甾体激素类药物的鉴别
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CONHNH2 .H2SO4
NO2
O
O NH N
O CH3 CH3 H H O H
CH3 H
CONHNH2
N
HCl
黄色
NNHCO N
+
N
室温下长 时间加热
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。 黄体酮 其他甾体
CH2OCOCH3 C=O O OH
+
O
N N
N
H 2O
N OH-
+
醋酸泼尼松
OH CH C=O O OH OH
四氮唑盐
+
N N
N N
+ CH3COOH
O
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
CONHNH2 NO2
N CONHNH2
H2SO4
H3PO4 呈色 HClO4 HCl （荧光）
硫酸呈色反应应用最广 1）操作简便 2）反应灵敏 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
适用：肾上腺皮质激素。 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
甾体激素类药 物的鉴别
演讲者：史颖超 048012126
鉴别的意义 甾体激素类鉴别
拓展
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质, 采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
机理：
R C CH + AgNO 3
R C C A g↓ + HNO3
NaOH滴定，电 位法指示终点
6、水解产物的反应
适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯 类药物：
R OCOCH
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
适用：雌激素类药物。 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮 染料。 OH OH
+
COO
N=N
SO3-
H+
COO N=N SO3H
苯甲酸雌二醇
红色
5、乙炔基沉淀反应
适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
炔雌醇
CH3 C O
m.p.201℃
CH3 C N OH
+2HO O
NH2 N HO
+2H2O
黄体酮
双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5 O +NH2CNHNH2 HCl O H2N O C H N N
OCOCH2CH2
+H2O+HAc
苯丙酸诺龙
OCOCH2CH3
缩氨基脲m.p.178~185℃
C21
18 12 19 1 11 9 10 5
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
C20
13 17
CBiblioteka Baidu
7
D
16
2
3
A
4
B
6
14 15 8
鉴别方法
化学鉴别法
呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 UV IR TLC HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
OH
+H2O O
KOH O
+CH3CH2COOH
丙酸睾丸素
m.p.150~156℃
★紫外分光光度法
[原理]： 具有C=C-C=O共轭系统， △４-3-酮 ～240nm 和C=C-C=C共轭系统， 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 如:曲安西龙 2. 吸收度的比值法。 如: 丙酸倍氯米松
△4–3–酮 C17–α–醇酮 基 肾上腺皮质 激素 雄性与蛋白 同化激素 雌性激素 C17–β– 羟基 C17–甲酮基 A环为3– OH苯环
+ +
+ + + +
孕激素
鉴别反应
+
+
UV、羰 还原性（碱 可成酯 与亚硝基铁氰 UV、与 基试剂、 性酒石酸酮、 化钠、间二硝 重氮苯磺 基苯反应 酸盐反应 氨基脲反 氨制AgNO3） 应
醇制KOH
H SO
C HOH
CH CH OCOCH
香
戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上：
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
呈蓝紫色
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机氯
有机破坏
Fˉ Clˉ
硝酸—硝酸银
卤素在侧链上：
加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
AgCl
总结
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹谱 鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
研究方法：
选取地塞米松等23种结构相近甾体激素，
运用褶合变换挖掘紫外光谱的特征信息并通过
科学计算可视化技术获取相应指纹谱的表征,并
利用夹角余弦法计算指纹谱之间的相似系数,并
考察方法的效能指标。
方法学验证结果：
精密度：所选5种药物各自的相似系数的日内精密 度均小于0.17%,日间精密度均小于0.21% 耐用性：所选药物不同浓度溶液的光谱相似系数 都大于0.993
重复性：在不同仪器及同台仪器不同扫描间隔条
件下,所选成分的相似系数的相关性均大于0.999。 结论：本法精密度、耐用性、重复性均好，可以 拓展紫外光谱法在药物定性鉴别中的应用。
要求在含量测定项下记录的色谱图 中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
拓展：
紫外光谱褶合变换 可视化指纹谱鉴别
褶合变换：是根据正交分析理论,对于任意一条光谱曲 线,在某个邻域内(即其中的某一小段曲线)可以用正交多 项式任意逼近,对于阶次相同的正交分量,可以通过改变 变换窗口的大小获得不同的光谱,从而在不同阶次上可 以得到一系列褶合变换光谱,相应的褶合光谱是同阶次 的导数光谱的线性组。 科学计算可视化技术：是数值计算中最直观最形象的方 法,它从大量的原始数据中提取有效数据开始,通过映射 生成绘制图像的几何原语,随之利用交互控制对几何原 语选定帧合成、色彩、纹理及阴影等参数完成图像的绘 制,最终显示出绘制的图像。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH H H H
γCH
HO
CH
1
ν
3300cm1616cm
-1
C C
1590cm1
苯环指纹区
3610cm
酚羟基 OH
-1
ν
3505cm -1
OH
ν
1505cm1
醇羟基
苯环的骨 架振动
黄体酮
H H O H
CH3 C O
薄层色谱法
[特点]： 简便、快速、分离效能高。 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 [应用范围]： 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含 量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹 谱鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
制备衍生物测定其熔点
[原理] 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、 肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体， 测定其熔点进行鉴别。 [特点] 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采 用。
COCl + HO KOH O C O
+KCl+H2O
[方法]：对照品法
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。
2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
1.供试品点样通常需做前处理（如有机溶剂提
[显色方法]：多用荧光显色法或荧光淬灭法
荧光显色
高效液相色谱法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
方法：对照品法
一般在含量测定的同时进行鉴别.
