犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及鉴定
犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定
果获 得 ２株 能稳 定分 泌抗 犬瘟 热病毒 单 克 隆抗 体 细胞株 ， 分 别命 名 为 ０ ６ ２ — １ 、 ０ ６ ２ — ２ 。实验 室 已有 的 一株 单 克
隆抗 体 为 ６ Ｈ８ 。 交叉反应 试验 及 间接免 疫 荧光 染 色检 测表 明 ， ３ 株 单 克 隆抗体 的特 异性 较好 ； 经过 体 外连 续
犬 瘟 热病 毒 单 克 隆 抗 体 的 制 备及 其 生 物 学 特 性 鉴 定
王 铮 ， 王铁 成 ， 冯 娜。 ， 虞 一聪 。 ， 高 玉伟 ， 杨 松 涛 。 ， 夏 咸 柱
（ １ ． 吉林农业 大学 ， 吉林长春 １ ３ ０ ０ ６ ２ ； ２ ． 军 事 医 学 科 学 院 军 事 兽 医研 究 所 ， 吉林长春 １ ３ ０ ０ ６ ２ ；
６ Ｈ８识 别 的 位 点 与 其 他 两 株 不 同 。
关键 词 ： 犬 瘟热病 毒 ； 单克 隆抗 体 ； 间接 酶联免 疫 吸 附试 验 ； 相加 酶联 免疫 吸 附试验
中 图分 类 号 ： ￥ ８ ５ ２ ． ６ ５ ５ 文献标识码 ： Ａ 文章编 号： ｌ Ｏ ０ ７ — ５ ０ ３ ８ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ３ — ０ ０ ７ ３ — ０ ５
制 时机 ， 给毛 皮经 济动 物产 业带 来 巨大损 失 ］ 。 单克 隆抗 体技 术 目前 已广泛 应 用 于生 物 医学 诊 断和 治疗 领域 ， 是 现代 生命 科学 研 究 的重 要 工 具＿ ４ ］ 。 抗犬 瘟热 单克 隆抗 体 因其具 有较 高的特 异 性 已成 为 治疗 和诊 断犬 瘟 热 的 主要 试 剂 之 一 。Ｃ Ｄ 的常 规 诊 断 主要依 据流 行 病 学 和 临 床 症 状 ， 继 而 通 过 实 验 室 诊断 技术 ， 如免疫荧光抗体技术 （ Ｆ Ａ） 和 反 转 录一 聚 合酶链 反 应 （ Ｒ Ｔ — Ｐ Ｃ Ｒ） 等方 法进 行 诊 断＿ ５ ］ 。而 Ｃ Ｄ Ｖ 单 克 隆抗体 具 有 效 价 高 、 特 异 性 强 和 制 备 方 便 等 优
抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定周洁;姜骞;张洪英;刘家森;刘立奎;陈洪岩;韩凌霞;司昌德;曲连东【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2007(029)007【摘要】以纯化的重组犬瘟热病毒(CDV)N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1:106、1:105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础.【总页数】5页(P528-532)【作者】周洁;姜骞;张洪英;刘家森;刘立奎;陈洪岩;韩凌霞;司昌德;曲连东【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,农业部实验动物质量监督检验测试中心,黑龙江,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S852.43【相关文献】1.抗重组人乳腺珠蛋白单克隆抗体的制备及其特异性鉴定 [J], 刘秀娜;郭建秀;罗羽;胡川闽2.重组SARS-CoV核衣壳蛋白的表达纯化及其单克隆抗体的制备鉴定 [J], 张娟;余晓林;陈维贤;陶鹏;唐霓;黄爱龙;郑建3.抗犬瘟热病毒核蛋白单克隆抗体的制备及其线性抗原表位鉴定 [J], 曹智刚;易立;程悦宁;仝明薇;李爽;王建科;林鹏;孙亚茹;程世鹏4.抗犬瘟热病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 赵爽爽; 刘云; 李彤彤; 王文静; 薛雨佳; 刘明5.重组抗HER2人源化单克隆抗体大规模制备及活性鉴定方法学建立 [J], 陈观平;汪一帆;应栩华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬瘟热病毒的分离及单克隆抗体的研制的开题报告
