HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理
hat选择培养基筛选杂交瘤细胞的原理
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HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理
H A T培养基筛选杂交瘤细胞的原理Revised by Liu Jing on January 12, 2021H A T培养基筛选杂交瘤细胞的原理HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质的细胞培养基。
1.细胞内合成DNA原料的核苷酸形成的途径（1）起始合成途径（de novo pathway）：由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。
（2）中间合成途径（salvage pa-thway）：利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。
2.利用HAT培养基筛选杂交瘤细胞（1）经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞—瘤细胞、融合的脾细胞—脾细胞、融合的瘤细胞—瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。
正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。
而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。
（2）融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株（例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株），即只有起始合成途径。
效应B细胞虽不增殖，但有两条DNA合成途径。
（3）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。
HAT培养基中含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。
杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培养基中次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷为原料进行合成。
而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。
从而选择出杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞筛选实验报告
一、实验目的本实验旨在通过细胞融合技术，获得具有无限增殖能力和特异性抗体分泌能力的杂交瘤细胞。
通过筛选和克隆化，最终获得纯化的单克隆抗体。
二、实验原理杂交瘤细胞筛选技术是利用细胞融合技术，将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体的淋巴细胞融合，形成杂交瘤细胞。
杂交瘤细胞具有肿瘤细胞无限增殖的特性，同时保留淋巴细胞分泌特异性抗体的能力。
通过筛选和克隆化，获得纯化的单克隆抗体。
三、实验材料1. 试剂：聚乙二醇（PEG）、HAT培养基、抗原、酶联免疫吸附剂（ELISA）、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠lgG抗体、包被液、脱脂奶粉、洗涤液、底物显色液、终止液等。
2. 仪器：倒置显微镜、细胞培养箱、超净工作台、冰箱、酶标仪、微量移液器、恒温箱、96孔板等。
3. 实验动物：小鼠。
四、实验步骤1. 细胞融合：将骨髓瘤细胞和分泌某种抗体的淋巴细胞按照一定比例混合，加入PEG诱导细胞融合。
2. 细胞培养：将融合后的细胞接种于含有HAT培养基的培养瓶中，在细胞培养箱中培养。
3. 细胞筛选：经过1-2周的培养，筛选出能够存活并无限增殖的杂交瘤细胞。
4. 特异性抗体筛选：采用ELISA方法，将抗原固相在微孔板上，将杂交瘤细胞培养上清加入微孔板中，检测抗体与抗原的结合情况。
