实验四 血涂片的制备与染色
血涂片制备实验报告
一、实验目的1. 掌握血涂片的制备方法；2. 了解血液细胞的形态及数量；3. 培养实验操作技能，提高显微镜观察分析能力。
二、实验原理血液细胞经涂片、固定和染色后，可体现出不同发育阶段及病理生理改变的白细胞，在细胞体积、细胞质成分及酸碱性、细胞核染色质含量及空间排列状态的差异。
借助显微镜对上述差异进行总体分析，从而将各种白细胞区别开来。
成熟红细胞不含细胞核，细胞质的主要成分是血红蛋白，略呈碱性。
制成血涂片经瑞-吉染色后，血红蛋白与染液中呈酸性的伊红结合而显桔红色或淡粉红色。
同时，红细胞的各种形态学特点也得以展现。
三、实验器材与试剂1. 器材：载玻片、盖玻片、血液涂片器、显微镜、细胞计数板、酒精灯、滴管、擦镜纸、剪刀、镊子、剪刀、烧杯、试管、试管架、显微镜载物台等。
2. 试剂：瑞氏染液、生理盐水、消毒酒精、双氧水、抗凝剂等。
四、实验步骤1. 采血：用消毒酒精消毒耳垂或手指尖，待干。
用剪刀剪去耳垂或手指尖一小部分皮肤，使血液自然流出。
如血流不畅，可用消毒棉轻轻挤压。
2. 制备血涂片：取一干净载玻片，用血液涂片器沾取少量血液，滴于载玻片中央。
用另一载玻片作为推片，将推片末端斜置于血液滴的左缘，成30°~40°角。
将推片稍向后退，使之与血液滴接触，血即向推片末端的两边伸展，并在两载玻片之间的斜角中充满。
此时把推片向前推动，血随推片而行，即涂成血片。
血片的厚薄可由血滴大小、推片速度和两片间的角度大小来调节。
3. 干燥与固定：将制备好的血涂片置于空气中自然干燥，或用酒精灯轻微烘烤。
待干燥后，滴加适量瑞氏染液，染色5~10分钟。
然后用蒸馏水冲洗，待自然干燥。
4. 观察与计数：将染好的血涂片置于显微镜载物台上，用低倍镜观察细胞分布均匀、染色良好的区域。
选用合适的计数板，进行红细胞和白细胞计数。
五、实验结果与分析1. 观察结果：通过显微镜观察，发现血涂片上红细胞呈椭圆形，无细胞核，细胞质略呈碱性，经瑞-吉染色后显桔红色或淡粉红色。
血涂片的制备及染色
图 １ 血涂片制备
·１６８·
２０ｍｉｎ，用热水将肥皂和血膜洗去，然后，用自来水对其反复
冲洗，擦干或烤干后备用。 取用载玻片时需用专用仪器，不
可用手接触玻片表面，以免污染玻片表面。 另外，还需对载
玻片两角作斜线标记，用剥离切割刀将载玻片两角裁去，制
成宽度约为 １５ｍｍ 的推片。
（ 二） 采血
准备好载玻片后，便可给受检者采血，可采用静脉采血
的着色效果较差。
（ 二） 姬姆萨染色法
姬姆萨染色法染色操作基本同瑞特染色法，不同的是其
采用的染料为姬姆萨染料，这是一种由天青和酸性染料伊红
组成的复合染料，可对细胞核结构和寄生虫进行良好的着
色，从而能清晰显示出这些物质的结构，但是，其对细胞质和
颗粒的着色效果较差。
（ 三） 瑞－姬染色法
瑞－姬染色法指的是将瑞氏染料与姬姆萨染料充分混
否存在血液疾病等，虽然该项检验技术在临床应用上极广，
但是，在实际检验过程中，受血涂片制备和染色不当等因素
的影响，常常会降低检验结果的准确性，从而会影响该项检
验技术的临床应用效果。 基于此，就需要检验人员掌握正确
的血涂片制备和染色方法。
一、 血涂片制备
（ 一） 载玻片和推片准备
一般需选用高纯度、耐腐蚀性强、抗水的玻璃制成的载
缘平滑的一端从血滴前方后移接触血液，使血滴沿推片边缘
展开，然后是推片与载玻片保持 ３０ ～ ４５° 夹角，平稳匀速地向
前推动，使血液沿推片散开，在载玻片上形成厚薄适宜、边缘
整齐的薄层血膜（ 边缘需留有一定的空隙） ，且还需保证血
涂片呈舌状，头体尾三部分明显，如图 １ 所示。
（ 四） 血涂片干燥
完成血涂片制备后，还需对其进行干燥处理，可采用空
血涂片的制备
血涂片的制备
血涂片是一种常见的医学检查方法，它可以通过显微镜观察血液细
胞的形态和数量，从而帮助医生诊断疾病。
下面将从材料准备、制备
步骤和注意事项三个方面介绍血涂片的制备方法。
一、材料准备
制备血涂片需要的材料有：血液样本、玻璃片、无菌棉签、生理盐水、甲醇、乙醇、甲苯、染色剂（如吉姆萨染色液）等。
