益气化瘀补肾方纯化工艺研究_刘梅
益气活血补肾方药对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及c-myc基因表达的影响
益气活血补肾方药对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及c-myc基因表达的影响刘静芳;温进坤;韩梅【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】1998(0)S1【摘要】目的:探讨益气活血补肾方药治疗系膜增殖性肾炎的机制。
方法:用该方药灌胃大鼠后采血分离含中药血清(中药血清),借~3H-TdR 掺入实验和 Northem 印迹分析技术,观察该方药对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞(MC)增殖及原癌基因 c-myc 表达的影响。
结果:中药血清能明显抑制体外培养的 MC 增殖;用中药血清或对照鼠血清处理 MC1h 后,MC c-myc 基因表达活性明显降低,说明该方药对 MC 增殖的抑制效应可能与抑制 MC 原癌基因 c- myc 表达有关。
结论:该方药可能对系膜增殖性肾炎具有良好的治疗作用。
【总页数】4页(P105-107)【关键词】益气活血补肾方药;中药血清;肾小球系膜细胞;细胞增殖;c-myc;基因【作者】刘静芳;温进坤;韩梅【作者单位】河北医科大学基础所生化室【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.YB-1蛋白在大鼠系膜增殖性肾小球肾炎及体外培养大鼠肾小球系膜细胞中的表达及其意义 [J], 冯泉城;黄松明;张爱华;陈秋霞;潘晓勤;郭梅;费莉;陈荣华2.大黄素对肾小球系膜细胞c-myc原癌基因表达的影响 [J], 刘志红;黎磊石;胡伟新;周虹3.体外培养肾小球系膜细胞转化生长因子β1和血管紧张素Ⅱ表达与过氧化物酶体增殖物激活受体α激动剂的影响 [J], 钟海花;万沁;徐勇4.活血化瘀、益气补肾中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响 [J], 刘丹丹;韩文霞;宋玉文;娄凯;于春晓;高聆;赵家军5.肾衰宁对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及其分泌细胞因子白细胞介素-1的影响 [J], 刘铜华;叶传蕙因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓孕鼠红细胞膜钠、钾-ATP酶及钙、镁-ATP酶作用的研究
补肾益气活血方对胎儿宫内生长迟缓孕鼠红细胞膜钠、钾-ATP酶及钙、镁-ATP酶作用的研究黄光英;韩庆红;徐珉【期刊名称】《中国中西医结合杂志》【年(卷),期】1998(0)S1【摘要】目的:研究补肾益气活血方对被动吸咽所致宫内胎儿生长迟缓(IUGR)孕鼠红细膜的保护作用。
方法:以钠、钾-ATP 酶(Na^+、K^+-ATPase),钙、镁-ATP 酶(Ca^(2+)、Mg^(2+)-AT-Pase)活性为指标,并观察红细胞形态。
结果:用药组和对照组 Na^+、K^+-ATPase(0.32±0.07、0.38±0.11μmolPi·mg pro^(-1)·h^(-1))、Ca^(2+)、Mg^(2+)-ATPase(0.79±0.10、0.85±0.08μmolPi·mgpro^(-1)·h^(-1))活性均高于模型组(0.22±0.03、0.52±0.08μmolPi·mg pro^(-1)·h^(-1)),均有显著性差异(P< 0.01);前两组之间无显著性差异(P>0.05)。
