DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)
小鼠过氧化氢酶(CAT)ELISA检测试剂盒使用说明书
小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书小鼠过氧化氢酶（CAT）ELISA检测试剂盒使用说明书检测原理试剂盒采纳双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。
往预先包被过氧化氢酶（CAT）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻di洗涤。
用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最后的黄色。
颜色的深浅和样品中的过氧化氢酶（CAT）呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品活性。
样品收集、处理及保存方法1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避开任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞快速当心地分别。
2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
3000转离心30分钟取上清。
3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。
3000转离心10分钟取上清。
5.保存：假如样本收集后不适时检测，请按一次用量分装，冻存于20℃，避开反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品1.酶标仪（450nm）2.高精度加样器及枪头：0.510uL、220uL、20200uL、2001000uL3.37℃恒温箱操作注意事项试剂盒保存在28℃，使用前室温平衡20分钟。
从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶wan全溶解后再使用。
试验中不用的板条应立刻放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对比或者空白；依照说明书操作时样本已经稀释5倍，最结束果乘以5才是样本实际浓度。
严格依照说明书中标明的时间、加液量及次序进行温育操作。
全部液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成名称96孔配置48孔配置备注微孔酶标板12孔×8条12孔×4条无标准品0.3mL*6管0.3mL*6管无样本稀释液6mL3mL无检测抗体HRP10mL5mL无20×洗涤缓冲液25mL15mL按说明书进行稀释底物A6mL3mL无底物B6mL3mL无停止液6mL3mL无封板膜2张2张无说明书1份1份无自封袋1个1个无注：标准品（S0S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80U/ml 试剂的准备20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
HER2检测试剂盒(免疫组化法)说明书-Agilent
DAB 显色液。 5% 3, 3’-二氨联苯胺四盐酸显色剂溶液。
3×500mL
2×5
抗原修复液（包含清洗剂）（10×）。 0.1 mol/L柠檬酸盐缓冲液，1% 吐温-20，pH 5.7。
质控切片
P04605CN_01_SK00121-2CN/2017.02 2/26
P04605CN_01
10 × 试剂瓶
【检测原理】
HercepTest™检测试剂盒包含对常规处理的、石蜡包埋的样本进行两步法免疫组化染色 所需要的全部试剂。兔抗人 HER2 蛋白一抗孵育后，该试剂盒采用基于葡聚糖技术的即用型 显色试剂。该试剂包含羊抗兔二抗和偶联至葡聚糖多聚体骨架上的辣根过氧化酶分子。因此， 不需要再依次使用连接抗体，人免疫球蛋白显色试剂和胎牛血清之间的交叉反应也因为使用 固相吸附材料而消除。依次填加的色素原的酶转换，也使得显色反应发生于抗原所在部位。 标本需要复染和封片。反应结果在光学显微镜下观察。质控玻片包含 3 个福尔马林固定、石 蜡包埋的人类乳腺癌细胞系，染色强度分别在 0、1+、以及 3+，提供用于对染色结果进行 评估。这些细胞的染色强度与其所表达的受体密度一致。
该抗体着色为棕色 DAB 染色，定位于细胞膜。是一种半定量免疫组化分析方法，适用 于考虑接受曲妥单抗治疗患者的辅助评价方法。
人 HER2 基因（也称之为 ERBB2 或 NEU）编码蛋白通常称之为 HER2 或 p185HER2。 HER2 蛋白是一种膜受体酪氨酸激酶，与表皮生长因子受体（EGFR 或 HER1）具有同源性 (1-8)。HER2 蛋白通常由各种表皮细胞表达，是一种正常组织成分（8）。
外。该试剂盒所提供的材料足够用于最多 10 次免疫组化染色。
数量
实验室废弃DAB去毒性处理方法
失灵 ”。
６ 尿管拔不 出 球 囊 内液 体 已完 全 抽 出 ， 仍 无 法 取 出尿 管 。 但
