基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响

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右美托咪啶上调sirtuin3减轻小鼠肾缺血-再灌注损伤

武月玲 ∗ ꎬ 曲海霞ꎬ 王俊星
( 运城市中心医院 / 山西医科大学第八临床医学院麻醉科ꎬ 山西运城０４４０００)
摘要:目的研究右美托咪啶( ＤＥＸ) 在肾缺血￣再灌注( Ｉ / Ｒ) 损伤小鼠中的保护作用及其机制ꎮ 方法将小鼠分为
假手术( ｓｈａｍ) 组、ｓｉＲＮＡ＋ｓｈａｍ组、肾Ｉ / Ｒ组( 常规法) 、ＤＥＸ＋Ｉ / Ｒ组( 腹腔注射２５ μｇ / ｋｇＤＥＸ) 、ｓｉＲＮＡ＋Ｉ / Ｒ组及
ａｐｏｐｔｏｓｉｓｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＴｕｎｅｌｓｔａｉｎｉｎｇꎬ ａｎｄｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＳＩＲＴ３ꎬ ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎＤ ( ＣｙｐＤ) ａｎｄｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅＣ
( ＣｙｔＣ) ｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ. ＲｅｓｕｌｔｓＤＥＸｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｒｅｎａｌｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａｌｄａｍａｇｅａｆｔｅｒＩ / Ｒꎬ ｕｐ￣ｒｅｇｕ￣
ｇｒｏｕｐꎬ ｒｅｎａｌＩ / Ｒｇｒｏｕｐ ( ｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄ) ꎬ ＤＥＸ＋Ｉ / Ｒｇｒｏｕｐ ( ２５ μｇ / ｋｇＤＥＸꎬ ｉｎｔｒａｐｅｒｉｔｏｎｅａｌｉｎｊｅｃｔｉｏｎ) ꎬ
ｓｉＲＮＡ＋Ｉ / ＲｇｒｏｕｐａｎｄｓｉＲＮＡ＋ＤＥＸ＋Ｉ / Ｒｇｒｏｕｐꎻ ｓｉＲＮＡ＋ｓｈａｍｇｒｏｕｐꎬ ｓｉＲＮＡ＋Ｉ / ＲｇｒｏｕｐａｎｄｓｉＲＮＡ＋ＤＥＸ＋Ｉ / Ｒ
２０２０年３月
基础医学与临床
第４０卷第３期
Ｂａｓｉｃ＆ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ
Ｍａｒｃｈ２０２０
Ｖｏｌ.４０Ｎｏ.３