电镜下红细胞形态用药组基本正常,异形红细胞出现率(6.5%)接近对照组(4.0%),而模型组达53.0%。
结论:补肾益气活血方具有保护红细胞膜 ATPase 活性、维持红细胞正常形态的作用,使红细胞变形能力恢复,从而改善子宫和胎盘血流灌注及营养供给,防止IUGR 的发生。
【总页数】5页(P346-349)【关键词】胎儿宫内生长迟缓;红细胞;膜;钠、钾-ATP酶;钙、镁-ATP;酶;补肾益气活血方【作者】黄光英;韩庆红;徐珉【作者单位】同济医科大学附属同济医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.脑梗塞患者红细胞膜钠-钾和钙-镁ATP酶活性与膜脂质相关性研究 [J], 曲伸2.大鼠肝脏冷/热缺血再灌注损伤钠钾ATP酶、钙ATP酶及镁ATP酶与肝细胞死亡方式的研究 [J], 包维民;郭永章;唐映梅;陆晓青;孙辉;赵新文3.中风后遗症气虚血瘀大鼠模型脑组织和血清钠、钾、钙、镁离子含量及脑组织和红细胞膜ATP酶活性的研究 [J], 朱传武;彭康;许文学4.血虚证红细胞膜ATP酶及红细胞钙镁钠钾离子关系的研究 [J], 何东初5.肝硬化红细胞钠钾ATP酶、钙镁ATP酶及钠钾钙镁改变 [J], 王方剑;刘安立;曹洁;卢永宏;赵青娥;韩升祥;蒙玲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
清热益气化瘀法治疗慢性前列腺炎体会
清热益气化瘀法治疗慢性前列腺炎体会摘要目的:運用清热益气化瘀法治疗慢性前列腺炎。
结论:认清本虚标实,兼有多种证候表现为其本质,证型不清、病程缠绵难愈为特点,故必须采用清利湿热为先导,活血化瘀为重点,补肾扶正为调理,结合局部用药的综合性治疗才能提高疗效。
关键词清热益气化瘀慢性前列腺炎资料与方法本组41例患者均为农民,年龄20岁以下2例,20～29岁9例,30～39岁17例,40～49岁10例,50岁以上3例;已婚32例,未婚3例,婚后生育25例,未生育7例,病程均在2个月以上(80天～2年);10例承认有不洁性生活史,8例认为是公共浴池传染,28例有明显尿道炎症状并有不正规治疗史,其余均为首诊。
主要症状有会阴不适、尿道异物感、腰骨底部疼痛、小腹坠胀、尿排不尽、尿后有白浊、失眠多梦、遗精、阳萎、早泄、乏力、健忘等。
直肠指检:前列腺体大于正常32例,质中硬或较硬28例,有轻度触痛或明显触痛3例,中失沟度平消失29例。
化验:前列腺每高倍镜视野白细胞大于10个以上,或见脓细胞,卵磷脂小体极少或无是本组的治疗范围。
基本药物组成:白花蛇舌草30g,半枝莲10g,白茅根30g,车前子10g,萆薢15g,茯苓10g,黄芪15g,川楝子15g,川牛膝10g,甲珠3g,乌药6g,肉桂3g,麦芽30g,生地6g。
出现头晕耳鸣、腰酸、失眠多梦、遗精、五心烦热者加知母、川柏、枸杞子、酸枣仁,若有肾阳虚出现阳痿、早泄、精神萎靡者加山萸肉、沙苑子、仙灵?;有血尿、血精加三七粉、小蓟、丹参;性交不射精或疼痛加红花、三棱,气虚明显加党参、白术,湿盛者加薏红、苍术,前列腺有结结者加夏枯草、皂角刺。
服法:清水煎300～400ml,分2次早晚半空服,1剂/日,1个月为1个疗程,另外将药渣再加水煎,将药液放入盆中坐浴,1次/日,10～15分/次。
疗效标准:①临床治愈:症状全部消失、前列腺压痛消失,大小正常或基本正常,二次前列腺液常规达正常标准。
补肾祛瘀方治疗肾虚血瘀型子宫腺肌症的效果观
补肾祛瘀方治疗肾虚血瘀型子宫腺肌症的效果观发表时间：2018-12-03T16:44:28.073Z 来源：《航空军医》2018年20期作者：李谦[导读] 子宫腺肌病是妇科临床上发病率较高的一种疾病，以育龄期女性为好发群体，其发病率不断升高并呈现出年轻化趋势。