△４-3-酮
～240nm
★ ★红外分光光度法
[必要性]
1.许多重要的甾体激 素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
1.对样品无破坏, 样品用量较少 2.特征性极强、 信息量丰富: 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得 到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指 纹谱鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
结果
本文所选23种甾体激素紫外光谱形状相似,最大吸收波长多在 239~242nm。 其中黄体酮、甲睾酮与其他皮质激素类药的相似系数均小于0.895, 说明不同类的甾体激素之间相似系数有较大差异。 同属于皮质激素类的哈西奈德与地塞米松、醋酸地塞米松、倍他 米松、泼尼松、丙酸倍氯米松之间的相似系数最大为0.726,而地塞 米松、醋酸地塞米松、倍他米松、泼尼松、丙酸倍氯米松相互之间 的相似系数最小为0.907。这是因为哈西奈德中的不饱和共轭结构为 4-烯-3-酮,其他五种皮质激素为1,4-烯-3-酮,说明少了位烯键对相似系 数的影响非常大。 地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松相互之间的最小相似系数为 0.998，这是因为醋酸地塞米松只是地塞米松21-羟基醋酸酯化,地塞 米松与倍他米松只是16-甲基的ɑ、ß之别。这说明母核相同侧链不同 或者与酸成酯对相似系数的影响非常小，但是仍然可以区分。
NO2
O
O NH N
O CH3 CH3 H H O H
CH3 H
CONHNH2
N
HCl
黄色
NNHCO N
+
N
室温下长 时间加热
O NH N
N
3，20-双腙
3.C17-甲酮基的呈色反应 适用：具有甲酮基的甾体激素类药物。
孕激素
能与亚硝基铁氰化钠、间二硝基酚、芳香醛反 应呈色。 黄体酮 其他甾体
CH2OCOCH3 C=O O OH
+
O
N N
N
H 2O
N OH-
+
醋酸泼尼松
OH CH C=O O OH OH
四氮唑盐
+
N N
N N
+ CH3COOH
O
深红色的三苯甲鐕
2、C3–酮基和C20–酮基
与羰基试剂2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯 肼反应生成腙。
CONHNH2 NO2
N CONHNH2
H2SO4
H3PO4 呈色 HClO4 HCl （荧光）
硫酸呈色反应应用最广 1）操作简便 2）反应灵敏 3）操作条件不易掌握
（某些甾体激素药物与硫酸—乙醇或硫酸—甲醇作用而呈 色。如甲睾酮.）
(二)官能团的反应
1、C17–α–醇酮基（还原性）
适用：肾上腺皮质激素。 能与碱性酒石酸铜试液（斐林试液）、氨制 AgNO3试液（多伦试液）、四氮唑盐反应呈色。 其中以四氮唑盐的显色反应最为常用，不但可 用作层析法的显色剂，还可用于含量测定.
甾体激素类药 物的鉴别
演讲者：史颖超 048012126
鉴别的意义 甾体激素类鉴别
拓展
鉴别， what&why?