sirna干扰原理

sirna干扰原理Sirna（small interfering RNA）是一种干扰RNA，它可以通过靶向特定的mRNA分子来抑制基因表达。

Sirna干扰技术在基因沉默和功能研究中具有重要的应用价值。

本文将介绍Sirna干扰的原理及其在生物学研究中的应用。

Sirna干扰的原理主要包括三个步骤，合成、靶向和介导。

首先，Sirna分子由双链RNA组成，可以通过化学合成的方法获得。

其次，Sirna通过其特定的序列可以与靶向的mRNA分子形成互补配对，从而导致mRNA的降解或翻译的抑制。

最后，Sirna需要介导蛋白来帮助其与靶向mRNA结合，并将其导入RNA诱导靶向基因沉默复合物（RISC）中，从而实现对基因表达的干扰。

在生物学研究中，Sirna干扰技术被广泛应用于基因功能研究、药物靶标筛选和疾病治疗等领域。

首先，通过设计特定的Sirna序列，研究人员可以选择性地抑制目标基因的表达，从而揭示其在细胞生物学过程中的功能。

其次，Sirna干扰技术可以用于筛选潜在的药物靶标，通过观察靶向基因的沉默对细胞表型的影响，来评估潜在药物的疗效和副作用。

此外，Sirna还可以作为一种治疗手段，用于治疗一些基因相关的疾病，如癌症和遗传性疾病。

总的来说，Sirna干扰技术具有高度的选择性和特异性，可以有效地抑制目标基因的表达，为基因功能研究和药物开发提供了有力的工具。

随着技术的不断发展，Sirna干扰技术在生物学研究和临床应用中的作用将会更加突出，为人类健康和疾病治疗带来新的希望。

在实际应用中，研究人员需要根据具体的研究目的和样本特点来设计合适的Sirna序列，并选择合适的转染方法将其导入到细胞内。

此外，还需要对靶向基因的沉默效果进行验证，以确保实验结果的可靠性。

在临床应用中，研究人员需要克服Sirna的稳定性和递送效率等方面的挑战，以实现其在治疗疾病中的应用。

综上所述，Sirna干扰技术作为一种强大的基因沉默工具，在生物学研究和临床应用中具有重要的意义。

缺氧预处理后GSK3β／STAT3信号通路在大鼠缺血性脑损伤中的作用及机制

ｂｒａｉｎｉｎｊｕｒｙｉｎｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ７０ｍｌｅａＳＤｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＮ，１０ｒａｔｓ），ｓｈａｍｏｐ－ｅｒａｔｉｏｎｒｏｇｕｐ（ｒｏｇｕｐＳ，１２ｒａｔｓ），ｃｅｒｅｂｒｌａｉｎｆａｒｃｔｉｏｎｒｏｇｕｐ（ｒｏｇｕｐＭ，１２ｒａｔｓ），ｃｅｒｅｂｒｌａｈｙｐｏｘｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇａｎｄｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐ（ｇｒｏｕｐＨＭ，１２ｒａｔｓ），ｈｙｐｏｘｉａｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇａｎｄｂｒａｉｎｏｂｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｉｎｈｉｂｉｔｏｒｒｏｇｕｐ（ｒｏｇｕｐ
摘要目的探讨ＧＳＫ３［３／ＳＴＡＴ３信号通路在缺氧预处理大鼠缺血性脑损伤中的作用及机
制。方法将７０只ｓＤ大鼠随机分为正常组（Ｎ组，１０只）、假手术组（ｓ组，１２只）、脑梗死组（Ｍ组，１２只）、缺氧预处理＋脑梗死组（ＨＭ组，１２只）、缺氧预处理＋脑梗死＋抑制剂组（ＨＭＩ组，１２只）、缺氧预处理＋脑梗死＋生理盐水组（ＨＭＮ组，１２只），采用Ｌｏｎｇａ的改良线栓法建立大脑中

