鱼油中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯的超临界流体色谱分离技术
二十碳五烯酸
二十碳五烯酸
二十碳五烯酸（EicosapentaenoicAcid）是一种有机物，分子式为C20H30O2，分子量为302.451，常温下为无色至淡黄色透明液体，无味，无臭，氧化后有一定的气味。
性状：常温下为无色至淡黄色透明液体，无味，无臭，氧化后有一定的气味。
密度（g/mL，25/4℃）：0.943
熔点（ºC）：−54
折射率：n20/D1.4977
闪点（ºC）：93
合成方法
方法一、以鱼肝或碎鱼为原料
将鱼肝或碎鱼处理，得精制鱼油。
将精制鱼油经尿素包合预浓缩后，在萃取压力为11-15MPa、萃取温度为35℃；精馏压力为11-15MPa、精馏温度为40-85℃的条件下，EPA十DHA 提纯至90%，采取两步分离法，EPA提纯至67%，DHA提纯至90%以上。
鱼油脂肪酸乙酯[超临界CO2萃取]→[分离]EPA
方法二、以鲱鱼下脚料为原料
以鲱鱼下脚料为原料，制得多不饱和脂肪酸，其中EPA和DHA的总含量为64.8%。
方法三、以花生四烯酸为原料
以花生四烯酸为原料，经去饱和，制得EPA。
花生四烯酸[去饱和]→EPA
方法四、超临界多元流体精密精馏技术
方法五、淡碱水解法提取鱼油
方法六、钾法提取鱼油
鱼油提取率为24.4%；酸值为2.58；碘值为309；皂化值为178.7；过氧化值为0.070%；EPA含量为15.05%。
深海鱼油工艺规程
鱼油加工规范1、概述本品系由海洋鱼油精制而成，富含二十碳五烯酸乙酯（C22H34O2）和二十二碳六烯酸（C24H36O2），总含量不得少于30%(归一法)。
为了保证甘油酯的生产和质量控制，特制订本工艺规程。
2、原辅材料、包装材料质量标准2.1原料鱼油质量标准2.3.工业用氢氧化钠溶液质量标准（液碱）2.4.包装铁桶质量标准（210L）使用原料油装铁桶经整形清洗或新桶。
3．甘油酯生产工艺流程：4．工艺操作及工艺条件4.1.原料鱼油验收：原料鱼油供应商必须具有卫生许可证，生产经营许可证、产品合格证、原料进厂经检验合格入库.4.2.原料鱼油碱炼水洗4.2.1.称取原料鱼油7桶近1350kg泵入锅中4.2.2.搅均后测其原料酸价根据酸价称取相应液碱，将碱液调整至16—20Be备用4.2.3.在热水锅中放入饮用水，加热至80-85℃。
4.2.4.若原料酸价低于5，油温50-60℃使用淡碱；酸价偏高油温30℃±5℃，使用浓碱；.控制油温，打开碱阀将碱液在5-10分钟内喷完，搅拌20分钟，使皂粒明显聚集。
4.2.5.升温70-80℃，喷入油重10-20%的盐水，喷完即停止搅拌，静置2小时。
4.2.6.放掉皂脚，再用热水洗涤两遍，要求最后洗涤水PH中性。
4.2.7.皂脚用硫酸调节至PH2，静置回收脂肪酸，将废水用液碱中和至PH值7后排完。
4.3.碱炼鱼油脱色。
4.3.1.将碱炼鱼油抽入脱色锅中，加热至90℃以上，真空维持在0.09MPa以上，脱水至油面无气泡。
4.3.2.根据色泽情况吸入称量好的白土，温度控制在100-115℃内待油面无气泡继续搅拌20-30分钟。
4.3.3.通冷却水将油温冷却至60-70℃。
4.3.4.将脱色油通过过滤器滤除白土。
4.4.脱色油冷冻初滤4.4.1.将油抽入冷冻锅中，在不断搅拌的情况下，采用冷冻盐水，将脱色油冷却至4-5℃。
4.4.2通过扳框压滤机初滤脱色油.4.5.调和压滤]4.5.1.根据配比通知单，按比例称量,将油抽入冷冻锅中。