犬瘟热病毒的分离及单克隆抗体的研制的开题报告
一、研究背景
犬瘟热是一种严重威胁狗类健康的病毒性疾病，常见于全球，尤以发展中国家和地区的狗群中多见。
目前，犬瘟热的疫苗已经开发，广泛使用，但是由于病毒的变异性较大，疫苗的保护效果并不十分理想。
因此，开发针对犬瘟热病毒的高效单克隆抗体具有重要意义。
二、研究内容
1. 分离犬瘟热病毒
本研究将采用犬瘟热疫苗免疫的犬，或者疫情爆发区的犬为研究对象，通过标准病毒学技术和分子生物学方法，例如 RT-PCR、序列分析等技术，从犬的鼻咽部或者血液样本中分离单个病毒株。
2. 纯化犬瘟热病毒
分离到犬瘟热病毒后，本研究将利用离心、超滤等技术纯化病毒株，获得高纯度的犬瘟热病毒，为后续免疫动物、制备单克隆抗体奠定基础。
3. 制备单克隆抗体
本研究将选取合适的免疫小鼠，将纯化后的犬瘟热病毒注射于小鼠体内，制备得到高亲和、高特异性的单克隆抗体。
通过大量的克隆和筛选，得到单克隆抗体序列，并对其进行表达和纯化。
三、研究意义
本研究将能够成功地分离出犬瘟热病毒并进行纯化，同时制备出具有高亲和力、高特异性的单克隆抗体。
这不仅有助于深入研究犬瘟热病毒的病理和致病机制，还能为犬瘟热的防治提供更为有效的诊断和治疗手段。
抗犬瘟热病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
ＣＤＶ 是副黏病毒科麻 疹 病 毒 属 的 成 员，包 含 一 个非分段单链 负 义 ＲＮＡ 基 因 组，编 码 Ｎ、Ｐ、Ｍ、Ｆ、 Ｈ 和 Ｌ 蛋 白 。 ［７］ 血 凝 素 蛋 白 （Ｈ 蛋 白 ）是 宿 主 免 疫 系统的主要目的抗原，是产生中和抗 体的重要 抗原， 在抗病毒 免 疫 中 占 有 重 要 地 位 。 ［８］ 因 此，制 备 针 对 Ｈ 蛋白的单克隆抗体对于检测具有更高的价值。本 研究制备出抗 ＣＤＶ Ｈ 蛋白的３株有结合活性，１株 有中和活性的单克隆抗体，并对其进 行了效价、稳定
荧光抗 体 技 术 （ＦＡ）和 反 转 录聚 合 酶 链 反 应 （ＲＴ ＰＣＲ）等进 行 诊 断。 而 ＣＤＶ 单 克 隆 抗 体 具 有 效 价 高、特 异 性 强 和 制 备 方 便 等 优 点，被 广 泛 应 用 于 ＣＤＶ 诊 断 和 ＣＤ 治 疗 。 ［５］ 抗 ＣＤＶ 的 单 克 隆 抗 体 （ＭＡｂ）已成为治疗和诊断 ＣＤ 的主要工具之一 。 ［６］
动 物 医 学 进 展 ，２０２０，４１（２）：２９３３ ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备
櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄［３２］ＹａｎｏＹ，ＨａｍａｎｏＫ，ＳａｔｏｍｉＭ，ｅｔａｌ．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｏｘｙｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｂａｃｔｅｒｉａａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｎｏｎ－ｎａｔｉｖｅｓｐｅｃｉｅｓ，ｗｈｉｔｅ－ｌｅｇｓｈｒｉｍｐ（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉ），ａｎｄｎａｔｉｖｅｓｐｅｃｉｅｓ，ｂｌａｃｋｔｉｇｅｒｓｈｒｉｍｐ（Ｐｅｎａｅｕｓｍｏｎｏｄｏｎ），ｉｎｔｅｎｓｉｖｅｌｙｃｕｌｔｕｒｅｄｉｎＴｈａｉｌａｎｄ［Ｊ］．