（湘潭市中心医院湖南湘潭411000）摘要：目的研究分析补肾祛瘀方治疗肾虚血瘀型子宫腺肌症的临床效果。
方法将62例肾虚血瘀型子宫腺肌症患者列为本次研究对象，对照组31例服用安慰剂，观察组31例给予补肾祛瘀中药，检测两组血清免疫球蛋白、全血T细胞亚群及炎性因子指标并观察不良反应情况。
结果用药后观察组患者全血T细胞亚群及炎性因子指标各项指标有显著改善，与对照组相比差异具有统计学意义（t1=6.355、7.944、6.573，P1=0.017、0.010、0.014；t2=8.430、8.655、9.924，P2=0.005、0.005、0.001）；两组血清免疫球蛋白表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。
两组用药期间未发生药物相关不良反应。
结论肾虚血瘀是引起子宫腺肌症的主要病机，采用补肾祛瘀中药可补肾益气、祛瘀活血，治疗该证型子宫腺肌症患者效果满意。
关键词：肾虚血瘀；子宫腺肌症；免疫水平；补肾祛瘀方；效果子宫腺肌病是妇科临床上发病率较高的一种疾病，以育龄期女性为好发群体，其发病率不断升高并呈现出年轻化趋势。
目前临床尚未明确本病机制，主要采用手术切除治疗，但术后患者生活质量下降比较严重[1]。
本研究主要观察分析补肾祛瘀中药治疗肾虚血瘀型子宫腺肌症的临床效果，希望为临床治疗提供参考和帮助，现报告如下：1对象与方法1.1 研究对象将2017年3月~2018年3月我院收治的62例肾虚血瘀型子宫腺肌症患者列为观察对象，年龄29~50岁，平均年龄（42.2±3.1）岁；病程1~6年，平均病程（2.4±0.5）年。
入组对象均符合子宫腺肌症临床诊断标准，经中医诊断为肾虚血瘀证型[2]，排除盆腔炎、既往12周内应用激素类药物、原发性痛经及精神疾患者。
补肾方药改善子宫内膜容受性的机制研究进展
补肾方药改善子宫内膜容受性的机制研究进展李婷婷;连方【摘要】近年来,关于子宫内膜容受性的研究已经成为生殖医学领域的重要组成部分.现代中医学认为“肾藏精,主生殖”,在该理论的指导下,提高子宫内膜容受性的临床和实验研究多从补肾入手,并结合现代研究技术,取得了较好的疗效和实验效果.故从超声评价、组织形态学、激素受体表达、分子水平、基因水平等5个层次,就补肾改善子宫内膜容受性的机制研究进展进行综述,以期为中医药在提高子宫内膜容受性方面的应用提供依据,同时借助子宫内膜容受性的研究,揭示补肾方药的作用机理,为进一步深化中医药在生殖方面的理论研究提供基础,使中西医相互促进联合应用进一步提高临床妊娠率成为可能.【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2016(022)002【总页数】3页(P293-295)【关键词】补肾;子宫内膜容受性;生殖【作者】李婷婷;连方【作者单位】山东中医药大学第一临床学院,济南 250355;山东中医药大学第一附属医院中西医结合生殖与遗传中心,济南 250014【正文语种】中文【中图分类】R271.14目前，关于子宫内膜容受性的研究已经成为生殖医学领域的重要组成部分。
现代中医学认为，“肾藏精，主生殖”，在该理论的指导下，提高子宫内膜容受性的临床和实验研究多从补肾入手，并且取得了较好的疗效和实验效果，现就运用中医补肾治法，改善子宫内膜容受性的机制研究进展综述如下。
在治疗周期，对子宫内膜进行直接评价比较困难，同时获取子宫内膜组织具有创伤性，患者不易接受。
使用超声对子宫内膜容受性进行评价是目前临床上简便易行的方法，主要从子宫内膜厚度、类型、容积、子宫动脉血流参数、子宫内膜及内膜下血流参数等方面来进行评价。
