冰冻切片免疫荧光染色步骤
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冰冻切片免疫荧光染色步骤：
(1)冰冻切片取出，室
温放置使其干燥后，用冷丙酮于4C固定10分钟。
( 2)切片用
0.01MPBS清洗后加入
1.2%双氧水作用30 分钟，以除去非特异染色。
( 3)
0.01M PBS清洗，3次X1分钟。
( 4)
0.3%Triton X-100作用30 分钟。
(5)加入以抗体稀释液(含1%BSA勺
0.01M PBS，pH
7.4)稀释至工作浓度的一抗，4C过夜。
( 6)
0.01M PBS清洗，3次X1分钟。
(7)加入荧光抗体TRITC-lgG( 1: 100)或FITC-lgG( 1: 100),室温孵育2 小时。
( 8)
0.01M PBS清洗，3次X1分钟。
( 9)缓冲甘油封片，荧光xx 下观察。
对照组:
采用空白对照:
除用
0.01MK PBS代替一抗外，其余程序与实验组相同载玻片处理步骤：（1 ）硫酸浸泡过夜。
（2）自来水冲洗干净后双蒸水冲洗3 遍。
（3）晾干后在
0.1%明胶中快速浸泡后取出。
室温晾干或37 C烤干备用。