%9a%84人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用
细胞自噬在器官纤维化病变中的作用
细胞自噬在器官纤维化病变中的作用毛 骏１，３ 李仁礼１，３ 李?华２，３ 张 青２，３ 李 海２，３ 向晓辉２，３，△（１武警后勤学院，天津３００３０９；２天津市西青医院消化内科，天津３００３８０；３天津市肝脏胰腺纤维化与分子诊疗重点实验室，天津３００１６２）摘要 自噬是细胞中一种进化上保守的生物学过程，通过降解受损的细胞器和多余的蛋白质使细胞在应激损伤时能够维持正常的平衡。
它包括一系列连续的过程，如吞噬泡的形成与延伸、自噬体的成熟、自噬体与溶酶体的融合等。
目前，对于调节自噬过程不同阶段的分子机制以及在疾病发展中作用的认识正逐渐加强。
本文综述了近几年来细胞自噬在多种器官纤维化病变中的研究进展，着重整理归纳与疾病相关的发生机制，以期为纤维化疾病的治疗提供新的理论指导和临床思路。
关键词 自噬；器官纤维化；分子机制中图分类号 Ｒ５９３ＣｅｌｌｕｌａｒＡｕｔｏｐｈａｇｙｉｎＯｒｇａｎＦｉｂｒｏｓｉｓ ＭＡＯＪｕｎ１，３，ＬＩＲｅｎ Ｌｉ１，３，ＬＩＭａｎ Ｈｕａ２，３，ＺＨＡＮＧＱｉｎｇ２，３，ＬＩＨａｉ２，３，ＸＩＡＮＧＸｉａｏ Ｈｕｉ２，３，△（１ＬｏｇｉｓｔｉｃｓＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＰｅｏｐｌｅ＇ｓＡｒｍｅｄＰｏｌｉｃｅＦｏｒｃｅｓ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３０９，Ｃｈｉ ｎａ；２ＤｉｇｅｓｔｉｖｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＴｉａｎｊｉｎＸｉｑｉｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，Ｔｉａｎｊｉｎ３００３８０，Ｃｈｉｎａ；３ＴｉａｎｊｉｎＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＨｅｐａｔｏ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃＦｉｂｒｏｓｉｓａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＤｉａｇｎｏｓｉｓ＆Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，Ｔｉａｎｊｉｎ，３００１６２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ Ａｕｔｏｐｈａｇｙｉｓａｎｅｖｏｌｕｔｉｏｎａｒｉｌｙｃｏｎｓｅｒｖａｔｉｖｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｐｒｏｃｅｓｓｉｎｃｅｌｌｓ．Ｉｔｃａｎｍａｉｎｔａｉｎａｎｏｒ ｍａｌｂａｌａｎｃｅｂｙｄｅｇｒａｄｉｎｇｄａｍａｇｅｄｏｒｇａｎｅｌｌｅｓａｎｄｒｅｄｕｎｄａｎｔｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｓｔｒｅｓｓｉｎｊｕｒｙ．Ｉｔｉｎｃｌｕｄｅｓａｓｅ ｒｉｅｓｏｆｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓｐｒｏｃｅｓｓｅｓ，ｓｕｃｈａｓｔｈｅｆｏｒｍａｔｉｏｎａｎｄｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｏｆｐｈａｇｏｐｈｏｒｅ，ｔｈｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎｏｆａｕｔｏ ｐｈａｇｏｓｏｍｅ，ｔｈｅｆｕｓｉｏｎｏｆａｕｔｏｐｈａｇｏｓｏｍｅａｎｄｌｙｓｏｓｏｍｅ．Ａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｔｈｅｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇｏｆｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｔａｇｅｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙａｎｄｉｔｓｒｏｌｅｉｎｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｏｆｄｉｓｅａｓｅｓｉｓｇｒａｄｕａｌｌｙｓｔｒｅｎｇｔｈｅｎｅｄ．