刘芳［1］等选择自然周期卵泡晚期超声提示，子宫内膜形态不良的不孕症患者47例，运用中药补肾活血三步法治疗2个周期，监测治疗前后卵泡晚期排卵前子宫内膜厚度、子宫内膜类型、子宫内膜和内膜下血流情况。
补肾健脾化瘀汤治疗自身免疫抗体阳性滑胎验案一则
补肾健脾化瘀汤治疗自身免疫抗体阳性滑胎验案一则自身免疫抗体阳性滑胎，用四君汤补后天之精，用寿胎丸补先天之精，加活血化瘀解郁之药，谨守病机，病证结合，疗效显著。
标签：滑胎；自身免疫抗体；补肾健脾化瘀汤；四君汤；寿胎丸中医称反复自然流产为“滑胎”、“屡孕屡堕”，其严重影响女性的生殖健康及身心健康。
滑胎的发病率呈逐年增高趋势，临床研究认为40%～60%的患者与免疫因素有关，其中的1/3与自身免疫性抗体相关联。
该病病因复杂，防重于治，中医治疗有其特色与优势。
肾虚是滑胎的根本原因。
近年的研究证实[1]，补肾健脾中药在改善妊娠免疫调节具有确切的效果。
自身免疫抗体包括抗心磷脂抗体（ACA）、抗子宫内膜抗体（EMAb）、抗透明带抗体（ZPAb）、抗精子抗体（AsAb）、抗卵巢抗体（（AOAb）、抗绒毛膜抗体（AHCGAb）、抗滋养层抗体（（ATA）等。
这些自身免疫抗体，或杀伤和吞噬精子，抑制精卵结合[2]，或干扰精子和卵子的运送并阻碍其结合[3]，或会对透明带的孕卵产生损伤作用[4]，或破坏孕卵引导配子停止发育[5]，或损害子宫内膜的功能[6]，或干扰孕卵着床和着床后的早期发育[7]，最终导致复发性流产的发生[8]。
对于该病患者，受抗心磷脂抗体影响最大[9]。
1病案情况患者王某，女，29岁。
2014年6月18日因早孕2月出现腰腹酸痛，到医院行B超提示胎停育，遂于外院行清宫术。
术后行血检生殖免疫抗体检查提示：抗心磷脂抗体（ACA-IgA ）（+），抗透明带抗体（AZP-IgG）（+），抗卵巢抗体（（AoAb-IgG）（+），抗卵巢抗体（（AoAb-IgA）（+）；TORCH检查：Ru-IgG（+），CMV-IgG（+），HSV1/2IgG（+）。
查男方精液正常。
患者14岁月经初潮，结婚半年，0-0-3-0。
2014年8月11日初诊：清宫术后2月，经量明显减少，经色暗红，末次月经：2014年8月9～11日。
面色萎黄，有黄褐斑，纳差，睡眠差，大便稀溏。
补肾方药延缓衰老实验研究概况
径 ， 节骨 质 疏 松 大 鼠 的骨 形 成 与骨 吸 收 ， 其 达 调 使 到骨形 成与 骨 吸收 相偶 联 ， 防治 骨 质疏 松 。 苟海 而 昕等 ¨ 研 究 发 现 ， 肾 中药 （ 骨 胶 囊 ） 以上 调 ¨ 补 密 可 骨髓微 环境 中 Ｓ ａ ｌ 因表达 水 平 ， ｍｄ 基 可能 是 其促 骨 形成 、 修复 骨损 伤作用 的分 子机制 之一 。
密度 、 血清 骨 钙 素 水 平 ， 低 尿 钙 排 泄 ， 时 ， 进 降 同 促
骨组 织 中 Ｉ 胶 原 和 Ｌ 型 ＭＰ一１ｍ Ｎ Ｒ Ａ表 达 ； 肾方 补 药还 提高小 肠 黏膜 Ｃ Ｂ ａ ｐ—Ｄ Ｋ基 因表 达 ， 而使小 ９ 从
产生过多及机体清除 自由基能力 的下降与衰老密 切 相关 。补 肾方 药 有 明 显 增 强 抗 氧 化 能 力 。许 青 媛 等 研 究发 现 ， 七宝 美髯丹 对 由氢化 考 的松 引起
种模型， 即地 塞米 松 和 卵巢 切 除所 诱 发 的骨 质疏 松 模型、 自然 衰 老 的 大 鼠骨 质 疏 松 模 型 ， 给 予 中药 并
治 疗 。测定 大 鼠骨密 度 、 代 谢 相关 生 化 指 标及 骨 骨 形 态计 量学 指标 及 基 因表 达 分 析 。结 果显 示 ， 肾 补 方 药可 显 著 提 高 地 塞 米松 所 致 骨 质 疏 松 大 鼠 的骨