5. 克隆化：将筛选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化，确保获得纯化的单克隆抗体。
6. 阳性杂交瘤细胞筛选：利用间接ELISA方法，检测克隆化后的杂交瘤细胞是否产生特异性抗体。
五、实验结果1. 细胞融合：成功将骨髓瘤细胞和分泌某种抗体的淋巴细胞融合。
2. 细胞培养：在HAT培养基中，杂交瘤细胞能够存活并无限增殖。
3. 细胞筛选：经过筛选，获得能够存活并无限增殖的杂交瘤细胞。
4. 特异性抗体筛选：ELISA结果显示，部分杂交瘤细胞能够产生特异性抗体。
5. 克隆化：对筛选出的阳性杂交瘤细胞进行克隆化，获得纯化的单克隆抗体。
6. 阳性杂交瘤细胞筛选：间接ELISA结果显示，克隆化后的杂交瘤细胞均能产生特异性抗体。
2025届高中生物学一轮复习检测案41 动物细胞工程(含解析)
检测案41动物细胞工程[基础巩固练]考点一动物细胞培养与体细胞克隆1．下列关于动物细胞工程的叙述，正确的是（）A.用胰蛋白酶处理动物组织后，可用培养液将分散的细胞稀释制成细胞悬液B．少数细胞在连续培养50代后可获得不死性，是某些基因选择性表达的结果C．根据在高倍镜下观察到基因突变的比例可推知某化学药品的毒性D．PEG诱导动物细胞融合形成的杂种细胞，经动物细胞培养能得到优良动物个体2．[2024·九省联考·贵州]利用动物体细胞核移植技术可培育高产奶牛，流程如图所示。
下列叙述错误的是（）A．犊牛W有母牛X细胞中的线粒体DNAB．犊牛W的遗传性状与母牛X相似度更高C．重构胚的形成可采用电融合的方法D．细胞培养时需添加氨基酸等营养物质3．如图为肾脏上皮细胞培养过程示意图，下列叙述不正确的是（）A．甲→乙过程需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理B．丙过程指细胞在添加血清的合成培养基中进行原代培养C．丙和丁过程均会出现细胞贴壁和接触抑制现象D．丁过程是传代培养的细胞，该过程体现了动物细胞的全能性4．我国科学家首次通过把食蟹猴的胚胎干细胞注射到猪的胚胎中，培育出了“猪—猴嵌合体”仔猪（如图所示），这项研究的最终目的是在动物体内培养人体器官用于器官移植。
下列相关叙述错误的是（）A.胚胎干细胞培养过程中细胞会因接触抑制而停止分裂，需用胰蛋白酶处理后继续培养B．采集的卵母细胞需培养至减数分裂Ⅰ后期才能与获能精子受精，进而获得猪胚胎C．从食蟹猴囊胚期胚胎的内细胞团获取的胚胎干细胞具有发育成各种组织、器官的潜能D．该技术有望将人的胚胎干细胞注入猪早期胚胎内，培育出完全由人体细胞组成的器官考点二细胞融合与单克隆抗体5．如图为单克隆抗体制备过程示意图，图中X、Y细胞分别是（）A．T淋巴细胞、骨髓瘤细胞B．T淋巴细胞、杂交瘤细胞C．B淋巴细胞、骨髓瘤细胞D．B淋巴细胞、杂交瘤细胞6．单克隆抗体在多种疾病的诊断和治疗中发挥重要的作用，下图为利用小鼠制备单克隆抗体的过程，下列有关叙述正确的是（）A．提取脾B淋巴细胞有多种，是因为一种抗原可诱导产生多种B细胞B．诱导动物细胞融合的方法与诱导植物细胞原生质体融合的方法完全相同C．在具有杂交瘤细胞的培养板上滴加相应抗体，出现阳性反应的即为目标细胞D．筛选出的目标杂交瘤细胞可在体外条件或注射到小鼠腹腔内进一步增殖培养7．[2024·九省联考·安徽]单克隆抗体在疾病诊断治疗和病原体鉴定中发挥重要作用。
hat培养基筛选杂交瘤细胞的原理
hat培养基筛选杂交瘤细胞的原理
筛选杂交瘤细胞原理是一种用来检测细胞的方法，它可以帮助我们发现不同的基因变化以及个体之间的活动。
筛选杂交瘤细胞使用的荧光技术是一种将少量物质转变成荧光信号的技术。
通过荧光技术，科学家们可以观察一个特定对照组，以及另一个不同的细胞群体。
在这种情况下，研究人员可以观察杂交瘤细胞，并尝试判断去区分哪些细胞是真正的杂交瘤细胞，哪些是质变或未发生突变的细胞。
筛选杂交瘤细胞也可以使用一种称为“hat select”的技术，它是一种在细胞的遗传学性质上控制细胞突变的技术。
“hat select”使用的原理是在受精卵上插入一种含有新基因的病毒，该病毒具有抗生素抵抗力的能力，病毒的基因将与卵染色体的基因结合，从而杂交瘤细胞将具备抗生素抵抗力的可能性。
不同的抗生素将被用来筛选不同的基因变异，并确定有几个药物抵抗力的基因变异。
筛选杂交瘤细胞是一种非常重要的手段，它可以为我们提供有用的信息，以便进行细胞的诊断和治疗。
