｇ ／ Ｌ
两株纤维素降解真菌的分离鉴定及其产纤维素酶酶学性质的初步研究
Ａ ｂ ｔａ ：Ｉ ｈｉ ｘｐ ｒｍ ｅ ｓ ｒ ｃｔ ｎ ｔ ｓ ｅ ｅ ｉ ｎｔ，８ ａ ｐｌｓ ｏ ｏｉ ｂｅｏｗ ｏｒ ｓ ｌ ｎ ｕｔ ｉ ２ ｓ ｍ ｅ ｆｓ ｌ ｌ ｆ ｅ ｔｆｏｏｒａ ｄ ｐ ｒｄ ｗｏｏ ｅ ｅｃ ｌ ｃ ｅ ｒ ｍ ｅｌ ｄ ｗ ｒ ｏｌｅ ｔ ｄ ｆ ｏ ｃ ｌｕ— ｌ ｓ ｅ ｒｃ ｄ ｎｖ ｒ ｏ ｅ ｎ ｉｈｅ ｅ ｉｏｎｍｅｎ ． Ａ ｐ ｏｘｉ ａ ｅ ｙ ５０ ｆ ｇｉ ｔ ａｎｓ ｔ ｐｒ ｍ ｔ ｌ ３ ０ ｕｎ ｓ ｒ ｉ ｗｈｉｈ ｏ ｄ ｃ ｃ ｕｌ ｈｙ ｏ ｙ ｅ ｅｌｕｌ ｅ ｄｒ ｌ ｚ ｃ ｌ ｏｓ ｗ ｅ ｅ ｓ ｌ ｔ ｄ． ｒ ｉｏ ａ ｅ Ｔ ｈｒ ｕｇｈ ｔ ｅ ｏ ｃ ｅ ｎｉ ｏ ｈｅｓ ｃ ｎｄ ｓ ｒ ｅ ｎｇ，１６ｆ ｎｇａ ｔａｉ ｉｈ ｇ ｃ ｌ ｏｓ ｃ ｉ ｔ ｅ ｅｏｂ ａｎｅ ． Ｔ ｈ ｖｃ ｌｗａ ｓ ｄ ａ ｕ ｌｓ ｒ ｎｓｗ ｔ ｈｉｈ ｅｌｕｌ ｅ ａ ｔｖｉｙ ｗ ｒ ｔ ｉ ｄ ｅ Ａ ｉｅ ｓ ｕ ｅ ｓ ｓ ｓ ｒｔ ｕｂ ｔ ａ ｅ。ｔ ｒ ｈｅ ｃ ｕｄｅ ｃ ｌ ａ ｅ ａ ｔｖｔ １ ｕｎ ｔａｉ ｗａ ｈａ ａ ｔ ｒｚ ｄ ａ ｗ ｏ ｓ ｒ ｉ ｓ ｎａ ｅ ｓ ｅｌｕｌｓ ｃ ｉ ｉｙ ｏｆ ６ ｆ ｇｉｓ ｒ ｎｓ ｓ ｃ ｒ ｃ ｅ ｉｅ ｎｄ ｔ ｔ ａ ｎ ｍ ｄ ａ Ｓ１ ｄ Ｘ ５ ０ ａｎ
素 降 解 真 菌 ， 次 筛 选 后 得 到 １ 株 纤 维 素 酶活 性 较 高 的 真 菌 。 以 Ａｖｃｌ 底 物 ， 定 １ 二 ６ ｉ 为 ｅ 测 ６株 纤 维 素 降 解 真 菌 的粗 酶
2.3土壤中纤维素分解菌的分离
课题3 分解纤维素的微生物 的分离
一、基础知识
（一） 纤维素与纤维素酶 1.纤维素在生物圈的分布
纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质. 植物的根茎叶等器官都含有大量的维生素.地球 上的植物每年产生的纤维素超过70亿吨.