胞膜 蛋 白激 酶 Ｃ（ Ｋ 和 Ｃ 一Ｍｇ 一Ａ Ｐ酶 的 Ｐ Ｃ） ａ Ｔ
活性 ， 探讨 肾虚 骨质 疏 松 症 病理 机 制 中肌 醇脂 质 系
β-环糊精包合益气化瘀颗粒中挥发油的工艺研究
２２１正 交试 验设 计 以包 合 率 、包 合 物 收率 为考 察 指标 ， ．． 考 察 １ Ｃ 与挥 发 油 的 投 料 比 、 合 时 间 及 包 合 温 度 因 素 对 ３ Ｄ 一 包 １Ｃ ３ Ｄ包 合 物 的影 响 ， 一 采用 Ｌ（ 正 交 实验 优 选 最 佳 包 合 工 ９３）
表 １ 正 交 试 验 因素 水 平表
包 合工 艺 进行 了优 选 。
１仪器 与材 料
２１２挥 发 油 的 提 取 测 定 按 照 表 １所 设 计 的 因素 水平 进 行 ．－
实 验 ， 磁 力搅 拌 器 （ 海 标本 模 型 厂 ） 电子 分 析天 平 上 ；
２２ 挥 发 油 Ｂ Ｃ 的 包 合 工 艺 ． — Ｄ
数 等 。根 据正 交 实 验设 计 原理 ， 合单 因素 实验 所 得 的初 选 综 结 果 。 择 其 中影 响较 大 的三 个 因 素 ： 碎 度 、 取 时 间和 加 选 粉 提
水 倍 数 ， 白术 、 对 莪术 、 当归 挥发 油 提 取 工 艺用 ｋ（ 正 交 试 ３） 验 进行 优 化 分 析 。正 交 因 素 和水 平 见 表 １ 以挥 发 油 的提 取 ，
国药典 规 定 。
２ 方 法 与 结 果
２１挥 发 油 的 提 取 工 艺 ．
顺 序 为 ： 碎度 （ ＞ 取 时 间 （ ＞ 水 倍 数 （ ， 粉 Ａ） 提 Ｂ） 加 Ｃ） 即粉 碎 度
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
图2 Caf对TNF-A诱导BMECICAM-1荧光强度的影响(n=3)**P<0101;TNF-A##P<0101达,从而起到协同致炎作用。本研究考察了Caf是否能抑制TNF-A诱导的炎症因子ICAM-1表达。参考文献[7]并初步筛选,采用25ng/mLTNF-A刺激内皮细胞,炎症因子表达可维持较高水平,此方法可用于后期实验。灯盏细辛主要含黄酮类、咖啡酸酯类、酚酸类以及其他类化合物[8],其主要活性成分之一的黄酮类具有一定扩张血管、增加动脉血流量、保护内皮细胞及抗氧化作用,但对于另一类主要活性成分咖啡酸酯类物质的药理学研究却较少。本研究中笔者首先观察了Caf是否能够抑制TNF-A诱导内皮细胞ICAM-1mRNA的表达水平。结果显示,单独使用TNF-A刺激内皮细胞12h,ICAM-1mRNA表达显著增加,25Lg/mLCaf与TNF-A共同作用内皮细胞12h后,ICAM-1mRNA表达明显降低。其次,笔者观察了Caf对TNF-A诱导内皮细胞膜表面ICAM-1蛋白表达的影响。ICAM-1
收稿日期:2009-02-23基金项目:上海中药现代化重点项目(03DZ19511)作者简介:刘梅(1978-),女,安徽芜湖人,硕士研究生,研究方向:防治脊柱退行性疾病的药效物质基础研究及新药开发。
在正常脑血管内皮细胞呈较低水平表达,TNF-A刺激后可明显升高,这与HanJM等[9]的研究结果基本一致。Caf和TNF-A共同作用的内皮细胞ICAM-1荧光强度明显降低,表明Caf抑制了TNF-A诱导的炎症蛋白分子表达。这些结果提示Caf对BMEC炎性相关因子具有一定调节作用,可能是其治疗脑缺血炎症的机理之一。参考文献[1] 刘宏,杨祥良,徐辉碧.灯盏花的研究进展[J].中草药,2002,33(6):566-568.[2] 张晓莉,刘四海,周芳.灯盏花的药理活性研究[J].四川生理科学杂志,2008,30(2):75-77.