分光光度法测定大枣中总黄酮含量
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法 (2)
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光 度 法 具 有 重 复 性 好 、准 确 、简 便 、易 掌 握 、不 需 要 复 杂 的仪器设备， 加之所需试剂便宜易得， 因此该方法应用
以 淫 羊 藿 苷 对 照 品 ， 用 ＡｌＣｌ３－ 甲 醇 体 系 ， 于 ４１３ ｎｍ 测 定淫羊藿中总黄酮含量， 该方法明显优于直接法在
于测定植物中黄酮含量最为广泛［５］。近年来， 紫外分光 ２７０ ｎｍ 处［１０］测定的结果。
［２２］ Ｇｒｉｇｅｌｍｏ－ Ｍｉｇｕｅｌ Ｎ， Ｇｏｒｉｎｓｔｅｉｎ Ｓ， Ｍａｒｔｉｎ － Ｂｅｌｌｏｓｏ Ｏ．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａ－
总黄酮含量测定
1 总黄酮含量测定1．1 紫外可见分光光度法严赞开［1］综述了紫外分光光度法测定植物中黄酮含量的方法．重点介绍了单波长法、差示法、双波长法、三波长法、导数法等紫外分光光度法测定黄酮类化合物含量的原理及分析特性。
1．1．1 紫外可见分光光度法: 是以分子吸收光谱为基础的紫外－可见分光光度法，利用某些物质的分子在峰带I( 300 ～400 nm) 和峰带Ⅱ( 220 ～280 nm) 光谱区的吸光度来进行分析测定的方法。
具有简便、适用性广、准确度、精密度和重现性较好等特点，在总黄酮含量分析中发挥着重要作用。
1．1．2 比色法: 是一些药典最常用的总黄酮含量检测方法，它主要以Al( NO3 ) 3 为显色剂，在碱性条件下，利用其与总黄酮形成红色螯合物为特征。
常用于总黄酮类化合物含量测定的金属盐试剂有Al( NO3 ) 3、AlCl3 等。
1．1．3 差示分光光度法简称ΔA 法: 使用稍高于样品或稍低于样品的标准作参比，测量样品和参比间的相对吸光度。
而此相对吸光度又与样品和参比间的浓度差成比例关系，借差示工作曲线而求出样品的含量。
1．1．4 双波长和导数分光光度法: 用于测定吸收光谱曲线重达的混合物的含量而不须用解联立方程，还可分析高浓度及混浊样品，其灵敏度和准确度比普通分光光度法好。
在选择波长时，原则上除了要干扰物有相等吸光度外，还要求两波长比较接近，被测组分在该两波长处的摩尔吸收系数相差大些，这样方法的灵敏度会更高。
如果将上述双波长分光光度计上两个波长尽可能指近，使只相差1 ～2 nm，并且同时进行扫瞄，能得到试样一阶导数吸收光谱-吸光度对波长的变化率曲线，即导数分光光度法。
2 药理作用2．1 镇痛作用赵铁华等［4］研究结果显示灌胃、腹腔注射、皮下注射适宜剂量的黄芩茎叶总黄酮，对实验动物经化学和热刺激导致的疼痛反应皆有一定的抑制作用，其镇痛作用机制与中枢作用相关。
银杏总黄酮( TFG) 腹腔内注射可显著抑制甲醛致小鼠疼痛反应，延长小鼠舔足潜伏期并减少小鼠扭体反应数。
分光光度法测定总黄酮含量的实验条件研究
对差值 ,芦丁为 3219 % ,锦鸡儿为 3016 % ,沙棘为 6611 %。可见 ,乙醇浓度对该方法的最终显色影响很
大 ,所以在实际测定中 ,视样品的溶解性 ,在保证所用乙醇浓度前后严格一致的情况下 ,一般可选用
30 %～60 %的乙醇稀释定容 。
3. 2 显色试剂加入时间 、显色时间对吸光度的影 液后放置 5 min ,然后加入 NaOH 溶液 。
目前确定的用量基础上变化范围在 50 %～150 %之间 ,对吸光度基本无影响 。
4 结果与讨论
4. 1 优化后的总黄酮含量测定实验步骤 取一定量的样品置于 25 mL 容量瓶中 ,用 30 %乙醇稀释至 10 mL ;加入 017 mL 5 % NaNO2 溶液摇匀 ,立刻加入 017 mL10 % Al (NO3 ) 3 溶液摇匀 ,放置 5 min ;加入 5
01477 013082 10217
01553 014384 10916
01623 015582 11116
5 小结
