细菌的生理生化试验
微生物生理生化实验
姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别3【实验题目】微生物生理生化实验【实验目的】1.了解生理生化的意义。
2.掌握几种常用生理生化的实验方法。
【实验器材】1、菌种：枯草芽孢杆菌，大肠杆菌，铜绿假单胞菌，变形杆菌，产气肠杆菌2、试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水等3、仪器和用具：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管等4、培养基淀粉培养基、油脂培养基（大分子物质水解实验）葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内附倒置的德汉氏小管）（糖发酵实验）蛋白胨水培养基（吲哚实验）葡萄糖蛋白胨水培养基（甲基红培养基）【实验原理】在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程。
具有酶功能的蛋白质多数在细胞内，称为胞内酶。
许多细菌产生胞外酶，这些酶从细胞中释放出来，以促进细胞外的化学反应。
各种微生物在代谢类型上表现出很大的差异，如表现在对大分子糖类和蛋白质的分解能力以及分解代谢的最终产物的不同，反映出他们具有不同的酶系和不同的生理特性，这些特性可被用作为细菌鉴定和分类的内容。
具体实验原理如下：一、大分子物质的水解实验原理姓名班级13级生命基地班学号同组者：科目微生物学实验题目微生物生理生化实验组别31、淀粉水解由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，所以必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解才能被微生物吸收利用。
胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内。
如淀粉酶将淀粉水解为小分子的糊精,双糖和单糖，能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉。
已知淀粉遇到碘会显现蓝色，因此可通过在淀粉培养基上滴加碘液来判断微生物是否能产生淀粉酶分解淀粉，菌落周围不呈蓝色，出现无色透明圈，则该菌种能够水解淀粉。
2、油脂水解脂肪酶可将脂肪水解为甘油和脂肪酸，而产生的脂肪酸可改变培养基的PH,因此在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后可通过观察菌苔的颜色判断菌种是否能够水解油脂，若出现红色斑点，则说明这种菌可产生分解油脂的酶。
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
微生物的生理生化反应
实验六微生物的生理生化反应一、实验目的掌握细菌鉴定中主要生理生化反应的常规实验法。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体个原理如下：1、淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种两种细菌（1—枯草杆菌，5—大肠杆菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2、明胶水解试验：穿刺接种于明胶培养基中的细菌，若能产生明胶酶利用明胶，则该培养基在4摄氏度条件下会处于液体状态，从而区别于正常条件下4摄氏度时固态的明胶培养基。
3、糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
4、IMVC实验包括四个试验，主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水环境的细胞血检查。
①吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
②甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙算和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
③柠檬酸盐利用试验：有些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一的碳源，而有些细菌则不能利用。
由于细菌不断地利用柠檬酸盐并生成碳酸盐，使培养基PH由中性变为碱性，培养基中的指示剂有浅绿色变为蓝色。
④伏-普试验（乙酰甲基甲醇试验 VP）：某些细菌在代谢过程中，能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸在羧化酶的催化下脱羧后形成活性乙醛，后者与丙酮酸缩合，脱羧形成乙酰甲基甲醇，或者乙醛化合生成乙酰甲基甲醇。