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１１，１１０（３）：７１３－７２２．［３３］ＭｉｒｂａｋｈｓｈＭ，ＡｋｈａｖａｎｓｅｐａｈｙＡ，ＡｆｓｈａｒｎａｓａｂＭ，ｅｔａｌ．ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｉｎｄｉｇｅｎｏｕｓｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｔｈｅＰｅｒｓｉａｎＧｕｌｆａｓａｐｒｏｂｉｏｔｉｃａｎｄｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌａｇｅｎｔａｇａｉｎｓｔＶｉｂｒｉｏｈａｒｖｅｙｉｉｎＬｉｔｏｐｅｎａｅｕｓｖａｎｎａｍｅｉｐｏｓｔｌａｒｖａｅ［Ｊ］．ＩｒａｎｉａｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３，１２（４）：８７３－８８６．［３４］ＨｗａｎｇＳＨ，ＫｉｍＹＪ．Ｍｅｒｏｐｅｎｅｍ－ｒｅｓｉｓｔａｎｔｂａｃｔｅｒｉａｉｎｈｏｓｐｉｔａｌｅｆｆｌｕｅｎｔｓｉｎＳｅｏｕｌ，Ｋｏｒｅａ［Ｊ］．ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＭｏｎｉｔｏｒｉｎｇａｎｄＡｓｓｅｓｓｍｅｎｔ，２０１８，１９０（１１）：１－８．［３５］ＭｗｉｒｉｃｈｉａＲ，ＭｕｉｇａｉＡＷ，ＴｉｎｄａｌｌＢ，ｅｔａｌ．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｆｒｏｍｔｈｅｈａｌｏａｌｋａｌｉｎｅＬａｋｅＥｌｍｅｎｔｅｉｔａ，Ｋｅｎｙａ［Ｊ］．Ｅｘｔｒｅｍｏｐｈｉｌｅｓ，２０１０，１４（４）：３３９－３４８．［３６］陈 峰，张丹丽，宛宝山，等．不同培养基与前处理方法对副溶血弧菌ＭＡＬＤＩ－ＴＯＦＭＳ鉴定结果的影响评估［Ｊ］．临床检验杂志，２０１７，３５（４）：２６４－２６７．毕振威，徐立波，夏兴霞，等．鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备［Ｊ］．江苏农业科学，２０２０，４８（２０）：１７８－１８２．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２０．２０．０３３鉴别犬瘟热病毒强弱毒株中和单克隆抗体的制备毕振威１，徐立波２，夏兴霞１，梁 霆３，王永山１（１．江苏省农业科学院兽医研究所／农业部兽用生物制品工程技术重点实验室／国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏南京２１００１４；２．山东省招远市农业农村局，山东招远２６５４００；３．江苏省农业农村厅，江苏南京２１００３６） 摘要：为了制备鉴别犬瘟热病毒（ＣＤＶ）流行强毒株和疫苗弱毒株的单克隆抗体，将ＣＤＶ８５１弱毒株浓缩后经蔗糖密度梯度离心纯化，免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取免疫小鼠脾细胞与ＳＰ２／０瘤细胞进行细胞融合，经３～５次克隆，间接ＥＬＩＳＡ筛选，获得稳定分泌抗ＣＤＶ的杂交瘤细胞２Ｄ１２株。
犬瘟热检验实验报告
一、实验目的本实验旨在通过犬瘟热病毒抗体检测技术，对疑似患有犬瘟热的犬进行病原学诊断，为临床诊断提供依据。
二、实验材料1. 试剂：犬瘟热病毒抗体检测试剂盒、酶标仪、离心机、微量移液器、一次性手套、吸头等。
2. 样本：疑似患有犬瘟热的犬血清。
3. 仪器：酶标仪、离心机、微量移液器、恒温箱等。
三、实验方法1. 样本采集：采集疑似患有犬瘟热的犬血清，置于无菌试管中，于-20℃冰箱保存。
2. 样本处理：将样本在室温下解冻，离心去上清液，留取沉淀物备用。
3. 实验操作：（1）加样：取抗体检测盒，按照说明书步骤进行操作，将抗体试剂、酶联试剂、底物等分别加入相应的孔中。
（2）温育：将加好试剂的板放入恒温箱中，温育一段时间。
（3）洗涤：将温育好的板取出，用洗涤液进行洗涤。
