茶多酚对移植性S_180_小鼠肿瘤模型抑瘤率的影响

・718　・中华中医药杂志(原中国医药学报)2005年第20卷第12期本,19132　清・金保三.《烂喉丹痧辑要・叶天士医案附录・丹痧经验阐解总论原本》.清光绪十八年玉台校刻本3　张赞臣.中医咽喉科发展概况.中华医史杂志,1982,(1):314　傅再希.应该认清几种传染病是外洋输入的.江西中医药,1959,(10):85　陆渊雷.古无今有的几种发疹性热病.国医导报, 1941,(2):76　清・高秉均.疡科心得集.卷上.北京:中国书店影印本,1987,117　清・陈耕道.《疫痧草・自序》.清光绪三十年魏塘紫阳氏铅印本.8　清・夏春农.疫喉浅论・序.上海:耕心山房朱氏石印本,19129　丁甘仁.喉痧症治概要・序.上海:孟河崇社堂铅印本,192710　曹炳章.喉痧症治要略・喉痧与白喉之预防.浙江:绍城和济药局铅印本,1936:9(收稿日期2005年6月14日)・论著・茶多酚对移植性S180小鼠肿瘤模型抑瘤率的影响3徐力　侯丽　刘杰　张燕明　陈信义(北京中医药大学东直门医院肿瘤血液科,北京100700) 摘要:目的:通过建立移植性S180小鼠肿瘤动物模型,观察茶多酚灌胃、腹腔注射与局部注射3种途径给药对移植性肿瘤抑制率的影响。

方法:移植性S180小鼠肿瘤动物模型建立后,随机分茶多酚灌胃给药(大、中、小剂量)、局部注射(大、中、小剂量)、腹腔注射(大、中、小剂量)、人参皂苷Rg3灌胃、环磷酰胺(CT X)腹腔注射以及模型对照12组,以观察实验各组抑瘤效应。

结果:茶多酚不同剂量、不同给药途径的肿瘤抑制率均大于30%,与模型对照组相比,经t检验,有统计学意义(P<0105)。

结论:茶多酚3种途径给药均具有明显抗肿瘤效应。

关键词:茶多酚;肿瘤抑制率;移植性S180小鼠肿瘤动物模型 国内外大量的研究资料证实,茶多酚具有明显的抗肿瘤效应,但目前均为口服用药单一途径。

在临床实际中,肿瘤治疗需要依据患者个体病情采用多种给药途径,包括口服、静脉注射、局部介入等。

笔者利用移植性S180小鼠肿瘤动物模型,观察茶多酚灌胃、腹腔注射与局部注射3种途径对移植性S180小鼠肿瘤抑制率的影响。

材料与方法11动物　雄性I CR小鼠,体重18～20g,南京中医药大学实验动物中心,许可证号:SYXK (苏)200220053。

21药物　茶多酚,中国农业科学院杭州茶叶研究所,纯度98%。

人参皂苷Rg3为参一胶囊,每粒含人参皂苷Rg310mg,吉林亚泰制药有限公司,批号20030601。

三健牌环磷酰胺(CTX),上海华联制药有限公司,批号020706。

31方法311　小鼠肉瘤S180模型建立　选取饲养1周的S180腹水瘤小鼠,抽取乳白色腹水,血性腹水不用,加生理盐水适量稀释成1∶4的瘤细胞悬液,调细胞数至1×108,每只鼠接种012m l于右前肢腋窝 3国家自然科学基金资助项目(No.30472280)通讯作者:陈信义,北京市海运仓5号下,整个接种时间在1h内完成。

312　分组及用药　待肿瘤生长至100～300mm3时,将130只S180小鼠随机分茶多酚灌胃给药组、局部注射组、腹腔注射组,人参皂苷Rg3灌胃组,CTX腹腔注射组,模型对照组,正常空白对照组。

其中,茶多酚不同给药途径又分大、中、小3个剂量组。

共计13组,每组10只。

313　给药剂量与方法　①茶多酚灌胃给药组:大、中、小剂量分别为6175、2125、0175mg/d,2005年第20卷第12期中华中医药杂志(原中国医药学报)・719　・生理盐水配制,每天灌胃014m l。