微生物的生理生化试验
一、糖类代谢试验
5、β-半乳糖苷酶试验（ONPG试验）
二、蛋白质代谢试验
不同细菌分解蛋白质能力不同，可利用不 同氮源来合成菌体蛋白质，可通过检测加 入蛋白质分解后的产物或PH变化来鉴定细 菌。
二、蛋白质代谢试验
1、吲哚（indole）试验（又称靛基质试验） 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌分解蛋白胨中色氨酸生成的吲哚与试剂 中的二甲氨基苯甲醛作用生成红色的玫瑰吲哚。 方法：纯培养物接种蛋白胨水后35℃培养24-48h沿 管壁徐徐加入Kovac氏试剂或欧氏试剂0.5ml观察。 结果：两层液体交界处出现红色为阳性，无色为阴 性。
2、凝固酶试验
目的：常用于鉴别葡萄球菌。 原理：金黄色葡萄球菌可产生凝固酶，使血浆中的纤维 蛋白原转变为纤维蛋白附着于细菌表面产生凝固。分为 与细胞壁结合的凝固酶（玻片法）与菌体生成后释放在 培养基中的游离凝固酶（试管法）。 玻片法：在玻片上加生理盐水与血浆个一滴，观察凝集 情况 试管法：三只含1：4血浆0.5ml的试管各接种待检菌、 阳性菌株和肉汤阴性菌株，待检菌出现凝固且阴性对照 不凝固为阳性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：某些细菌将丙二酸盐作为唯一的碳源时，丙 二酸盐被分解成为碳酸钠，使培养基变碱性。 结果：培养基变蓝色为阳性，颜色无变化为阴性。
三、碳源和氮源利用试验
2、丙二酸盐利用试验
三、碳源和氮源利用试验
3、醋酸盐利用试验 目的：用于肠杆菌科细菌的鉴定。 原理：细菌利用铵盐作为唯一氮源同时利用醋酸盐 作为唯一碳源时，分解醋酸钠产生二氧化碳和水与 钠离子结合生成碳酸钠使培养基呈碱性，指示剂由 绿变蓝。 结果：斜面上有菌落生长且培养基变蓝色为阳性。
实验九微生物生理生化实验
• 2CH3COCOOH
CH3COCHOHCH3十2CO2
丙酮酸
乙酰甲基甲醇
• CH3COCHOHCH3
CH3COCOCH3
乙酰甲基甲醇
NaOH 丁二酮（二乙酰）
具体操作：
❖接种及培养方式如同吲哚实验
❖取出塞子， 加10滴VP试剂，振荡混合后， 置沸水浴中保温，5分钟后观察实验结果。 出现红色这位VP试验阳性。
3. 吲哚（indole）试验：（含氮化合物的 分解利用）
色氨酸→吲哚→玫瑰吲哚 ↑
吲哚试剂
-+
具体操作：
（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌和大肠杆菌 于蛋白胨水培养基中。
（2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7d。以未接种 的作为对照（全班1-2支试管即可）。
（3）观察结果时，在培养液中加入乙醚约1毫升（使呈 明显的乙醚层）。充分振荡，使吲哚溶于乙醚中，静 置片刻，待乙醚浮于培养液上面时，沿管壁慢慢加入 吲哚试剂10滴。如吲哚存在，则乙醚层呈玫瑰红色。
具体操作：
（1）以液体接种的方式分别接种枯草杆菌BS或 大肠杆菌EC于葡萄糖、蔗糖、乳糖商品化发 酵管中。以未接种的作为对照（全班1-2支试 管即可）。
（2）接种后置于37℃恒温培养箱，培养7d。
（3）观察结果时，看各管颜色变化及小管顶部 有无气泡。产酸产气用“⊕”表示；只产酸不 产气用“+” 表示；不产酸也不产气用“-”表 示。
5 . 石蕊牛乳试验：（利用蛋白质酪素的能力）
牛乳的主要成分为乳糖，蔗糖，蛋白质和酪素等成分。 牛乳中加入石蕊作为酸碱指示剂和氧化还原的指示剂 （中性为黄色，酸性为红色，碱性为蓝色，石蕊被还原 时，则部分或全部脱色）。由于各种细菌对牛乳的利用 不同，引起培养基的变化也就不同，主要变化为：
生理生化实验方法2
Ray Kuo 2008菌种的生理生化分析1.2 放线菌形态观察。
在高氏一号培养基[4]、蔗糖蔡氏琼脂培养基、葡萄糖－天门冬素琼脂培养基及甘油淀粉谷氨酸盐琼胶培养基[11]上，插片培养菌种，观察其基内菌丝体以及气生菌丝体的颜色。
将培养基融化后，以每皿15－18ml的量倾倒平板，待凝固，将放线菌划线接种在皿中，然后取无菌的盖玻片以45度角插入培养基内，盖玻片插入深约1/3（玻片必须于接种线垂直），每皿可以插2－3片。
盖上皿盖，置于28℃培养，菌丝将沿玻片向上生长，定期观察。
[12]菌株生理生化特性测定明胶液化将待检菌种接种于柱型明胶培养基[8]表面（不用穿刺）28℃下培养，分别在5，10，20及30天各观察一次液化情况。
观察前将菌种管冷藏20－30分钟，如明胶不液化则仍是固体状态，若呈液体即为液化。
明胶的水解是由于菌种所产生的蛋白酶的作用。
牛奶凝固与胨化测定 将牛奶10000rpm离心，去上层油脂成脱脂牛奶。