(1) 用 NaNO2 - Al (NO3 ) 3 - NaOH 体系分光光度法测定总黄酮含量时 ,必须严格保证稀释定容用乙 醇的浓度 、试剂加入时间 、显色时间等测试环节前后完全一致 ,否则会出现很大误差 。
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法
紫外分光光度法测定植物黄酮含量的方法紫外分光光度法是检测植物黄酮含量的最有效的方法，紫外分光光度的检测方法有很多，本文主要介绍了直接测定法、显色测定法、差示测定法、多波长法测定的方法，这些方法的应用条件不同，需要结合实际，综合考虑后选择适用的测定方法，这样才能提高测定的工作效率，保证测定结果的正确性。
通过对植物黄酮含量的测量，可以掌握黄酮类化合物含量的原理，还能对植物的特性进行科学的分析，具有一定的医药价值。
标签：紫外分光光度法植物黄酮方法【文献标识码】B【文章编号】1004-4949（2014）11-0709-02黄酮类化合物广泛存在于自然界，是一類重要的天然有机化合物，很多植物中都含有一定量的黄酮。
黄酮种类很多，其主要类型有黄酮、异黄酮、黄酮醇、二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇等等，具有一定的保健和药用价值。
黄酮类化合物的存在形式既有与糖结合成糖苷的，也有游离态，多呈黄色，在紫外光下一般具有荧光，具有很强的抗氧化性。
紫外分光光度法是测定植物黄酮含量的主要方法，下面对具体的测定方法进行一些介绍，以供参考。
一直接测定法黄酮是指具有α或β苯基苯稠吡喃酮的一类化合物，这种化合物的分子中含有肉桂酰基，也还有苯甲酰基，是一种综合的共轭体系，在甲醇溶液中，大多数黄酮类化合物在甲醇中的紫外吸收光谱由两个主要吸收带组成。
出现在300～400nm之间的吸收带称为带Ⅰ，出现在240～280nm之间的吸收带称为带Ⅱ。
带Ⅰ是由B环桂皮酰基系统的电子跃迁引起的吸收，而带Ⅱ是由A环苯甲酰基系统的电子跃迁引起的吸收，如图1所示。
峰带Ⅱ吸收紫外线的能力较强，也更适合直接测定法的检测。
在利用直接测定法对植物含黄酮量进行测定时，需要运用lambert- Beer 定律进行计算。
直接测定法主要利用了黄酮结构的特点，在测定的过程中不需要使用显色剂，在黄酮特征吸收峰处直接测定即可。
这种方法比较直接快速，而且操作简单，但是也具有一定的缺点，只适合单一成分的测定，在检测的过程中，若样品含有一定杂质，可能会影响检测结果的准确性。
大枣中黄酮类成分研究进展
大枣中黄酮类成分研究进展发表时间：2013-06-04T11:25:07.827Z 来源：《医药前沿》2013年第9期供稿作者：王雨艨[导读] 大枣(Ziziphus iujuba)为鼠李科植物枣的成熟果实，与桃、李、栗、杏并称为我国古代五果。
王雨艨 (安徽省亳州市食品药品检验所安徽亳州 236800) 【中图分类号】R284 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2013）09-0332-02大枣(Ziziphus iujuba)为鼠李科植物枣的成熟果实，与桃、李、栗、杏并称为我国古代五果。
始载于本经，在我国已有4000多年得栽培史。
枣的医疗保健价值我国研究最早。
大枣也常用于中药，其具有补血、健脑、抗癌及健脾强身等功效，于《神农本草经》中列为上品，历代本草中均有收载。
大枣中的有效成分包括黄酮类、多糖类、三萜类、氨基酸、维生素、环磷腺苷等，近年来随着提取工艺及检测方法的提高，对大枣中黄酮类成分的研究越来越深入，本文就大枣中黄酮类化学成分、提取工艺、含量测定、药理作用的研究作一综述。
1 化学成分从枣属植物中发现的黄酮类成分数量不多，但其总黄酮含量较高约为0.5～2.9mg.g-1[1],主要分布于果实及叶中。
除芦丁外，大多为黄酮苷，如当药黄素(swertisin)、棘苷(spinosin)、6，8-二-C-葡萄糖基-2(S)-柚皮素[6，8-di-C-glucosyl-2(S)-naringenin]和6，8-二-C-葡萄糖基-2(R)-柚皮素[6，8．Di-C-glucosyl-2(R)-naringenin]等[2]。
另外果实中还含有3种酰化黄酮苷，即acylatedflavuone．C—glycoside I、Ⅱ、Ⅲ[3]。