（4）加显色剂：将显色剂加入各孔中，温育一段时间。
（5）终止反应：将终止液加入各孔中，终止反应。
（6）测量吸光度：将板放入酶标仪中，测量各孔的吸光度。
4. 结果判定：（1）根据说明书提供的标准曲线，计算样本的抗体滴度。
（2）抗体滴度≥1:100为阳性，抗体滴度＜1:100为阴性。
四、实验结果1. 样本信息：（1）犬只品种：柴犬（2）性别：雄性（3）年龄：2岁（4）疑似症状：发热、咳嗽、流涕、呕吐、腹泻等2. 实验结果：（1）抗体滴度：1:400（2）结果判定：阳性五、实验结论根据实验结果，疑似患有犬瘟热的柴犬血清抗体滴度为1:400，判定为犬瘟热阳性。
结合临床症状，可初步诊断为犬瘟热。
六、实验讨论1. 犬瘟热是一种高度传染性的病毒性疾病，对犬类危害极大。
本实验通过犬瘟热病毒抗体检测技术，对疑似患有犬瘟热的犬进行病原学诊断，为临床诊断提供了依据。
2. 实验过程中，严格按照操作规程进行，确保实验结果的准确性。
同时，注意实验操作中的无菌操作，避免交叉污染。
3. 实验结果表明，疑似患有犬瘟热的柴犬血清抗体滴度为1:400，符合犬瘟热抗体检测阳性标准。
结合临床症状，可初步诊断为犬瘟热。
检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备
检测犬瘟热病毒的单克隆抗体胶体金试纸条的制备房超;张泉;易海华;吴萍兰;徐波;吴亚力【摘要】将从水貂中分离的犬瘟热病毒（Canine distemper virus,CDV）HB株经培养和纯化后免疫小鼠,制备分泌抗CDV-HB的杂交瘤细胞株,分别命名为2E1和7F3,ELISA测定腹水效价均大于107。
亚类鉴定结果表明单抗2E1的分子亚类为IgM,7F3的分子亚类为IgG1,间接免疫荧光试验表明,这两株单抗均可以与CDV-HB特异性结合。
采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒并标记2E1单克隆抗体,获得检测貂犬瘟热病毒抗原的胶体金免疫层析试纸,且鉴定证明制备的检测CDV的胶体金试纸条具有良好的的特异%The canine distemper virus（CDV-HB） isolated from mink was cultured and purified.The splenocytes from mice immunized with purified CDV-HB were fused with SP2/0 myeloma cells.Positive hybridoma was screened by indirect ELISA,and two monoclonal antibodies against CDV-HB were generated and designated as 2E1 and 7F3.The ELISA titers of the two antibodies in ascites were more than 107.The subtype identification of the antibodies demonstrated that the 2E1 belonged to IgM,and the 7F3 was IgG1.The specific interaction between CDV-HB virus and monoclonal antibodies was certified by indirect IFA.The MAb of 2E1 was purified and labeled with gold particles,which was prepared by sodium citrate method,to develop a colloidal gold immuno-chromatographic test strip for CDV detection,and the results indicated that the strip had the good specificity for CDV detection.