二、制备步骤
1.取一块干净的玻璃片，用无菌棉签在玻璃片上涂上一层薄薄的血液样本。
2.将玻璃片放在通风处晾干，使血液样本充分干燥。
3.将玻璃片浸泡在生理盐水中，轻轻摇晃，使血液样本充分溶解。
4.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
5.将玻璃片浸泡在甲醇中，固定细胞形态。
6.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
7.将玻璃片浸泡在乙醇中，使细胞脱水。
8.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
9.将玻璃片浸泡在甲苯中，使细胞透明。
10.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
11.将玻璃片浸泡在染色剂中，染色。
12.将玻璃片取出，用无菌棉签擦拭干净。
13.将玻璃片放在通风处晾干，制备完成。
三、注意事项
1.制备血涂片时要注意无菌操作，避免污染。
2.血液样本要新鲜，避免血液凝固。
3.制备过程中要注意时间控制，避免细胞形态变化。
4.染色剂的选择要根据需要进行，不同染色剂对细胞的染色效果不同。
5.制备完成后要注意保存，避免受潮和污染。
总之，血涂片的制备是一项细致的工作，需要严格按照步骤进行操作，才能得到准确的检查结果。
希望本文能对大家有所帮助。
血涂片的制备和瑞氏染色
5、实验员作好有关实验记录。
前期准备
↓
采血
↓
干燥
↓
标记
↓
染色
↓
冲洗
↓
观察结果
↓
后期分析处理
6、冲洗：1分钟后，用流水冲去染液，待干。
7、观察结果：将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体尾交界处的血细胞。
四、后期分析处理。
1、学生填写实验报告。
2、各组实验结果是否满意，分析造成偏差的原因。
3、器材由各组学生清洗完毕，实验员清点数目后放回准备室，打扫卫生，打扫完毕关闭门窗水电。
2、推片：左手平执载波片，右手持推片从后方或前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载波片呈30度到45度角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌、头、尾三部分。
3、干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
4、标记：在载玻片的一端用记号笔编号。
5、染色：待血涂片干透后，将波片平置，滴加快速瑞氏染液数滴，使其快速盖满血涂片，
血涂片的制备和瑞氏染色
操作规程
操作流程
一、实验目的：
掌握血涂片的制备和染ห้องสมุดไป่ตู้的方法。
二、前期准备
1、抗凝血和快速瑞氏染液
2、学生分组（每二人一组）分放器材。毛细管、瑞氏染液、载波片、推片、纱布块、显微镜。
3、实验题目内容，操作步骤在黑板上写明。
三、步骤
1、采血：用微量吸管在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。
血涂片操作实验报告
一、实验目的1. 掌握血涂片的制备方法。
2. 了解血液细胞的形态、数量及功能。
3. 熟悉显微镜的使用方法。
二、实验原理血液细胞经涂片、固定和染色后，可体现出不同发育阶段及病理生理改变的白细胞，在细胞体积、细胞质成分及酸碱性、细胞核染色质含量及空间排列状态的差异。
通过显微镜观察，可以了解血液细胞的形态、数量和功能。
三、实验器材1. 试剂：香柏油、二甲苯或乙醇乙醚清洁液、细胞染色剂、拖尾液。
2. 器材：人血涂片标本、载玻片、血液涂片器、显微镜、拭镜纸、目镜测微尺。
四、实验步骤1. 准备工作：将所需试剂和器材准备好，确保显微镜清洁、完好。
2. 制备血涂片：a. 取一清洁载玻片，用血液涂片器蘸取少量血液。