②茶多酚腹腔注射组:大、中、小剂量分别为214、018、0127mg/ d,生理盐水配制,每天注射012m l。

③茶多酚局部注射组:大、中、小剂量分别为712、214、018mg/d,生理盐水配制,每天注射011m l。

④人参皂苷Rg3灌胃组:011mg/d生理盐水配制,每天灌胃014m l。

⑤CT X腹腔注射组:按50mg/(kg・d)腹腔注射给药,每天注射012m l。

⑥模型对照组:以每天014m l生理盐水灌胃。

⑦正常空白对照组:以每天014m l生理盐水灌胃。

于实验第6日处死小鼠,迅速剥离各实验组肿瘤组织,称重,计算抑制率。

41统计学方法　实验数据用珋x±s表示,应用SPSS1010软件进行t检验。

结果测量治疗前后小鼠瘤块重量,通过下列公式计算肿瘤抑制率。

肿瘤抑制率(%)=[(模型对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/模型对照组平均瘤重]×100%。

由表1可以看出,茶多酚局部注射、腹腔注射、灌胃给药各个剂量组肿瘤抑制率均大于30%。

茶多酚不同剂量、不同给药途径瘤重与模型对照组相比,经统计学处理,有统计学意义(P<0105)。

对表1进一步分析还可以看出:①局部注射组与腹腔注射组相应大、中、小剂量组比较,无统计学意义(P>0105);局部注射中剂量组与腹腔注射大剂量组比较,有统计学意义(P< 0105)。

②局部注射大、中剂量组与灌胃给药大、小剂量组比较,有统计学意义(P<0105)。

③灌胃给药组与腹腔注射组相应大、中、小剂量组比较,无统计学意义(P>0105)。

表1　实验各组瘤重比较(n=10,珋x±s)组别瘤重(g)抑瘤率(%)模型对照组 2100±0160-茶多酚局部注射大剂量组0168±01403#66100中剂量组0170±01233△#65100小剂量组1103±0152348150茶多酚腹腔注射大剂量组1117±0150341150中剂量组1102±0161349100小剂量组0192±0155354100茶多酚灌胃给药大剂量组1138±0119331100中剂量组1107±014346150小剂量组1118±0138341100 CTX腹腔注射组 0198±0129351100人参皂苷Rg3灌胃组1153±0184323150 注:与模型对照组比较,3P<0105;与茶多酚腹腔注射大剂量组比较,△P>0105;与茶多酚灌胃给药大、小剂量组比较,#P <0105。