近年来又报道了5个新的黄酮类化合物。
它们分别是槲皮素-3-O-β-D-吡喃木糖醇（1→2）-a-L-吡喃鼠李糖基-4，-O-a-L-吡喃鼠李糖苷（89）、dodecaacetylprodel phinidin B3(90)[4]、未命名的化合物（91）[5]、异棘苷（isospinosin,92）[6]、6,,,-阿魏酰基异棘苷（93）[5]、槲皮素-4，-O -a-L-吡喃鼠李糖基-3-O-a-L-吡喃鼠李糖基-β-D-吡喃葡萄糖苷（94）[7]。
总黄酮测定方法
总黄酮测定（紫外分光光度法，以柚皮苷计）[26]
1）标准曲线
精密称取柚皮苷对照品10mg ，以无水乙醇溶解并定容至50mL ，得0.2mg/mL 柚皮苷溶液。
分别取此浓度0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6mL ，以无水乙醇定容至5mL ，在284nm 处测定吸光度。
从图1-2中，得回归方程：A=0.0067c-0.0033，R 2=0.9993（n=3）。
式中：c —测定用样品液中的总黄酮含量，μg
A —吸光度
图1-2 总黄酮标准曲线
Fig.1-2 The calibrate curve of flavonoids
2） 样品中总黄酮含量的测定
准确称取试样，以乙醇溶解定容，按标准曲线方法测定[26]。
样品中总黄酮提取率计算公式为：
10010
V m K V c %)P(621⨯⨯⨯⨯⨯= 式中：p: 样品中总黄酮提取率，%;
c ：从标准回归曲线中计算得到的样液的总黄酮含量，μg;
V 1：样品提取液总体积，mL ；
V 2: 测定用体积，mL ；
K ：稀释倍数;
m: 样品的投料量，g。
紫外可见分光光度法在黄酮类 含量测定中的应用
论文科目：中药制剂分析题目：紫外可见分光光度法在黄酮类化合物含量测定中的应用班级：2012级药物制剂组员：何奇、张三军、段靓琳、杨雪超、赵甜甜可见-紫外分光光度法在黄酮类化合物含量测定中的应用概况摘要：本文概述了国内外紫外可见分光光度法在黄酮类化合物含量测定中的应用现状。
对黄酮类化合物含量测定中常用的紫外可见分光光度法进行归类，并分析总结其优缺点。
对紫外可见分光光度法在黄酮类化合物含量测定中的发展前景进行了展望。
关键词:紫外-可见分光光度法黄酮类化合物含量测定自然界中,黄酮类化合物是广泛存在于天然植物中的一大类化合物,多具有颜色,在植物体内多为次生代谢产物,除部分以游离形式存在外,大部分与糖结合以苷的形式存在。
药理和临床试验表明:芦丁、葛根素等黄酮类化合物有益于心脑血管疾病的预防和治疗,大豆异黄酮、金雀异黄素等化合物均有抗菌作用,另外在抗炎、抗病毒、止咳平喘、祛痰等方雌性激素样作用,黄芩素和黄芩苷等有一定程度的面均有相应的黄酮类化合物存在[1]。
由于黄酮类化合物具有多种多样的生理活性,因此,针对该类化合物定量分析的研究报道很多,如高效毛细管电泳法、高效液相色谱法、薄层扫描法、极谱法等[2]。
但测定黄酮类化合物含量使用最多的方法仍为紫外-可见分光光度法。
1 直接扫描测定尽管黄酮类化合物种类繁多,但其基本母核为2-苯基色原酮,都具有C6-C3-C6的结构,因此,多数黄酮类化合物存在两个特征吸收,即在300~400nm区间由B环桂皮酰基系统电子跃迁引起的带Ñ和在240~285nm之间由A环苯甲酰基系统电子跃迁引起的带Ò。
约有6%的文献采用供试品溶液与对照品溶液通过紫外光谱扫描在以上区间获得共有吸收作为检测波长进行含量测定。
韦英杰等[3]采用化橘红中成份柚皮苷为对照品,经扫描,供试品溶液和对照品溶液在283nm处均有最大吸收,因此,确定283nm为化橘红总黄酮含量测定的检测波长。
2 与A13+形成络合物后测定在黄酮类化合物定量分析方法的研究中,约有88%的文献报道采用黄酮类化合物母核中某些位置的羟基与Al3+发生络合反应形成络合物后进行测定。
枣叶和酸枣叶的总酚、总黄酮以及抗氧化能力含量测定
枣叶和酸枣叶的总酚、总黄酮以及抗氧化能力含量测定一、本文概述本文旨在测定枣叶和酸枣叶中的总酚、总黄酮含量，并评估其抗氧化能力。