Ｉｎｔｈｉｓｒｅｖｉｅｗ，ｔｈｅｒｅｃｅｎｔｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆａｕｔｏｐｈａｇｙｉｎｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｐａｔｈｏ ｇｅｎｅｓｉｓｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｓｉｓｓｕｍｍａｒｉｚｅｄｉｎｏｒｄｅｒｔｏｐｒｏｖｉｄｅｎｅｗｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｇｕｉｄａｎｃｅａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌｉｄｅ ａｆｏｒｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ ａｕｔｏｐｈａｇｙ；ｏｒｇａｎｆｉｂｒｏｓｉｓ；ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍ 纤维化是指组织中细胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）发生过度沉积，细胞再生能力不能满足损伤修复的动态病理过程，几乎可以发生在任何实体器官或组织中，终末期可导致肝、肺、肾等重要器官的衰竭［１］。
止消通脉宁干预转化生长因子—β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究
止消通脉宁干预转化生长因子—β1诱导人肾小管上皮细胞表型转化的研究作者：杨丽霞李晓东程涛刘铜华吴丽丽Margetts Peter Joseph来源：《中国中医药信息》2013年第01期摘要：目的观察止消通脉宁药物血清对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导人肾小管上皮细胞（HK-2）表型转化的影响，并探讨其机制。
方法将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12（1∶1）培养基培养并分为空白对照组、TGF-β1诱导组（TGF-β1 10 ng/mL）、空白血清对照组（TGF-β1 10 ng/mL+10%空白血清）、干预1组（TGF-β1 10 ng/mL+10%低剂量止消通脉宁药物血清）、干预2组（TGF-β1 10 ng/mL+10%中剂量止消通脉宁药物血清）、干预3组（TGF-β1 10 ng/mL+10%高剂量止消通脉宁药物血清）。
药物干预24 h后，免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达。
在24、48、72 h应用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清中Ⅰ型胶原（ColⅠ）、Ⅲ型胶原（ColⅢ）和纤连蛋白（FN）的含量。
结果正常HK-2细胞表达E-cadherin，不表达α-SMA，经TGF-β1刺激后细胞表型发生转变，E-cadherin的表达明显减弱，α-SMA表达明显增强，且ColⅠ、ColⅢ和FN的分泌明显增加，与空白对照组比较差异有统计学意义（P关键词：止消通脉宁；转化生长因子-β1；人肾小管上皮细胞；表型转化；Ⅰ型胶原；Ⅲ型胶原；纤连蛋白中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2013）01-0037-03糖尿病肾病（DN）是糖尿病最为常见的慢性微血管并发症之一，严重影响糖尿病患者的生活质量和生命健康。
DN的发病机制尚未明确。
既往认为DN的早期病变部位在肾小球，近年来研究发现肾小管病变及肾间质纤维化的程度与肾功能的相关性更为密切，故肾间质纤维化的机制在DN的发展中越来越受到人们的重视[1]。
内皮-间质转化参与组织纤维化的研究进展
