食品检测中单纯使用生化鉴定系统鉴定双歧杆菌的可行性研究
微生物检测技术在食品检验中的运用
微生物检测技术在食品检验中的运用发布时间：2023-07-10T03:05:54.750Z 来源：《科技新时代》2023年6期作者：秦琨鹏[导读] 在有效的运用微生物检测技术过程，技术人员要重视科学的进行技术优化，创新微生物检测技术方法，全面的运用到实践工作中，以提高微生物检测技术水平，全面保证食品检验工作质量。
哈尔滨顶津食品有限公司摘要：随着新时期技术的不断发展，在食品检验过程，技术人员通过运用微生物检测技术，能全面提高检验水平，也利于提高检验工作效率。
基于此，通过全面分析，对微生物检测技术进行了具体探索，从多方面总结了运用微生物检测技术开展食品检验工作的途径，希望分析能全面提高实践研究能力。
关键词：微生物检测技术；食品；检验引言在有效的运用微生物检测技术过程，技术人员要重视科学的进行技术优化，创新微生物检测技术方法，全面的运用到实践工作中，以提高微生物检测技术水平，全面保证食品检验工作质量。
通过进一步分析，本文总结了微生物检测技术的重要性，探索了将微生物检测技术有效运用到食品检验中的措施。
1微生物检测技术的概述微生物技术不只是单独的某个技术，是运用技术进行食品的有效检测，对食品是否存在有害物质加以重点分析，像这样的技术都属于微生物检测技术。
目前，食品安全检测主要检测菌落总数，大肠菌群等，而在食品安全当中应用微生物检测技术可以让不利于人体安全的因素被降低，确保了身体的健康，因此在食品安全检测的整个过程中，广泛应用着微生物检测技术。
作为技术人员，在食品检验过程，必然也要运用到微生物检测技术，因此要不断学习先进的技术方法，科学的运用到实践之中，以确保微生物技术能够广泛运用到食品检验领域。
2微生物检测技术的重要性在食品检验时，微生物检测技术逐渐得到重视，变得越来越重要。
在现代化食品检测行业，最主要的技术方法就是微生物检测技术，之所以如此是该技术通过让食品检测效率不断提高，确保了检测数据的准确性。
有关部门如今对微生物技术在食品检测当中的应用非常的关注，在实施微生物检测技术方法和微生物检测技术时，制定了比较重要的一些政策。
双歧杆菌保藏性能研究
《 品研究 与开发｝ ０２年 ６月第 ２ 卷第 ３期 食 ２０ ３ 由于可 食 性包 装 膜 能 有 效 地解 决 保 鲜 与环 境 的问题 ，因此 ，用可食性包 装代替 塑 料包装 已成 为 当前 包装 行业 的一太热 门技 术。 目前 ，世界 各 国都 在 争相 投入资金 ，加 紧开展这 方面 的研究工 作 。现 在， 已取得 了可喜 的成果 ， 国 “ 美 纳蒂克 ” 发研 制 开
７ ５
可食性包 装被开 发 研制 出来 ，可食性包 装 膜会有更
加广 阔的应用前 景 。 参 考 文 献
１ Ｇｏｎ ａ ｄ Ｎ Ｇｕｄ ｅ ｔＢ ｏ— ｐ ｃ ａ ｅ ｇ： ｔｃｈ ｌ ｇ ａ ｄ ｐ ｌ ｔｒ ｈ ｒ Ｂｉ ａｋ ｇ ｎ ｅ ｍｏ ｏ ｙ ｂ ｒ＞
ｐ ｒｉｓ。 ｇｒｃ ｌｕ ａ ｒｇｎ ｎ Ｆｏ ｄ Ｐａ ｋ ｇｎ ｎ ｅｅ ｖ — ｅ ｔｅ ｆａ ｉｕｔ ｒ ｌｏ ｉｉ Ｉ ｏ ｃ ａ ｉｇ ａ ｄ Ｖｒｓ ｒ ａ
食品中病原菌和微生物引起的食 品腐烂。可食性包
装膜 是一 种 目前 最有效 的 ＭＡＰ保 鲜技 术 ，且降低 包 装材料 的费用 ，投 资花费 远低于其 它保鲜 技术 的 花费 ， 信 在不久 的将来 ， 相 会有更 多 的 ， 能更好 的 性
ａ ｄ ｏ ｉ ｅ ｒｄｈｅＰ ｃ ａ ｉｇｍａｅ ｉｓ 【 ｖｅ Ｆ ｏ ｎ ／ ｒｂｏ ｇａ ａ ｌ ａｋ ｇｎ ｔｒ ｌ Ｒｅ ｉ ｄ ａ ｗ】 ｏ ｄＡｄ
２ Ｂｒ ｄ ｎ ｒ Ｈ ， Ｃ ｅ ｌＥｄｈ ｅＦｉ ｓａ ｄ Ｃ ｔｎ ｓ ｆｏ ａｎ ｅ ｈｕ ｇ Ａ Ｌ ｔａ ｉｌ ｌ ｎ ｏａ ｉｇ ｒ ｍ ｍ
Ｓ ｙＰ ｏｅｎＪＦ ｏ ｃ ９ ３ ５ （ ） １８ ～１８ ｏ ｒ ｔｉ ｏ ｄＳ ［１ ９ ．８ ５ ０ ６ ０９
GB4789. 35乳酸菌检验
乳酸菌计数
嗜热链球菌计数 根据待检样品嗜热链球菌活菌数的估计，选 择2 个～3 个连续的适宜稀释度，每个稀释 度吸取0.1 mL样品匀液分别置于2 个MC 琼 脂平板，使用L 形棒进行表面涂布。 36℃±1℃，需氧培养48 h±2 h后计数。嗜 热链球菌在MC 琼脂平板上的菌落特征为： 菌落中等偏小，边缘整齐光滑的红色菌落， 直径2 mm±1mm，菌落背面为粉红色。