b. 将血液涂片器轻轻放在载玻片的一端，使血液自然流下，形成一条细线。
c. 沿着载玻片边缘，用另一载玻片将血液细线均匀展开，制成血涂片。
3. 固定与染色：a. 将制成的血涂片放在固定液中浸泡约10分钟。
b. 取出后，用流水冲洗，去除固定液。
c. 将血涂片放入染色液中，染色约5分钟。
d. 取出后，用流水冲洗，去除染色液。
4. 观察与记录：a. 将染色的血涂片正面向上置于显微镜载物台上。
b. 调整显微镜，先用低倍镜观察血涂片的质量，选择细胞分布均匀、染色良好、细胞排列不拥挤的区域。
c. 转换高倍镜，观察白细胞、红细胞等血液细胞的形态、数量和功能。
d. 记录观察结果，包括细胞形态、数量、分布等。
五、实验结果与分析1. 观察到的白细胞主要为中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞。
中性粒细胞体积较大，呈球形或椭圆形，细胞质丰富，含有中性颗粒；淋巴细胞体积较小，呈圆形或椭圆形，细胞质较少，细胞核较大；单核细胞体积较大，呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，含有较多嗜碱性颗粒。
2. 观察到的红细胞呈两面凹的圆饼状，无细胞核，细胞质内含有血红蛋白，略呈碱性。
红细胞数量最多，分布均匀。
3. 观察到的血小板呈不规则形状，数量较少，分布不均匀。
血涂片的制备及染色
血涂片的制备及染色血涂片的制备及染色摘要血涂片是世界上使用最广泛的实验室检测方法之一，应用于疾病的筛查，发现，诊断以及监控。
本文提供了在临床检验中制备及染色出优质血涂片的一种参考。
虽然在如何人工制备血涂片上仍存在某些“工艺”，但是已尽可能采用了客观标准使得临床实验室能准备和染色出优质血片。
本参考中包含固定和染色手工工艺中的问题解决方法。
关键词：血涂片制备，染色前言血涂片是世界上使用最广泛和最频繁的检测方法之一，但似乎没有关于血涂片制备要求，程序及潜在问题等的综合性文献。
虽然血涂片的制备是个简单的过程，但作为一种检测方法，有很多因素可导致检测失败或比其预期低效。
本文应国际血液学标准化委员会的请求所写，并作为实验室血细胞计数板的指导方针。
本文旨在提供临床检验中用于形态评价的血涂片制备及其染色的指导和标准化。
显微镜分析过程和解释不在本文的范围内。
列举的方法中包括最先进的技术以及发展中国家实验室的适用方法。
发展中国家不具备最高水平的指标，但应在所有条件下可达到其规定的指标，以确保诊断测试的质量，以免降低病人护理。
这点尤其重要，因为无论对于病例发现，诊断或疾病监测，血涂片显微镜分析所得数据通常在临床情况中起最终和决定性的作用。
为了方便参考使用，本文采用一种特殊的格式来描述涉及血涂片制备和染色的各个步骤。
血涂片制备载玻片载玻片应由最高纯度的耐腐蚀玻璃制成；通常不可接受其他材料如塑料。
典型玻片为75×25mm，约有1mm 厚度，必须平整，无扭曲和波痕，而且必须澄清无色（“水白，无色透明”）。
荧光显微镜检测必须使用无自发荧光的玻片。
最好使用预洗过的载玻片，但至少实验室必须确保载玻片无划痕，干净无尘、绒线，油脂（指纹），而且必须干燥。
这就意味着在潮湿环境中，载玻片必须能抗水。
在所处密闭容器开启后，载玻片必须保存于干燥器或装有无水（甲基）乙醇或乙醇与丙酮混合液（3:1）的容器内直至被使用。
载玻片需一直保存于密闭容器中，只能在立即使用前开启。
静脉采血血涂片的制备与染色课件
实验操作步骤
根据所使用的染色液， 按照说明书进行染色 操作。
在显微镜下观察染色 后的血涂片，观察细 胞的形态和分布。
一般来说，将染色液 滴加在血涂片上，用 吸水纸吸去多余的染 色液。
实验结果分析
血涂片质量评估
01
评估血涂片中的白细胞、红细胞和血小板 等细胞的形态和数量。
03
02
观察血涂片的制备是否均匀，细胞分布是否 清晰。
载玻片
用于制作血涂片。
染色液
如瑞氏染液或姬姆萨染液， 用于给血涂片染色。
其他
酒精灯、火柴、吸水纸等。
实验操作步骤
血涂片制备 将载玻片用酒精灯火焰灭菌，自然冷却。