人类以淀粉为主要能量来源，但完全不能消 化纤维素，而反刍动物和大量的微生物则主要以 纤维素为能量来源。这是因为，在反刍动物的瘤 胃中生活着大量的可以分解纤维素的微生物。
3.将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸 应该埋进土壤多深？
答：将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相 对聚集，实际上是人工设置纤维素分解菌生存 的适宜环境。一般应将纸埋于深约10 cm左右 腐殖土壤中。
4.想一想，两种刚果红染色法各有哪些 优点与不足？你打算选用哪一种方法？
方法一是传统的方法，缺点是操作繁 琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生 混杂；其优点是这样显示出的颜色反应 基本上是纤维素分解菌的作用。
(2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自 培养基中的 化合物A ，实验需要振荡培养， 由此推测“目的菌”的代谢类型 是 异养需氧 。
例1(20分)某化工厂的污水池 中，含有一种有害的、难于降 解的有机化合物A。研究人员 用化合物A、磷酸盐、镁盐以 及微量元素配制的培养基，成 功地筛选到能高效降解化合物 A的细菌(目的菌)。实验的主 要步骤如图所示。请分析回答 问题：（北京卷）
（二）分离的结果是否一致： 由于在土壤中细菌的数量远远高于真菌 和放线菌的数量，因此最容易分离得到的是 细菌。但由于所取土样的环境不同，学生也 可能得到真菌和放线菌等不同的分离结果。
P30课题延伸：纤维素酶的测定方法
一般是采用对纤维素酶分解 滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖 进行定量的测定
纤维素分解微生物的分离与鉴定
环境微生物技术实验总结报告一、国内外研究进展：①纤维素资源据不完全统计，全球每年通过光合作用产生的植物物质高达1.8×1011 t，这些植物物质所含的能量相当于全球人类每年能量消耗量的20倍，食物中所含能量的200倍。
纤维素是构成植物细胞的基本成分，纤维素占全球植物总干重的30%一50%，是地球上分布最广、含量最丰富的碳水化合物，它存在于所有植物当中。
在生物界中，结合于有机体中的碳达27×1010t，在自然界有机体中构成纤维素的碳约占40%，据此估算，在植物界中纤维素的总量约达26.0×1010t，而且自然界中的植物原料是年复一年地不断生长和更新的，可以说，纤维素在自然界中是一种最丰富的可再生的有机资源。
纤维素是一种不能被大多数动植物直接利用的多糖物质。
但对人类来说只要能将其降解成小分子物质，纤维素就会成为一种有广阔应用前景的资源。
而且这种潜在的资源数量是惊人的，其中的大多数作为绿色植物的成分在维持生态平衡中起作用而不宜利用，但是仍有数量可观的纤维素由人类生活和生产产生，它们主要存在于农作物秸秆和城市垃圾之类的废弃物中。
灾荒或战乱造成的粮食危机依然是正存在的和潜在的威胁;随着全球经济的飞速发展，地球上石油、煤炭的储量正以惊人的速度减少，能源危机成了世界大多数国家所面临的一个严峻问题;由于对资源的破坏性开采和利用，人类赖以生存的环境正在不断地恶化，对可再生资源利用的研究与开发的可持续发展战略己在世界各国逐步展开。
如何处理和利用废弃纤维素将成为一个十分紧要的问题。
②农业废弃物资源的利用现状植物纤维素资源的开发利用对解决粮食和能源短缺以及环境污染问题有极其深远的意义。
我国的纤维素资源极为丰富，每年的农作物秸秆产量达5.7x107吨，约相当于北方草原年打草量的50倍。
但是，农作物秸秆产生数量多且产生时间集中(每年到收获季节农村就会有大量的秸秆产生)，而我国的农作物秸秆主要用于燃料、畜禽饲料与自然堆肥，不仅利用效率低，而且随着农村生活水平的提高，农作物秸秆成为农村固体废弃物的主要来源。
稻秆纤维素降解菌的分离筛选和降解性能研究
Ｇｕ Ｔｉｎｇ，Ｓｈｅｎ Ｗ ｅｉｓｈｏｕ，Ｚｈｏｎｇ Ｗ ｅｎｈｕｉ （Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｅｎｖｉｒ ｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｎａｎｊｉｎｇ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ ２１００４６，Ｃｈｉｎａ）