sirt3分子量

SIRT3分子量1. 简介SIRT3是一种重要的酶，属于Sirtuin家族的成员之一。

Sirtuins是一类在真核生物中高度保守的NAD^+-依赖性蛋白去乙酰化酶。

SIRT3主要存在于线粒体内，对于调控细胞能量代谢、抗氧化应激和细胞凋亡等生物学过程起到关键作用。

2. 结构SIRT3的分子量为44 kDa（千达尔顿）。

它由274个氨基酸残基组成，具有一个线粒体定位信号序列，这使得它能够定位到线粒体内。

SIRT3的分子结构包括一个N末端结构域、一个保守的sirtuin结构域和一个C末端结构域。

3. 功能3.1 能量代谢调节SIRT3通过去乙酰化调节多个与能量代谢相关的蛋白，从而对细胞能量代谢起到重要调控作用。

例如，SIRT3可以去乙酰化并激活丙酮酸脱氢酶2（ACLY），促进脂肪酸合成和氧化磷酸化。

此外，SIRT3还可以去乙酰化并激活丙酮酸脱氢酶1（PDH），从而促进糖原的分解和线粒体呼吸链的活性。

3.2 抗氧化应激SIRT3通过去乙酰化调节多个与抗氧化应激相关的蛋白，从而发挥抗氧化应激作用。

例如，SIRT3可以去乙酰化并激活超氧化物歧化酶2（SOD2），增强细胞对自由基损伤的抵抗能力。

此外，SIRT3还可以去乙酰化并激活谷胱甘肽过氧化物酶2（GPX2），增强细胞对过氧化物的清除能力。

3.3 细胞凋亡调控SIRT3通过调节多个与细胞凋亡相关的蛋白，发挥对细胞凋亡的调控作用。

例如，SIRT3可以去乙酰化并激活FOXO3a转录因子，促进细胞周期阻滞和凋亡。

此外，SIRT3还可以去乙酰化并激活BCL2相关蛋白X（Bax），增强线粒体通透性转换蛋白的活性，导致细胞凋亡。

4. 调控机制SIRT3的活性受到多个因素的调控。

首先，SIRT3的表达水平受到基因转录的调控。

研究发现，多个转录因子可以调节SIRT3基因的表达，包括PPARα、PGC-1α等。

其次，SIRT3的活性还受到底物和辅因子的影响。

SIRT3是一种NAD+-依赖性酶，在细胞中NAD+/NADH比值升高时，SIRT3的活性会增加。

新生小鼠缺血缺氧性脑损伤中TLR4_TRIF信号通路的表达_黄晓雷

新生小鼠缺血缺氧性脑损伤中ＴＬＲ４－ＴＲＩＦ信号通路的表达黄晓雷　崔桂云△徐州医学院院附属医院　神经内科徐州医学院神经病学教研室　徐州　２２１００２【摘要】　目的　建立新生小鼠缺血缺氧模型，探讨ＴＬＲ４－ＴＲＩＦ信号通路中ＴＬＲ４、ＩＲＦ３的表达。

方法　将６０只７日龄Ｃ５７ＢＬ／６小鼠分为假手术组、缺血缺氧１ｄ、２ｄ、３ｄ、４ｄ、７ｄ、建立新生小鼠缺血缺氧性脑病模型，比较鼠脑左右半球的质量，确定模型是否建立成功。

以逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测大脑皮质和海马中ＴＬＲ４ｍＲＮＡ、ＩＲＦ３ｍＲＮＡ的表达。

结果　缺血缺氧１ｄ组右侧的脑质量明显重于左侧，说明缺氧缺血１ｄ后，右脑水肿明显。

缺氧缺血组的ＴＬＲ４ｍＲＮＡ、ＩＲＦ３ｍＲＮＡ的表达水平均明显高于假手术组。

结论　脑缺氧缺血损伤可激活ＴＬＲ４，引起ＩＲＦ３表达量增加。

【关键词】　缺氧缺血性损伤；Ｔｏｌｌ样受体４；海马；小鼠【中图分类号】　Ｒ－３３２【文献标识码】　Ａ【文章编号】　１６７３－５１１０（２０１２）０９－００１６－０３Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ＴＬＲ－ＴＲＩＦ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｄｕｒｉｎｇ　ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｍｉｃｅ　Ｈｕａｎｇ　Ｘｉａｏｌｅｉ，ＣｕｉＧｕｉｙｕｎ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｘｕｚｈｏｕ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｘｕｚｈｏｕ２２１００２，Ｃｈｉｎａ【Ａｂｓｔｒａｃｔ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｏｂｓｅｒｖｅ　ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　４（ＴＬＲ４），ＩＲＦ３ｉｎ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓ－ｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ（ＨＩＢＤ）ｉｎ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｍｉｃｅ　ａｎｄ　ａｎａｌｙｚｅ　ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｔｈｅｍ，ｉｎ　ｏｒｄｅｒ　ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ＴＬＲ４ｉｎｔｈｅ　ＨＩＢＤ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｒａｎｄｏｍｌｙ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ＨＩ　ｇｒｏｕｐ（ｎ＝１０）．Ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　ＨＩＢＤｍｉｃｅ　ｗｅｒｅ　ｓｕｂｊｅｃｔｅｄ　ｔｏ　ｒｉｇｈｔ　ｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｙ　ｌｉｇａｔｉｏｎ　ａｎｄ　１０％Ｏ２ｆｏｒ　６０ｍｉｎ　ｏｎ　ｐｏｓｔｎａｔａｌ　７ｄａｙｓ．Ｔｈｅ　ｂｒａｉｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｗａｓ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ａｔ１ｓｔ　ｄａｙ，２ｎｄ　ｄａｙ，３ｒｄ　ｄａｙ，４ｔｈ　ｄａｙ，７ｔｈ　ｄａｙ．Ｂｒａｉｎ　ｗａｓ　ｗｅｉｇｈｅｄ　ｉｎ　ｐａｐｅｒ　ｂｙ　ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ　ｂａｌａｎｃｅ，ａｎｄ　ｌｅｆｔ　ａｎｄ　ｒｉｇｈｔ　ｂｒａｉｎ　ｗｅｉｇｈｔｗａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＴＬＲ４，ＩＦＲ３ｉｎ　ｔｈｅ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ａｆｔｅｒ　ＨＩ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＲＴ－ＰＣＲ　ａｔ　ｅａｃｈ　ｔｉｍｅｐｏｉｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｒｉｇｈｔ　ｂｒａｉｎ　ｏｆ　１ｓｔ　ｄａｙ　ｏｆ　ＨＩ　ｗｅｉｇｈｔ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｅａｖｉｅｒ　ｔｈａｎ　ｔｈｅ　ｌｅｆｔ　ｂｒａｉｎ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｈａｍ－ｏｐｅｒ－ａｔｅｄ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｌｅｖｅｌｓ　ｏｆ　ｂｏｔｈ　ＴＬＲ４ｒｅａｃｈｅｄ　ａ　ｐｅａｋ　ａｔ　１ｓｔ　ｄａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｇｒａｄｕａｌｌｙ．ＩＲＦ３ｂｅｇａｎ　ｔｏｉｎｃｒｅａｓｅ　ａｔ　１ｓｔ　ｄａｙ　ａｎｄ　ｒｅａｃｈｅｄ　ａ　ｐｅａｋ　ａｔ　２ｎｄ　ｄａｙ　ａｎｄ　ｔｈｅｎ　ｇｒａｄｕａｌｌｙ　ｄｅｃｌｉｎｅｄ，ｂｕｔ　ｈａｄ　ｎｏ　ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ　ａｔ　７ｔｈ　ｄａｙ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓ　ｏｆ　ＴＬＲ４ａｎｄ　ＩＲＦ３ｉｎ　ｃｅｒｅｂｒａｌ　ｃｏｒｔｅｘ　ａｎｄ　ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ　ａｆｔｅｒ　ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍ－ａｇｅ　ｉｎ　ｎｅｏｎａｔａｌ　ｍｉｃｅ　ａｒｅ　ｅｌｅｖａｔｅｄ，ｗｈｉｃｈ　ｍａｙ　ｐｌａｙ　ａ　ｃｒｉｔｉｃａｌ　ｒｏｌｅ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ｎｅｏｎａｔａｌｍｉｃｅ．【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｈｙｐｏｘｉｃ－ｉｓｃｈｅｍｉｃ　ｂｒａｉｎ　ｄａｍａｇｅ；Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ　ｒｅｃｅｐｔｏｒ　４；Ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ；Ｒａｔ缺血缺氧性脑病（ＨＩＥ）为新生儿常见疾病之一，病死率高达７５％，是目前新生儿死亡及远期致残的主要原因。