这种技术的使用不仅可以使细胞的诊断更加准确，而且可以帮助科学家们更好地理解细胞的行为，以及特定紊乱的产生。
什么是杂交瘤技术？杂交瘤技术的原理及步骤
什么是杂交瘤技术？杂交瘤技术的原理及步骤杂交瘤技术（hybridoma technique）即淋巴细胞杂交瘤技术，又称单克隆抗体技术。
它是在体细胞融合技术基础上发展起来的。
克勒（Kohler）和米尔斯坦（Milstein）（1975）证明，骨髓瘤细胞与免疫的动物脾细胞融合，形成能分泌针对该抗原的均质的高特异性的抗体——单克隆抗体，这种技术通称为杂交瘤技术。
这一技术的基础是细胞融合技术。
骨髓瘤细胞在体外可以连续传代，而脾细胞是终末细胞，不能在体外繁殖。
如将小鼠的骨髓瘤细胞与分泌某种抗体或因子的淋巴细胞融合，则融合细胞既具有肿瘤细胞无限繁殖的特性，又具有淋巴细胞能分泌特异性抗体或因子的能力，同时也克服了免疫淋巴细胞不能在体外繁殖的缺点，融合的细胞称为淋巴细胞杂交瘤。
杂交瘤技术原理及步骤：杂交瘤技术的基本原理是通过融合两种细胞而同时保持两者的主要特征。
这两种细胞分别是经抗原免疫的小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞。
被特异性抗原免疫的小鼠脾细胞（B淋巴细胞）的主要特征是它的抗体分泌功能，但不能在体外连续培养，小鼠骨髓瘤细胞则可在培养条件下无限分裂、增殖，即具有所谓永生性。
在选择培养基的作用下，只有B细胞与骨髓瘤细胞融合的杂交细胞才能具有持续培养的能力，形成同时具备抗体分泌功能和保持细胞永生性两种特征的细胞克隆。
其原理从下列3个主要步骤阐明。
(一)细胞的选择与融合建立杂交瘤技术的目的是制备对抗原特异的单克隆抗体，所以融合细胞一方必须选择经过抗原免疫的B细胞，通常来源于免疫动物的脾细胞。
脾是B细胞聚集的重要场所，无论以何种免疫方式刺激，脾内皆会出现明显的抗体应答反应。
融合细胞的另一方则是为了保持细胞融合后细胞的不断增殖，只有肿瘤细胞才具备这种特性。
·选择同一体系的细胞可增加融合的成功率。
多发性骨髓瘤是B细胞系恶性肿瘤，所以是理想的脾细胞融合伴侣。
使用细胞融合剂造成细胞膜一定程度的损伤，使细胞易于相互粘连而融合在一起。
单克隆抗体中hat选择原理_理论说明
单克隆抗体中hat选择原理理论说明1. 引言1.1 概述引言部分旨在介绍本篇长文的主题和研究背景，提供一个整体的概述。
单克隆抗体作为一种重要的生物医学工具，在药物研发、临床诊断和治疗等领域发挥着重要的作用。
本篇长文将重点探讨单克隆抗体中HAT选择原理，即使用辅助因子Hypoxanthine, Aminopterin和Thymidine (HAT)来筛选并培养产生单克隆抗体的杂交瘤细胞株。
1.2 文章结构本文内容将按如下结构展开：- 引言：对文章主题进行简述和概括，并介绍各章节的内容安排。
- 单克隆抗体：对单克隆抗体的基本概念进行介绍，包括其定义、制备原理等，并探讨其在各个应用领域中的重要作用。
- HAT选择原理：详细阐述HAT（Hypoxanthine, Aminopterin和Thymidine）选择法的原理和步骤，并探讨其在单克隆抗体制备中的优势与限制。
- 单克隆抗体中HAT选择原理的理论说明：针对HAT选择法在单克隆抗体制备过程中的关键原理进行解释，包括三个方面的原理解释。
- 结论与展望：总结本文的研究内容并给出未来研究方向和存在问题的展望。
1.3 目的本篇长文旨在深入探讨单克隆抗体中HAT选择原理，并通过对其背后的理论进行详细说明，为读者对该方法有一个全面深入的了解。
通过文章内容的介绍和分析，读者将能更好地理解HAT选择原理在单克隆抗体制备中所起到的作用，并具备一定的指导意义。
希望本文能够促进相关领域研究人员对单克隆抗体制备技术的应用和改进。
2. 单克隆抗体:2.1 基本概念:单克隆抗体是指由同一种细胞克隆产生的具有相同特异性和亲和力的抗体分子。
与多克隆抗体相比，单克隆抗体具有更高的单一特异性、较低的杂交瘤形成率和较高的存储稳定性。
单克隆抗体可以通过混合各种细胞提供优良的质量控制，并被广泛应用于医学诊断、治疗和科学研究领域。
2.2 抗体选择原理:在制备单克隆抗体时，常常需要从多克隆源中筛选出能够特异性结合目标抗原的细胞。
四川省成都市石室中学2024-2025学年高三上学期10月月考生物试题含答案
成都石室中学高2025届2024-2025学年度上期十月考试生物试卷试题分第Ⅰ卷（选择题）和第Ⅱ卷（非选择题）两部分，满分100分，考试时间75分钟。