用火柴点燃酒精灯，用吸水纸吸取少量酒精，涂抹在载玻片的中央区域。
实验操作步骤
用推片蘸取少量血液，均匀涂抹在载玻片的酒精区域。 等待血液干燥，即可得到血涂片。
搅拌
在稀释过程中，需要轻轻摇晃或搅拌， 以促进血液与抗凝剂充分混合。
涂片制备方法
制备涂片
使用玻璃片或专用涂片制备器，将稀释后的血液均匀涂抹在载玻片上。
干燥
将涂片放在干燥处自然干燥或用吹风机轻轻吹干。
02
血涂片染色
瑞氏染色法
瑞氏染色法是一种常用的血涂片染色方法，能够清晰地显示出细 胞的结构和形态。
姬姆萨染色法使用姬姆萨染料和伊红等染料，通过特定的染色程序，能够更清晰 地显示出细胞的内部结构和核特征，如核沟、核孔等。该方法对于鉴别和诊断血 液疾病具有重要意义，尤其在骨髓穿刺和血液肿瘤诊断中广泛应用。
苏木素-伊红染色法
苏木素-伊红染色法是一种广泛用于组织学和病理学检查的染色方法，能够清晰地显示细胞核和细胞质的形态特征。
红细胞形态观察
血涂片的制备与染色(29)
血涂片的制备
◈ 制备合格的血涂片，是血液学检查的最基本的技 术和方法， ◈ 血片的质量及染色的好坏，直接影响到细胞形 态的观察、和诊断。
（一） 载玻片的清洁
1. 新玻片：常带有游离碱质，用1mol/L HCl 浸泡24h， 清水冲净，干燥备用。
2. 用过的玻片：肥皂（洗涤剂）水煮沸20 min，再用 热水将肥皂和血膜洗净，清水反复冲洗，干燥备用。
3. 自动推片机法
标准化 自动化 智能化
第四部分 血细胞常用的染色方法
细胞染色技术
细胞涂片，在光学显微镜观察之前需要固定、染色。
固定：将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联和凝固，
以保持细胞原有的形态结构不发生变化。
染色目的：使细胞的主要结构（细胞质、细胞核、
细胞器等）染上不同的颜色，便于显微镜下观察。
Hale Waihona Puke 碱性美蓝结合，偏碱：出现异常蓝染。 ⓑ PH<PI: 酸性环境，蛋白质分子带正电荷多，易与酸
性伊红结合，因此偏酸：氢离子较多，降低对碱性染料 的亲和力，增强伊红着色，出现异常红染。
最佳PH：6.4～6.8，应使用缓冲液。
同时使用优质甲醇（AR）和清洁的中性玻片。
【染色方法】
以血涂片为例 ① 血膜干后，在两端用蜡笔化线，平放在染
色架上； ② 加染液数滴，固定1min； ③ 加等量或稍多的缓冲液，与染液充分混匀，
有一定的空隙（0.3cm和1.5cm），血膜长度
占载玻片的2/3左右。玻片的一端应留有贴标
签的地方。
0.3cm
临
沂 市
1.5cm
人
民
医
院
制血膜
白细胞显微镜分类
瑞氏染色
检验技师检验资料：血涂片制备与染色
检验技师检验资料：血涂片制备与染色检验技师检验资料：血涂片制备与染色血涂片是通过特定的方法将血液按一定方向均匀涂开的过程，微观上使细胞是由球形变为平面形或近平面形平铺在载片上。
血涂片的显微镜检查是血液细胞形态学检查的基本步骤，特别是对于各种血液病的诊断和鉴别诊断，具有重要价值。
血涂片制备是否合格、染色的好坏直接关系到检验结果的质量。
(一)血涂片制备1.载片的准备新载片常带有游离碱质，须用浓度为lmol/L的HCl浸泡24h，再用清水彻底冲洗，干燥后备用。
旧载片要用含洗涤剂的清水中煮沸20min，洗掉血膜，再用清水反复冲洗，最后用0.95L/L乙醇浸泡1h，干燥备用。
使用载片时，不要用手触及片表面，保持片清洁、干燥、中性、无油腻。
2.血涂片制作方法取血液标本一滴置载片的一端，以边缘平滑的推片一端，从血滴前沿方向接触血液，使血液沿推片散开，推片与载片保持30～45○夹角，平稳地向前推动，血液即在载片上形成薄层血膜。
涂片的厚薄与血滴大小、推片与载片之间的角度、推片时的速度及血细胞比容有关。
血滴大、角度大、速度快则血膜越厚;反之则血膜越薄。
一张良好的血涂片，要求厚薄适宜，头体尾明显，细胞分布均匀，血膜边缘整齐并留有的空隙。
(二)血涂片染色染色的目的是使细胞的主要结构，如细胞膜、细胞质、细胞核等染上不同的`颜色，以便于镜下观察识别。
