高效石油降解菌的筛选及其降解特性
石油降解菌的筛选及降解性能研究
２００８年 １０月
污
染
防
治
技
术
Ｖｏ ． Ｉ２１． ． Ｎｏ ５
０ｃ ．２０ ０ ８ ｔ．
ＰＯＬＬ ＵＴ１ ０Ｎ ＣＯＮＴＲ０Ｌ ＴＥＣＨ ＮＯＬＯＧＹ
石 油 降 解 茵 的 筛 选 及 降解 性 能 研 究
李 海花 ， 单爱 琴 ， 周海 霞
ｏｌｄ ｇ ａ ａｉｎ ｒ ｔ． Ｔｗｉ８ ａ ｎｈｂｉ ｒ ｆｅ ｔ ｎ ｏｌｄ ｇ ａ ａｉｎ． ｉ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ａｅ ｎ ０ ｈ ｄ ｉ ｉ ｔ ｙ ｅｆ ｃｓｏ ｉ ｅ ｒ ｄ ｔ ｏ ｏ Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｄｓ： ｔｏｅ ｍ ； ｉ ｄ ｇ ａ ｔ ｎ；ｄ ｇ ａ ｉ ｇ ｂ ｃ ｅｉ ｐｅｒｌ ｕ ｂ ｏ ｅ ｒｄａｉ ｏ ｅ ｒ ｄ ｎ ａ ｔｒａ；ｄ ｇ ａ ａｉ ｎ ｒ ｔ ｅ ｒ ｄ ｔｏ ａｅ
处理 石油污 染作 了初探 。
５ｇ 琼脂 ２ ， ， ０ ｇ 蒸馏 水 １ ０ Ｌ，Ｈ为绘 学院 ，江 苏 徐 州 ２ １０ ） ２ ０ ８
摘 要 ： 石 油 污 染 的 土壤 中分 离驯 化 ， 到 特 征 明显 的石 油 降 解 菌 ， 究 了 不 同 时 间 、 油 浓 度 、 种 量 、Ｈ值 、 质 从 得 研 石 接 ｐ 基
及添加物等条件对 降解菌 降解石油 的影响。结果 表明 ： 在实验条件下 ， 降解菌接种量越 多 ， 降解 效果越好 ； 石油降解效率随
ｐ Ｈ ｖ ｌ ｅ，ｇ ｒ ｉｕ ｅ ａ ｄ Ｓ ｎ． Ｔｈｅ ｒ ｓ ｌｓ ｓ ｏ ｄ ｈａ ｄ ｒ ｔｅ ｅ ｔｃ ｎ ｔｏ ｓ，ｔ ｅ ａｕ ａ ｎｔ ｒ ｎ Ｏ ｏ ｅ ｕ ｔ ｈ ｗｅ ｔ ｔｕｎ ｅ ｈ ｔｓ ｏ ｄｉｉｎ ｈ ｍｏｅ ｄ ｓ ｓ ｗｅｅ ｄ ｅ ｒ ｏ ｅ ｒ ａ ｄ ｄ，ｔ ｅ ｈ ｍｏｅ ｅｆｃｅ ｔ ｒ ｆｉｉｎ
两株石油降解菌的筛选及其生长特性-精选文档
两株石油降解菌的筛选及其生长特性DOI：10.14088/jki.issn0439-8114.2016.02.016土壤是人类赖以生存的自然基础和重要资源，近年来，随着社会经济发展对石油产品需求量增加，大量的石油及其加工品在勘探、开采、运输、加工及储存的过程中进入土壤，造成土壤的石油污染日趋严重，已成为世界性的环境问题[1，2]。
石油物理化学性质特殊，进入土壤后残留时间长，在自然条件下难以降解，给受污染土壤带来一系列的危害：石油黏性强，影响土壤的通透性，使土壤盐碱化、沥青化和板结化，破坏土壤结构和功能，在长期累积过程还会导致土壤中碳氮比和碳磷比失调，引起土壤微生物群落变化，破坏土壤微生物区系，影响植物生长；石油中所含的多环芳烃具有致癌、致突变、致畸变等作用，它们能通过食物链在动植物体内逐级富集，危及人类健康和生态安全[3，4]。
鉴于以上原因，修复和治理污染土壤已经成为迫切需要研究解决的问题。
目前石油污染土壤的修复方法主要有物理方法、化学方法和生物方法，其中微生物处理技术具有经济、有效和环境友好等特点，是目前修复石油污染土壤优先考虑的技术[5，6]。
微生物修复技术是微生物通过代谢作用将石油污染物转化为稳定、无毒的以二氧化碳、水和无机物为主的降解产物。
石油的降解程度和速度取决于微生物特性、污染物的性质和环境因素，而具有强降解能力的石油降解菌是决定生物修复效率的关键因素。
因此，需要有针对性地筛选适合本地区石油污染土壤的土著高效降解菌。
新疆是中国石油主产区，存在大面积石油污染土壤亟待修复[7，8]。
基于此，本研究从新疆石油污染土壤中筛选出2株高效石油降解菌，通过形态和生理生化试验对其进行了初步鉴定，并初步研究该菌的生长特性和培养条件，以期为新疆石油污染土壤的微生物修复提供试验基础。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 土壤和石油样品分离菌种土壤采自新疆油田区污染程度不同的位置，采样时取地表10 cm污染土壤1.0 kg，去除杂物，装入密封袋，于4 ℃冰箱保存。