将代测定菌株接种于脱脂牛奶中，28℃下培养，分别在3，6，10，20及30天各观察一次。
如牛奶出现凝块，则为凝固。
这是由于凝乳酶或发酵乳糖时产酸的作用，依据凝固原因的不同，尚有酸凝和酶凝脂粉。
牛奶中的酪蛋白在蛋白酶的作用下被水解，使牛奶变得清亮而透明，此为胨化。
凝固速度在开始的3－6天最快。
淀粉水解测定 将待检菌接种于淀粉培养基平板上。
28℃培养10天至20天后在培养基表面加入碘液。
若有淀粉酶产生，则淀粉变成糊精或糖而被吸收利用，菌落遇碘液不显蓝色，可在培养物周围形成无色透明圈。
圈的大小表示淀粉酶产生的强弱。
如不产生淀粉酶，则菌落周围遇碘成蓝色。
纤维素水解将菌种接种于滤纸条上，接种材料最好是孢子（不带培养基）置28℃培养30天后观察。
滤纸条分解表明产生了纤维素酶，滤纸条无变化者为阴性。
硫化氢产生实验将待检菌接种于含柠檬酸铁（即Tresner’s）有机培养基斜面上，置28℃培养10天左右（视菌苔生长成丛为宜）观察结果。
微生实验报告 2012.12.实验十二、细菌常用生理生化反应实验结果观察测定
微生实验报告姓名：王晶晖专业年级：2011级生物技术学号：040312011032实验十二细菌常用生理生化反应实验结果观察一、结果观察1、葡萄糖发酵实验直接观察试管：试管变黄者为葡萄糖发酵阳性菌，不变者为阴性菌。
2、V. P. 反应和甲基红试验:将培养好的液体培养基分装于两个干净的小试管中,在一管中滴入2-3滴甲基红试剂, 溶液变红的为甲基红阳性菌,不变的为甲基红阴性菌. 在另一管中加入V. P. 试剂,在37℃保温15分钟, 变红者为阳性菌,不变者为阴性菌。
3、吲哚实验在培养好的液体培养基中加入1厘米高的乙醚,振荡,静置分层,加入2-4滴吲哚试剂,在掖面交界出现红色者为吲哚反应阳性菌,不变者为阴性菌。
4、硝酸盐还原实验在点滴板上滴入革里斯试剂A液和B液，如过溶液变红说明有亚硝酸盐，为硝酸盐还原阳性菌，如果不变色需要再倒出部分培养基在另外的小孔中再滴如耳苯胺试剂，如果变蓝，说明此菌为阴性菌；如果不变色，说明此菌为硝酸盐还原强阳性菌。
5、柠檬酸盐实验直接观察斜面，斜面变兰色者为柠檬酸盐利用阳性菌，不变者为阴性菌。
6、明胶水解向培养好的明胶培养基中加入酸性氯化汞或三氯乙酸溶液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为明胶水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌。
7、淀粉水解实验向培养好的淀粉培养基平板上加入碘液，并铺满平板，菌落周围出现透明圈的菌为淀粉水解阳性菌，没有透明圈的菌为阴性菌。
8、硫化氢产生实验直接观察培养好的培养基，出现黑色沉淀者为阳性菌，不变者为阴性菌。
二、实验结果1、葡萄糖发酵实验阳性：大肠杆菌（半固体培养基变黄，左图）阴性：恶臭假单胞菌（保持紫色不变，右图）2、V. P. 反应和甲基红试验：（1）V．P．实验阳性：大肠杆菌（加入40%的KOH溶液10～20滴，再加入等量的α-萘酚溶液，放入37℃恒温箱中保温15～30分钟，培养液出现红色，右图）阴性：产气杆菌（同上操作，培养基不变色，左图）（2）甲基红试验阳性：产气杆菌（加入 M．R．试剂3-4滴后变红，左图）阴性：大肠杆菌（加入 M．R．试剂3-4滴后不变色，右图）3、吲哚实验阳性：大肠杆菌（乙醚层呈现玫瑰红色，右图）阴性：产气杆菌（左图）4、硝酸盐还原实验阳性：大肠杆菌（滴入革里斯试剂后变红，左下图）阴性：恶臭假单胞菌（滴入二苯胺试剂后变蓝，右上图）5、柠檬酸盐利用实验阳性：产气杆菌（溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色，右图）阴性：大肠杆菌（斜面培养基不变色，左图）6、明胶水解实验阴性：大肠杆菌（菌落周围没有出现透明圈，上图）7、淀粉水解实验阳性：枯草杆菌（加入碘液，菌落周围出现透明圈，下图）阴性：大肠杆菌（菌落周围没有出现透明圈，上图）8、产硫化氢实验阳性：变形杆菌（出现黑色沉淀，左图）阴性：大肠杆菌（未出现黑色沉淀，右图）思考题1、你的实验结果与实验预期是否相同？如果不同试分析原因。
细菌生化试验的主要用途
细菌生化试验的主要用途细菌生化试验是一种基础科学研究手段，主要用于研究和解析细菌的生物学特性、代谢途径、遗传机制等方面的问题。
细菌是一类存在于自然界中广泛分布的微生物，其研究对于理解细胞生物学、微生物学、生态学以及人类健康与疾病等领域具有重要的意义。
以下将从不同的方面介绍细菌生化试验的主要用途。
1. 细菌代谢研究：细菌代谢研究是细菌生化试验的重要应用之一。
通过细菌代谢试验，可以了解细菌对不同碳源、氮源和其他营养物质的利用能力。
通过测定细菌在不同代谢途径下的产物生成情况，可以推测细菌利用的代谢途径以及相关的酶系统。
此外，细菌代谢试验还可以研究细菌在特定环境条件下的生长情况，探究不同因素对细菌生长和代谢的影响。