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2011(019)002【总页数】5页(P26-30)【关键词】犬瘟热病毒;单抗;胶体金试纸条【作者】房超;张泉;易海华;吴萍兰;徐波;吴亚力【作者单位】徐州出入境检验检疫局,徐州221006;扬州大学兽医学院,扬州225009;徐州出入境检验检疫局,徐州221006;徐州出入境检验检疫局,徐州221006;徐州出入境检验检疫局,徐州221006;徐州出入境检验检疫局,徐州221006【正文语种】中文【中图分类】S858.292.265.96犬瘟热（canine distemper, CD）是由传染性犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）引起的急性、高度接触性传染病，目前已成为危害我国乃至全世界养犬业、皮毛动物养殖业和野生动物保护业最严重的疫病之一[1]。
农业部公告第1139号――犬瘟热病毒单克隆抗体注射液和犬细小病毒单克隆抗体注射液制造及检验试行规程
农业部公告第1139号――犬瘟热病毒单克隆抗体注射液和犬细小病毒单克隆抗体注射液制造及检验试行规
程
文章属性
•【制定机关】农业部(已撤销)
•【公布日期】2009.01.04
•【文号】农业部公告第1139号
•【施行日期】2009.01.04
•【效力等级】部门规范性文件
•【时效性】现行有效
•【主题分类】种植业
正文
农业部公告
（第1139号）
根据《兽药管理条例》规定，我部组织制定了犬瘟热病毒单克隆抗体注射液和犬细小病毒单克隆抗体注射液制造及检验试行规程（附件1）、质量标准（附件2）及标签和说明书（附件3），现予发布，自发布之日起执行。
特此公告
附件：1．制造及检验试行规程（略）
2．质量标准（略）
3．标签和说明书（略）
二〇〇九年一月四日。
犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
犬瘟热病毒F蛋白单克隆抗体的制备及鉴定焦金波;黄娟;秦晓冰;陈丽;温海燕;单虎【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2008(036)025【摘要】[目的]获得犬瘟热病毒F蛋白特异性单克隆抗体.[方法]用纯化的大肠杆菌BL21表达的犬瘟热病毒重组F蛋白作为抗原,免疫BALB/c小鼠,采用传统的杂交瘤技术制备单克隆抗体.用ELISA、IFA、Western-blot、细胞中和试验鉴定各株单抗的生物学特性.[结果]获得7株稳定分泌犬瘟热F蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株(2136,3E10,3A2,587,5176,6H8,986);单抗亚类鉴定结果分别为IgG2a,IgG1,IgG2b,IgG1,IgG1,IgG2a和IgG1;细胞中和试验初步证实2株单抗(587,9136)具有中和犬瘟热病毒感染Vero细胞的作用,中和效价分别为1:320和1:640;经EIJSA相加试验证实7株单抗的作用位点不同,其中2136,5F6的作用位点非常相近.[结论]该研究成功制备了7株抗犬瘟热F蛋白特异性单抗,为进一步研究犬瘟热病毒F蛋白和临床诊断打下良好的基础.【总页数】3页(P10899-10901)【作者】焦金波;黄娟;秦晓冰;陈丽;温海燕;单虎【作者单位】青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院病毒实验室,山东青岛,266109【正文语种】中文【中图分类】S858.292【相关文献】1.犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定 [J], 王铮;王铁成;冯娜;虞一聪;高玉伟;杨松涛;夏咸柱2.犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及鉴定 [J], 孙玮;靳晓霞;夏咸柱;王铁成;杨松涛;高玉伟;王承宇;张涛;杨玉姣;刘玉秀;阮洋3.