石油降解菌株的筛选 鉴定及其石油降解特性的初步研究
（2）pH值对菌株降解效率的影响：在pH值为7.0时，菌株X的降解效率最高， 达到60%以上。当pH值偏离7.0时，其降解效率明显下降。
（3）盐度对菌株降解效率的影响：在低盐度条件下，菌株X的降解效率较高。 随着盐度的增加，其降解效率逐渐降低。当盐度超过5%时，其降解效率显著下降。
（4）产物分析：利用GC-MS等技术，我们对菌株X降解石油烃的产物进行了 分析。结果显示，菌株X能够将石油烃主要降解为脂肪酸、酚类化合物等中间产 物。这些中间产物在进一步降解过程中转化为二氧化碳和水，从而实现石油烃的 生物修复。
2、筛选流程：首先，采集油污土壤和石油废水样品，进行富集培养；其次， 通过初筛和复筛，获得具有较强石油降解能力的菌株；最后，通过形态学和分子 生物学鉴定，确定菌株种类。
3、鉴定步骤：将筛选得到的菌株进行16S rDNA分子鉴定，利用细菌分类学 软件进行比对分析，最终确定菌株的种属。
4、石油降解特性分析：采用液体培养法测定菌株的石油降解能力，通过测 定不同时间点石油烃类物质的含量，计算菌株的降解速率和降解效率。
1、菌株筛选
从石油烃污染地区采集土壤样品，采用富集培养法，经过多步筛选，获得具 同温度、pH值、盐度等条件下，对菌株降解石油烃的能力进行测定。通 过改变环境因素，观察其对菌株降解效率的影响。同时，利用气相色谱-质谱联 用（GC-MS）等技术，对菌株降解的产物进行分析。
参考内容
一、引言
石油烃是石油和天然气的主要成分，它们在自然环境中的存在和降解对全球 碳循环和环境生态有着重要影响。厌氧降解菌在石油烃的降解过程中扮演着关键 角色。本次演示旨在筛选出具有高效石油烃厌氧降解能力的菌株，并对其降解特 性进行研究，以期为石油烃污染的生物修复提供理论依据。
二、材料与方法
土壤中高效石油降解菌的筛选及其降解特征的研究
土壤中高效石油降解菌的筛选及其降解特征的研究林标声;陈雪英;江胜滔;林跃鑫【期刊名称】《福建师大福清分校学报》【年(卷),期】2010(000)002【摘要】从受石油产品污染土壤中筛选出5株石油降解菌,并通过生理生化实验对其进行了初步鉴定.石油降解能力的测定结果表明,其中KF-2、KF-4两株菌均为微球菌属(Microrococcus sp.),石油降解能力较强,其单菌落接种20天后石油降解率分别可以达到76.21%、74.82%.在对这两株菌的降解特征的进一步探究中发现:KF-2菌株在NH4NO3作为氮源的条件下石油降解率较高;而KF-4在(NH4)2SO4作为氮源的条件下石油降解率较高.环境pH为7时,KF-2、KF-4的石油降解率都最高.混合菌的试验表明,KF-2、KF-4混合菌的降解效果明显好于各单菌株接种降解效果.【总页数】6页(P11-16)【作者】林标声;陈雪英;江胜滔;林跃鑫【作者单位】龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;龙岩学院生命科学学院,福建龙岩,364012;福建师范大学生命科学学院,福建福州,350108【正文语种】中文【中图分类】Q93-3【相关文献】1.石油污染土壤中降解菌的分离鉴定及降解基因筛选 [J], 秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远2.石油污染土壤中降解菌的分离鉴定及降解基因筛选 [J], 秦薇;梁玉婷;刘勇俊;刘雨佳;赵远;3.石油污染土壤中石油降解菌的筛选及降解特性研究 [J], 汤小萌;马超;熊元林4.石油污染土壤中苯降解菌的筛选及降解特性研究 [J], 姚治华;王红旗;刘敬奇;张小啸5.高效石油降解菌的筛选及石油污染土壤生物修复特性的研究 [J], 徐金兰;黄廷林;唐智新;肖洲强因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