６ １ 原 因 留置尿管时间过长 ， ． 球囊 周围形成结石 ； 强行 若 拔 出尿管 ， 则易损伤膀胱颈 、 括约肌、 尿道 ， 致膀胱 、 尿道 大出 血 ， 以后 的尿失禁 、 导致 尿道瘢痕性狭 窄。 ６ ２ 处理办法 ． Ｂ超 在膀 胱 区进 一步 明确 ， 为结石 先行 若 Ｅ ＷＬ 体外振波碎石 ） Ｓ （ 之后可顺 利取 出尿管 。 ６３ 预 防措 施 留置尿管 时间不宜过 长 ， 超过 ３周 应更 ． 若 换尿管 ； 若需长期 留置 宜膀 胱造瘘 ； 天使用含抗 菌素 的生 每 理盐水冲洗尿管 １ ２次。 —
根据受伤部位和年龄而异也可选择关节处如头静脉肘正中静脉下肢踝部的大隐静脉小腿小隐静脉等肢体较直较粗的静脉便于穿刺成功和固定如血管细小使得穿刺困难又不易成功既使成功留在血管内的套管与血管腔间的空隙太小易出现药液流速缓慢甚致外渗
・
２ｌ ・ ２
２１ ０Ｏ年 ８月第 ４卷 第 １ ５期
Ｃ ｉ ＪＭｏ ｒｇＡ ｐ， ｕ ２ ｌ ｖ Ｎ ． ｈｎ ｄＤ ｕ ｐ ｌＡ ｇ ０ ｏ，０． ０！
实 验 室 废 弃 Ｄ Ｂ去 毒 性 处 理 方 法 Ａ
陈彦 杰
【 摘要】 Ｄ Ｂ作为过氧化物酶最敏感 、 Ａ 最常用 的显色底物 ， 在实验医学生物领域广泛应用 。但 是它 的毒性较大尤其可致膀胱癌 ， 且潜伏期长 ， 以废弃 Ｄ Ｂ的去毒性处理是实验室安全 防护 中很重要的一 所 Ａ 环。Ｄ Ｂ去毒性处理的关键是 Ｄ Ｂ分 子完全被破坏 且反应副产物 和终产物也必须 不具 备诱变性 。本 Ａ Ａ 文就实验室废弃 Ｄ Ｂ的去毒性处理方法演变进行 了阐述 ， 出硫酸－ Ａ 指 高锰酸钾法是当前值得推广使用 的 简易 、 有效 的处理方式 。
TUNEL细胞凋亡检测试剂盒(显色法)说明书
TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)产品编号 产品名称包装 C1098TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(显色法)50次产品简介：碧云天生产的显色法TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒(Colorimetric TUNEL Apoptosis Assay Kit)为您提供了一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。
对于待检测的细胞或组织样品，经过生物素标记和后续的DAB 显色等步骤，即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。
细胞在发生凋亡时，会激活一些DNA 内切酶，这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA 。
细胞凋亡时抽提DNA 进行电泳检测，可以发现180-200bp 的DNA ladder 。
基因组DNA 断裂时，暴露的3'-OH 可以在末端脱氧核苷酸转移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP)，随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合，最后在HRP 的催化下通过DAB 显色来显示凋亡细胞，从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞，这就是TUNEL(TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法检测细胞凋亡的原理。
本试剂盒有如下优点。
(1) 高灵敏度：背景染色极低，阳性染色强，可以在单细胞水平检测到细胞凋亡，同时由于凋亡早期就有DNA 断裂，可以检测到早期的细胞凋亡。
(2) 特异性好：TUNEL 检测时通常更容易标记凋亡细胞，而不容易标记坏死细胞。
(3) 快速：仅需约2-3个小时即可完成。
(4) 应用范围广：可以用于检测冷冻或石蜡切片中的细胞凋亡情况，也可以检测培养的贴壁细胞或悬浮细胞的凋亡情况。
(5) 实测效果好：参考图1。
图1. 本试剂盒的检测效果图。
A. HeLa 细胞未处理或用DNase I 室温孵育10分钟后的检测效果图。
免疫组化、免疫荧光、流式细胞术的应用比较及常见问题分析-精选文档
免疫组化流程示意图
IHC二抗原理及选择
1. SABC法
原理：SABC法是利用链酶亲和素 (Streptavidin)与生物素(Biotin)特有的高度亲 和力这一生物学性质，先将生物素与辣根过 氧化物酶(HRP)结合，形成生物素化HRP， 然后与链酶亲和素按一定比例混合，形成 SABC复合物。用生物素化二抗与第一抗体 结合，再与SABC复合物联结形成抗原～抗 体～生物素化二抗～ SABC复合物。最后用 底物显色剂显色。 特点：该法具有灵敏度高以及低背景染色 等特点。
免疫组织化学结果分析
免疫组织化学常见问题分析
1.显色过深
一抗浓度过高或孵育时间过长，建议降低 一抗浓度或减少孵育时间。 孵育温度过高，建议室温或4℃孵育。
HRP标记二抗孵育时间过长，建议缩短时
2.非特异性显色
石蜡切片脱蜡不彻底，建议延长脱蜡时间。 操作过程中冲洗不充分，建议增加冲洗的 次数与冲洗时间。
IHC常用酶标二抗原理示意图
IHC显色方法原理及选择
1. DAB显色法