血涂片染色包括两个过程：固定和染色。
固定是将细胞蛋白质和多糖等成分迅速交联凝固，以保持细胞原有形态结构不发生变化。
常用的染色方法有瑞特染色法(Wright)、姬姆萨染色法(Giemsa)等。
1.瑞特(Wright)染色法本法的特点是将固定和染色合并在一起进行，手续简便，染色时间短，对白细胞特异性颗粒着色较好，但对核的着色略差。
2.姬姆萨(Giemsa)染色法姬姆萨染料由天青和酸性染料伊红组成的复合染料。
染色原理、缓冲液与瑞特染色法大致相同。
本法对细胞核结构和寄生虫着色较好，结构显示更为清晰，但细胞质和颗粒着色较差。
血涂片实验报告手绘图
血涂片实验报告手绘图血涂片实验报告手绘图血涂片实验是一种常见的临床检验方法，通过观察和分析患者的血液样本，可以了解其健康状况和疾病情况。
在这篇文章中，我将结合手绘图的方式，向大家展示血涂片实验的过程和结果。
1. 血涂片实验的准备首先，我们需要准备一些实验所需的材料，包括显微镜、玻璃载片、血液样本和染色剂。
在实验开始之前，我们需要确保实验环境的清洁和卫生，以避免外部因素对实验结果的干扰。
2. 血涂片的制备将一滴新鲜的血液样本滴在玻璃载片上，并利用另一块载片将其平均涂抹开来。
这一步需要细心和耐心，以确保血液样本均匀地分布在载片上。
3. 血涂片的染色将制备好的血涂片放入染色剂中，染色剂的种类根据实验需要而定。
染色剂的作用是使细胞和细胞器在显微镜下更加清晰可见，便于观察和分析。
4. 血涂片的观察将染色后的血涂片放在显微镜下，调整镜头和光源，以获得清晰的图像。
通过显微镜的放大功能，我们可以观察到血涂片中的细胞形态、数量和排列情况。
5. 血涂片的分析根据观察到的细胞形态和排列情况，我们可以对患者的健康状况进行初步的判断。
例如，红细胞的形状和数量可以反映贫血的程度，白细胞的数量和种类可以提示是否存在感染等。
通过手绘图的方式，我将血涂片实验的过程和结果呈现给大家。
在图中，我用不同的颜色和形状代表了不同类型的细胞，如红细胞、白细胞、血小板等。
通过观察图中的细胞形态和排列情况，我们可以进一步分析患者的健康状况。
血涂片实验是一项非常重要的临床检验方法，它可以为医生提供有价值的信息，帮助他们做出正确的诊断和治疗决策。
通过手绘图的方式，我们可以更加直观地了解实验的过程和结果，使学习和理解变得更加有趣和易于记忆。
总之，血涂片实验是一项重要的临床检验方法，通过手绘图的方式，我们可以更加生动地展示实验的过程和结果。
希望这篇文章对大家了解血涂片实验有所帮助，并对临床检验方法有更深入的认识。
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实验四 血涂片的制备与
染色
Document number【SA80SAB-SAA9SYT-SAATC-SA6UT-SA18】
实验四 血涂片的制备与染色
【目的】 掌握血涂片的制备和染色方法（preparation and staining of thin blood films）。
【原理】 将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层紧密分布，制成薄血片。用含天青B和伊红的Romannowsky类
染料进行染色。细胞中的碱性物质如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞胞质中的嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染
成红色；细胞中的酸性物质如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中
性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合，染成淡紫红色。
【器材】
1．载玻片 使用前，必须仔细清洗，并用乙醇或软布清洁。
2．推片 选择边缘光滑的载玻片，在两角分别作斜线标记，然后用玻璃切割刀裁去两角，制成约15mm宽度的推