内皮-间质转化参与组织纤维化的研究进展王倩倩;杨宝军【摘要】组织纤维化的典型特征是成纤维细胞过度增殖和细胞外基质过度蓄积.近年来研究表明,成纤维细胞是一组高度异源的细胞群体,除了由局部静止的成纤维细胞活化而来外,还可由上皮细胞、内皮细胞、血管周细胞和骨髓起源的循环祖细胞、单核细胞等转化而来,其中源自内皮细胞的内皮-间质转化是成纤维细胞的重要来源之一,亦是纤维化发生、发展的重要机制之一.【期刊名称】《医学综述》【年(卷),期】2013(019)021【总页数】4页(P3856-3859)【关键词】内皮-间质转化;内皮细胞;成纤维细胞;纤维化【作者】王倩倩;杨宝军【作者单位】汕头大学医学院第二附属医院心内科,广东,汕头,515041;汕头大学医学院第一附属医院心内科,广东,汕头,515041【正文语种】中文【中图分类】R364.3组织纤维化是指组织在缺血、化学药物、毒素、感染、物理损伤和免疫反应等慢性损伤因素作用下，导致成纤维细胞激活、大量增殖，细胞外基质合成增多、降解减少、基质过度沉积的病理过程。
以往研究认为，成纤维细胞的激活仅仅是局部处于静态的成纤维细胞的活化而来［1］，但近年来研究认为，成纤维细胞并非一群同质性细胞，而是由不同来源的细胞群体组成［2-4］。
值得注意的是，内皮细胞受到刺激后向间质成纤维细胞的转化，即内皮-间质转化(endothelial-mesenchymal transition，EndMT)是成纤维细胞的重要来源之一，在心肌纤维化、肾脏纤维化、肺纤维化等组织纤维化过程中发挥重要作用。
1 EndMT的类别EndMT过程中，一方面细胞逐渐丧失原有的内皮细胞特异性标志物，如VE-cadherin等表达逐渐减少，内皮细胞间紧密连接和细胞极性减弱;另一方面开始表达间质成纤维细胞标志物(如成纤维细胞特异蛋白1等)并获得合成胶原和迁移的能力，待迁移至间质后转化为成纤维细胞，进一步激活为肌成纤维细胞，大量表达α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin，α-SMA)，分泌大量细胞外基质，导致组织纤维化的发生［2，5］。
组织纤维化
(organ
Байду номын сангаас
fibrosis)一直是世界医学的研究热点之一。
4.1慢性肾脏病
慢性肾脏病的主要病理特征为细胞外基质过度沉积，广泛的纤维化。 最终导致终末肾功能衰竭的共同通路。肾纤维化的范围和程度与肾 功能缺陷具有高度的相关性。
4.2肺纤维化
肺纤维化是各种内外致病原引起慢性肺疾病的共同结局病理过程。 是肺组织损伤修复失调导致大量细胞外基质重构、过度沉积，最终 导致肺组织结构改变和功能丧失 。
C、纠正ECM合成及降解失平衡 脯氨酸4－羟化酶和赖氨酰氧化酶等抑制胶原合成过程所需要的
酶，可能直接减少纤维性胶原沉积在ECM。发现己酮可可碱能明显
降低人HSC中TIMP-1mRNA的表达，发挥抗肝纤维化作用。
5.1逆转的研究
近年来，对ECM转换在纤维化逆转方面进行了一些研究，主要涉及： 提高胶原降解酶的活性； 抑制胶原降解酶抑制物PAI-1和TIMPs 的活性等，以促进胶原的 降解，恢复胶原的合成与降解的平衡；
3.1转化生长因子-β （TGF-β)
属于一组调节细胞生长和分化的TGF-β 超家族。有广泛的生物学作用:调节 细胞生长、分化、凋亡、迁移、黏附、基质形成，以及损伤修复等。在促纤维 化作用是细胞因子中最强的。 TGF-β 是由两个分子量为12.5 kD的亚基通过二硫键连接而成的同源二聚 体，二聚体形式的TGF-β 才具有生物活性。 哺乳动物主要有TGF-β 1、TGF-β 2和TGF-β 3的3种形式，三者的生物学 作用基本相似，其中以TGF-β 1最重要。
3.3 结缔组织生长因子 (connective tissue growth factor，CTGF
CTGF蛋白是一种富含半胱氨酸的分泌性多肽。 在创伤愈合、器官 纤维化发生中已观察到结缔组织生长因子的过度表达， CTGF在纤 维化形成中的作用： 促进细胞增殖、粘附、迁移、整合素表达； 促使Ⅰ、Ⅲ型胶原和 FN 等ECM的合成。在创伤愈合、皮肤、肾 脏、肝脏、心脏、肺脏和胰腺纤维化以及粥样硬化的动脉，均观察 到呈高表达的CTGF。
什么是纤维化
（4）两药袋表面，要用手压平，然后在塑料布 上沿，铺上一条毛巾，以防药液沾污衣物 （5）患者在平躺之前，一定要先用手背测试药 袋的温度，感觉温度适宜时方可躺下。 （6）药袋一定要调整到两肾区位置（约后背腰 部），双肾下缘大约在两髂脊向上2公分左 右，平躺后，肘尖应处于药袋中间的位置。
