紫外分光光度法测定兔血清中氨茶碱的浓度
实验二静脉注射氨茶碱血药浓度及药动学参数的检测
2.静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定
①取体重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，于耳缘静脉（外侧）注射氨茶碱10mg/kg（2min内注完）， 另一耳用锐利刀片切割耳缘静脉取血。分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、180 min取 血约1.5ml，室温下静置60 min。
2.为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其 差值？
六、参考结果：
一、氨茶碱血药浓度与△A的标准曲线
C = 1.84*△A- 0.00002 C单位：mg/ml
二、氨茶碱血药浓度-时间表
序号
时间（min）
1
5
2
10
3
20
4
30
5
60
6
120
7
180
8
240
不同波长下吸光度
274 nm
298 nm
二、氨茶碱血药浓度-时间表
T
5
(min)
10
20
30
60
△A
120 180
C (μg/ml)
三、药物动力学参数的计算结果
作时间t-浓度C-lgC表，画lgC – t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1 处理）。
五、讨论与思考
1.氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解 释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是 什么？
实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测 定及药动学参数的计算
一、实验目的:
1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法；
2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和 方法；
3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药 浓度测定中的应用。
家兔的氨茶碱静脉注射药代动力学研究.
家兔的氨茶碱静脉注射药代动力学研究实验目的1、掌握紫外分光光度法测定兔血中氨茶碱2、掌握药动学参数的计算方法【实验原理】氨茶碱,多用于治疗支气管哮喘,为茶碱与乙二胺的复盐。
茶碱是主要的药效成分,而乙二胺则能够提高药物的水溶性。
由于其治疗窗相对较窄(10-20微克/毫升,大约有75%的患者在血药浓度超过25微克/毫升的时候出现中毒反应。
因此,加强患者的氨茶碱的血药浓度监控非常必要。
茶碱是一种弱酸,所以可以用有机溶剂在酸性条件下将其从血清里面中提取分离,同时血清蛋白变成沉淀。
随后,茶碱可以用碱液从有机溶剂中提取分离。
茶碱的最大吸收波长是274nm,然而,空白血清在该波长处也有显著的吸收,所以使用双波长(274nm和298nm紫外分光光度法来测定兔血中的茶碱浓度。
【实验步骤】1、参比溶液的标准曲线取茶碱5.0g至10容量瓶中,用10ml NaOH溶液(0.1mol/L溶解并定容至刻度制成500ug/ml的储备液。
分别取5.0,10.0,15.0,20.0,25.0和30.0ul的储备液加至装有500ul空白血清样品的试管中。
最终的生物标准校正浓度范围为5.0-30.0ug/ml。
标准样品通过下述的方法进行测定。
绘制以△A(A274-A298为纵坐标,以浓度为横坐标的标准曲线。
2、血清中茶碱浓度的测定取200ul的盐酸(0.1mol/L和5ml的氯仿-异丙醇(95:5加入500ul的血清样品中。
混合均匀后,将混合液用离心机(3000r/min离心10min。
然后,取氯仿层(3.0ml转移进入另一试管中,再加入3.0ml的氢氧化钠(0.1mol/L混匀。
混合液用离心机(3000r/min离心10min。
取上清液(约2.5ml分别在274nm和298nm处测定其吸光度A。
空白液为2.0ml的蒸馏水和4.0ml的氢氧化钠(0.1mol/L混匀制成。