报告（GB4789.35-2010）
7.3.1 选取菌落数在30 CFU～300 CFU 之间、无蔓 延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU 的 平板记录具体菌落数，大于300 CFU 的可记录为多 不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平 均数。 7.3.2 其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不 宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释 度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余 一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘 以2，代表一个平板菌落数。 7.3.3 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长 时，则将每条单链作为一个菌落计数。
GB/T 4789.35－2003乳酸菌饮料中乳酸菌检验流程
SN/T 1941.1-2007: 检验方法有三部分： 第1部分：分离与计数方法； 第2部分：PetrifilmTM测试片法； 第3部分：乳杆菌的PCR法
SN标准
GB/T 4789.35－2008 乳酸菌饮料中乳酸菌检验修订
本标准与GB/T 4789.35－2003相比主要修 改如下： ——将选择性分离培养基由改良TJA 培养基 （改良番茄汁琼脂培养基）改为MRS培养基； ——增加API 50CH 诊断试剂条； ——乳酸菌计数由倾注法改为涂布法。
乳酸菌计数
乳杆菌计数 乳酸菌总数结果减去 双歧杆菌与 嗜热链球 菌计数结果之和即得乳杆菌计数。
双歧杆菌能力的影响
双歧杆菌能力的影响本文作者：王彦、孟祥晨、王丽群、李馨单位：东北农业大学乳品科学教育部重点试验室双歧杆菌是人和动物肠道最常见的革兰氏阳性有益细菌,约占人体肠道可培养微生物的10%。
双歧杆菌属的微生物是应用较多的益生菌之一,在食品中通常通过添加于乳制品进行食用消费。
研究表明,双歧杆菌可以通过平衡肠道菌群维持机体的整体健康水平。
双歧杆菌经食用进入体内,发挥益生功能的先决条件是其在肠道的黏附与定植,例如黏附能够缩短痢疾持续时间[1],刺激免疫应答[23],竞争排斥病原微生物[4]等,因此,黏附肠道能力是筛选益生菌的一个重要标准。
双歧杆菌被摄食后,在未达到肠道前会经历胃的酸性环境,而人体胃液的酸度很强,通常的pH为3.0,空腹或食用酸性食品时可达1.5,食用碱性食物时可达4.05.0[5],双歧杆菌经历该酸性环境后,其黏附作用会受何影响还不清楚。
因此,本文将主要探讨不同pH 的酸性环境对双歧杆菌黏附能力的影响。
由于体内实验实施困难,体外细胞培养,尤其是人结肠癌细胞系Caco-2细胞,可作为模型用于分析菌株的黏附[67]。
另外,有研究表明双歧杆菌的黏附能力与细菌表面组成及结构直接相关,所以菌体表面的物理化学性质也可以间接反应菌体的黏附能力,菌体细胞表面的物理化学特征主要取决于其表面疏水性和自动聚集能力,Pan等[8]通过对23株双歧杆菌疏水性和黏附能力进行比较分析,建立了能够反映双歧杆菌表面疏水性与黏附性之间关系的回归方程(R2=0.78),疏水性越强的菌株黏附能力越强。
王丽群等[9]测定了7株双歧杆菌表面疏水性和自动聚集能力,同时观察了双歧杆菌的黏附能力,结果表明,双歧杆菌的黏附能力、自动聚集能力及表面疏水性具有一定的正相关性。
因此,在评价低pH处理对菌株黏附性影响时,本研究同时确定对菌体自动聚集能力和表面疏水性的影响。
1材料与方法1.1试验材料1.1.1试验菌种:两歧双歧杆菌KLDS2.0603分离自成人粪便,由乳品科学教育部重点实验室冻干保藏。
双歧杆菌的计数检验方法——指导
本指导方法介绍了科汉森双歧杆菌BB-12使用的培养基及计数方法。
本方法适用于发酵乳中单株BB-12或混合菌株中BB-12的计数。
本方法基于国际标准草案ISO/WD…I IDF 220 建立，特别适用于BB-12双歧杆菌。