鱼油DHA和EPA提纯方法
鱼油DHA和EPA提纯方法作者：刘璐来源：《中国化工贸易·下旬刊》2019年第03期摘要：鱼油是一种从多脂鱼类提取的油脂，富含DHA和EPA，有利于人类身体健康，在医药和保健品领域有着广泛的应用。
所以提纯鱼油中DHA和EPA有很大的发展前景。
本文介绍了几种鱼油DHA和EPA提纯方法，并简单分析了各自特点。
设计了鱼油减压精馏塔，通过热解实验了解热敏温度，并对操作条件和设备选型做了分析和优化，通过理论计算，能得到较高纯度的DHA和EPA。
关键词：鱼油;DHA和EPA;提纯方法;精馏ω-3系列脂肪酸中的DHA（二十二碳六烯酸酯）和EPA（二十碳五烯酸酯）是人体不能被替代的必需脂肪酸。
必需脂肪酸是人体不能自身合成，必须从食物中获取的物质，主要来自海洋生物，鱼虾及藻类，鱼类中DHA/EPA三甘酯含量最高。
鱼油是一种从多脂鱼类提取的油脂，富含DHA和EPA，具有降脂，调节代谢平衡、促进婴幼儿智力开发，预防心脑血管疾病等健康益处，其中EPA被称为“血管清洁剂”，DHA被赞为“脑黄金”。
人们越来越意识到鱼油对身体健康的重要性，所以DHA和EPA在医药和保健品领域有着广泛的应用。
DHA的结构式中含有6个双键，EPA含有5个双键，双键越多，越不稳定，在空气中就越容易被氧化，发生变质，油脂发生变质后会产生醛类和过氧化物等有害物质，失去了使用价值，并且散发的气味让人很难接受。
所以人们一般会对天然油脂做一定酯化处理，使其性质更加稳定。
鱼油组成比较复杂，碳原子数从C14到C22不等，沸点很高，甚至含有更高沸点组成的物质。
其中油酸酯类、亚油酸酯类等不是我们的目标产物，DHA和EPA是我们需要的。
近年来人们对鱼油的研究日益深入，开发了多种对DHA和EPA提纯的方法，为了得到高含量和高稳定的EPA和DHA产品。
1 DHA和EPA提纯方法介绍目前已报道的不饱和脂肪酸（酯）的提纯方法有：尿素包合法、减压精馏法、超临界CO2萃取法、分子蒸馏法、脂肪酶浓缩法等。
超临界流体色谱法
高效液相色谱法的特点
柱效:是指色谱柱保留某一化合物而不使其扩散 的能力。
柱效能:是一支色谱柱得到窄谱带和改善分离的 相对能力。 色谱柱的有效塔板数越大或有效的塔板高度越低， 色谱柱的柱效越好，类似于每个塔板的分离效率相 同，有效塔板数越多，最终得到的物质越纯。
高效液相色谱法的特点
超临界流体色谱法的分类 根据所用的色谱柱分类 ① 填充柱超临界流体色谱（填充柱） ② 毛细管超临界流体色谱（毛细管柱） 根据色谱过程的用途分类 ① 分析型SFC：主要用于常规的分析 ② 制备型SFC：常用超临界二氧化碳作为流动相。
超临界流体色谱法的工作原理
超临界流体色谱的流动相和改性剂 （一）流动相
SFC的流动相为超临界流体。超临界流体的主要特点是在不 同压力下对各种样品有不同的溶解能力。其溶解度随超临界 流体密度的增加而增加。当两组分的溶解度常数越接近时，， 其互溶性就越好。几种常用的超临界流体的溶解能力在相同 的压力条件下顺序是乙烷<二氧化碳<氧化亚氮<三氟甲烷， 在相同条件下其分离能力是：＜二氧化碳＜氧化亚氮＜三氟 甲烷≈乙烷。 除溶解性能外，还要与检测器相适应，CO2是最常用的流动 相。其临界温度低、压力适中，容易操作，相对便宜，无毒 无嗅，安全性好，且在190nm以上无紫外吸收。
超临界流体色谱法的应用
从色谱图中可以看出EPA与SFC有较好的分离效果