鉴别试验： 是根据药物的分子结构、理化性质, 采用物理、化学或生物学方法来判断药物 的真伪。是药检工作中的首项任务，只有 在药物鉴别无误的情况下，才能进行药物 的杂质检查、含量测定。
基本结构
机理：
R C CH + AgNO 3
R C C A g↓ + HNO3
NaOH滴定，电 位法指示终点
6、水解产物的反应
适用： 本类药物C3、C17或C21位上羟基的酯
原理：一些甾体激素类药物具有醋酸酯、戊酸 酯及已酸酯的结构，可先行水解，根据水解产物 来鉴别。
醋酸酯 类药物：
R OCOCH
亚硝基铁氰化钠
蓝紫色 淡橙色或不显色
☻黄体酮专属性反应，称为“碱性硝普钠反应。
4.酚羟基的呈色反应
适用：雌激素类药物。 能与重氮苯磺酸发生偶合反应，生成红色偶氮 染料。 OH OH
+
COO
N=N
SO3-
H+
COO N=N SO3H
苯甲酸雌二醇
红色
5、乙炔基沉淀反应
适用：含炔基的甾体激素类药物（炔雌醇、 炔诺酮）。
炔雌醇
CH3 C O
m.p.201℃
CH3 C N OH
+2HO O
NH2 N HO
+2H2O
黄体酮
双肟m.p.238℃
OCOCH2CH2 C6H5 O +NH2CNHNH2 HCl O H2N O C H N N
OCOCH2CH2
+H2O+HAc
苯丙酸诺龙
OCOCH2CH3
缩氨基脲m.p.178~185℃
C21
18 12 19 1 11 9 10 5
甾体激素 类药物均 具有环戊 烷骈多氢 菲母核。
C20
13 17
CBiblioteka Baidu
7
D
16
2
3
A
4
B
6
14 15 8
鉴别方法
化学鉴别法
呈色反应 官能团反应
制备衍生物测熔点 光谱法 色谱法 UV IR TLC HPLC
（一）与强酸的呈色反应
(甾体母核）
甾体激素 类药物
OH
+H2O O
KOH O
+CH3CH2COOH
丙酸睾丸素
m.p.150~156℃
★紫外分光光度法
[原理]： 具有C=C-C=O共轭系统， △４-3-酮 ～240nm 和C=C-C=C共轭系统， 苯环（B带：280nm，K带：220nm ） 1.可用规定波长处的吸收度鉴别 如:曲安西龙 2. 吸收度的比值法。 如: 丙酸倍氯米松
△4–3–酮 C17–α–醇酮 基 肾上腺皮质 激素 雄性与蛋白 同化激素 雌性激素 C17–β– 羟基 C17–甲酮基 A环为3– OH苯环
+ +
+ + + +
孕激素
鉴别反应
+
+
UV、羰 还原性（碱 可成酯 与亚硝基铁氰 UV、与 基试剂、 性酒石酸酮、 化钠、间二硝 重氮苯磺 基苯反应 酸盐反应 氨基脲反 氨制AgNO3） 应
醇制KOH
H SO
C HOH
CH CH OCOCH
香
戊酸、己酸酯类药物，有特臭。
7、卤元素的呈色反应
卤素在母核上：
氧瓶燃烧法破坏
如地塞米松磷酸钠
呈蓝紫色
茜素氟蓝—硝酸亚铈
有机氟 有机氯
有机破坏
Fˉ Clˉ
硝酸—硝酸银
卤素在侧链上：
加热水解法破坏
如丙酸倍氯他索
AgCl
总结
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹谱 鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
研究方法：
选取地塞米松等23种结构相近甾体激素，
运用褶合变换挖掘紫外光谱的特征信息并通过
科学计算可视化技术获取相应指纹谱的表征,并
利用夹角余弦法计算指纹谱之间的相似系数,并
考察方法的效能指标。
方法学验证结果：
精密度：所选5种药物各自的相似系数的日内精密 度均小于0.17%,日间精密度均小于0.21% 耐用性：所选药物不同浓度溶液的光谱相似系数 都大于0.993
重复性：在不同仪器及同台仪器不同扫描间隔条
件下,所选成分的相似系数的相关性均大于0.999。 结论：本法精密度、耐用性、重复性均好，可以 拓展紫外光谱法在药物定性鉴别中的应用。
要求在含量测定项下记录的色谱图 中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。