检测发酵乳制品中的微生物，样品准备、稀释以及平板培养可以与P-9指导方法结合使用。
双歧杆菌 单一菌株培养基 MRS 琼脂培养基，每升培养基中添加5 ml 盐酸半胱氨酸储备溶液*技术 倾注平板厌氧培养，37℃（99℉），3天双歧杆菌 在AB ，BC ，BY ，ABC ，ABT ，ABY ，BCT 中，或与中温菌混合。
培养基 MRS 琼脂培养基，每升培养基中添加5 ml 盐酸半胱氨酸储备溶液，2.5 ml Mupirocin 储备溶液。
技术 倾注平板厌氧培养，37℃（99℉），3天注释 所有菌落均计为双歧杆菌Mupirocine 抑制大多数乳酸菌通常，我们始终建议使用显微镜镜检几个菌落，以确认是正确的菌株。
缩写词缩写词：：A：嗜酸乳杆菌B：双歧杆菌C：类干酪乳杆菌类干酪亚种T：嗜热链球菌Y：由保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌组成的酸奶菌种。
准备培养基及储备溶液准备MRS 琼脂培养基琼脂培养基：：溶解70g MRS 琼脂粉（ Difico 288210 ）到1000ml 蒸馏水中，加热至沸腾并不断搅拌直至完全溶解。
分装培养基至瓶中，用121℃（250℉），15 min 高压杀菌。
高压杀菌后pH 值：6.5+/-0.2，25℃.准备好的MRS琼脂培养基可以在5+/-3℃的黑暗条件下储藏三个月。
倾注好的培养基平板可以在5+/-3℃的黑暗条件下储藏10天。
准备盐酸半胱氨酸储备溶液准备盐酸半胱氨酸储备溶液：：盐酸半胱氨酸 10g Merck No 2839蒸馏水 100 ml高压杀菌釜灭菌溶液储藏在室温条件下。
货架期最长2个月，如果有沉淀发生，则弃掉溶液。
准备Mupirocin 储备溶液储备溶液：：Li-Mupirocin 100 mg ( , art.no: EPM3806000) 蒸馏水 10 ml过滤除菌（0.45μm）如果溶液不能立即用完，建议将溶液分装到灭菌冷冻管中，冻藏在-20℃。
生化编码鉴定实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握数字编码鉴定技术的原理和操作方法。
2. 通过生化编码鉴定，对肠杆菌科细菌进行种、型鉴定。
二、实验原理数字编码鉴定法是一种基于微生物生理生化特性的鉴定方法。
通过一系列生化反应，将实验结果转换成生物型数字，再查阅编码鉴定手册，即可得到待检菌的种、型鉴定结果。
肠杆菌科细菌生化编码鉴定采用常规生化反应11项、补充试验21项。
11项常规生化反应分为4组，包括葡萄糖产酸（A）、产气（G）反应等。
三、实验材料1. 肠杆菌科细菌生化编码鉴定管（11种10支）2. 配套试剂（靛基质试剂、无菌液体石蜡、苯丙氨酸试剂等）3. 肠杆菌科细菌生化鉴定编码册四、实验步骤1. 将待检菌接种于生化编码鉴定管中，进行常规生化反应。
2. 观察实验结果，记录各项反应结果。
3. 将实验结果转换成生物型数字。
4. 查阅编码鉴定手册，根据生物型数字得到待检菌的种、型鉴定结果。
五、实验结果1. 葡萄糖产酸（A）、产气（G）反应：结果为阳性。
2. 赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶、氨基酸脱羧酶对照：结果为阴性。
3. 硫化氢、蛋白胨水：结果为阳性。
4. 乳糖、卫茅醇、苯丙氨酸、尿素、西蒙氏柠檬酸盐：结果为阴性。
根据实验结果，将各项反应结果转换成生物型数字，查阅编码鉴定手册，得到待检菌的种、型鉴定结果为“肠杆菌科细菌”。
六、讨论与分析1. 实验过程中，严格按照操作步骤进行，确保实验结果的准确性。
2. 实验结果与编码鉴定手册中的结果相符，说明本次实验操作正确。
3. 数字编码鉴定法具有操作简便、鉴定快速、结果准确等优点，适用于临床细菌学检验和微生物学研究。
七、注意事项1. 实验过程中，注意无菌操作，防止污染。
2. 实验结果转换成生物型数字时，注意查阅编码鉴定手册，避免出错。
3. 实验结束后，及时清洗实验器材，保持实验室卫生。
八、实验总结本次实验通过生化编码鉴定法对肠杆菌科细菌进行了种、型鉴定，实验操作规范，结果准确。
通过本次实验，掌握了数字编码鉴定技术的原理和操作方法，为今后临床细菌学检验和微生物学研究奠定了基础。
食品微生物检验中大肠杆菌的快速检测方法研究