缺氧相关基因

缺氧相关基因缺氧是指细胞或组织在供氧不足的情况下遭受的一种应激状态。

缺氧状态可以产生一系列的生理和病理变化，引发一些基因的表达变化。

下面将介绍一些与缺氧相关的基因。

1. HIF-1α基因：缺氧诱导因子(Hypoxia-inducible factor 1α, HIF-1α)基因是一个与缺氧密切相关的基因。

HIF-1α基因的蛋白质产物HIF-1α激活了一系列与缺氧应答相关的基因，如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter-1, GLUT-1)等。

HIF-1α基因的表达水平在缺氧时显著上调，从而促使机体采取相应的应对措施。

2. VEGF基因：VEGF是一种与新血管生成密切相关的细胞因子。

缺氧条件下，HIF-1α激活VEGF基因的表达，促进血管内皮细胞的增殖和迁移，以及血管通透性的增加，从而增加血管形成。

VEGF的表达上调可以提高组织缺氧状态下的氧气供应，改善缺氧损伤。

3. EPO基因：EPO (erythropoietin)基因编码一种促红细胞生成的细胞因子。

在缺氧条件下，HIF-1α激活EPO基因的表达，促进红细胞的生成和释放。

EPO的作用是通过促进红细胞生成，增加血液的氧载体，改善缺氧状况。

4. NOS基因：NOS(nitric oxide synthase)基因编码一类产生一氧化氮的酶。

在缺氧状态下，一氧化氮的生成量会增加。

一氧化氮通过扩张血管、改善血液流动性等方式，调节血液供应，从而改善缺氧状态。

5. HMOX1基因：HMOX1(heme oxygenase 1)基因编码一种可以分解血红蛋白的酶。

在缺氧环境下，HMOX1的表达水平上调，通过降解血红蛋白产生的细胞色素，释放所需的生物效应子，如一氧化氮等，从而保护细胞免受缺氧引起的损伤。

6. SOD2基因：SOD2 (superoxide dismutase 2)基因编码一种抗氧化酶。

探讨缺氧后处理的心肌保护机制-病理学论文-基础医学论文-医学论文

探讨缺氧后处理的心肌保护机制-病理学论文-基础医学论文-医学论文——文章均为WORD文档，下载后可直接编辑使用亦可打印——尽管各种治疗手段的改进,缺血性心脏病仍是目前全球致死性疾病的首要病因。