（7）设定理疗时间，一般以45分钟左右 为宜，选择模式，调好电流强度和加热等级， 以感到舒服为止。电流强度的设置，可按自 己的承受力逐渐上调。但不能太强，要适当 掌握。在调试过程中，可以适当调整药袋所 敷的位置。 （8）渗透治疗结束时，应先切断电源， 才可起床。起床后，用温湿毛巾轻轻擦除腰 背部残留药液，穿好衣服以防感冒。 以上为一次完整的微化中药渗透理疗的 程，渗透治疗以每日两次为宜。
第二期、炎症基质合成期（纤维化形成期） 该期特点：继续依赖炎症性刺激，浸润的单核细胞持 续释放促炎症因子与促纤维化生长因子，成纤维细胞 呈持续性活化增殖状态；并出现小管上皮细胞转分化 （EMT）此期增殖的间质成纤维细胞与来源于EMT形 成的成纤维细胞其细胞表型共同发生转化，转化成肌 成纤维细胞（MyoF）。MyoF形成后，首先合成并分 泌纤粘连胶原蛋白（FN），组成ECM支架结构，继而 合成Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原成分，ECM形成。该期的 成纤维细胞依赖炎性刺激和致纤维化生长因子的持续 刺激下合成ECM为特点从而形成肾脏固有细胞、浸润 的炎性细胞、促炎症因子与抗炎症因子以及其他各种 生物活性物质在肾内相互作用，构成了错综复杂的关 系，最终纤维化形成。
⑵中药活性物质通过阻止凝血酶激活抑制因子 的合成，来解除凝血酶合成的障碍。通过凝血 酶合成能力的恢复，来加速ECM降解，从而阻 断ECM的大量积聚，恢复肾脏组织结构与肾功 能。
中药活性物质对肾脏的修复主要包括以 下五个方面： 第一、 激活残存肾单位功能，恢复正常 细胞代谢。 第二、 改善肾脏微循环，缓解缺氧状态， 加速肾脏修复。能缓解肾小球的三高（高灌 注、高内压、高滤过）状态，减少蛋白漏出， 促进排毒。
单细胞 成纤维细胞亚群的marker基因
单细胞成纤维细胞亚群的marker基因-概述说明以及解释1.引言1.1 概述概述部分的内容可以包括对单细胞研究和成纤维细胞亚群的marker 基因的概述。
具体内容可以参考以下示例：在生物医学研究领域，单细胞研究已经成为一种重要的技术手段。
随着高通量测序技术的发展，人们可以逐个细胞地分析其基因表达谱，从而揭示细胞的异质性和功能特性。
其中，成纤维细胞作为一类重要的细胞类型，广泛存在于人体组织中并且具有多种重要的生理功能。
在单细胞研究中，对成纤维细胞亚群的研究具有重要意义。
成纤维细胞是一类关键的结缔组织细胞，在维持细胞外基质的合成和重塑中起着重要的作用。
成纤维细胞的功能多样，包括参与生长因子的分泌与调控、参与组织修复与创伤愈合以及细胞外基质的合成与降解等。
此外，成纤维细胞还在炎症反应、免疫应答等生理和病理过程中发挥着重要的调节作用。
然而，由于成纤维细胞的异质性以及其亚群之间的功能差异，研究人员迫切需要一种能够准确鉴定和分类成纤维细胞亚群的方法。
为了解决这一问题，研究人员发展了一种名为marker基因的分析手段。
marker基因是一组具有特异性表达的基因，可以作为标志物来鉴定特定细胞类型或亚群。
通过鉴定成纤维细胞亚群的marker基因，研究人员可以更好地理解不同亚群间的功能差异和调控机制，并进一步揭示成纤维细胞在生理和病理条件下的作用。
本文将着重探讨单细胞研究中鉴定成纤维细胞亚群的marker基因的重要性，并对未来相关研究方向进行展望。
通过深入剖析marker基因的作用和意义，我们可以更好地认识成纤维细胞亚群的功能特点，为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。
1.2 文章结构文章结构是指文章整体上的组织和安排方式。
一个清晰的文章结构可以帮助读者更好地理解和掌握文章的内容。
本文的结构分为引言、正文和结论三个部分。
引言部分用于介绍文章的背景和目的，引起读者的兴趣并概述文章的主要内容。
正文部分是文章的核心部分，包括单细胞研究的背景、成纤维细胞的功能和特点、成纤维细胞亚群的重要性以及Marker基因的作用和意义等内容。
皮肤与皮肤再生
皮肤与皮肤再生一、皮肤的解剖与生理皮肤作为一个复杂的器官覆盖人体全身，约占人体体重的15%，是人体最大的器官。
担负着多个重要的功能，主要为保护人体免受化学、物理或生物学伤害。
皮肤的构造精良，组织来源多样，包括上皮细胞、结缔组织、血管、肌肉和神经。
皮肤分为3层：表皮（内含附属器如皮脂腺、毛囊和汗腺），真皮和皮下组织。
皮肤细微结构在不同部位差异很大，如厚度、表皮附属物分布和黑素细胞密度。
除了手掌和足底，毛发遍布全身。
表皮是由不断自我更新的上皮细胞组成，细胞类型多样，但90%～95%为角质形成细胞，为来源于外胚层经历特定分化过程的上皮细胞，最终发展为扁平，无核的角质形成细胞。