血液中的药物浓度使用茶碱标准曲线的线性回归方程进行计算。
3、动物实验1注射给药:氨茶碱(用两倍体积的5%的葡萄糖溶液稀释以15mg/kg的剂量通过耳缘静脉在2min之内缓慢注射入家兔体内。
氨茶碱的血药浓度测定及药动学研究
【器材与药品】 754型紫外分光光度计，液体涡旋混和器， 数学坐标纸、半对数坐标纸各一张。氨茶 碱标准液，0.1mol/L HCl,0.1mol/L NaOH,异丙醇：氯仿抽提液（5:95）。
【实验动物】 家兔
【实验步骤】
1．取体重2.5-3kg健康家兔1只，一耳缘静脉注射氨茶碱 15mg/kg，另一耳用锐利刀片切割取血。分别在给氨 茶碱后5、10、20、30、60、120、180、300、 420min取血。
5. 制作茶碱标准曲线：取5支试管，依次加入茶碱标准液 20、40、60、80、100µl，各加入0.1mol/L NaOH溶液 4ml，终浓度依次为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5µg/ml，测 定各管的A274和A298，计算△A。以茶碱浓度为横坐标， △A为纵坐标描点绘图，用Excel软件求直线回归方程，即 为茶碱标准曲线的直线方程（图示）。
A 茶碱
本底
λ
274
298
茶碱吸收度曲线
2.氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到 平衡后转入消除相。时量曲线呈二房室动力学模型。
3.房室模型是抽象的数学模型，它的划分与解剖学部位或生 理学功能无关。药物转运速率相同或相近的部位可划分 为同一房室。房室模型可以分为一室模型、二室模型、 多室模型。大多数药物在体内的转运和分布符合二室模 型。即药物静脉注射入血后，首先快速进入血流量大的 组织，如心、肝、肾、肺、脑等，然后缓慢地向血流量 小的组织，如脂肪组织、静止的肌肉组织等转移。
2．分离血清，各管均取血清0.5ml于15ml试管中，加 0.1mol/L盐酸0.2ml、抽提液5ml，振摇混合， 2500r/min离心10min。
3．吸取下层氯仿液4ml置另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，振摇混匀，2500r/min离心10min。
紫外分光光度法测定茶碱的血药浓度
国 现代 药 物应 用 ２ ０ ０ ８年 ３月 第 ２卷 第 ６期
Ｃ ｉ ｄＤ ｕ ｐ ｌＭａ ２０ 。 ｏ． 。 ｏ６ ｈｎＪＭｏ ｒｇＡ ｐ ， ｒ ０ ８ Ｖ １２ Ｎ ．
・
９・
紫外分光光度 法测定茶 碱 的血药 浓度
魏桂林 赖庆 文 廖 志 宪
紫外分 光 光度 法 测 定 茶 碱 血 药 浓 度 的研 究 ， 国
匀， 即得 不 同浓度 的标 准溶 液 。
内 已有 较 多 的文 献 报 道 。 。但 普遍 使 用 的 仪 器 较
好， 血样 处 理 和 测 定 方 法 较 复 杂 ， 适 合 基 层 医 院 不
１２ ２ 血 样 的 制 备 ．．
ｂａ ｉ ｈｏ ｐｉ １ ｓｃ— ｓ ｔ ． ａ
【 ｙｗ ｒｓ Ｕ ｔ ｖ ｌｔ ｐ ｃ ｏｈ ｔ ｔ ；ｈ ｏｈ ｌｎ ； ｌ ｍａＤｕ ｅｅ； ｅ ｒ ｉａ ｏ Ｋｅ ｏｄ 】 ｌａｉ ｅ Ｓ ｅｔ ｐ ｏ ｍｅ ｙＴ ｅｐｙｌ ｅ Ｐａ ｒｇＬ ｖｌＤ ｔ ｎｔ ｎ ｒ ｏ ｒ ｏ ｒ ｉ ｓ ｅ ｍ ｉ
ｗ ｒ ｏ ｕ ａ ｚｎ ｎ ｔｅ ｂ ｓｃ ｈ ｓ ｉ １ Ｍ ｅ ｈ ｄ Ｔ ｅ ｄ ｔ ｒ ｉ ａｉ ｎ ｏ ｅ ｐ ｙｌ ｅ ｂ ｌ ａ ｉｌ ｔ ｐ ｅｒ ｐ ｏ ｏ ｔ ｐ ｐ ｌｒ ｉ ｇ ｉ ｈ ａ ｉ — ｏ ｐ ｔ ． ｔ ｏ ｓ ｈ ｉ ａ ｈ ｅｅ ｎ ｔ ｆ ｈ ｏ ｈ ｌ ｎ ｙ ｕ ｔ ｖｏ ｅ ｅ ｔ ｈ — ｍ ｏ ｔ ｉ ｒ ｓ ｏ
ｃｅ ｔ ＝ ． ９ ２ ｎ＝ ） Ｔ ｅａ ｅａ ｅｒｃ ｖ ｒ ｉ ９ ． １ （ Ｓ ｉｎ ｒ ０ ９ ９ （ ６ ． ｈ ｖ ｒｇ ｅ ｏ ｅ ８ ６ ％ Ｒ Ｄ＝２ ０ ％ ， ｙｓ ． ９ ｎ＝５ ． ｈ ｏｆ ｃｅ ｔ ｆｖｒ ｔ ｎ ） Ｔ ｅｃ ｅ ｉｎ ｏ ａ ａ ｏ ｉ ｆ ｉ ｉ （ Ｖ）ｓ ． ３ ． ｎ ｌｓ ｎ Ｔ ｅｍ ｔｏ ｉ ｐｅ ｒｐｄ ａｃ ｒｔ ａ ｄ ｓ ｉ ｂｅｆｒｔ ｏ ｕ ｒ ａ ｏ ｅ Ｃ ｉ ２ ８ ％ Ｃｏ ｃ ｉ ｈ ｅｈ ｄ ｉ ｓ ｌ，ａ ｉ ，ｃ ｕ ａ ｎ ｕｔ ｌ ｏ ｅ ｐ ｐ ｌ ｉ ｔ ｎ ｉ ｔ ｕ ｏ ｓ ｍ ｅ ａ ｈ ａ ｚｉ ｎ ｈ