片。
3．吸耳球。
4．显微镜。
5．酒精灯或Bunsen灯。
6．采血针。
7．注射器和针头。
【试剂】
1．瑞氏（Wright）染液
（1）Ⅰ液：包含瑞氏染料、纯甲醇（AR级以上)600ml、甘油15ml。将全部染料放入清洁干燥的乳钵中，先加少
量甲醇慢慢地研磨（至少30min），以使染料充分溶解，再加一些甲醇混匀，然后将溶解的部分倒入洁净的棕色瓶
内，乳钵内剩余的未溶解的染料，再加入少许甲醇细研，如此多次研磨，直至染料全部溶解，甲醇用完为止。再加
15ml甘油密闭保存。
（2）Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（～），包含磷酸二氢钾（KH2PO4）、磷酸氢二钠（Na2HPO4）、蒸馏水加至1000ml。
配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口贮存。如无缓冲液可用新鲜蒸馏水代替。
2．吉姆萨染液 包含吉姆萨染料、甘油35ml、甲醇65ml。将吉姆萨染料、甘油和甲醇放入含玻璃珠的容器内，
每天混匀3次，连续4天，最后过滤备用。
3．瑞-吉复合染液
（1）I液：包含瑞氏染料1g、吉姆萨染料、甲醇500ml、中性甘油10ml。将瑞氏染料和吉姆萨染料置洁净研钵
中，加少量甲醇，研磨片刻，再吸出上液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色玻璃瓶中，每天早、晚各摇
3min，共5d，以后存放1周即能使用。
（2）Ⅱ液：即磷酸盐缓冲液（～）。包含无水磷酸二氢钾、无水磷酸氢二钠，加少量蒸馏水溶解，用磷酸盐调
整pH，加水至1000ml。
【标本】 EDTA抗凝静脉血或末梢血。
【操作】
1．采血
（1）静脉采血法：用EDTA·K2抗凝1～2h内的标本，使用玻棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加
1滴抗凝血，直径约4mm。
（2）皮肤采血法：选择第三、四手指，并先采红细胞、白细胞计数，再采血1滴置洁净玻片上用于血涂片制
备。
2．制作涂片 左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从后方移动接近血滴，使血液沿推片
边缘展开，将推片与载玻片呈30°～45°角，用均匀速度向前将血液推成厚薄适宜的血涂片（图1-12），血涂片应
呈舌状，头、体、尾三部分，且清晰可见。所有血液必须在推片到达末端前用完。贫血病人推片速度要快。
图1-12 血涂片制备示意图
3．干燥涂片
（1）空气干燥：将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。
（2）加热干燥：握住涂片，在距离酒精灯或Bunsen灯火焰上方50mm处晃动，但不能直接对着火焰。
4．标记涂片 在载玻片的一端用记号笔编号，注明患者姓名或门诊/住院号。
5．染色
（1）瑞氏染色法：待血涂片干透后，用蜡笔在两端画线，以防染色时染液外溢。然后将玻片平置于染色架上，
滴加染液（I液）3～5滴，使其迅速盖满血涂片，约～1min后，滴加等量或稍多的缓冲液（Ⅱ液），轻轻摇动玻片
或用吸球对准血涂片吹气，使染液充分混合。5～10min后用流水冲去染液，待干。
（2）吉姆萨染色法：将固定的血涂片置于被～磷酸盐缓冲液稀释10～20倍的吉姆萨染液中，浸染10～30min
（标本较少可用滴染）。取出用流水冲洗，待干燥后显微镜检查。
（3）瑞一吉复合染色法：操作步骤同瑞氏染色法，只是染色时将瑞一吉复合染液Ⅰ液和Ⅱ液替代瑞氏染液的Ⅰ
液和Ⅱ液。
6．观察结果 将干燥后的血涂片置显微镜下观察。用低倍镜观察血涂片体、尾交界处的血细胞。在显微镜下，
成熟红细胞染成粉红色；血小板染成紫色；中性粒细胞胞质染成粉红色，含紫红色颗粒；嗜酸性粒细胞含大的桔黄色
颗粒；嗜碱性粒细胞胞质含有大量深紫蓝色颗粒；单核细胞胞质染成灰蓝色；淋巴细胞胞质染成淡蓝色。
【注意事项】