产品描述：二氨基联苯胺( 3，3’diaminobenzidine，DAB ) 是过氧化物酶 (Peroxidase) 的显色底物，在过氧化物酶的 催化下，DAB显色工作液会于反应部位产生 不溶于酒精的棕褐色沉淀。本试剂盒适用于 辣根过氧化物酶（HRP）系统的免疫组化显 色。 试剂盒组成： DAB显色原（20×）（试剂A） DAB底物缓冲液（1×）（试剂B）
间。
组织富含内源性的生物素与过氧化物酶， 建议使用相关试剂进行封闭。
发生抗原异位。 蛋白封闭不充分，建议增加蛋白封闭时间。
翻译好的罗氏公司Tunel试剂盒操作说明方案
翻译好的罗氏公司T u n e l试剂盒操作说明方案集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]罗氏(R o c h e)公司T u n e l试剂盒操作说明书(Insitucelldeathdetectionkit-POD法)一、原理：TUNEL（TdT-mediateddUTPnickendlabeling）细胞凋亡检测试剂盒是用来检测组织细胞在凋亡早期过程中细胞核DNA的断裂情况。
其原理是荧光素（fluorescein）标记的dUTP在脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdTEnzyme）的作用下，可以连接到凋亡细胞中断裂DNA的3’-OH末端，并与连接辣根过氧化酶（HRP，horse-radishperoxidase）的荧光素抗体特异性结合，后者又与HRP底物二氨基联苯胺（DAB）反应产生很强的颜色反应（呈深棕色），特异准确地定位正在凋亡的细胞，因而在光学显微镜下即可观察凋亡细胞；由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA断裂，因而没有3‘-OH形成，很少能够被染色。
本试剂盒适用于组织样本（石蜡包埋、冰冻和超薄切片）和细胞样本（细胞涂片）在单细胞水平上的凋亡原位检测。
还可应用于抗肿瘤药的药效评价，以及通过双色法确定细胞死亡类型和分化阶段。
二、器材与试剂器材：光学显微镜及其成像系统、小型染色缸、湿盒（塑料饭盒与纱布）、塑料盖玻片或封口膜、吸管、各种规格的加样器及枪头等；试剂：试剂盒含：1号（蓝盖）EnzymeSolution酶溶液：TdT10×、2号（紫盖）LabelSolution标记液：荧光素标记的dUTP1×、3号（棕瓶）Converter-POD:标记荧光素抗体的HRP；自备试剂：PBS、双蒸水、二甲苯、梯度乙醇（100、95、90、80、70%）、DAB工作液（临用前配制，5μl20×DAB+1μL30%H2O2+94μlPBS）、ProteinaseK工作液（10-20μg/mlin10mMTris/HCl，pH7.4-8）或细胞通透液（0.1%TritonX-100溶于0.1%柠檬酸钠，临用前配制）、苏木素或甲基绿、DNase1（3000U/ml–3U/mlin50mMTris-HCl，pH7.5，10mMMgCl2，1mg/mlBSA）等。
小鼠髓过氧化物酶（MPO）检测试剂盒说明书
小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T3µg/L -160µg/L小鼠髓过氧化物酶(MPO)检测试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平。
用纯化的人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)，再与HRP 标记的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB 显色。
TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)呈正相关。
用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)浓度。
试剂盒组成1 30 倍浓缩洗涤液20ml×1 瓶7 终止液6ml×1 瓶2 酶标试剂6ml×1 瓶8 标准品（320µg/L）0.5ml×1 瓶3 酶标包被板12 孔×8 条9 标准品稀释液1.5ml×1 瓶4 样品稀释液6ml×1 瓶10 说明书1 份5 显色剂A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 张6 显色剂B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
160µg/L 5 号标准品150µl 的原倍标准品加入150µl 标准品稀释液80µg/L 4 号标准品150µl 的5 号标准品加入150µl 标准品稀释液40µg/L 3 号标准品150µl 的4 号标准品加入150µl 标准品稀释液20µg/L 2 号标准品150µl 的3 号标准品加入150µl 标准品稀释液10µg/L 1 号标准品150µl 的2 号标准品加入150µl 标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
免疫标记技术
常用的酶及其底物 酶 辣根过 氧化物 酶 (HRP) 底物
邻苯二胺 (OPD) 四甲替联苯胺 (TMB) 5氨基水杨酸 (5AS) 邻联苯甲胺 (OT) 2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻 唑啉磺酸-6)铵盐 (ABTS )