2. 细菌酶活性分析：细菌生化试验还可以通过测定细菌酶的活性来研究细菌的特性。
利用研究细菌酶的催化反应过程，可以了解细菌代谢途径中不同酶的功能和调控机制。
例如，利用亚硝酸还原酶活性分析方法，可以判断细菌是否具有还原亚硝酸的能力，进而推测其可能的氮代谢途径和氮源选择性。
3. 细菌毒性和药敏性研究：细菌生化试验对于研究细菌的毒性和对抗微生物药物的敏感性也具有重要意义。
通过测定细菌对抗生素的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)，可以评估抗生素对细菌的杀菌效果，并对细菌对抗生素的耐药性进行研究。
此外，细菌生化试验还可用于评估不同物质对细菌的毒性作用，如常用消毒剂、药物和化学试剂等。
4. 细菌遗传机制研究：细菌生化试验还可用于研究细菌的遗传机制，如水平基因转移和垂直基因转移等。
通过构建不同的遗传操作，如突变、基因敲除和表达等，可以了解细菌基因对细菌生长、代谢和适应环境的调控作用。
此外，通过分析细菌基因和基因产物的表达情况，还可以探究细菌的表观遗传调控机制和信号传导系统。
5. 细菌生态学研究：细菌生长和代谢的研究对于了解细菌在环境中的角色和功能具有重要意义。
通过细菌生化试验，可以探究细菌在不同环境条件下的适应性和竞争优势。
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实验九 细菌的生理生化试验
实验九 细菌的生理生化试验
1 目的
1.1 了解细菌鉴定中常用的生理生化试验反应原理
1.2 掌握测定细菌生理生化反应的技术和方法
2 原理
各种微生物在代谢类型上表现了很大的差异。由于细菌特有的单细胞原核生物的
特性，这种差异就表现的更加明显。不同细菌分解、利用糖类、脂肪类和蛋白类
物质的能力不同，所以其发酵的类型和产物也不相同，也就是说，不同微生物具
有不同的酶系统。即使在分子生物学技术和手段不断发展的今天，细菌的生理生
化反应在菌株的分类鉴定中仍有很大作用。
3 材料
3.1 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通
变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种
3.2 培养基
葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）
3.3 试剂
40％NaOH溶液、肌酸、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、1.6%溴甲基酚紫指示剂。
3.4 器具
超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液管、杜氏小套管。
4 流程
糖发酵试验→V-P试验→甲基红试验→吲哚试验
5 步骤
(一) 糖类发酵试验
1 目的
了解不同细菌分解利用糖的能力及实验原理，并掌握其操作方法．
2 原理
可根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是
否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在
5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判
断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。
3 材料
3.2 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通
变形杆菌（Proteus vulgaris）的斜面菌种
3.３ 培养基
葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管
４ 流程
发酵液试管→标记→接种→培养→观察→记录
5 步骤
5.1 试管标记 图 9-1 糖发酵产气
取分别装有葡萄糖、蔗糖和乳糖发酵培养液试管各 Ａ 不产气；Ｂ 产气
4支，每种糖发酵试管中均分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形菌和空白
对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔至以上各相应试管中，每种糖发酵培养液的空白对
照均不接菌。将装有培养液的杜氏小管倒置放入试管中（图9-1），置37℃恒温
箱中培养，分别在培养24h、48h、和72h观察结果。
5.3 观察记录
与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能
利用该种糖，记录用“－”表示；如培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能