食品微生物检验中大肠杆菌的快速检测方法研究目录一、内容概括．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.研究背景与意义．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22.研究目的和任务．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33.研究现状及发展趋势．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4二、大肠杆菌及其检测方法概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51.大肠杆菌的基本特性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62.大肠杆菌的检测方法及原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73.常见检测方法的优缺点分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．8三、食品微生物检验中大肠杆菌的快速检测方法研究．．．．．．．．．．．．．91.研究材料与方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．101.1 实验材料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．111.2 检测方法．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．122.实验结果与分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．132.1 检测结果．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．142.2 对比分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．153.讨论与改进建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．163.1 检测结果准确性分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．183.2 影响因素分析．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．193.3 改进方向和建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．20四、快速检测方法的实际应用与效果评估．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．221.应用范围及场景．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232.实际应用流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．243.效果评估及反馈机制．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．25五、快速检测方法的优化与标准化建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．261.方法优化策略．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．272.标准化建设的必要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．293.标准化实施路径．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．30六、结论与展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．311.研究结论总结．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．312.研究成果对行业的贡献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．323.未来研究方向和展望．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33一、内容概括本文档主要研究了食品微生物检验中大肠杆菌的快速检测方法。
食品生化实验报告
一、实验目的1. 了解食品中常见的生化成分及其生理功能。
2. 掌握食品生化实验的基本操作方法。
3. 学会运用生化方法检测食品中的主要成分。
二、实验原理食品生化实验是研究食品中各种生化成分的组成、性质、生理功能及其相互关系的一门科学。
本实验主要检测食品中的蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素等成分。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、牛奶、面粉、水果、蔬菜等。
2. 实验仪器：电子天平、显微镜、离心机、紫外可见分光光度计、恒温水浴锅、滴定管等。
四、实验方法1. 蛋白质测定（1）原理：利用双缩脲试剂与蛋白质中的肽键发生反应，产生紫色复合物，根据紫色复合物的吸光度值判断蛋白质含量。
（2）步骤：①称取1g鸡蛋清，加入9mL蒸馏水，搅拌均匀。
②取2mL上述溶液，加入2mL双缩脲试剂，摇匀，室温放置5min。
③用紫外可见分光光度计在波长540nm处测定吸光度值。
2. 脂肪测定（1）原理：利用索氏抽提法提取食品中的脂肪，再通过比色法测定脂肪含量。
（2）步骤：①称取2g牛奶，加入10mL石油醚，用索氏抽提器提取脂肪。
②将提取的脂肪用蒸馏水洗至无色，干燥后称重。
③根据脂肪重量计算脂肪含量。
3. 碳水化合物测定（1）原理：利用斐林试剂与碳水化合物中的还原糖反应，产生红色沉淀，根据沉淀颜色深浅判断还原糖含量。
（2）步骤：①称取1g面粉，加入10mL蒸馏水，搅拌均匀。
②取2mL上述溶液，加入2mL斐林试剂，水浴加热5min。
③观察沉淀颜色深浅，判断还原糖含量。
4. 维生素测定（1）原理：利用紫外可见分光光度计测定食品中维生素的含量。
（2）步骤：①称取1g水果，加入10mL蒸馏水，搅拌均匀。
②用紫外可见分光光度计在特定波长下测定吸光度值。
③根据吸光度值计算维生素含量。
五、实验结果与分析1. 蛋白质含量：鸡蛋清中蛋白质含量为8.6%，牛奶中蛋白质含量为3.4%。
2. 脂肪含量：牛奶中脂肪含量为3.8%，水果中脂肪含量为0.2%。
微生物学实验报告——双歧杆菌分离
微生物学实验报告乳酸菌分离纯化——双歧杆菌的分离纯化2012/6/5实验目的：从酸奶等富含乳酸菌的物质中分离到具有活性的双歧杆菌并进行初步鉴定。
实验原理：双歧杆菌是动物体肠道内的正常优势生理细菌，革兰氏阳性，无芽孢，没有运动能力，最适生长温度37℃~41℃，专性厌氧。
双歧杆菌的细胞呈现多样形态，有短杆较规则形、纤细杆状具有尖细末端形、球形、长杆弯曲形、分枝或分叉形、棍棒状或匙形。
单个或链状、V形、栅栏状排列，或聚集成星状。
双歧杆菌的菌落光滑、凸圆、边缘完整、乳脂至白色、闪光并具有柔软的质地(7)。
因为双歧杆菌是严格厌氧细菌，所以双歧杆菌的培养条件必须无氧，且培养基要具有低氧化还原电势。
培养双歧杆菌最常用的方法是亨盖特厌氧滚管法(1, 5, 7)，此外还有厌氧箱法，厌氧袋法和厌氧罐法等。
亨盖特厌氧滚管法是亨盖特（Hungate）于1950年发展起来的一套严格厌氧微生物的培养技术，主要原理是利用铜柱氧化除氧的滚管分离纯化法。
亨盖特厌氧滚管法的优点是可以实时检查培养物，无氧效果好且花费不高，但需要专门的仪器和技术性很强的操作。
本实验采用的简易厌氧罐法是一种操作简单且成本很低的方法，主要原理是利用焦性没食子酸除去厌氧罐内的氧气。
该方法的缺点是焦性没食子酸与NaOH反应过程中会产生一定量的NO，可能不利于细菌的生长；此外，过量的NaOH 会将厌氧罐中的CO2一起除掉，而CO2对多数厌氧菌的生长有促进作用。
另外，在同一个培养皿上接种好氧细菌（如大肠杆菌和枯草杆菌）能加强除氧的效果。