酚类和黄酮类化合物是植物中常见的次生代谢产物，具有广泛的生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。
枣树和酸枣树作为常见的果树，其叶片中含有丰富的酚类和黄酮类化合物，因此具有一定的药用和保健价值。
本研究通过化学方法提取枣叶和酸枣叶中的总酚和总黄酮，并采用标准曲线法对其含量进行测定。
通过DPPH自由基清除实验和ABTS 自由基清除实验评估其抗氧化能力。
通过对比枣叶和酸枣叶中总酚、总黄酮含量及抗氧化能力的差异，为进一步开发利用这两种植物资源提供理论依据。
本研究的结果将为枣叶和酸枣叶的开发利用提供重要参考，同时也有助于深入了解植物次生代谢产物的生物活性及其与人体健康的关系。
本研究还将为植物资源的综合利用和农业可持续发展提供新的思路和方法。
二、材料与方法本实验所用的枣叶和酸枣叶采自同一地区、相同生长条件下的健康植株。
采样时间为春季，选择新鲜、无病虫害的叶片，经过清洗、干燥、粉碎后备用。
实验所用试剂包括福林酚试剂、碳酸钠、铝离子试剂、芦丁标准品等，均为分析纯。
实验仪器包括紫外可见分光光度计、电子天平、离心机、恒温水浴锅等。
采用福林酚法测定总酚含量。
取适量样品粉末，加入一定浓度的福林酚试剂，充分反应后，测定吸光度值，根据标准曲线计算总酚含量。
采用铝离子比色法测定总黄酮含量。
取适量样品粉末，加入铝离子试剂，充分反应后，测定吸光度值，根据标准曲线计算总黄酮含量。
采用DPPH自由基清除法测定抗氧化能力。
取适量样品粉末，加入DPPH自由基溶液，充分反应后，测定吸光度值，根据公式计算DPPH 自由基清除率，从而评估样品的抗氧化能力。
实验数据采用Excel软件进行整理与计算，采用SPSS软件进行统计分析。
所有数据均以平均值±标准差表示，不同样品间的比较采用t检验。
通过本实验方法，我们可以对枣叶和酸枣叶的总酚、总黄酮以及抗氧化能力进行定量测定，为深入研究这两种植物的药理活性提供科学依据。
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收稿日期:2011-03-27
作者简介:沈广志(1979-),男,讲师,硕士,从事药学教学与科研
工作。
分光光度法测定大枣中总黄酮含量
沈广志,郭 强,何志鹏
(牡丹江医学院,黑龙江牡丹江 157011)
摘要:目的:建立大枣中总黄酮含量的测定方法。
方法:以A1(N O 3)3、NaN O 2及NaOH 为显色剂,以芦丁为对照品,采用分光光度法测定。
结果:红枣中总黄酮含量为2 35mg /g 。
结论:方法简便易行,适用于大枣中总黄酮含量的测定。
关键词:大枣;总黄酮;分光光度法
中图分类号:O657.3 文献标识码:A 文章编号:1005-5320(2011)04-0026-02
Spectrophotometric determination of total flavonoids in Jujube
SHEN Gu ang -zhi,GU O Qiang,H E Zhi -peng
(Mudan j iang Medical Univ ersity,Heilongjiang Mudanjiang 157011,China)
Abstract:Obj ective:To establish the method for the determination of total flavonoids contents in Jujube.Methods:Spectrophotometry was used to determine content of total flavonoids in Jujube,adding A1(NO 3)3、NaNO 3、NaOH as colour agent.Ruitn as constrast sample.Results:The contents of total flavonoids in Jujube is 2.35mg/g.Conclusion:The method is simplicity in result and applicable for the de termination of total flavonoids in Jujube.