缺血预处理(IPC)被公认为有效的心肌保护方式,但IPC必须在缺血前应用,因此临床应用受到限制。

研究人员发现缺血后处理可以通过减小缺血心肌梗死面积,提高血管内皮细胞功能等途径发挥心肌保护功能。

而且缺血后处理不受时间的限制,已有研究人员证实缺血后处理可以在经皮冠状动脉介入术中使用。

然而缺血后处理的分子机制仍然不清楚。

目前多数研究使用乳鼠心肌细胞或者新生鼠心肌细胞缺氧复氧模型。

新生鼠心肌细胞与成年鼠心肌细胞在形态、结构和功能上存在很大差异,很难将新生期心肌细胞培养所得的研究结论应用到完全分化的成熟心肌细胞中。

且成年心肌细胞更有科学研究价值。

故本实验采用成年大鼠心肌细胞缺氧复氧模型探讨缺氧后处理的心肌保护机制。

1 材料与方法1.1 动物SD大鼠,雄性,体质量250~350g,由重庆第三军医大学实验动物中心提供[SCXK(渝)2012-0005]。

1.2 主要药品、试剂及仪器硫氢化钠(Sigma,美国);M199培养基(Thermo,美国);层粘连蛋白(Sigma,美国);Ⅱ型胶原酶(Sigma,美国);磷酸化p38MAPK一抗、b-actin以及相应的二抗(SantaCruz,美国);线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)(碧云天生物技术研究所,江苏);ALC-HP型离体心脏灌流实验装置(奥尔科特生物科技有限公司,中国);DIG-303A型艾柯超纯水器(成都唐氏康宁科技发展有限公司,中国);激光共聚焦显微镜(Leica,德国);95%O2+5%CO2细胞培养箱(Thermo,美国);95%N2+5%CO2细胞培养箱(Thermo,美国);Petri皿(杭州生友生物技术有限公司,中国);其他试剂均为国产分析纯。

1.3 心肌细胞的分离培养腹腔注射异戊巴比妥40mg/kg,肝素250g/kg麻醉后迅速剑突下剖胸取出心脏,应用langendorff离体灌注装置,依次逆行灌注750m Ca2+液,无Ca2+EGTA液,Ⅱ型胶原酶液;之后将消化好的心脏浸泡于5mL含1%的Ⅱ型胶原酶液中,并置于37Ⅱ恒温水浴摇震荡5min/次,160m无菌滤网过滤收集酶液于无菌试管内,置于37 Ⅱ恒温水槽内等待心肌细胞自然沉降,重复操作5次;酶洗脱洗涤沉降细胞3~4次,M199培养基洗涤细胞2次,收集细胞;将细胞数以104/cm2的密度平铺于层粘连蛋白预处理的Petri皿中,加入培养基放入95%O2+5%CO2细胞培养箱。

阿托伐他汀预处理对缺氧复氧后乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制

阿托伐他汀预处理对缺氧复氧后乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制刘会1，谭洪文1，庞军1，张曙影21 贵州省人民医院心内科，贵阳550002；2 大连大学附属中山医院心内科摘要：目的　探讨阿托伐他汀预处理对缺氧复氧后乳鼠心肌细胞的保护作用是否与线粒体ATP 敏感的钾通道（mitoK ATP C ）和线粒体膜通透性转换孔（MPTP ）有关。

方法　将原代培养的C57BL /6乳鼠心肌细胞随机分为五组，control 组常规培养，H /R 组、Ator 组、5-HD+Ator 组和LND+Ator 组均进行缺氧复氧处理（缺氧12 h 、复氧6 h ）；Ator 组缺氧复氧前给予1 µmol /L 阿托伐他汀预处理3 h ，5-HD+Ator 组缺氧复氧前给予100 µmol /L mitoK ATP C 通道阻断剂5-羟基葵酸+1 µmol /L 阿托伐他汀干预3 h ，LND+Ator 组缺氧复氧前给予1 µmol /L 阿托伐他汀干预3 h+30 µmol /L MPTP 开放剂氯尼达明干预20 min 。