超临界流体色谱法的应用 化妆品中维生素D2和维生素D3的SFC分析 分离模式：填充柱SFC 柱系统：ACQUITY UPC2 2-EP（2.1×100 mm，1.7 μm） 分析条件：A.二氧化碳，B.异丙醇 洗脱梯度：0 min，1% B，0.5 min，1% B，4 min，5% B 备压：2000 psi 柱温：50 ℃ 检测器：紫外，263 nm 说明：维生素D2和维生素D3由于结构上极为相似，因此是HPLC 分离的难点，目前主要采用正相HPLC分析方法进行分析。采用 SFC的检测方法能获得比正相HPLC方法一致或更高的分离度， 而且分析时间仅为3.9 min左右，效率很高。
鱼油DHA和EPA提纯方法
鱼油DHA和EPA提纯方法鱼油是从深海鱼体内提取出来的一种富含ω-3多不饱和脂肪酸的植物油。
其中，其中最重要的两种多不饱和脂肪酸是EPA（二十碳五烯酸）和DHA（二十二碳六烯酸）。
它们被认为有助于预防和治疗心血管疾病、炎症和自身免疫疾病。
得益于这些好处，EPA和DHA 成为了日益受欢迎的营养补充品。
然而，鱼油并不是纯的EPA和DHA，它们必须通过提纯才能被用于饮食补充或药物治疗。
下面介绍鱼油DHA和EPA的提纯方法。
鱼油提纯前处理在提取EPA和DHA之前，鱼油必须进行预处理。
这个步骤通常包括去除水、碳水化合物、蛋白质和其他杂质。
鱼的脂肪组织通常含有许多别的物质，通常将其先用去水法得到干物质，然后采用超临界二氧化碳萃取或卤化物沉淀等分离其硫酸盐、酮和胆固醇。
溶剂提纯法鱼油中的EPA和DHA可以使用溶剂提纯法进行分离。
这种方法使用醇（如乙醇和甲醇）和纯化水来分离ω-3脂肪酸，溶剂和提取出的ω-3脂肪酸于此是可分离的。
离子交换柱可以用来清除残留的皂化物和游离脂肪酸，从而提高EPA和DHA的纯度。
超临界流体提纯法超临界流体提纯法是一种更现代化的鱼油提纯方法，它在许多方面优于溶剂提纯法，因为它是一种无毒、无害和可持续的方法。
在此方法中，将鱼油加压至高于临界温度和压力的条件下，从而将鱼油转化为超临界流体。
然后，超临界流体将用作提取EPA和DHA的介质。
这种提纯方法可以产生具有较高EPA和DHA纯度的鱼油。
卤化物沉淀法卤化物沉淀是用盐酸或硫酸钠等卤化物转化DHA和EPA到卤盐状态，再用硫酸盐或硝酸盐还原成不溶于水的酯形态，最后被去除在沉淀中。
这种方法被广泛用于生产大规模鱼油DHA和EPA。
有研究表明，卤化物沉淀法可以产生高度纯度的DHA和EPA。
总体而言，这些方法提供了从鱼油中提取DHA和EPA的可行且有效的方法。
超临界流体提纯法被认为是最先进的一种鱼油提纯方法，因为它环保且无毒。
不过其他方法也有着很好的效果。
鱼油中多不饱和脂肪酸的位置分布检测方法
鱼油中多不饱和脂肪酸的位置分布检测方法摘要：(n-3Polyunsaturatedfattyacid,n-3PUFA),尤其是二十碳五烯酸(Eicosapentaenoicacid,EPA)和二十二碳六烯酸(Docosahexaenoicacid,DHA),在防治心血管疾病，抑制癌症，抗炎，促进婴幼儿大脑以及视觉系统发育等方面发挥重要作用，因此广泛应用于食品和医药行业。
在以往的研究中，主要侧重提高鱼油中EPA和DHA的纯度。
然而，鱼油中含有的色素、氧化产物、皂类以及微量金属元素等杂质会降低鱼油品质，进而影响后续富集纯化和生理活性试验。
据报道，油脂在脱色过程中不仅能迅速脱去色素，而且脱色剂对油脂中其它杂质也有一定的吸附作用。
关键词：鱼油；加工工艺；sn-2位脂肪酸；核磁共振碳谱；二十二碳六烯酸引言高脂血症是指体内脂类代谢紊乱导致血脂水平增高的一种病症。