Key Words:jujube;total flavonoids;spectrophotometry
大枣为鼠李科植物枣的干燥成熟果实,具有补中益气、养血安神、开胃健脾等多种药用功效,是我国传统的保健佳品。
黄酮类化合物是广泛存在于植物界的一大类化合物,具有抗氧化、抗衰老、清除体内自由基及增加机体免疫力的作用[1]。
本实验采用分光光度法测定了大枣中的总黄酮含量,取得了较好的效果。
1 仪器与试剂
1.1 仪 器
旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)、超声波清洗仪(武汉嘉鹏电子有限公司)、722p 型分光光度计(上海光谱仪器有限公司)、分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
1.2 试 剂
乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠(均为AR);芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);大枣(市售)。
2 方法与结果2.1 样品溶液的制备
大枣打粉过40目筛,精确称取5 0g,与150ml 60%乙醇溶液倒入四颈瓶中,加入搅拌子,放入微波合成仪中,设定参数(功率600W;70 ;10min)提取,待仪器停止后取出进行抽滤,定容至250ml 。
2.2 标准溶液的制备
精确称取芦丁标准品10mg,用无水乙醇溶解,用60%乙醇定容于100m l 容量瓶中。
2.3 测定波长的选择
取标准溶液1ml,置于25ml 容量瓶中,加入0 6ml 5%NaNO 2,摇匀,放置6min 后加入1ml 10%A1(NO 3)3,放置6min,再加入10ml 4%NaOH 溶液,混匀,用60%乙醇稀释至刻度,同时作空白对照,15min 后测定波长400~600nm 区段的吸光度,得知最大吸收在510nm ,因此选定波长为510nm 。
2.4 标准曲线的建立
分别取0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0ml 标准液于25ml 容量瓶中,各加入0 6ml 5%NaNO 2,摇匀,放置6min 后加入1m l 10%A1(NO 3)3,放置6min,再加入10ml 4%NaOH 溶液,混匀,用60%乙醇稀释至刻度,静置15min,以试剂空白为参比于510nm 处测其吸光度,得到回归方程为:A =11 83c+
26
0 0169(r =0 9994),式中A 为吸光度,c 为溶液中芦丁的浓度(mg /ml),线性关系良好。
2.5 精密度考察
精密移取标准溶液5份1ml,按标准曲线项下操作测定其吸光度,RSD 为0 81%(n =5),说明精密度良好。
2.6 重现性考察
精密移取样品溶液5份1ml,按标准曲线项下操作进行测定其吸光度,RSD 为1 23%(n =5),说明重现性良好。
2.7 总黄酮含量测定
准确吸取样品溶液1ml,共5份,测定样品溶液中总黄酮的浓度为0 047mg/ml,RSD 为0 17%(n =5),并通过计算得出红枣中总黄酮含量为2 35mg/g 。
2.8 回收率实验
移取已知总黄酮含量的样品溶液1m l,加入标准溶液,按标准曲线项下操作测定吸光度,带入回归方程,计算加样回收率,结果见表1。
可知,平均回收率为102 46%,RSD 为2 91%(n =5)。
3 讨 论
表1 回收率测定结果
样品测定值(mg/ml)加标量(mg/ml)测得总量(mg/ml)回收率(%)0.0470.0040.0511102.50.0470.0080.0554105.00.0470.0120.0597105.80.0470.0160.0631000.047
0.02
0.0668
99
目前分析黄酮类化合物的方法主要有:分光光度法、荧光光度法、高效液相色谱法、薄层层析等,本实验采用分光光度法测定了大枣中总黄酮的含量,效果较好。
该操作具有方便快捷、操作简便、成本较低的优点,值得推广使用。
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收稿日期:2010-11-30
基金项目:贵州省中医药管理局基金项目。
作者简介:张丽丽(1961-),女,高级实验师,主要从事实验室工
作。
通讯作者:杨玉琴,硕士生导师,主要从事中药质量控制及新药研发。
不同产地厚朴多糖的含量测定
张丽丽1,朱京礻韦2,杨玉琴1,张丽艳1,俞玉丹3
(1.贵阳中医学院药学系,贵阳 550002;2.贵阳市第二人民医院,贵阳 550023;3.贵阳中医
学院药学系2005级贵阳 550002)
摘要:目的:考察不同产地厚朴中多糖的含量。
方法:采用可见分光光度法测定,以葡萄糖为对照品,以苯酚 浓硫酸为显色剂,检测波长490nm 。
结果:葡萄糖在12 29~61 45 g/ml 范围内与吸光度呈良好的线性关系(r =0.9999);平均回收率为97 84%。
结论:方法操作简单,灵敏度高,可作为测定厚朴多糖的方法。
关键词:厚朴;多糖;葡萄糖;紫外 可见分光光度法
中图分类号:R284.1 文献标识码:B 文章编号:1005-5320(2011)04-0027-01
厚朴为木兰科植物厚朴(M agnolia off icinalis REHD et)干燥根皮、枝皮及干皮,本品为常用中药,具有燥湿消痰、下气除满之功效,用于湿滞伤中、脘痞吐泻、食积气滞、腹胀便秘、痰饮喘咳等症[1]。
1 仪器与试药1.1 仪 器
UV-2501PC 紫外可见分光光度计(日本岛津),分析天平AB204-s(瑞士梅特勒)。
葡萄糖、浓硫酸、苯酚均为分析纯。
1.2 药 材
厚朴药材购于不同省市的药材市场及自采,经贵阳中医学院付志明副教授鉴定为厚朴木兰科植物(Magnolia o f f icinalis Rehd et Wils)厚朴的干燥根
27。