第Ⅰ卷（选择题，共48分）一、选择题（本卷共16题，每题3分，共计48分。
每小题只有一个选项符合题意）1．生物大分子是构成细胞生命大厦的基本框架，研究组成生物体的成分对揭示生命现象具有十分重要的意义。
下列关于生物大分子的叙述，正确的是（）A．多糖结构具有多样性取决于构成多糖的单体种类的多样性B．蛋白质、糖类和脂肪是能源物质，糖类是主要的能源物质C．真核细胞的DNA分布在细胞核内，RNA分布在细胞质内D．在生物体内可以发生水解反应的化合物均属于生物大分子2．研究表明多种核仁蛋白会参与rRNA的编辑、端粒DNA序列的修复、调节细胞周期等生命活动。
核仁蛋白NPM1可在核质之间穿梭，与中心粒结合后可抑制中心粒的复制。
NPM1与抑癌基因P53结合后会增强P53的转录。
下列叙述错误的是（）A．某些核仁蛋白参与核糖体的形成B．NPM1可能通过核孔进出细胞核C．NPM1增多可抑制动物细胞分裂D．NPM1基因突变后可抑制细胞癌变3．牙菌斑是由多种细菌分泌物组成的膜状物，这层膜帮助细菌附着在牙釉质，牙齿被其覆盖后会导致龋齿，其主要成分含有下图箭头所示的化学键。
下列相关叙述正确的是（）A．细菌大小形态各异，但其遗传物质都分布在染色体上B．细菌能发生吸水涨破，因此勤漱口可以有效预防龋齿C．牙菌斑的形成需要核糖体、内质网等细胞器的共同参与D．由于牙菌斑的存在，附着在牙釉质上的细菌难以清除4．线粒体是半自主复制的细胞器，由核基因编码的转运体蛋白AAC位于线粒体膜上，AAC只能等比例转运ADP和A TP，其功能如图所示。
AAC可以交替暴露ADP和A TP的结合位点，该过程借助线粒体内膜的膜电位驱动。
米酵菌酸可与A TP竞争AAC上的A TP结合位点，从而阻止A TP运出线粒体。
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HAT（一）培养基筛选杂交瘤细胞的原理HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质的细胞培养基。
1.细胞内合成DNA原料的核苷酸形成的途径
（1）起始合成途径（de novo pathway）：
由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。
在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。
（2）中间合成途径（salvage pa-thway）：
利用次黄嘌呤—
鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。
2.利用HAT培养基筛选杂交瘤细胞
（1）经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞—
瘤细胞、融合的脾细胞—脾细胞、融合的瘤细胞—
瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。
正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。
而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。
（2）融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株（例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株），即只有起始合成途径。
效应B细胞虽不增殖，但有两条DNA合成途径。
（3）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。
HAT培养基中含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。
杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培养基中次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷为原料进行合成。
而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。
从而选择出杂交瘤细胞。
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