紫外分光光度法测定氨茶碱中毒方法的建立与应用
紫外分光光度法测定氨茶碱中毒方法的建立与应用陈姿如;陈礼明;吴名;杜书明【期刊名称】《国际检验医学杂志》【年(卷),期】2014(000)007【摘要】目的：建立血清中氨茶碱定量分析的紫外分光光度法，探讨对氨茶碱中毒患者实际应用的价值，为临床氨茶碱中毒提供诊疗依据。
方法取0．5 mL血清加0．2 mL的0．1 mol／L盐酸溶液，再加入三氯甲烷：异丙醇（95：5）的萃取液4．0 mL。
充分震荡萃取，高速离心，取有机层于另一试管中加0．1 mol／L氢氧化钠溶液2．0 mL混匀反提，高速离心后取氢氧化钠层50μL紫外扫描。
结果血清中氨茶碱最大吸收峰在（275±l ）nm处，浓度在5．0～60μg／mL范围内呈线性，回归方程为犢＝0．0101犡＋0．0065，相关系数（狉）＝0．9998，回收率为85．5％～102．4％，相对标准差（犚犛犇）为3．5％～4．8％。
日内、日间犚犛犇分别为3．08％～5．00％和3．16％～4．95％，最低检出浓度2．0μg／mL。
结论该方法操作简便、分析快速、结果准确。
为临床诊断氨茶碱中毒提供了一个简便准确的检测方法。
【总页数】2页(P890-891)【作者】陈姿如;陈礼明;吴名;杜书明【作者单位】武警后勤学院附属医院，天津 300162;武警后勤学院附属医院，天津 300162;武警后勤学院附属医院，天津 300162;武警后勤学院附属医院，天津300162【正文语种】中文【相关文献】1.紫外分光光度法检测血清草甘膦中毒方法的建立和应用2.紫外分光光度法测定氨茶碱的血浆药物浓度3.双波长紫外分光光度法测定氨茶碱血药浓度4.磺胺甲噁唑对紫外分光光度法测定氨茶碱血药浓度的影响5.紫外分光光度法测定氨茶碱注射液含量结果的不确定度评定因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
氨茶碱的血药浓度测定实验报告
氨茶碱的血药浓度测定及药动学参数计算一、【目的】掌握血清中氨茶碱血药浓度的紫外测定法，掌握血清中茶碱提取法，验证氨茶碱的动力学模型，掌握二房室动力学模型的参数计算方法。
用有机溶剂将血清中的氨茶碱提出，用紫外测定法根据标准曲线测出氨茶碱浓度，用残差法运用计算机进行数据处理、曲线描绘及参数计算，从而验证氨茶碱动力学模型，使大家对药动学研究有一初步的了解。
二、【原理】氨茶碱为临床常用平喘药，由茶碱与乙二胺缩合而成，在体液中可分离出茶碱。
在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提出茶碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液把茶碱从有机溶剂中提出（见图1）。
测量λ274和λ298处的吸光度（A274为茶碱和本底，即溶剂、血清的吸光度，A298为本底的吸光度）。
茶碱的吸收度为△A = A 274 A 298，使用UV1601双波长分光光度计测定（见图2）。
图1．茶碱的抽提过程图2氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入消除相。
时量曲线呈二房室动力学模型，公式为C = Ae -αt +Be -βt ，曲线由分布相C a = Ae -αt 和消除相C b =Be -βt两部分组成，其对数表达式分别为log C a = (-αlog e) t + log A 和log C b = (-βlog e) t + log B （见图3），在对数坐标上由于分布相较早趋近于零，故可先在时量曲线终末段直线回归法求出消除相对数表达式log C b = (-βlog e) t + log B ，然后用差数法求出C a = C - C b ，再次运用直线回归法求出分布相对数表达式log C a = (-αlog e) t + log A ，最终得到所有的参数A 、α、B 和β，从而得到时量曲线C = Ae -αt +Be -βt 。