拓展：
紫外光谱褶合变换 可视化指纹谱鉴别
褶合变换：是根据正交分析理论,对于任意一条光谱曲 线,在某个邻域内(即其中的某一小段曲线)可以用正交多 项式任意逼近,对于阶次相同的正交分量,可以通过改变 变换窗口的大小获得不同的光谱,从而在不同阶次上可 以得到一系列褶合变换光谱,相应的褶合光谱是同阶次 的导数光谱的线性组。 科学计算可视化技术：是数值计算中最直观最形象的方 法,它从大量的原始数据中提取有效数据开始,通过映射 生成绘制图像的几何原语,随之利用交互控制对几何原 语选定帧合成、色彩、纹理及阴影等参数完成图像的绘 制,最终显示出绘制的图像。
亚甲基、角甲基吸收 带
C CH OH H H H
γCH
HO
CH
1
ν
3300cm1616cm
-1
C C
1590cm1
苯环指纹区
3610cm
酚羟基 OH
-1
ν
3505cm -1
OH
ν
1505cm1
醇羟基
苯环的骨 架振动
黄体酮
H H O H
CH3 C O
薄层色谱法
[特点]： 简便、快速、分离效能高。 主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别 ChP很多甾体激素制剂均用该法鉴别。 [应用范围]： 甾体激素制剂的鉴别、纯度检查以及含 量测定前的分离和制剂稳定性的研究。
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指纹 谱鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
制备衍生物测定其熔点
[原理] 1.甾醇、甾酮类药物可与一些试剂反应生成酯、 肟、缩氨脲. 测定其熔点进行鉴别。 2.利用醇制碱液水解甾体酯类生成相应的母体， 测定其熔点进行鉴别。 [特点] 繁琐费时，但专属性强.目前仍为一些国家药典采 用。
COCl + HO KOH O C O
+KCl+H2O
[方法]：对照品法
取），消除注射液、片剂及软膏剂等辅料的干扰。
2.要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对 照品溶液的主斑点相同。
1.供试品点样通常需做前处理（如有机溶剂提
[显色方法]：多用荧光显色法或荧光淬灭法
荧光显色
高效液相色谱法
主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别
方法：对照品法
一般在含量测定的同时进行鉴别.
△４-3-酮
～240nm
★ ★红外分光光度法
[必要性]
1.许多重要的甾体激 素药物紫外光谱非常 相似，紫外光谱鉴别 缺乏专属性。 2.甾体激素药物化学 结构上仅有微小的差 异，也难以用化学鉴 别法来区分。
红外分光光度法的优势
1.对样品无破坏, 样品用量较少 2.特征性极强、 信息量丰富: 每种化合物都有红外吸收，从红外光谱可以得 到大量信息。官能团区的吸收反映了化合物中 官能团的特征，而指纹区的吸收对于指认分子 提供了可靠的依据。
----袁丽霞,张中湖.甾体激素的紫外光谱褶合变换可视化指 纹谱鉴别研究[J]药学实践杂志,2007,25(1)
结果
本文所选23种甾体激素紫外光谱形状相似,最大吸收波长多在 239~242nm。 其中黄体酮、甲睾酮与其他皮质激素类药的相似系数均小于0.895, 说明不同类的甾体激素之间相似系数有较大差异。 同属于皮质激素类的哈西奈德与地塞米松、醋酸地塞米松、倍他 米松、泼尼松、丙酸倍氯米松之间的相似系数最大为0.726,而地塞 米松、醋酸地塞米松、倍他米松、泼尼松、丙酸倍氯米松相互之间 的相似系数最小为0.907。这是因为哈西奈德中的不饱和共轭结构为 4-烯-3-酮,其他五种皮质激素为1,4-烯-3-酮,说明少了位烯键对相似系 数的影响非常大。 地塞米松、醋酸地塞米松、倍他米松相互之间的最小相似系数为 0.998，这是因为醋酸地塞米松只是地塞米松21-羟基醋酸酯化,地塞 米松与倍他米松只是16-甲基的ɑ、ß之别。这说明母核相同侧链不同 或者与酸成酯对相似系数的影响非常小，但是仍然可以区分。