石油降解菌的筛选、鉴定及降解石油研究
2020年02月Bi 、Ni 、Fe 、Mn 、Ca 、Mg 、Al 、Cu 、Pt 、Pd 标准溶液0、0.50、1.00、5.00、10.00ml 于100ml 容量瓶中，分别加入10ml 王水，用去离子水定容至刻度摇匀以备用；此系列混合标准溶液为0、0.5、1、5、10µg/ml （个别含量高的元素可准备为50µg/ml 的高标）。
（3）样品的测定。
将上述保留的分金溶液及洗液蒸发至近干，用王水加热溶解，冷至室温定容至刻度线，混匀静置待测。
采用电感耦合等离子体发射光谱仪（ICP-OES ）在相应的波长下测定铋、铅、铜、铁、砷、蹄、镍、镉、猛、钙、镁、铝、铂、钯的浓度，仪器需优化消除干扰以获得最大的灵敏度，使谱线强度和浓度成线性关系。
将所有元素的测定值减去空白值相加来计算分金溶液和洗液中的总杂质含量。
3结果3.1金银合粒中存在的杂质元素根据铜精矿元素情况，其中主要金属元素含有铜、铁、钙、镁、铝、铋、铅、砷、蹄、镍、镉、猛、铂、钯等14种元素，通过火试金分离富集得到的金银合粒除去了大多数杂质元素，其主要成分为金银，其余杂质成分含有少量的铅、铋、钙，部分样品含有少量的铂、钯[1]。
本文列举了几种有代表性的铜精矿分析各元素含量可知6类样品金银合粒中铜、铁、砷、蹄、镍、锰、镉、镁、铝的含量均＜0.2ug,其含量基本忽略不计，而所有铜精矿金银合粒中均含有铅、铋、钙这三种元素，含量随品位高低有波动，有2类铜精矿金银合粒中测出少量的铂、钯。
3.2方法精密度和样品回收率试验金银合粒中存在的杂质元素主要是铅、铋、钙、铂、钯，选择铜精矿样品，经火试金富集、分金酸溶解后按所选仪器最佳工作条件测定，考察方法的精密度和样品加标回收率（n=8）如见表2。
表2部分元素精密度和加标回收率元素Pb Bi Ca平均值/ug 30.2063.253.75RSD/%3.582.695.25加入量/ug 20.0050.003.00回收总量/ug49.90110.906.90回收率%99.40%97.92%102.22%3.3杂质元素对银品位影响准确测定各类铜精矿金银合粒中的杂质元素总含量，分析换算成品位的影响情况，通过统计数据得知大部分铜精矿金银合粒中杂质品位占比在0.5~4.5%，随着银品位升高杂质占比减少。
高效降解原油细菌的筛选和处理效果
转速( r/ min) 0 60 100 140 180 220 260 溶解 氧( mg/ L) 0. 65 3. 72 5. 10 5. 71 6. 29 7. 11 7. 23
4 三相流化床处理含原油废水
三相流化床采用体积质量> 1 的细小惰性颗粒 活性炭作悬浮填料, 采用体积质量< 1 的树脂球作
漂浮填料, 再接种高效降解原油菌, 使其生长于这些 载体表面形成生物膜, 通过曝气使废水自下向上流 动, 使载体处于流化状态, 其上附着的生物膜可与废 水充分接触。在温度为 30 e 、pH 值为 6. 5、停留时 间为 2~ 3 h、流量为 2~ 3 L / h 条件下处理含油废 水, 运行稳定后 2 h 取样分析 1 次, 处理结果见表 6。
膏 ) 蛋白胨培养基, 培养后离心分离获得菌泥, 将菌 泥按相同比例混合后投入含原油废水中, 采用摇动 培养, 考察 pH 值、溶解氧、温度等因素对处理效果 的影响。
测定 pH 值用玻璃电极法, 测定溶解氧用膜电 极法, 测定油含量用紫外分光光度法[ 2] 。 312 结果与讨论
¹ pH 值 当废水油 含量为 35. 42 mg/ L、处 理温度 为 30 e 、摇床转速为 200 r/ min、投菌量为 5 g ( 湿重) / L 时, 在不同 pH 值下处理 12 h 及 24 h 后发现, pH 值 为 5. 5~ 7. 0 时能有效地降解废水中的原油, 且随着 处理时间的延长, 除油率增大。当处理时间为 12 h 时除油率为 42% ~ 57% ; 当处理时间为 24 h 时除油 率达 70% ~ 78% 。当 pH < 5. 0 或> 9. 0 时除油率 迅速降低, 这是因为随着 pH 值的变化, 酶分子上的