取 血 试 管酸 性 分 离 管碱 性 分 离 管血液 NaOH抽提液血清含茶碱的上层液图3．二房室模型的时量曲线三、器材：玻璃试管、离心管、注射器、吸管、离心机、微量进样器、UV1601双波长分光光度计。
药物分析双波长分光光度法测定兔血浆中氨茶碱的含量
理化性质
茶碱不易溶于水，氨茶碱系茶碱和二乙 胺缩合而成，其溶解度为茶碱的20倍，在体 液中分离出茶碱起效。在酸性条件下，可用 有机溶剂从血浆中提出茶碱，并同时沉淀血 浆蛋白；再用碱溶液把茶碱从有机溶剂中提 出。
双波长法
ΔA=A257-A3ຫໍສະໝຸດ 4 =(ASMZ257+ATMP257)-
(ASMZ304+ATMP304) = ASMZ257- ASMZ304 =（ESMZ257-ESMZ304）Cl = ΔE Cl
置于抗凝试管中 然后从耳静脉快速注射氨茶碱水溶液(25mg/ml)
1.0 ml，分别于给药后15min、0.5h、1h从颈静脉 (或其他部位)取血约3ml， 将上述血样离心(3500r/min) 10min，分取上层血 浆样品至冰箱保存后待用。
操作过程：
称重（？公斤） 麻醉（注意点）
分离皮下组织及肌肉组织（注意点）
钝性分离 气管正上方肌肉 切口不可偏离气管上方 沿肌肉纤维纵向剪肌肉 切口不可过大
插管（注意点） 分离颈动血管
－－颈动脉（红色） －－颈静脉（较暗）
动脉插管
－－动脉夹夹住近心端 －－死结结扎远心端 －－穿绳，活结备用 －－ v形斜口，插管 －－固定 －－插管另一段止血钳夹住
麻醉剂：3%戊巴比妥钠 部位：兔耳外缘静脉； 参考量： ？公斤×1ml
麻醉注意点：
注射量按照参考量，上下浮动，缓慢注射 注射阻力大或局部肿胀，针头未刺入 麻醉过程中，注意兔子的反应（角膜反射；夹
捏后肢股部肌肉）
操作过程
固定 颈部剪毛
－－准备一杯凉水，放兔毛
切开颈部皮肤
－－紧靠喉头下缘；5～7cm皮肤切口
实验二、静脉注射氨茶碱血药浓度及药动学参数的检测
• 氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制 体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，从而增加 其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆管、冠状动脉 作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用，一般应用 于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等。
2. 静脉注射药物动力学
• 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入 消除相。血药浓度-时间曲线呈二室药物动力学模型。
3. 氨茶碱血药浓度的测定
• 双波长法测定原理：在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶 碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后 采用双波长法进行紫外测定，即测定λ274和λ298处的吸光度（ λ274为茶 碱和本底，即溶剂、血清的吸收， λ298为本底的吸收 ），△A= λ274 λ298 ，可根据标准曲线进行浓度换算。
取5支0.5 ml空白家兔血清，分别加入氨茶碱注射液（2.5 mg/2 ml）使其浓度分别达到 0.5、1.0、 1.5、2.0、2.5 ml，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合
后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶 液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离心10min。吸取上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做 参比，测定其在λ274和λ298的吸收度（ A274和A298 ），计算△A，以茶碱浓度为横坐
实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测 定及药动学参数的计算