显色反应 测定波长
橙红色 蓝绿色 棕色 蓝绿色
蓝绿色
492 450 449 425 642
酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可导致大 量的催化过程，所以极为敏感。它的催化过程 有两种基本形式： (1)E十S →(ES)→E十P (2)E十S →＝(ES) (ES)十D1 →E十P十D2 E为酶，S为酶作用的底物，P为底物分解 后的产物，D，为供氢体，D：为D1的氧化型。 如P或D：为有色化合物，即可用呈色反应显示 酶的存在。
HRP的催化反应需要底物过氧化氢(H2O2) 和供氢体(DH2)。供氢体多为无色的还原型 染料，通过反应可生成有色的氧化型染料 (D)。酶促反应的过程如下: HRP DH2＋H2O2────→D＋2H2O
供氢体的种类很多，形成的产物特点不一。如 DAB(3.3－二氨基联苯胺)的反应产物为不溶性沉 淀物，并有电子密度，故适宜于做免疫酶染色或 电镜观察。5AS(5-氨基水杨酸)早期曾用于ELISA， 但其溶解度不够大，且空白孔不易控制到无色， 现已很少应用。OT(邻联甲苯胺)的特点是能产生 鲜艳的蓝绿色产物且灵敏度较高，但反应中受温 度影响较大，而且由于产物不稳定，需要在短时 间内进行测定。
荧光是指一个分子或原子吸收了给 予的能量后，即刻引起发光；停 止能量供给，发光亦瞬即停止。 荧光素是一种能吸收激发光的光能 产生荧光，并能作为染料使用的 有机化合物。目前用于标记抗体 的荧光素主要有异硫氰酸荧光黄 (FITC)、四乙基罗丹明及四甲基 异硫氰酸罗丹明。
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仅供科研版本号：161208 DAB辣根过氧化物酶显色试剂盒(20×)
【产品组成】
【保存条件】
-20℃,避光,12个月
【产品概述】
DAB辣根过氧化物酶显色液(DABHorseradishPeroxidaseColorDevelopmentKit)是一种依据辣根过氧化物酶(HRP)结合显色，用于免疫组化显色、原位杂交显色或Western、Southern、Northern、EMSA等膜显色的试剂盒。
DAB即3,3N-DiaminobenzidineTertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。
在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀，该棕色沉淀丌溶于水和乙醇。
因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。
本显色液可以用于细胞或组织在免疫组化或原位杂交时结合的辣根过氧化物酶显色，也可用于Western 等结合有辣根过氧化物酶的膜的显色检测。
同时也可以用于细胞或组织内源性的辣根过氧化物酶显色。
【使用方法】
1、常规组织切片、细胞样品、膜不辣根过氧化物酶标记的抗体或其它形式的探针孵育后，用适当洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
对于检测内源性辣根过氧化物酶的组织或细胞样品，在适当固定后，也可用洗涤液洗涤3～5次，每次3～5min。
2、按(A):试剂(B):蒸馏水=1:1:18的比例混合,即为DAB染色工作液，即配即用。
3、洗涤过组织后，去除洗涤液，加入适量DAB染色工作液，确保覆盖样品。
4、室温避光孵育30min或更长时间，直至显色至预期深浅。
5、去除DAB染色工作液，用蒸馏水清洗1～2次即可终止显色反应。
6、对组织切片或细胞样品，反应终止后，如有必要可用中性红染色液染色，便于观察。
对于膜染色，反终止后可室温晾干避光保存。
【常见问题及可能原因】
1、背景显色太深
①在免疫组化时如果背景显色太深，考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。
也应请注意选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
②在进行含内源性过氧化氢酶的免疫组化时，如果背景显色太深，需注意灭活内源性过氧化氢酶。
可以在4体积甲醇中加入1体积3%过氧化氢，混匀后用于内源性过氧化氢酶的灭活。
③可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。
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④选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间。
2、没有显色或显色太弱
①当提高一抗或二抗的浓度。
检测二抗效果，滴一滴稀释二抗在膜上，检测二抗是否可以被a正常显色。
②考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
③适当延长显色时间，另外确定抗原修复是否对于使用的一抗是必需的。
【注意事项】
1、DAB是致癌物，请注意适当防护。
2、试剂(A)、试剂(B)避免反复冻融。
2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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