讨论临床应用的抗肿瘤药均需经过动物移植瘤实验确定抑瘤率,并得到相应国家药政部门批准后才能在临床推广应用。

因此,移植性肿瘤动物模型的建立为抗肿瘤药物筛选与新药药理学研究提供了理想实验工具。

其优点有:①接种一定数量瘤细胞或无细胞滤液(病毒性肿瘤)后,可使一群动物生长具有同样特征的肿瘤,且生长速度比较一致,个体差异较小。

②移植性肿瘤在动物体内成活率近100%,对宿主的影响与人体肿瘤类似。

③利用移植性肿瘤动物模型易于客观判断抗肿瘤药物疗效。

④移植性肿瘤可在同种或同品系动物中连续移植传代,可提供不同实验研究需求。

⑤实验周期相对不长,在短时间内即可判定抗肿瘤药物效果。

⑥移植性肿瘤在动物机体内生长过程更接近人类实体瘤生长环境。

⑦比较容易判定药物毒性,能够为临床用药安全性提供帮助。

目前,世界上已保留了近500种包括各种实体瘤、腹水瘤和白血病在内的移植性肿瘤细胞体系。

国内也创建了50多种移植性肿瘤细胞体系,这为研究抗肿瘤药物提供了极大方便。

尽管动物移植瘤有增殖速度较快、体积倍增时间短等与人类实体瘤不同的细胞动力学特点,但到目前为止,移植性肿瘤动物实验仍是抗肿瘤药物最常用的方法。

通过对实验动物的系统观察可以整体判断动物对抗肿瘤药物的耐受剂量、抗肿瘤效果与可能出现的不良反应。

因而,目前还没有一种体外实验技术能够替代。

近些年来,国内外有大量的研究资料证实茶多酚具有明显的抗肿瘤效应,但给药途径单一。

在动物实验中,单一的灌胃用药途径常会影响对茶多酚实际疗效的估价。

因此,笔者参照了其他药物研究模式,设计了灌胃给药、腹腔注射与局部注射3种给药途径,通过不同剂量、不同给药途径全面观察茶多酚抗肿瘤疗效。

从茶多酚灌胃给药3个剂量组疗效分析,大剂量组抑瘤率仅为31%,不及中、小剂量组,表明用药剂量与抑制率之间无明显的相关性,其研究结果与文献报道的茶多酚口服抑瘤实验相一致,似乎说明茶多酚口服用药途径不具备细胞毒药物典型的剂量依赖性。

既往的文献资料表明,茶多酚体外对癌细胞直接杀灭作用不强,而在体内却显示出较强的抑瘤活性,提示茶多酚抑瘤效果可能需要在体内吸收后而发挥作用。

可以推测,茶多酚在体内吸收后可转化为具有抑瘤活性更强的物质,或许是茶多酚复杂成分及多样性的药理功效・720　・中华中医药杂志(原中国医药学报)2005年第20卷第12期相互协调作用的结果。

有研究证实,茶多酚抗肿瘤机制与该活性成分能够直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞凋亡与分化、调节免疫机制、抑制端粒酶活性、阻断信号传导等有直接关系。

依据笔者研究结果分析认为,茶多酚灌胃大剂量组疗效差的原因可能与吸收不良有一定关系。

茶多酚偏酸,口服后会刺激胃肠道黏膜,影响其吸收功能,生物利用度低。

所以,大剂量组效果反不及中、小剂量组。

茶多酚局部注射3个剂量组肿瘤抑制率均大于35%,可以判定局部注射具有明显的抗肿瘤效果。

同时,可以看出局部注射3个剂量组的抑瘤率与剂量明显呈正相关性,提示局部注射的抑瘤效应可能是细胞毒作用参与的结果,至于是否会通过其他机制而发挥治疗作用,有待进行深入研究。

茶多酚局部注射用药可直接达到肿瘤的靶部位,局部药物浓度高,有利于对瘤体细胞的直接杀伤。

局部注射用药的有效性为探索茶多酚介入用药提供了有益的尝试。

茶多酚局部注射所发挥的效果充分说明,该活性成分有可能通过基础与药理学研究成为一种新介入药物应用于临床。

茶多酚腹腔注射3个剂量组肿瘤抑制率也大于35%,证明具有抗肿瘤效果。

进一步分析可以发现腹腔注射3个剂量组的抑瘤率与剂量明显呈负相关,剂量越小抑瘤率越高。

产生这样结果,笔者认为与茶多酚偏酸有关,经测试腹腔注射大、中、小剂量组的pH值分别为414、416、418,剂量越大酸性程度越强,腹腔注射后可能引起急性炎性变而影响了肠道吸收,导致生物利用度下降。

对于这一问题的处理有望通过制剂工艺的改造来加以克服。

茶多酚3种不同给药途径比较分析,局部注射疗效好于灌胃给药组和腹腔注射组。

局部注射中剂量组优于腹腔注射大剂量组,局部注射大、中剂量组优于灌胃给药大、小剂量组,而灌胃给药与腹腔注射组无显著差异。

总体来看,茶多酚不同剂量与不同给药途径所得的结果皆提示,该活性成分具有明显的抗肿瘤效应。

基于对以往研究资料分析,可以推测茶多酚抗肿瘤机制是综合作用的结果。

其多途径、多层次、多靶点的抑瘤作用正是中药共有的抑瘤特征[1～11]。

对于茶多酚抗肿瘤机制既往文献已有较多阐明,如直接杀伤肿瘤细胞、诱导肿瘤细胞分化与凋亡、抗突变、调节免疫等。