尿素测定方法

实验十七

实验名称：尿素的测定

实验目的与要求：掌握测定血清尿素的基本原理

实验仪器、试剂：半自动生化分析仪、尿素测定试剂盒

实验原理：

尿素经脲酶水解生成NH3与CO2,在谷氨酸脱氢酶（GLDH）的作用下，氨与α-酮戊二酸及还原型辅酶Ⅰ（NADH）反应生成谷氨酸和NAD+，NADH在340nm 处的吸光度下降速率与待测样品中尿素的含量成正比。

操作方法：

1、将试剂R1：R2=4：1混合，即为工作液

2、按下列顺序加入各试剂

单位ml 空白标准样本

蒸馏水0.01 ——

样本－－0.01

标准液－0.01 －

工作液 1.0 1.0 1.0

3、混匀各管，340nm,空白管调零，延时30秒，读取初始吸光度A1，60秒后读取A2，计算ΔA

实验现象与数据：记录ΔA

结果分析与结论：尿素＝ΔA样/ΔA标×C标（8.32 mmol/l）

参考范围：1.7-8.3mmol/l

临床意义：

实验十八

实验名称：血清尿酸的测定

实验目的与要求：掌握尿酸酶-过氧化物酶耦联法测定尿酸的基本原理

实验仪器、试剂：尿酸测定试剂盒，722E/723分光光度计

实验原理：尿酸酶氧化尿酸，生成尿囊素和过氧化氢，在过氧化物酶催化下，过氧化氢使ESBmT和4－氨基安替比林缩合成有色化合物，其在546nm吸光度与尿酸浓度成正比。

操作方法：

按以下步骤操作

单位ml 标准测定空白

样本－0.025 －

标准液0.025 －－

蒸馏水－－0.025

酶试剂 1.0 1.0 1.0

混匀37℃温浴5min，以空白管调零。546nm，0.5cm比色杯，测定各管的A 实验现象与数据：记录各管的A

结果分析与结论：血清尿酸浓度＝A样/A标×C标（357μmol/l）参考值：男202－416μmol/L，女142-339μmol/L

临床意义：

思考题：P223第2题