角质形成细胞在分化成熟过程中经历从基底层向上迁移的过程，最终成为角质从表面脱落。
5%～10%的表皮细胞为非角质形成细胞，主要包括朗格汉斯细胞、黑素细胞和麦克尔细胞。
表皮细胞呈连续层状分布，由下至上分为：基底细胞层，棘细胞层或棘层（5～15层），颗粒细胞层（1～3层）和角质（或角化）层（5～10层），在人体某些部位（如掌跖），在颗粒层与角质层之间存在透明层。
表皮角质层细胞来源于基底层干细胞的有丝分裂，分裂出来的细胞向皮肤表面迁移，同时进行生态学和生物学分化（角质化），此过程大约需要30天。
基底层位于表皮底部与真皮层相邻，真皮层内丰富的血管可以供应基底层细胞所需要的营养。
表皮平均厚度为100μm，但在不同部位有差异（眼睑部位50μm而掌跖部位1mm）。
表皮内还有汗腺，亦由上皮细胞组成，但具有各自的生物学特性（如重建、分化和对外界刺激的反应）。
（一）角质形成细胞（KC）角质形成细胞的形态在表皮各层各不相同，基底层细胞为柱状或立方状，为6～10μm；其胞质嗜碱性，细胞核较大。
它们垂直于基底膜有序排列，以特殊的附着结构（半桥粒）锚定在基底膜上。
电镜下；棘层细胞较基底层细胞大，为10～15μm，呈多边形，胞质嗜酸性，内有一个泡状核与一个或两个突出的核仁。
肿瘤相关成纤维细胞的分类
肿瘤相关成纤维细胞的分类全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：肿瘤是一种极具危害性的疾病，其发生和发展涉及到一系列复杂的细胞类型和信号通路。
成纤维细胞在肿瘤的形成过程中扮演着重要的角色。
成纤维细胞是一种起源于间叶的细胞，具有合成胶原蛋白和纤维蛋白等蛋白质的能力，是维持组织结构和功能的重要细胞之一。
在肿瘤的微环境中，成纤维细胞可以被肿瘤细胞引导或激活，从而发生功能和表型的改变，促进肿瘤的生长和扩散。
根据其在肿瘤微环境中的不同功能和表型，我们可以将肿瘤相关成纤维细胞进行分类。
一、活跃型成纤维细胞活跃型成纤维细胞是一种具有高度代谢活性和细胞增殖能力的成纤维细胞。
在肿瘤微环境中，活跃型成纤维细胞能够被肿瘤细胞激活，释放大量的细胞因子和生长因子，如基质金属蛋白酶、血管内皮生长因子等，促进肿瘤细胞的增殖和转移。
活跃型成纤维细胞还可以合成大量的胶原蛋白和纤维蛋白，形成肿瘤的基质支架，为肿瘤的生长和扩散提供支持。
抑制型成纤维细胞是一种在肿瘤微环境中发挥抑制作用的成纤维细胞。
在肿瘤发生时，抑制型成纤维细胞可以通过释放抑制性因子或直接抑制肿瘤细胞的增殖和转移，从而抑制肿瘤的生长和扩散。
抑制型成纤维细胞在肿瘤治疗中具有重要的作用，可以成为潜在的靶点和治疗策略。
肿瘤相关成纤维细胞的分类是一个复杂而又重要的研究领域，对其进行深入的研究可以为肿瘤的发生机制和治疗提供重要的启示。
希望未来在这方面的研究能够取得更多的进展，为肿瘤的防治工作做出更大的贡献。
【本文共涉及1132字】第二篇示例：肿瘤相关成纤维细胞是一类具有重要生物学功能的细胞类型，在肿瘤的发生和发展过程中扮演着重要的作用。
成纤维细胞是结缔组织中的一种细胞类型，主要起到细胞外基质合成和修复组织损伤的作用。
在肿瘤相关成纤维细胞中，存在着多个亚型，根据其表型和功能的不同可以将其分类为多种类型。
根据功能和作用的不同，可以将肿瘤相关成纤维细胞分为促进和抑制肿瘤生长的两类。
促进肿瘤生长的成纤维细胞主要通过促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭，促进肿瘤血管生成等途径来促进肿瘤的发展。
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ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路在ＴＧＦ－β１诱导的人皮肤成纤维细胞表型转化中的作用
胡永亮刘真焦大凯马恬王常勇贾赤宇