采用CCK -8法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞内钙离子浓度、线粒体膜电位、MPTP 开放情况和活性氧（ROS ）含量。

结果　与control 组比较，H /R 组、Ator 组、5-HD+Ator 组、LND+Ator 组细胞存活率均降低、钙离子浓度均升高，H /R 组、5-HD+Ator 组、LND+Ator 组线粒体膜电位均降低、MPTP 开放程度及ROS 含量均升高（P 均<0.05）。

与H /R 组、5-HD+Ator 组、LND+Ator 组比较，Ator 组细胞存活率、线粒体膜电位均升高，钙离子浓度、MPTP 开放程度及ROS 含量均降低（P 均<0.05）。

结论　阿托伐他汀对缺氧复氧后的乳鼠心肌细胞具有保护作用，其机制可能与开放mitoK ATP C 和关闭MPTP 从而抑制ROS 生成有关。

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ＯＧＤ（＝０８６＞００）ＴｅｅｐｅｓｏｆＰＣ—ｌｎＳＤｅｅｄｃｉｅｉｎｆａｔｎｔｅｔｒｅｇｏｐｆＳＲＴ一一Ｐ．６．５．ｈｘｒｓｉｎｏＧａａｄＭｎＯｗｒｅｌｄｓｇｉｃｎｌｉｈｈｅｒｕｓｏＩ３／ｎｉｙ
收稿日期：０１０ — ８２１－４０
基金项目：国家自然科学基金（１７０９；８０１６）广东省科技计划项目（００００００８；东省科技计划项目（０８００００９２１Ｂ８７１０）广２０Ｂ８７３２）
作者简介：超英，士研究生，究方向：李硕研脑血管病，ｍａｌｌｌ１７２．ｒ；通信作者：玲，士生导师，授，－ｉＥ— ｉ：ｃｙ１５＠１６ｃｎｏ李博教Ｅｍａｌ
明显（Ｐ＜００）．５。经预处理后ＳＲ３／组ＡＰ水平增加，ＩＴ一一Ｔ且与Ｖｃｏ组间差异无统计学意义（ｅｔｒＰ＝０８６＞００）ＳＲ３／．６．。ＩＴ一一３５
组细胞问ＰＣｌＧ — ａ及ＭｎＯＳＤ蛋白的表达与Ｖｃｒ对应的３组比较明显下降（ｅｔ组ｏＰ＜００）ＨｐＯＤ及ＯＤ相对于各自．５，ｙ＋ＧＧ
预处理中发挥重要的细胞保护作用。关键词：缺氧预处理；ｉｕｎ；Ｓｒｉ３过氧化物酶体增生激活受体一ｔ的共刺激因子一ｃ；ｌＬ锰超氧化物歧化酶；ｉＮｓＡ干扰Ｒ中图分类号：３Ｒ文献标志码：Ａ文章编号：６２３５（０２０ — ０１０１７ — ５４２１）１００ — ７
００９与Ｖｃｏ组（．２±０１０相比，．０）ｅｔｒ０５６．４）细胞活性下降更明显（Ｐ＜００）经预处理后ＳＲ３／组细胞活性增加，．５，ＩＴ一一且与Ｖｃｏｅｔｒ组间差异无统计学意义（Ｐ＝０３１＞００）ＯＤ后ＳＲ３／组（．３．１．５。ＧＩＴ一一０３４±００６与Ｖｃｒ（．５．０）ｅｔ组０４３±Ｏ０５相比，Ｔｏ．１）ＡＰ下降更
ｅａｕｔｄｕｉｇＡＰＦｕｒｍｅｒｓｙＫｉＴｅｅｐｅｓｏｆＳＲ３，Ｐｅｏｉｏｒｌｅａｏ — ｃｉａｅｅｅｔｒｃａｔａｏ一ｖｌａｅｓｎＴｌｏｏｔｃＡｓａｔｉ．ｈｘｒｓｉｎｏＩＴｒｘｓｍｅｐｏｉｒｔｒａｔｔｄｒｃｐｏ一ｏｅｉｔｒ１ｆｖｖ
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第３３卷
ｂｔｅｅｎｒａｅｙ＋ＧｓｅｔｅｙＰ＜００）ｒｓｌｎｏｓｎｃｎｉｅｅｃｅｅｎＳＲ３／ｎｅｔｒｎＨｐｕｗｒｉｃｅｓｄｉＨｐＯＤｒｐｃｖｌ（ｎｅｉ．５．ｅｕｉｇｎｎｇｉａｔｆｒｎｅｔｅＩＴ一一ａｄＶｃｏｉｙ＋ｔｉｉｆｉｄｆｂｗ
定细胞活性。ＡＰ荧光检测试剂盒测定胞内的ＡＰ水平。ＷｅｔｎＢｏ法测定各组细胞内ＳＲ３过氧化物酶体增生激活受ＴＴｓｒｌｔｅＩＴ、
体一的共刺激因子一仅ＰＣ１，超氧化物歧化酶（ｎＯ）１（Ｇ一）锰ＭＳＤ的蛋白表达水平。【果】Ｇ结ＯＤ后ＳＴ一一（．０± Ｉ３／组０３Ｒ４
摘
要：目的】探讨基因干扰Ｓｔｉ（ＩＴ）【ｉｎＳＲ３后对缺氧预处理的影响。【法】ｒ３ｕ方使用空白载体ｐＣＩ— ＦＧＳＬＧＰ进行预实