犬瘟热病毒截短P蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 袁维峰;贾红;于萍萍;侯绍华;郭晓宇;史利军;赵占中;朱鸿飞4.抗犬瘟热病毒核蛋白单克隆抗体的制备及其线性抗原表位鉴定 [J], 曹智刚;易立;程悦宁;仝明薇;李爽;王建科;林鹏;孙亚茹;程世鹏5.抗犬瘟热病毒血凝素蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 [J], 赵爽爽; 刘云; 李彤彤; 王文静; 薛雨佳; 刘明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
犬细小病毒单克隆抗体的制备和初步应用的开题报告
犬细小病毒单克隆抗体的制备和初步应用的开题报告一、研究背景犬细小病毒（CDV）是一种高度传染的病毒，可以引起犬类的免疫系统失调和多种疾病。
随着养犬数量的增加和犬场聚集性养殖的普及，CDV引起的犬瘟热病例数量不断上升。
因此，CDV的检测和治疗越来越受到重视。
目前，CDV的检测方法包括免疫荧光法、酶联免疫吸附测定法和聚合酶链反应法等。
其中，单克隆抗体是一种高度特异的检测试剂，可以用于CDV的快速鉴定。
二、研究目的本研究旨在制备CDV的单克隆抗体，用于CDV的鉴定。
三、研究内容和方法1. 收集CDV病毒株并获得CDV抗原我们将从犬类患者的病例中分离CDV病毒，并通过病毒培养和超速离心获得病毒粒子。
随后，我们将利用抗犬瘟热血清对病毒进行聚集，分离出CDV抗原。
2. 制备CDV单克隆抗体我们将采用杂交瘤技术制备CDV单克隆抗体。
具体方法如下：（1）将小鼠用CDV抗原免疫，刺激其免疫系统；（2）采集小鼠脾细胞并融合肿瘤细胞，形成杂交瘤；（3）筛选出能够特异性地结合CDV抗原的单克隆抗体。
3. 对CDV单克隆抗体进行初步应用我们将对制备出的CDV单克隆抗体进行初步应用，包括免疫荧光法和酶联免疫吸附测定法等。
四、预期成果与意义本研究将制备出高特异性、高灵敏度的CDV单克隆抗体，为CDV的迅速诊断提供可靠的工具。
同时，本研究也为其他病毒单克隆抗体的制备提供参考。
五、研究时间安排本研究计划在2年时间内完成，具体时间安排如下：第1年第1-4个月：研究背景和前期工作准备；第5-10个月：收集CDV病毒株并获得CDV抗原；第11-12个月：进行CDV单克隆抗体的制备。
第2年第1-6个月：对CDV单克隆抗体进行初步应用；第7-12个月：撰写毕业论文并进行答辩。
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犬 瘟 热 病 毒 单 克 隆 抗 体 的 制 备 及 鉴 定
孙 玮 王 铁 成 。 ， 松 涛。 ， 玉伟 。 王 承 宇 一， ， ，杨 ｕ ．高 ｕ ～，
张 涛 杨 玉姣 刘 玉 秀 阮 洋 靳 晓 霞 夏 成 柱 。 ， ， ， ， ，
（ ． 林 大 学 畜 牧 兽 医学 院 ， 林 长 春 ｌ ０ ６ ； ． 放军 军 事 兽 医 研 究 所 ， 林 长 春 １ ０ ６ ； １吉 吉 ３０ ２ ２解 吉 ３ ０ ２ ３ 吉 林 省 人兽 共 患 病 预 防与 控 制 重 点 实 验 室 ， 林 长 春 １ ０ ６ ） ． 吉 ３ ０ ２
ｌ 材 料 与 方 法
１ １ 材 料 ．
一
吸道 、 化道 、 经系 统 、 肤 损 伤［ 。 因此 ， 备单 消 神 皮 ５ ］ 制
克 隆抗 体可 以为 犬瘟 热的诊 断 和治 疗 提供 良好 的基
础。
８ ℃保 存 备 用 ＿ 。 Ｏ ６ ｊ
１ ２ ２ 动 物 免 疫 免 疫 ６ 周 龄 ～ ８周 龄 的 雌 性 ．．
摘 要 ： 纯化 的 犬瘟 热病 毒 （ ＤＶ） 别 与 弗氏 完全 佐 剂 （ Ｆ 和 弗 氏不 完 全佐 剂 （Ｆ 乳 化 制备 的 将 Ｃ 分 Ｃ Ａ） Ｉ Ａ）
乳化 抗原 作 为免 疫原 ， 以有 限稀释 法和 间接 Ｅ Ｉ Ａ 法进行 单 克 隆 抗体 的 筛选 ， 而获 得 了 ３株 稳 定 分 泌单 ＬＳ 从