土壤石油高效降解菌的筛选、鉴定及其特性研究
无机 盐培养 基 ： Ｎ Ｈ４ Ｎ Ｏ ３ ２ ｇ ， Ｋ ２ Ｈ Ｐ Ｏ ４ １ ． ５ ｇ ， Ｋ Ｈ ２ Ｐ Ｏ ２ ． ５ ｇ ， Ｍｇ Ｓ Ｏ ４・ ７ Ｈ ２ Ｏ ０ ． １ ｇ ， 无水 Ｃ ａ Ｃ １ ２ ０ ． ０ １ ｇ ， Ｎ ａ ２ Ｅ Ｄ Ｔ Ａ ・２ Ｈ ２ Ｏ ０ ． ０ ２ ｇ ， 蒸馏水 １ ０ ０ ０ ｍＬ ， ｐ Ｈ 为７ ． ３ 。
重点实验室开放基金（ ２ ０ １ ４ Ｇ １ ５ ０ ２ ０ ３ １ ） 资 助
油醚 溶解后 ， 经０ ． ２ ２ ｍ 无 菌滤 器 加至 固体平 板 表 面并使 其 均匀分 散 。 牛 肉膏蛋 白胨 培养基 ： 牛 肉膏 ５ ｇ ， 蛋 白胨 １ ０ ｇ ，
别为７ ４ ． ２ ４ ％、 ７ １ ． ６ ６ ％和 ８ ０ ． ２ ９ ％。
关键词 石油降解菌
筛选
鉴定
特性研 究
中图法 分类号
Ｘ１ ７ ２
文献标志码
Ａ
石 油素 有 “ 工 业 的血 液 ” 之称 ， 在现 代 工业 中拥 有 举足 轻重 的地 位 ， 但 其 也会 带 来 众 多 环境 污 染 问 题 。由于技 术缺 陷和 管理 的不完 善 ， 在 石油 运输 、 开 采 以及 提炼 的过 程 中 ， 不 可避 免 地 会 对周 围环 境 产
⑥
２ ０ １ ６ Ｓ ｃ ｉ ． Ｔ ｅ ｃ ｈ ． Ｅ ｎ ｇ ｒ ｇ ．
环境科 学、 安 全 科 学
土壤 石油高效降解菌的筛选 、 鉴定 及 其 特 性 研 究
张 斌 朱 雷 郭 超 ， 刘 小英
原油降解菌JL21的筛选与降解性能分析
原油降解菌JL21的筛选与降解性能分析作者：宫勋来源：《石油知识》 2017年第2期摘要：菌株JL21与Gordonia amicalis（序列号：KM113029）菌亲缘关系最近，同源性达99%，与构建系统发育树的结果一致。
因此，菌株JL21在分类学地位上初步确定为友善戈登氏菌Gordonia amicalis JL21。
随着2015年新环保法的公布，石油污染的有效处理已经成为国内外研究的重中之重。
微生物处理技术作为既经济高效又环保的方法，受到国内外研究人员的青睐。
本文着重探讨了石油降解菌的筛选与降解性能的测定。
关键词：原油；降解菌；表面活性剂1 实验材料和方法1.1 采样地点及原油来源分离、筛选、降解实验所用的原油及土壤样品均来自中国石油天然气股份有限公司吉林油田分公司。
1.2 培养基无机盐培养基（MSM）：Na2HPO4·2H2O 8.5 g、KH2PO4 3.0 g、NaCl 0.5 g、NH4Cl 1.0 g、MgSO4·7H2O 0.5g、CaCl2 14.7 mg、CuSO4 0.4 mg、KI 1.0 mg、MnSO4·H2O4.0 mg、ZnSO4·7H2O 4.0 mg、H3BO3 5.0 mg、Na2MoO4·2H2O 1.6 mg、FeCl3·6H2O 2.0 mg，蒸馏水1 L。
pH7.0-7.2、121 ℃灭菌20 min。
原油降解培养基：在MSM培养基中添加0.5%的灭菌原油。
油平板：将原油溶于石油醚（原油终浓度为10%）中，滤纸剪成直径85 mm，置90 mm培养皿中，加2 mL 10%原油溶液，待石油醚挥发后，121℃高压蒸汽灭菌20 min，取出烘干备用。
无机盐培养基灭菌后倾倒平板，将滤纸紧贴在MSM平板上后即成油平板。
富集培养基：蛋白胨 10 g、牛肉膏 5 g、NaCl 5 g、蒸馏水 1 L，pH 7. 0.血液琼脂培养基：脱纤维绵羊血 50 ml、血液营养琼脂45 g、去离子水 1L。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。