本实验所用的培养基参考了NPNL培养基(6)和BS培养基的配方，其中鱼粉、牛肉膏、酵母浸粉、胰蛋白胨的作用是提供氮源、维生素和生长因子，葡萄糖和乳糖为乳酸菌发酵提供糖类底物，磷酸氢二钾和磷酸二氢钾为酸碱缓冲剂，硫酸亚铁、硫酸锰为乳酸菌提供生长因子，氯化钠维持均衡的渗透压。
如果在培养基中加入一定浓度的抗生素，比如硫酸卡那霉素（75μg/ml）、硫酸新霉素（30-200μg/ml）、硫酸巴龙霉素（20-200μg/ml）、萘啶酮酸（15或80μg/ml）、氧化锂（3mg/ml）、丙酸钠（10或15g/L）、山梨酸（0.4g/L）等，培养基就成为双歧杆菌的选择性培养基(7)。
双歧杆菌的生长曲线测定及其氧浓度对细胞浓度的影响
菌种数
装液量为9ml试管中细胞数在0-3h双歧杆菌处于衰亡期， 菌种数不断减少从2.7*107-1.1*107CFU/mL.但3h之后菌细 胞处于生长期不断增长。
菌种数*10^7CFU/m L
4 3 2 1 0 0 3 6 9 培养时间/h 12 15 18 菌种数
装液量为11ml试管中细胞数在0h-3h双歧杆菌处于衰亡期， 细胞数不断减少从2.7*107CFU/mL-1.12*107CFU/mL.但3h之 后细胞数处于生长期不断增长。
双歧杆菌的生长曲线测定 及其氧对细胞浓度的影响
班级： 11生物技术1班 学生：陈婷 指导老师：江胜滔
一 .
双歧杆菌的概况
双歧杆菌 (Bifidobacterium)是由法国 学者Henry Tissierz 在1899年从母乳营 养儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰 氏阳性杆菌，末端常常分叉，故名双歧 杆菌。
培养基装液量为13ml的试管最适合菌种生长。
本实验不足：因为实验的时间不够长，不能准确的测到 双歧杆菌的生长情况。而且在实验过程中没有完全消毒， 操作不熟练等易造成实验误差。
谢 谢！
11ml生长曲线图 4 3
菌种数
2 1 0 0h 3h 6h 9h 培养时间 12h 15h 18h
菌种数
装液量为13ml试管中细胞数在0-3h双歧杆菌处于衰亡期， 细胞数不断减少从2.7*107-1.8*107CFU/mL.但3h之后细胞 数处于生长期不断增长。
11ml生长曲线图 4 3
菌种数
3ml生长曲线图 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 0h 3h 6h 9h 培养时间 12h 15h 18h 菌种数
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反应 24 h 后开始观察并记录结果，每 24 h 观察记 录一次。由于 API50CH 试剂条设计为乳杆菌的鉴定， 其数据库中并不能将结果鉴定为双歧杆菌。所以，本 实 验 参 考 了 国 家 标 准 GB4789.34-2016 里 双 歧 杆 菌 鉴 定 的 生 化 鉴 定 结 果 进 行 人 工 鉴 定 对 比。 结 果 发 现， API50CH 试验所得的结果并不能与国家标准鉴定结果 对应，尽管结果只代表 90% 的菌株情况，在后续没有 其他实验指标的支撑下，最终难以得到让人信服的结 果。而且，在试验观察中，API50CH 中的某些反应缓 慢阳性需要等待长达 5 d 才能趋于稳定不再改变，无 形中对试验的鉴定结果时效性产生了重要影响。
4 结果与讨论
API 鉴定系统对于这 6 株菌株在属水平上的鉴定 是可以肯定的，但在种上的鉴定仍未能完善和涉及，这 与双歧杆菌生化反应的多变特殊性不无关系。其中，多
1 材料与方法
①试验中用到的标准菌株：长双歧杆菌（ATCC15707）、 短双歧杆菌（ATCC15700）、青春双歧杆菌（ATCC15703）、 婴儿双歧杆菌（ATCC15697）、动物双歧杆菌（CICC6165）。 ②试验中菌株的复苏培养使用的培养基为商业化的 MRS 培养基，主要成分及配制方法：蛋白栋 10.0 g，牛肉粉 5.0 g，酵母粉 4.0 g，葡萄糖 20.0 g，吐温 80 1.0 mL，磷酸 氢二钾 2.0 g，乙酸钠 5.0 g，柠檬酸三 2.0 g，硫酸镁 0.2 g， 硫酸锰 0.05 g，琼脂粉 15.0 g。将上述成分加入 1 000 mL 蒸馏水中，加热溶解，校正 pH 6.2 后分装，121 ℃高 压灭菌 15 min[4]。③生化鉴定使用商业化的 API20A 与