目的 观察ＴＧＦ－［１对人皮肤成纤维细胞表型转化的作用是否受到ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶 信号通路的影响，以探究该通路是否参与了人皮肤成纤维细胞的表型转化。方法 原代培养人皮 肤成纤维细胞，将第４代细胞用ＴＧＦ－β１（ １０ ｎｇ／ｍｌ）刺激后，分不同作用时间（０、３、６、２４ｈ）提取细胞 内总蛋白。ＢＣＡ法测定总蛋白浓度，Ｗｅｓｔｅｒｎ －ｂｌｏｔ检测α－ＳＭＡ的表达水平；并用相同的方法检测不 同浓度ＴＧＦ－β１（０、２、１０、５０ ｎｇ／ｍｌ）刺激人皮肤成纤维细胞后，α－平滑肌肌动蛋白（α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ，α－ＳＭＡ）的表达水平。用ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路阻断剂Ｙ－２７６３２处理后，再用ＴＧＦ－β１刺激， 作为实验组，将未作处理的正常细胞作为空白对照组，Ｙ－２７６３２（１０ μｍｏｌ／Ｌ）组作为阴性对照组，只 用ＴＧＦ－β１（ １０ ｎｇ／ｍｌ）刺激组作为阳性对照组，分别检测α－ＳＭＡ的表达差异。使用ＡＮＯＶＡ对蛋白 表达量进行统计学分析，Ｐ ＜０．０５为差异有统计学意义。结果 １０ ｎｇ／ｍｌ ＴＧＦ－β１按不同作用时间 刺激人皮肤成纤维细胞后，α－ＳＭＡ的表达量分别为：０ｈ为１．０，３ｈ为１．９＋０．２、６ｈ为２．１±０．１， ２４ ｈ为３．１±０．１。２４ ｈ较其他３个时间点α－ＳＭＡ表达量明显上升（ｎ＝４，Ｐ＜０．０５）。不同浓度 ＴＧＦ－β１刺激人皮肤成纤维细胞后，α－ＳＭＡ的表达量分别为：０ ｎｇ／ｍｌ为１．０，２ ｎｇ／ｍｌ为１．４±０．２， １０ ｎｇ／ｍｌ为３．２±０．１，５０ ｎｇ／ｍｌ为３．１±０．２。１０ ｎｇ／ｍｌ表达量明显高于０ ｎｇ／ｍｌ和２ ｎｇ／ｍｌ（ｎ ＝４， Ｐ ＜０． ０５），较５０ ｎｇ／ｍｌ差异无统计学意义（ｎ＝４，Ｐ＞０．０５）。用Ｙ－２７６３２（１０ μｍｏｌ／Ｌ）处理后，再用 ＴＧＦ－β１刺激，细胞的表型转化明显受到抑制，实验组α－ＳＭＡ的表达量（１．２±０．２）较阳性对照组 （２．９±０．１）明显降低（ｎ＝５，Ｐ ＜０．０５），与空白对照组（１．０）和阴性对照组（１．１±０．１）相比差异均 无统计学意义（ｎ＝５，Ｐ＞０． ０５）。结论 ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路参与了 ＴＧＦ－β１诱导的人皮肤成纤 维细胞表型转化过程。
成纤维细胞； ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ激酶信号通路；转化生长因子β１； α－平滑肌肌动蛋白
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｏｎ ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ＨＵ Ｙｏｎｇ－ｌｉａｎｇＬＩＵ ＺｈｅｎＪＩＡＯ Ｄａ－ｋａｉ
ＭＡ ＴｉａｎＷＡＮＧ Ｃｈａｎｇ－ｙｏｎｇ
ＪＩＡ Ｃｈｉ－ｙｕＣｅｎｔｅｒ ｏｆ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ ａｎｄ Ｂｕｒｎ Ｒｅｐａｉｒ， ３０９ ｔｈ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ ＰＬＡ， Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００９１， Ｃｈｉｎａ
１０． ３７６０／ｃｍａ． ｊ． ｉｓｓｎ． １００９－４５９８． ２０１１．０５． ０１５国家自然科学基金（３０７７２２５９）
作者单位：１０００９１ 北京，解放军第３０９医院整形美容烧伤修复中心（胡永亮、刘真、马恬、贾赤宇）；军事医学科学院基础医学研究所组织工程研究室（王常勇）；航空工业中心医院整形外科（焦大凯）
Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘａｍｉｎｅ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｏｎ ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｔｈｅ ４ｔｈ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｉｍａｒｙ ｃｕｌｔｕｒｅｄ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＧＦ－β１ （１０ ｎｇ／ｍｌ）． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ α－ＳＭＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ＴＧＦ－β１ ｆｏｒ ０， ３， ６， ａｎｄ ２４ ｈ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔ－ＳＭＡ ｗａｓ ａｌｓｏ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ａｆｔｅｒ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－β１ （０， ２， １０， ５０ ｎｇ／ｍｌ）． Ｔｈｅｎ ｔｈｅ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ
ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ （４ｔｈ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ） ｗｅｒｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＴＧＦ－３１ （ １０ ｎｇ／ｍｌ） ａｆｔｅｒ ｂｅｉｎｇ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ Ｙ－２７６３２ （ｌ０ｕｍｏｌ／ｍｌ）． Ｔｈｅ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｔｈｉｎｇ ａｓ ｓｈａｍ ｃｏｎｔｒｏｌ， ｏｒ ｗｉｔｈ Ｙ－２７６３２ （１０ｕｍｏｌ／Ｌ） ｏｎｌｙ ａｓ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ， ｏｒ ｗｉｔｈ ＴＧＦ－β１ （１０ ｎｇ／ｍｌ） ｏｎｌｙ ａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ α－ＳＭＡ ｗａｓ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｇｒｏｕｐｓ． Ｐｒｏｔｅｉｎ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
万方数据ｗａｓ ａｎａｌｙｚｅｄ ｗｉｔｈ ＡＮＯＶＡ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｍｅｔｈｏｄ． Ｒｅｓｕｌｔｓ α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ｗｉｔｈ １０ ｎｇ／ｍｌ ＴＧＦ－β１ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ０， ３， ６， ２４ ｈ ｗａｓ １．０， １．９ ＋０．２， ２． １ ＋０． １， ３．１ ＋０． １， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ２４ ｈ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ｏｔｈｅｒ ｔｈｒｅｅ ｇｒｏｕｐｓ （ ｎ ＝ ４， Ｐ ＜ ０． ０５ ）．α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ ａｆｔｅｒ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＴＧＦ－β１ （ ０，２， １０， ５０ ｎｇ／ｍｌ） ｗａｓ １．０， １．４ ±０． ２， ３．２ ±０． １， ３．１ ± ０． ２， ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ， α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ １０ ｎｇ／ｍｌ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｉｎ ２ ｎｇ／ｍｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ ｎ ＝ ４， Ｐ ＜ ０． ０５ ）． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ｉｎ α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ １０ ｎｇ／ｍｌ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ５０ ｎｇ／ｍｌ ｇｒｏｕｐ （ｎ ＝４， Ｐ ＞０． ０５ ）． Ｗｉｔｈ ｂｏｔｈ Ｙ－２７６３２ （１０ μｍｏｌ／Ｌ） ａｎｄ ＴＧＦ－β１ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ， ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｗａｓ ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ． α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ｇｒｏｕｐ （ １．２ ± ０． ２ ） ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｒｅｄｕｃｅｄ， ｗｈｅｎ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ ２． ９ ± ０． １ ） （ ｎ ＝ ５， Ｐ ＜ ０． ０５ ）． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ （ ｎ ＝ ５， Ｐ ＞ ０．０５ ） ｉｎ α－ＳＭＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ １．０ ） ａｎｄ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ （ １．１ ±０． １ ）． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｓｈｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ＴＧＦ－β１－ｉｎｄｕｃｅｄ ｐｈｅｎｏｔｙｐｉｃ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｄｅｒｍａｌ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ； ＲｈｏＡ／Ｒｈｏ ｋｉｎａｓｅ ｓｉｇｎａｌ ｐａｔｈｗａｙ； Ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－ｂｅｔａ１ ；α－ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ａｃｔｉｎ
万方数据・３７８・史！￡鳖丝丛ｉ±盘查！！！！篁！旦笙！！鲞箜！塑￡！ｉ！：！！堕！！！！些！！！Ｐ：垫！！！∑！！：！！！盟！』
缓冲液清洗２遍，然后用细胞裂解液ｌｙｓｉｓｂｕｆｆｅｒ
（１０ｍｍｏＬ／ＬＴｒｉｓ—ＨＣｌ、１５０ｍｍｏｌ／ＬＮａＣｌ、０．１％ＳＤＳ、
１％ＴｒｉｔｏｎＸ一１００、１０ｎｇ／ｍｌＡｐｒｏｔｉｎｉｎ、２ｕｇ／ｍｌ
Ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ、ｌｍｍｏｌ／Ｉ．ＰＭＳＦ）裂解细胞，冰卜孵育
１５ｍｉｎ。将裂解物进行离心１２０００ｒ／ｒａｉｎ，离心半径７ｃｍ，４℃，１０ｒａｉｎ，将卜－清分离到Ｉ．５ｍｌＥｐｐｅｎｄｏｒｆ
管中。用ＢＣＡ法测定蛋白浓度，最后制备电泳样
品，一２０℃冻存。１．２．６Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔ：取细胞总蛋白电泳样品（０【一ＳＭＡ：总蛋白１斗ｇ，１０％ＳＤＳＰＡＧＥ；ＲｈｏＡ：总蛋白１０ｕｇ，１２％ＳＤＳＰＡＧＥ）ＳＤＳＰＡＧＥ。再将凝胶上
的蛋白用半干法电转至ＰＶＤＦ膜上，５％脱脂奶粉４℃封闭过夜，分别选用０【一ＳＭＡ一抗１：３０００，Ｂ．
ａｃｔｉｎ一抗１：４０００；用ＴＢＳＴ洗３次，每次１０
ｍｉｎ。
山羊抗鼠二抗ｌ：１００００，各室温孵育ｌｈ，用ＴＢＳＴ
洗３次，每次１０ｒａｉｎ。洗涤后的膜用ＷｅｓｔｅｒｎＥＣＬ
发光剂室温下反应５ｍｉｎ，最后暗室曝光成像。
１．２．７统计学方法：用软件ＩｍａｇｅＪ１．４２分析数据，统计表达差异，得出结论。使用ＡＮＯＶＡ进行统汁学分析，Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。２结果２．１不同时问ＴＧＦ—Ｂ，对人皮肤成纤维细胞表型转化的影响１０ｎｇ／ｍｌ