生物药剂学与药物动力学实验课件
一、实验目的:
1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法；
2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和 方法； 3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药 浓度测定中的应用。
双波长紫外分光光度法测定血清中茶碱浓度
双波长紫外分光光度法测定血清中茶碱浓度
钱萍;陈晓琪;等
【期刊名称】《山东医药工业》
【年(卷),期】1999(018)006
【摘要】氨茶碱是临床上常用的抗哮喘药物,也是TDM 实验室监测最多的药物之一。
其主要成分茶碱的治疗指数窄,疗效和毒性反应与血药浓度密切相关,故对其进行血药浓度监测是十分必要的。
常用的监测方法是HPLC、FPIA和EMIT法。
本文采用双波长紫外分光光度法测定血清中茶碱浓度,实验证明,方法良好,适合于临床应用。
【总页数】2页(P5-6)
【作者】钱萍;陈晓琪;等
【作者单位】济南市中心医院
【正文语种】中文
【中图分类】R974.3
【相关文献】
1.互为内标法测定人血清中茶碱与多索茶碱的浓度 [J], 朱金平;林秀丽;陈春枚;费燕
2.双波长紫外分光光度法测定家兔隔室模型血清茶碱浓度及其药动学参数 [J], 孙淑萍;李胜利;张从芬;鄢海燕;吴少云;黄瑞
3.反相高效液相色谱法同时测定血清中多索茶碱和茶碱的浓度 [J], 唐富山;佟婉红;牟希恒;于兆云;高燕
4.双波长紫外分光光度法测定氨茶碱血药浓度 [J], 罗兰;廖英姿
5.反相高效液相色谱法同时测定人血清中茶碱和多索茶碱的浓度 [J], 毕津莲;付成效;李湘斌;李卓
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
双波长紫外分光光度法测定家兔隔室模型血清茶碱浓度及其药动学参数
双波长紫外分光光度法测定家兔隔室模型血清茶碱浓度及其药动学参数孙淑萍;李胜利;张从芬;鄢海燕;吴少云;黄瑞【摘要】目的:判断静脉注射(静注)氨茶碱在家兔体内的隔室模型,计算相关药代动力学参数.方法:双波长紫外分光光度法测定家兔静注氨茶碱后的血清茶碱浓度,根据相关药代动力学理论研究其药动学.结果:静注氨茶碱在体内符合二室模型,药动学方程为C=14.46e-3.451t +10.40e-0.114t.结论:可以用双波长紫外分光光度法测定茶碱血药浓度,在体内代谢符合二室模型,并可计算出其药动学方程.%Objective: To judge the compartment model of aminophylline by vessel injection and work out its pharmacokinetic parameters. Methods: The serum theophylline concentration by vessel injection was detected through two wavelength ultrviolet spectrophotometry,and the pharmacokenetic parameters were studied according to the related theory. Results:The compartment model of aminophylline by vessel injection matched the double compartment model,the formula of its pharmacokinetics was C = 14.46e -3.451t+ 10.40e-0.114t. Conclusions:The serum theophylline concentration could be detected by two wavelength ultraviolate spectrophotometry, its metabolism in body matched the double compartment model, the formula of its pharmacokinetics could also be made out.