第 １１卷 第 １期
南 京 师 范 大 学 学 报 （工 程 技 术 版 ）
Ｖｏ１．１ｌ Ｎｏ．１
２０１ １年 ３月 ＪＯＵＲＮＡＬ ＯＦ ＮＡＮＪＩＮＧ ＮＯＲＭＡＬ ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ（ＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ ＡＮＤ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ ＥＤＩＴＩＯＮ）
Ｍ ａｒ，２０１１
稻 秆 纤维 素降 解 菌 的 分 离 筛选 和 降 解 性 能研 究
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｒｅｅ ｈｉｇｈ－－ｅｆｉ ｃｉｅｎｔ ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ－－ｄｅｇｒａｄｉｎｇ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｒｅｄ ｓｏｉｌ ｏｆ ｐａｄｄｙ ｆ ｉｅｌｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ—ｉｎｄｕｃｅｄ ｍｕｔａｔｉｏｎ， ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｏｎｅ ｂａｅｔｅｒｉａｌ ｓｔｒａｉｎ ｎａｍｅｄ ａｓ ＹＢ２０ ａｎｄ ｔｗｏ ｆｕｎｇａｌ ｓｔｒａｉｎｓ Ｆ９ ａｎｄ ＹＦ１５． Ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｏｆ ＹＢ２０ ｗａｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ ａｓ ａ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ ｓｐ，ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ Ｆ９ ａｎｄ ＹＦ１５ ｗｅｒｅ ｂｏｔｈ ｃｈａｒａｃｔｅｒ ｉｚｅｄ ａｓ Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ ｖｉｒｉｄｅ ｓｐ． Ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｃｅｌｌｕｌａｓｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｔｈｒｅｅ ｓｔｒａｉｎｓ ｗｅｒｅ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ，ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｈｅ
46 尿素分解菌、纤维素分解菌的筛选和分离-【一轮全考点】备战2022年高考生物一轮复习专题课件
实例
（Taq DNA聚合酶） 缺乏碳源：分离出自养型微生物
分离耐寒微生物：低温环境：如冰川 分离分解石油的细菌：油田
石油作为唯一碳源：分离出石油分解菌
以尿素作为唯一氮源：分离出尿素分解菌 以纤维素作为主要碳源：分离出纤维素分解菌
将培养基放在高温环境中培养：分离出耐高温的微生物
将培养基pH调至较低水平中培养：分离出耐酸的微生物
也会形成以尿素分解菌为中心的红色的圈（但不是透明圈）
原因：分解尿素的细菌，能够将尿素分解成氨，使培养基PH升高， 使酚红指示剂变红
纤维素分解菌的筛选和鉴定
鉴别纤维素分解菌的培养基
碳源
思考1：配方中各物质为微生物生长提供的 主要营养物质分别是？
碳源、氮源、生长因子 无机盐 凝固剂
碳源、生长因子
水
纤维素分解菌的筛选和鉴定
选择纤维素分解菌的培养基
碳源（主要） 氮源、无机盐
思考21：这配个方培中养各基物对质微为生微物生是物否生具长有提选供择的 作主用要？营如养果物具质有分，别是如？何进行选择的？ 有 培养基中纤维素为主要碳源，更适合
能够分解纤维素的微生物大量繁殖
无机盐