Key words：Bifidobacterium; API20A; API50CH
中图分类号：TS207.4
双 歧 杆 菌 是 一 种 厌 氧 的 革 兰 氏 阳 性 杆 菌， 由 于 其对人体有诸多好处，如预防腹泻，减少便秘，抗过 敏、抗肿瘤、调整肠道功能及改善营养等，常作为一 类体外摄入的活性菌添加到许多不同的食品中。对于 双歧杆菌的分离与鉴定方面的研究也随着其作用的不 断发现得到了应有的重视和发展。从 1899 年法国学者 Tissier 从母乳营养儿的粪便中分离出双歧杆菌开始， 双歧杆菌已发现有 32 个亚型 [1]。其鉴定的手段也从简 单的形态学上的描述鉴定发展到构建了现代科学的分 子进化树 [2]。本文尝试通过简单的商业化 API 试剂条 对 6 种双歧杆菌进行鉴定。
3 试验结果观察
实验条每 24 h 观察一次并记下结果，直到生化反 应试剂条颜色不再改变，其结果如下。
3.1 API20A 结果
反应 24 h 后滴加 BCP 的结果基本不再改变。所 有的菌株测试结果输入数据库中皆能鉴定出为双歧杆 菌属。分别落在其数据库分类的双歧杆菌属一类与双 歧杆菌属二类中。根据数据库反馈的结果并不能将菌 株鉴定到种。虽然，数据库分类结果提示试验还能通 过附加试验——牛奶消解试验、淀粉分解试验、β-GP 试验等，进一步进行种的分类，但最终只能鉴定出其 中的 3 种双歧杆菌种。
关键词：双歧杆菌；API20A；API50CH
Abstract：According to the GB 4789.34-2016, by using API20A and API50CH bacteria identification system for identification of six kinds of Bifidobacterium, the result found that all the six strains can be identify accurately in genus level, but there are defects in identification of species level. In daily food testing which needs accurately identify the strains in species level should use molecular means as supplement.
ｄｏｉ：１０．１６７３６／ｊ．ｃｎｋｉ．ｃｎ４１－１４３４／ｔｓ．２０１８．０３．０３３
Analysis and Testing 分析检测
食品检测中单纯使用生化鉴定系统鉴定 双歧杆菌的可行性研究
Study on the Feasibility of Using API Identification System to Identify Bifidobacterium
XIANDAISHIPIN 现代食品 /109
现代食品2018年2月上正文-20180316.indd 109
2018/3/16 13:ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ1:00
分析检测 Analysis and Testing
API50CH 试剂条。
2 试验过程
实验过程与最终鉴定标准参照 GB 4789.34-2016。 为了保证菌株的活性和稳定性，先将菌株在 MRS 培 养基上厌氧培养划线分离复苏培养一代，再分别按照 说明书使用 API20A 与 API50CH 试剂条配备的培养基 （API50CH 使用的是 API50CHL 培养基）配制菌液进 行试剂条的加样，并将添加好试剂的试剂条放于厌氧 罐中，在 36 ℃下培养。
◎ 许再元 （中国广州分析测试中心，广东 广州 510070）
Xu Zaiyuan (China National Analytical Center (Guangzhou), Guangzhou 510070, China)
摘 要：依据国家标准 GB 4789.34-2016 双歧杆菌鉴定的方法，使用 API20A 与 API50CH 细菌鉴定系统对 6 种食品常用的双歧杆菌进行鉴定，试验结果发现在鉴定到双歧杆菌属方面能得到准确的结果，但在种的鉴定方 面存在较大的缺陷。在日常食品检测中，如需准确鉴定到种，引入分子的手段必不可少。