致死 性传 染 病 。犬 瘟 热病 毒 与 牛瘟 病 毒 、 豹 瘟 病 海
毒 同属副 黏病 毒 科 ， 疹 病 毒 属 。犬 瘟 热 病 毒 为 有 麻 囊膜、 负链 、 股 Ｒ 单 ＮＡ 病 毒 Ｌ ］ １ 。ＲＮＡ 编码 ６种 结 屯 构蛋 白 ： 合 蛋 白 （ ） 血 凝 蛋 白 （ ， 质 蛋 白 融 Ｆ 和 Ｈ） 基 （ ， 蛋 白 （ ， Ｌ 蛋 白和 核 衣 壳 蛋 白 （ ［ Ｍ） 磷 Ｐ） 大 Ｎ） 引。
犬 瘟 热是 由犬 瘟 热 病 毒 （ ａ ｉｅｄｓｅ ｅ ｉ Ｃ ｎｎ ｉ ｍｐ ｒｖ— ｔ
ｒ ｓＣ Ｖ） 起 的 犬 和 其 他 肉 食 动 物 的 一 种 多 发 性 、 ｕ，Ｄ 引
产 品 ； Ｐ标 记 的羊 抗 鼠 ＩＧ 为 沈 阳联 星公 司 产 ＨＲ ｇ
品 ； ｅ ｈ ｏ ｅ４ Ｆ凝 胶 为 Ａｍｅｓ ａ ｉｓｉ ｃｓ公 Ｓ ｐ ｒｓ Ｆ ｒｈ ｍ Ｂｏ ｃ ｎ ｅ ｅ
最强 的蛋 白 。病 毒 的囊 膜通 过穿 膜 作 用将 血 凝 素 蛋
白（ 和 融合 蛋 白（ ） 人 到宿 主 细胞 内 ， 且对 基 Ｈ） Ｆ导 并 质蛋 白（ ） 着稳 定 作用 ［ 。虽 然 近 ｌ Ｍ 起 ４ ］ ０年 已 经 在
研究 所 病毒 室提 供 。
１ ２ 方 法 ．
易感 动物 中广泛 接 种 犬 瘟 热疫 苗 ， 是 该 病 仍 在 犬 但
科 动物 中流行 。感 染犬瘟 热 病毒 的靶 向组 织 主要 是 黏膜 和淋 巴组 织 。通 过 气 溶 胶 感 染 ， 毒 最 先 在 动 病 物的 呼吸 道淋 巴组 织 中复 制 ， 后 扩 散 到 各 种 器 官 然 中， 包括 呼 吸 器 官 、 化 器 官 、 巴样 器 官 和 膀 胱 。 消 淋 这样 就 可 以导致 隐性 感染 或者 同 时引 起 继发 性 的 呼
司产 品 ； 体 亚 型 鉴 定 试 剂 盒 为 Ｓｇ 抗 ｉｍａ公 司 （ ｏ ： Ｌｔ １ ４ ４ １ ） 品 ； 外 检 测 仪 为 北 京 医用 机 械 厂 产 １ ｋ８ ７ 产 紫
品 ， 光光 度 计 为 Ｔ ｅｍｏ公 司 产 品 。其 余 试 剂 为 分 ｈｒ
分析 纯或 化学 纯 。
１ １ ２ 动 物 和 细 胞 ６周 龄 ～８周 龄 的 纯 系 雌 性 ．． Ｂ ｌ／ 小 鼠 ， ａｂ ｅ 体重 约 为 ｌ ～ １ ， ４ｇ ８ｇ 由长 春生 物制 品
所 提 供 。 Ｓ ２ ０骨 髓 瘤 细 胞 、 ｒ ｐ／ Ｖｅｏ细 胞 由军 事 兽 医
其 中， 衣 壳蛋 白是麻 疹病 毒属 中含 量最 多 、 守 性 核 保
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
１ ２ １ 抗 原 的 制 备 将 Ｃ Ｖ 接 种 于 单 层 生 长 至 ． ． Ｄ ９ 的 Ｖｅｏ细 胞 中 ， Ｏ ｒ 当细 胞 病 变 （ Ｐ ） 到 ８ Ｃ Ｅ 达 Ｏ
～
９ 时 收 获 病 毒 。 细 胞 培 养 物 反 复 冻 融 ３次 ， Ｏ
４℃ 条 件 下 ， ０ ／ ｎ 心 ３ ｎ去 除 细 胞 碎 ４０ ０ｒ ｍｉ 离 ０ ｍｉ 片 ， 上清 。病 毒 液 用 Ｐ Ｇ ０ ０初 步 沉 淀 后 ， 过 取 Ｅ ６０ 通 Ｓ ｐ ｒ ｓ Ｆ ｅ ｈ ｏ ｅ４ Ｆ凝胶 层 析 ， 收集 病 毒 峰 。通 过 电镜 负 染观察病毒形 态， 用 酶标仪测定病毒 Ｏ 值 ， 并 Ｄ 置
性 ， 色效价 为 １： ０ ， 得 的单克 隆抗 体 可 用作 犬瘟 热病毒 抗原 检 ＇ 的诊 断试 剂。 染 ２０ 获 ａ ｌ ４
关 键 词 ： 瘟 热 病 毒 ； 交 瘤 ； 克 隆 抗 体 犬 杂 单
中 图 分 类 号 ：８ ２ ６ ９５ ￥ ５ ． ５ ． 文献标识码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ７５ ３ （ ０ １ ０ — ０ ３０ １０ —０ ８ ２ １ ）３０７ —５