验，筛选适合的感染复数（Ｉ。正式实验使用ｐＣＩ— ＵＳＲ３转染Ｐ１ＭＯ）ＧＳＬＰＲ— ＩＴｃ２细胞。成功构建空白载体（ｍｐｙｖｃｒ及ｅｔｅｔ）ｏＳＲ３／稳定细胞株后，两种细胞分别分为对照组（ｏｔ１；ＩＴ一一将ｃｎｒ）缺氧预处理＋氧组（ｙ＋Ｇ；纯缺氧组（Ｇ；Ｔ测ｏ缺ＨｐＯＤ）单ＯＤ）Ｍ１ｒ
ｏｉｎｍｅＪａｇｎ２００，Ｃｉａ．ｅｋｎｎｖｒｉｈｎｈｎＨｏｐｔｌｈｎｈｎ５３，Ｃｈｎ；４Ｄｅａｔｎｆｆａｇｎ，ｉｎｍｅ５９３Ｊｈｎ；３ＰｉｉｇＵｉｅｓｔＳｅｚｅｓｉ，Ｓｅｚｅ０６ｙａ１８ｉａ．ｐｒｍｅｔｏ
Ｏｙｅ —ｌｃｓｄｐｉｔｎ（ｙ＋ＧａｄＯＤｒｓｅｔｅ．Ｉａｓｙｗｓｓｄｆｒｅｔｇｈｅｓｉｉｔ．ｈＴｖｌａｘｇｎｇｏｅｅｒａｏＨｐＯＤ）ｎＧｐｃｉｌＭＴ＂ｓａｅｓｎｅｃｌａｌｙＴｅＡＰｌｅｗｓｕｖｉｅｖｙａｕｏｔｉｔｌｖｂｉｅ
００）ＡｅＧ．５．ｆｒＤ，ＴｅＡＰｌｖｌｄｃｅｓｄｍｒｉＳＲ３／ｏａｅｉｅｔｒ０３４±００６ｖ．５ｔＯｈＴｅｅｒａｅｏｅｎＩＴ一一ｃｍｐｒｄｗｔＶｃｏ（．３ｅｓｈ．０ｓ４３±００５Ｐ００）０．１，＜．１，
ＭＴａｅｅｒａｅｏｅｉＳＲ３／ｏｐｒｄｗｔＶｃｏＯ４０±Ｏ０９ｖ．２４Ｏ１０Ｐ＜００）ｂｔｅｅｎｒａｅＴｖｌｓｄｃｅｓｄｍｒｎＩＴ一一ｃｍａｅｉｅｔｒ（．３ｕｈ．０ｓ５－．４，Ｏ６．１，ｕｒｃｅｓｄｉｗｉｎＨｐ＋ＯＤｒｓｅｔｅＰ＜Ｏ０）ｒｓｌｎｏｓｎｆａｔｉｅｅｃｅｅｎＳＲ３／ｎｅｔｙ＋ＧＰ＝０３１ｙＧｐｃｖｌｅｉｙ（．，ｅｕｔｇｉｎｇｉｃｎｆｒｎｅｔｅＩＴ一一ａｄＶｃｒｎＨｐＯＤ（５ｉｎｉｉｄｂｗｏｉ．１＞
（．ｅａｍｎｅｒｌｙＦｒｆｌｔｄＨｓｉｌＳｎＹｔｅｎｖｒｉ，ｕｎｚｏ００Ｃｉ；．ｈｅｔｌｏｐｔｌ１ｐｒｅｔｆｕｏｇ，ｉｔｆｉｅｏｐｔ，ｕａＳｎＵｉｓｙＧａｇｈｕ５０８，ｈｎ２ＴｅＣｎａＨｓｉＤｔｏＮｏｓＡｉａａ — ｅｔ１ａｒａ
ｆｒｌｅｐｒｎｓＣｌｒｎｆｅｅｔｍｐｙｖｃｏｓｏＩ３Ｒｏｍａｘｅｉｍｅｔ．ｅｌｔｓｔｄｗｉｅｔｅｔｒｒＳＲＴ一ＮＡｉＬｗｅｅｄｖｄｄｉｔｏｔ１ｈｐｘｃｐｅｏｄｔｎｎ＋ｓａｅｈ — Ｖｒｉｉｅｎｏｃｎｒ．ｙｏｉｒｃｎｉｏｉｇｏｉ
ｃｎｏ组均上调（ｏｔｌｒＰ＜０５，．）且预处理组的上调更明显（ＯＤ组比较，０与ＧＰ＜０５结论】．）【０干扰ＳＲ３基因后ＰＣ１ＩＴＧ一仅及
ＭｎＯＳＤ的表达下降，ＩＴＳＲ３为预处理或缺氧处理上调ＰＣ１Ｇ一及ＭｎＯＳＤ的其中一条途径，干扰ＳＲ３后其他的途径仍然在ＩＴ
基础研究・
基因干扰Ｓｒｉ３ｉｕｎ后对缺氧预处理的影响ｔ
李超英，胡一俊，赵嘉，王莹，陶玉倩，李玲
（．１中山大学附属第一医院神经内科，广东广州５０８；．１００２江门市中心医院，广东江门５９３；．ｉｌ医院神经内科，２００３深￣ｌ；：大ｌ广东深圳５８３；．１０６４中山大学附属第二医院神经内科，广东广州）
第３３卷
２１０２年
・
第１期
１月
中山大学学报（医学科学版）
ＪＵＮＦＳＮＹＴＳＮＵＩＥＳＴＭＥＩＡＣＥＣＳＯＲＡＬＯＵＡ —ＥＮＶＲＩＹ（ＤＣＬＳＩＮＥ）
Ｖｏ．３Ｎｏ．１３１
Ｊｎ２２ａ．Ｏ１
Ｎｕｏｏ，ｅｏｄＡｌｔｏｐｔｌＳｎＹｔｅｎｖｒｔ，ｕｎｚｏ１１０ＣｉａｅｒｌｇＳｃｎｆｉｅＨｓｉ，ｕａＳｎＵｉｅｓｙＧａｇｈｕ５０２，ｈｎ）ｙｉａｄａ — ｉ
Ａｓａｔ【ｂｃｖ】ｏｉｅｉｔｔｆｃｏＳｕ３（ＩＴ）ｏｙｏｉｐｃｎｉｎｇ（ｙ）ｉｓｅｅｎｃｅｂｔｃ：ＯｊｔｅＴｖｔａｅｅｅｔｆｉｉＳ３ｎｈｐｘｒｏｄｉｉＨｐｗｔｉｇｎｏｋｄｒｅｉｎｓｇｅｈｆｒｎｔＲｃｅｔｎｏｈｔｋｄｗ．Ｍｔｄ】Ｅｐｅｔｓ（ＧＳ —Ｆ）ｗｒｕｄｔｓｅｔｈｕａｌＭＩＧＳ —Ｕ－ＩＴ一ｃｒｗｒｕｄｉｏｎ【ｅｏｓｍｔｖｃｒｐＣＩＧＰｅｓｅｃｔｓｉｂＯ．ｐＣＩＰＲＳＲ３ｖｔｓｅｓｈｙｏＬｅｅｏｌｅｔｅＬｅｏｅｅｎ