其与心肌梗死、中风、脂肪肝、糖尿病等疾病的发生关系密切，是引发脑梗死的主要潜在因素，是引起动脉粥样硬化和冠心病发生的重要危险因素之一，同时还会引起糖尿病等疾病。
高脂血症具体表现为脂肪代谢或转运异常，血清中总胆固醇（TC）和甘油三酯（TG）含量过高，而高密度脂蛋白（HDL）含量降低。
研究表明膳食脂肪酸与高脂血症的发生关系密切，多不饱和脂肪酸具有明显的降血脂作用。
二十二碳六烯酸（DHA）和二十碳五烯酸（EPA）是重要的多不饱和脂肪酸，是人体和动物不能合成，由食物提供的一类必需脂肪酸。
鱼油中富含EPA、DHA等ω-3多不饱和脂肪酸，具有降低血液中TC、TG、LDL-C，升高HDL-C等重要作用，还可以改善血液微循环，降低血液黏稠度，在一定程度上极大地缓解和治疗高脂血症1实验方法1.1 Sn-2-MAG的制备鱼油（市售）；浓硫酸、无水乙醇等（均为国产分析纯）。
鱼油软胶囊（山东禹王制药有限公司），成分含量为DHA30~45g/100g、EPA25~40g/100g。
(整理)多烯酸.
新增品种多烯酸乙酯Duoxisuan YizhiEthyl Polyenoate本品系自海洋鱼类提取的鱼油经水解、精制、酯化而得的多不饱和脂肪酸乙酯化产品。
含二十碳五烯酸乙酯（C22H34O2）和二十二碳六烯酸乙酯（C24H36O2）的总和不得少于84.0%，二十碳五烯酸乙酯与二十二碳六烯酸乙酯含量的比值应为0.4～1.0。
【性状】本品为微黄色至黄色的澄清油状液体，略有鱼腥味。
本品在三氯甲烷、乙醚中极易溶解，在水中不溶。
相对密度本品的相对密度（附录VI A）为0.905～0.920。
折光率本品的折光率（附录VI F）为1.480～1.495。
酸值本品的酸值不得过2.0（附录Ⅶ H）。
碘值本品的碘值不得低于300（附录VII H）。
【鉴别】在含量测定项下记录的色谱图中供试品溶液两个主峰的保留时间应分别与二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸乙酯对照品峰的保留时间一致。
【检查】过氧化值本品的过氧化值不得过15.0（附录Ⅶ H）。
不皂化物取本品5g，精密称定，置锥形瓶中，加入2mol/L的乙醇制氢氧化钾溶液50ml，在水浴中回流约1～2小时至溶液澄清，加水50ml，放冷，移至分液漏斗中，用石油醚50ml分数次洗涤皂化用锥形瓶，洗液并入分液漏斗中，剧烈振摇1分钟，待分层后，分出醚层皂化液，置另一分液漏斗中，再用石油醚振摇提取2次，每次50ml，合并醚液，先用50%的中性乙醇50ml洗涤1次，再同法洗涤2次，每次25ml，最后用水洗涤，每次50ml，洗至水洗涤液对酚酞指示液不显色为止。
将洗涤后的醚液置已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，105℃干燥1小时，精密称定，残渣不得过3%。
砷盐取本品2.0g，置50ml石英坩埚中，加硝酸镁2.5g，再覆盖0.5g氧化镁，小火加热至刚冒烟，将坩埚取下，以防内容物溢出，待烟小后，再加热至炭化完全，在550℃炽灼使完全灰化，放冷，加水3ml，分次缓缓加入盐酸7 ml，使残渣溶解，转移至砷斑检查用锥形瓶中，坩埚用盐酸3 ml洗涤，再加水洗涤3次，每次5ml，洗液合并至锥形瓶中，依法检查（附录ⅧJ第一法），应符合规定（0.0001%）甲氧基苯胺值避光快速操作。
[新版]bp方法二鱼油含量测定方法
![[新版]bp方法二鱼油含量测定方法](https://img.taocdn.com/s3/m/5e895d6f30b765ce0508763231126edb6f1a76ff.png)