【期刊名称】《蚌埠医学院学报》【年(卷),期】2013(038)005【总页数】4页(P597-600)【关键词】氨茶碱;双波长紫外分光光度法;药动学;兔【作者】孙淑萍;李胜利;张从芬;鄢海燕;吴少云;黄瑞【作者单位】皖南医学院,药学系,安徽,芜湖,241002;安徽省亳州市华佗中医院,骨伤科,236800;皖南医学院,药学系,安徽,芜湖,241002;皖南医学院,药学系,安徽,芜湖,241002;皖南医学院,药学系,安徽,芜湖,241002;皖南医学院,药学系,安徽,芜湖,241002【正文语种】中文【中图分类】R974.3氨茶碱是临床应用最为广泛的平喘药之一，其药理作用主要来自茶碱，乙二胺使其水溶性增强。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
实验一紫外分光光度法测定兔血清中氨茶碱的浓度
一、实验目的
1.掌握紫外分光光度法测定测定血浆中氨茶碱含量的基本原理
2.熟悉紫外分光光度法测定血浆中氨茶碱含量的基本操作
3.了解血样收集方法及血清样品的一般处理方法
二、实验材料
动物：家兔
实验材料：紫外分光光度计、离心机、容量瓶、移液管、注射器、胶头滴管、烧杯、刀片等
试剂及试药：氯仿、异丙醇、NaO、HCL
三、实验原理
茶碱用于治疗支气管哮喘及其他呼吸不正常的疾病。
茶碱的治疗血药浓度较窄（5~20ug/ml），血浓高于25ug/ml时常出现中毒症状。
氨茶碱个体差异大，服用同剂量氨茶碱的病人之间的治疗效果有明显差异，且与血药浓度有关，因此需要进行临床用药监护。
茶碱不易溶于水，对胃肠道有刺激作用，古临床上常用其盐类制剂。
氨茶碱系茶碱和乙二胺缩合而成，其溶解度为茶碱的20倍，在体液中分离出茶碱起效。
在酸性条件下，可用有机溶剂从血浆中提出茶碱，并同时沉淀血浆蛋白；再用碱溶液把茶碱从有机溶剂中提出。
在λ274测定碱性吸收液的吸收度（A）。
A274为茶碱和本底（溶剂、血清）吸收度。
四、试验方法
（一）标准曲线的绘制
1.称取氨茶碱标准品100mg，置200ml容量品中，加0.1mol/L NaOH溶液至刻度，得0.5mg/ml的氨茶碱标准。
2.依次取氨茶碱标准溶液5uL、10uL、15uL、20uL、30uL、50uL于10ml容量瓶中，用0.1mol/lNaOH溶液定容，以0.1mol/L NaOH溶液为空白。
测定其吸光度
3.以吸光度为横坐标、浓度为纵坐标绘制曲线
（二）血样处理
先将家兔称重，取氨茶碱注射剂按15mg/Kg体重，兔耳缘静脉注射氨茶碱。
从家兔的另一只耳缘静脉抽取3ml血液（10min,30min,1h,2h,3h,4h,5h），静置待血液凝固后，置于离心机中离心（3500/min）离心10min 分离血清，用胶头滴管吸取0.5ml 置离心管中，加0.1mol/L HCL溶液0.2ml ，精密加入氯仿；异丙醇（95:5）溶液6ml ，振摇混匀，离心（2500r/min ）10min ,用移液管吸取氯仿层（下层）4.0ml 置另一离心管中，加入0.1mol/L NaOH 6.0ml ，振摇混匀, 离心（2500r/min ）10min, 用移液管吸取碱液（上层）5 ml ,用同法处理其他样品，供测定用。
（三）样品测定
将血样经上述方法处理后，在274nm 下测定吸光度，以时间为横坐标，血清中药物浓度为纵坐标，根据标准曲线绘制时间与血药浓度曲线。
五、实验结果
1.标准曲线
Y=0.0702X-0.0091 R²=0.9990
2.样品实测数据
六、注意事项
1.兔子采血时要注意要在同一伤口处，将兔耳低于心脏，采血完毕后要立即之血。
2.分离血清时，要把血液放置待凝后，离心取血清；
3.离心机往往不尽人意，可适当提高转速和时间，记住离心前一定要配平；
4.吸取下层氯仿液时要注意将使离心管倾斜以便于将移液管深入管底而又防止粘上过多
的血清絮状物；
5.分离血清时要将血液静止足够长的时间，否则会导致离心效果不理想，无法得到足够量
的血清；
6.如果分离血清量不够，可以提高转速或者重复离心。
如果血清分离不够，要记住血清的
体积
7.每一步定量要准确，否则影响结果。
七、思考题
1.临床治疗药物检测的范围有哪些？
2.临床治疗药物检测的常用方法有哪些？。