分解该种糖产酸，记录用“＋”表示。培养液中的杜氏小管内有气泡为阳性反应，
表明该菌分解糖能产酸并产气，记录用“＋”表示；如杜氏小管内没有气泡为阴性
反应，记录用“－”表示。
（二） 乙酰甲基甲醇试验(V．P试验)
1 目的
了解鉴别不同肠杆菌科各菌属的乙酰甲基甲醇试验原理，并掌握其操作方法．
2 原理
某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养液中能分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱
羧成乙酰甲基甲醇，后者在强碱环境下，被空气中氧，氧化为二乙酰，二乙酰与
蛋白胨中的胍基生成红色化合物，称V－P（+）反应。
3 材料
3.1 菌种
大肠埃希氏菌（Escherichia coli）、产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes）、普通
变形杆菌（Proteus vulgaris）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）的斜面菌种
3.2 培养基
葡萄糖蛋白胨培养液的试管
４ 流程
培养液试管→标记→接种→培养→观察→记录
5 步骤
5.1 标记试管
取5支装有葡萄糖蛋白胨培养液的试管，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通
变形菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃
恒温箱中，培养24～48h。
5.3 观察记录
取出以上试管，振荡2min。另取5支空试管相应标记菌名，分别加入3～5ml以
上对应管中的培养液，再加入40％NaOH溶液10～20滴，并用牙签挑入约0.5～
1mg微量肌酸，振荡试管，以使空气中的氧溶入，置37℃恒温箱中保温15～30min
后，若培养液呈红色，记录为V.P.试验阳性反应（用“＋”表示）；若不呈红色，
记录为V.P.试验阴性反应（用“－”表示）。
注意：原试管中留下的培养液用作甲基红试验。
（三） 甲基红试验（M.R.试验）
1 目的
了解鉴别肠杆菌科各菌属的甲基红试验原理，并掌握其操作方法．
2 原理
肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解
中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产物，
可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红。
3 材料
3.1 菌种
同V．P试验
3.2 培养基
同V．P试验
4 流程
培养液→指示剂→观察→记录结果
5 步骤
于V.P.试验留下的培养液中，各加入2～3滴甲基红指示剂，注意沿管壁加入，
仔细观察培养液上层，若培养液上层变成红色，即为阳性反应；若仍呈黄色，则
为阴性反应，分别用“＋”或“－”表示。
（四）吲哚试验
1 目的
掌握吲哚试验(Ehrlich法)的原理和方法
2 原理
有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚(靛基质)。吲哚本身
没有颜色，不能直接看见，但当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，该试剂与吲哚
作用，形成红色的玫瑰吲哚。
3 材料
3.1 菌种
测试菌株．
3.2培养基
蛋白胨水培养基
3.3 试剂
二甲基氨基苯甲醛溶液、乙醚。
4 流程
标记试管→接种→培养→观察→记录
5 步骤
5.1 试管标记
取装有蛋白胨水培养液的试管5支，分别标记大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形
菌、枯草芽孢杆菌和空白对照。
5.2 接种培养
以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，第5管作空白对照不接种，置
37℃恒温箱中培养24～48h。
5.3 观察记录
在培养液中加入乙醚1～2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙
醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5～10滴吲哚试剂（加入吲哚试剂
后切勿摇动试管，以防破坏乙醚层影响结果观察），如有吲哚存在，乙醚层呈现
玫瑰红色，此为吲哚试验阳性反应，否则为阴性反应，阳性用“＋”、阴性用“－”
表示。
6 结果
记录生理生化反应测定结果．
7 思考
1以上生理生化反应能用于鉴别细菌，其原理是什么？
2 细菌生理生化反应试验中为什么要设对照．
3 试设计一试验方案，鉴别一株肠道细菌．