英国药典附录XP. 富含Omega-3酸的油1.脂肪酸的构成欧洲药典方法2.4.29该方法可用于对不同浓度下的鱼油产品中Omega-3的EPA与DHA的定量测定。
该方法适用于三酸甘油脂或乙酯类，其结果用三酸甘油脂或乙酯分别表达。
EPA and DHA气相色谱分析（2.2.28）.执行快速操作，避免受到光，氧化性物质，氧化催化剂（例如：铜和铁）和空气的影响.该方法可对待检测物质中的甲基酯或乙基酯（All-Z）二十碳五烯酸(EPA; 20:5 n-3)和(All-Z) 二十二碳六烯酸(DHA; 22:6 n-3)进行检测。
内部标准二十三酸甲酯R试验溶液(a)A.根据表2.4.29-1, 将待检测样品与70mg 内标（二十三酸甲酯R）在50毫克/升丁基苯甲醇的三甲基戊烷溶液中溶解并用相同溶液稀释至10毫升。
对乙酯进行分析检测，对于甘油三酯，继续按步骤B中所述的进行。
B. 提出步骤A所获得的2毫升溶液放入石英管中，用平缓的氮气流R 蒸发溶剂。
添加1.5毫升含量为20克/升氢氧化钠的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖紧，混合后放入水中加热7分钟。
冷却。
添加2毫升三氟化硼的甲醇溶液，以氮气覆盖，用聚四氟乙烯帽盖紧，混合后放入水中加热30分钟。
冷却至40到50 °C，添加1毫升三甲基戊烷溶液，盖紧后用力摇动30秒。
立即添加5毫升饱和的氯化钠溶液，以氮气覆盖，盖紧后用力摇动15秒。
转移上部混合层至另一真空管中。
加1毫升的三甲基戊烷溶液再次摇匀甲醇层。
清洗三甲基戊烷混合提取物2次，分别为1毫升水和干燥过的无水硫酸钠溶液。
每个样品准备三个溶液。
试验溶液(b) 在50毫克/升丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解0.3克的样品，用同样的溶液稀释至10毫升。
按照试验溶液(a)所描述的进行操作。
参考溶液(a) 在50 mg/l 丁基羟基甲苯的三甲基戊烷的溶液中溶解60毫克的二十二碳六烯酸乙酯CRS, 内标70毫克和90毫克的二十碳五烯酸CRS。
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食品科学
※工艺技术
鱼油中二十碳五烯酸乙酯和二十二碳六烯酸 乙酯的超临界流体色谱分离技术
陈伟珠1,2，洪 专1,*，赵 敏1，张怡评1，谢全灵1，易瑞灶1
(1.国家海洋局第三海洋研究所，福建 厦门 361005； 2. 厦门大学化学化工学院化学系，化学生物学福建省重点实验室，福建 厦门 361005)
Keywords：supercritical fluid chromatography (SFC)；eicosapentaenoic acid ethyl ester (EPA-EE)； docosahexae (DHA-EE)；separation
中图分类号：O657.74
rate of 2 mL/min. Under these conditions, baseline separation of EPA-EE and DHA-EE was achieved. The developed method was
simple, rapid, highly reproducible and suitable for the separation of EPA-EE and DHA-EE from fish oil.