1．瑞氏染液 新鲜配制的染液偏碱，染色效果较差，经在室温下贮存一定时间，美蓝逐渐转变为天青B后方可
使用，这一过程称染料成熟。放置时间愈久，天青B愈多，染色效果愈好，但必须盖严瓶口，以免甲醇挥发或氧化成
甲酸。甲醇必须用AR（无丙酮）。染液中也可加中性甘油3ml，防止甲醇挥发，使细胞染色较清晰。
2．采血
（1）不能采集以下部位的血液：①示指或拇指血液。②感染部位血液，如甲沟炎。③耳垂部位血液，含单核细
胞太多。
（2）不能使用肝素抗凝标本。
（3）玻片必须清洁、干燥、无尘。①新玻片：应在清洁液中浸泡过夜，然后用水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。②
已用过的玻片：应在60℃清洁液中加热20min，然后用水冲洗，最后用蒸馏水冲洗。③边缘破碎、表面有划痕的玻片
不能再用。
（4）使用玻片时，只能手持玻片边缘，切勿触及玻片表面，以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。
3．制作涂片 许多因素可影响血涂片的厚度，针对不同患者应有的放矢，对血细胞比容高、血粘度高的患者应
采用小血滴、小角度、慢推；而贫血患者则应采用大血滴、大角度、快推。涂片质量不佳及可能原因见表1-1，图1-
13。
表1-1 涂片质量不佳及可能原因
涂片质量不佳 可能原因
不规则间断和尾部太长 推片污染、推片速度不连续、载玻片太脏
有空洞 载玻片污染脂肪、油脂
白细胞和血小板尾部分布不规则 制片技术差
涂片太长或太短 推片角度不佳
涂片没有尾部 血滴太大
涂片很短 血滴太小
涂片没有边缘空隙 推片太宽
有细胞退变现象 固定延迟、固定时间太短、甲醇污染
血涂片厚 血滴大、血粘度高、推片角度大、推片速度快
白细胞破损 推片时用力过猛
图1-13 血涂片质量比较
（A为涂片质量好，B、C、D、E、F、G、H、I为涂片质量差）
4．干燥涂片 血涂片干透后方可固定染色，否则细胞尚未牢固地吸附在玻片上，在染色过程中容易脱落。
5．染色步骤
（1）操作注意事项及操作不当的后果见表1-3。
表1-2 染色操作注意事项及操作不当的后果
操作注意事项 操作不当的后果
加染液应适量 过少则易蒸发沉淀，一旦染料沉积在血涂片上，则不易冲洗，
使细胞深染不易检查。
冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲洗 染料沉着在血涂片上
冲洗时间不能过久 脱色
冲洗完的血涂片应立放于支架上 剩余水分浸泡脱色
（2）染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关。染液淡、室温低、细胞多则染色时间要长；反之，可减少染
色时间。必要时可增加染液量或延长时间。冲洗前，应先在低倍镜下观察有核细胞是否染色清楚，核质是否分明。应
该在具体实践中摸索合适的时间，特别是在更换染液时。每批染色液和缓冲液，均需试染，以便掌握染色时间和加缓
冲液的比例。
6．结果观察 低倍镜下观察血涂片应厚薄适宜，细胞不重叠，头尾及两侧有一定的空隙，一些体积大的特殊细
胞常在血涂片的尾部出现。如有可能，干燥后的血涂片先用中性树胶封片后再观察，不仅能长期保存血涂片，而且观
察效果更佳。染色质量不佳及原因见表1-3。
表1-3 染色质量不佳及可能原因
染色效果 可能原因 纠正措施
太蓝 涂片太厚、冲洗时间太短、中性水pH太高、染色时间太长、稀释染液重复使用、贮存染液暴露于阳光 在含1％硼酸的95％乙醇溶液冲洗2次，用中性水
冲洗，待干镜检
太红 冲洗时间太长、中性水pH太低、贮存染液质量不佳、涂片干燥前加封片 规范操作。新鲜配置中性水。保证染液质量不佳
太淡 染色时间太短、冲洗时间太长 复染。应先加缓冲液，后加染液，或加染液与缓冲
液的混合液，不可先加染液
染料沉积 染料沉淀、染液未过滤、涂片太脏 用甲醇冲洗2次，并立即用水冲掉甲醇，待干后复
染
蓝色背景 固定不当、涂片未固定贮存过久、使用肝素抗凝剂 注意涂片的固定。使用EDTA抗凝静脉血