思考3：如何设计一个对照实验，说明选择 培养基的作用？
在草食性动物等的消化道内，有分解纤维素的微生物，这些微生物和土 壤中分解纤维素的微生物可产生纤维素酶而分解纤维素
基础知识 纤维素酶
纤维素分解菌的筛选和鉴定
组成：一种复合酶，至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶
作用： 纤维素 C1酶、Cx酶
葡萄糖苷酶 纤维二糖
葡萄糖
证明：
纤维素分解菌的筛选和鉴定
实验基本原则
类型
平行重复原则
对照原则
降解纤维素嗜热真菌的筛选与分子鉴定
Ｊｕｎｌ ｆ ｕｉ ｇｉ ｌ ｒ ａｄＦｒｓｙＵ ｉ ｒ ｔ Ｎ ｔｒ ｃ ｎｅＥ ｉｏ ） ｏｒａ ｏ ｊ ｎＡ ｒ ｕｔ ｅ ｎ ｏｅｔ ｎｖ ｓｙ（ ａ ａ Ｓ ｉ ｃ ｄｔ ｎ Ｆ ａ ｃ ｕ ｒ ｅｉ ｕｌ ｅ ｉ
第 ４ 卷 第 ２期 ｜ Ｄ ２１ ０ １年 ３月
降解纤维素嗜热真菌的筛选 与分子鉴定
林 白雪 刘 ， 斌 ，张宁 宁 谢 联辉 ，
（． １福建农林大学植物病毒研究所 ；． ２ 福建农林大学食品科 学学院， 福建 福州 ３ ００ ） ５０ ２
摘 要：为获得有强降解纤维 素能力的嗜热 真菌 ， 以羧 甲基纤维素钠培养基为基础培养基 ， 从温泉 中初筛获得 ２ ３株透明水解
圈较大 的降解纤维素 的嗜热真菌． 经过液体发酵复筛 得到 １ 株 降解能力 较强的 优 良菌株 ． ２ 通过 １ＳｒＮ ８ Ａ序列 分析 ， Ｄ 对之
中的 ７株 嗜热真菌进行分子鉴定 ， 结果 表明 ， ７株嗜热真菌分别属于曲霉属 、 枝孢霉属和毛孢酵母 属． 关键词 ： 纤维素酶 ；嗜热真菌 ； 筛选 ； 分子鉴定
Ｋｅ ｏｄ ： ｅｕａｅ ｔｅ ｏ ｈｈ ｇ；ｓｒ ｎ ｇ ｉｅｔ ｃｔｎ ｙｗ ｒ ｓ ｃｌ ｓ ；ｈ ｒ ｐｉｃｆ ｉ ｃｅｉ ； ｄｎｉ ａｏ ｌ ｌ ｍ ｎ ｕ ｅｎ ｉ ｆ ｉ
纤 维素是 地球 上最 丰 富也 最廉 价 的可再 生资 源． 维素 酶可 以降解 纤维 生成 葡萄糖 ， 而发 酵生成 乙 纤 进 醇 ． 物 乙醇 是最 有发 展前景 的新 型可 再 生 能源 之 一 ， 发 前 景广 阔¨ ． 生 开 Ｊ此外 ， 纤维 素 酶 还 可 广泛 用 于 食 品、 纺织 、 涤 、 料 、 酒 、 油勘探 等领 域 Ｊ 洗 饲 酿 石 ．
堆肥用木质纤维素降解菌筛选技术规程
堆肥用木质纤维素降解菌筛选技术规程堆肥用木质纤维素降解菌筛选技术规程一、概述本技术规程适用于堆肥中的木质纤维素降解菌的筛选，旨在提高堆肥过程中木质纤维素的降解效率，加快堆肥的成熟度。
二、原材料1. 堆肥原料：任何含有木质纤维素的堆肥原料，如柿子皮、玉米秸秆、豆腐渣、鸡粪等。
2. 周转土壤：适当数量的质量稳定的土壤，用于混合筛选后的菌株以促进其生长繁殖。
三、筛选工艺1. 采集样品：从堆肥中采集样品，将其放入无菌的容器中保存备用。
2. 建立简单培养基：选择含有纤维素的培养基，如CMC-Na、微晶纤维素等，加入必要的营养物质，如氮源、无机盐等。
对于难以发酵的样品，可以采用先采用酸或碱法降解后，再加入培养基。
3. 接种菌株：将采集到的样品转移到培养基中，进行菌株接种。
4. 筛选菌株：在温度为25-35摄氏度，pH在6.5-7.5的条件下，进行连续传代或称呼吸发酵，筛选出挥发脂肪酸和酶活性高且能很好地降解纤维素的菌株。
5. 培养单一菌株：将所得到的优良菌株进行单一化处理，并进行在基于液体培养基中大量生产。
四、生产应用1. 生产培养液：利用大质量生产的单一菌株，生产木质纤维素降解菌培养液。
2. 将所获得的菌株加入堆肥中：根据堆肥原料的特点，适当调整降解菌添加量，加入筛选得到的木质纤维素降解菌到堆肥中，加速堆肥的成熟过程，提高堆肥品质。
3. 将获得的菌株应用于生物质降解和生物质转化工程：将所获得的菌株应用于生物质能源开发，例如生物乙醇和生物柴油的生产，从而实现木质纤维素的高效利用。
五、质量控制要求1. 筛选得到的优良菌株应符合菌种鉴定标准，如生物特性、代谢途径、遗传特性等。
2. 优良菌株的筛选应该有重复性和可重复性，同时筛选得到的菌株应该色泽正常，存活率高。
3. 如果需要将筛选得到的菌株应用于生物质能源开发，应对所得到的菌株进行基因治疗，减少或消除对人体或环境的潜在危害，以保证其应用安全性和环保性。
六、安全措施1. 实验室操作过程中，应注意微生物的无害化处理和卫生管理，进行废弃物和培养基的规范处理。