摘 要：建立鱼油中二十碳五烯酸乙酯(EPA-EE)和二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE)的超临界流体色谱纯化方法。比 较Luna 5u Silica、Hedera ODS-BP、Hypersil ODS2、ZORBAX SB-C8和Hypersil C8等色谱柱对EPA-EE和DHA-EE的 分离效果，确定以Hedera ODS-BP作为优选色谱柱，进一步以容量因子、选择性和分离度为考核指标，考察改性 剂、流动相比例、背压及温度对分离效果的影响。得到的优化分离条件为：以Hedera ODS-BP为色谱柱，10%甲醇 为改性剂，总流速2mL/min、柱温40℃、背压100bar。在此条件下，鱼油中EPA-EE和DHA-EE可以达到基线分离。 结论：本法简便、快速、重现性好，可用于鱼油中EPA-EE和DHA-EE的分离。 关键词： 超临界流体色谱(SFC)；二十碳五烯酸乙酯(EPA-EE)；二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE)；分离
were investigated. The optimum conditions forthese factors were found to be separation on Hedera ODS-BP column at a column temperature of 40 ℃ an a back pressure of 100 bar using a mobile phase containing 10% methanol as a modifier at a total flow
Xiamen University, Xiamen 361005, China)
Abstract：A supercritical fluid chromatographic method to separate eicosapentaenoic acid ethyl ester (EPA-EE) and
Supercritical Fluid Chromatographic Separation of Eicosapentaenoic Acid Ethyl Ester and Docosahexaenoic Acid Ethyl Ester from Fish Oil
CHEN Wei-zhu1,2，HONG Zhuan 1,*，ZHAO Min1，ZHANG Yi-ping1，XIE Quan-ling 1，YI Rui-zao 1
docosahexaenoic acid ethyl ester (DHA-EE) from fish oil was established. Hedera ODS-BP was found to be the most effective
column for separating EPA-EE and DHA-EE from fish oil as demonstrated by a comparison with Luna 5u Silica, Hypersil ODS2,
(1. The Third Institute of Oceanography of the State Oceanic Administration, Xiamen 361005, China； 2. Key Laboratory for Chemical Biology of Fujian Province, Department of Chemistry, College of Chemistry and Chemical Engineering,
ZORBAX SB-C8, and Hypersil C8. The effects of mobile phase modifier type, methanol percentage in mobile phase, back pressure and column temperature for the separation of both esters by Hedera ODS-BP on capacity factor, diastereoselectivity and resolution
文献标识码：A
文章编号：1002-6630(2012)24-0082-04
二十碳五烯酸(EPA) 、二十二碳六烯酸(DHA)均为 人体必需的ω-3型多烯不饱和脂肪酸，近年来大量实验 和临床研究表明，DHA具有健脑作用，EPA具有降血 脂、抗血小板聚集、延缓血栓形成的作用 。 [1-2] 在鱼体
处理[3]，将EPA和DHA甘油酯分别转化为二十碳五烯酸 乙酯(EPA-EE)和二十二碳六烯酸乙酯(DHA-EE)，再进 行精制纯化。目前对于EPA-EE和DHA-EE纯化技术研 究的报道主要有机溶剂萃取、尿素络合、超临界萃取以