[3] CalabriaAR,WeidenfellerC,JonesAR,eta.lPuromycin-purifiedratbrainmicrovascularendothelialcellculturesexhibitimprovedbarrierpropertiesinresponsetoglucocorticoidinduction[J].JNeurochem,2006,97(4):922-933.[4] 张丽慧,魏尔清.ICAM-1、VCAM-1在脑缺血损伤炎症机制中的作用及调控[J].中国药理学通报,2005,21(11):1281-1285.[5] Radomska-LescniewskaDM,SadowskaAM,VanOverveldFJ,eta.lIn-fluenceofN-acetylcysteineonICAM-1expressionandIL-8releasefromendothelialandepithelialcells[J].JPhysiolPharmaco,l2006,57:325-334.[6] KimYS,AhnY,HongMH,eta.lCurcuminattenuatesinflammatoryresponsesofTNF-alpha-stimulatedhumanendothelialcells[J].JCar-diovascPharmaco,l2007,50(1):41-49.[7] HughesCC,MaleDK,LantosPL.Adhesionoflymphocytestocerebralmicrovascularcells:effectsofinterferon-gamma,tumournecrosisfactorandinterleukin-1[J].Immunology,1988,64(4):677-681.[8] 吕曙华,解军波,吕归宝.灯盏细辛的研究进展[J].天津药学,2003,15(2):46-48.[9] HanJM,LeeWS,KimJR,eta.lEffectsofdiarylheptanoidsonthetumornecrosisfactor-alpha-inducedexpressionofadhesionmoleculesinhumanumbilicalveinendothelialcells[J].JAgricFoodChem,2007,55(23):9457-9464.
益气化瘀补肾方纯化工艺研究刘 梅1,张 宁1,王拥军2,施 杞2,唐占英2,叶福媛1(11上海中医药大学,上海201203;21上海中医药大学脊柱病研究所,上海200032)
摘 要:目的:确定益气化瘀补肾方的最佳纯化工艺。方法:以黄芪甲苷含量、淫羊藿苷含量、小鼠耳廓肿胀率、小鼠热板疼痛抑制率为指标,通过药化学和药效学的综合评价,优选最佳纯化工艺。结果:最佳纯化方法为水提醇沉法,加入乙醇使含醇量达70%。结论:最佳纯化工艺合理、可行。关键词:益气化瘀补肾方;纯化;药化学;药效学中图分类号:R28316 文献标识码:A 文章编号:1000-1719(2009)09-1556-03
StudyonPurificationTechnologyofYiqiHuayuBushenRecipe
LIUMei1,ZHANGNing1,WANGYong-jun2,SHIQi2,TANGZhan-ying2,YEFu-yuan1(11ShanghaiUniversityofTCM,Shanghai201203,China;21InstituteofSpinalDiseaseofShanghaiUniversityofTCM,Shanghai200032,China)
Abstract:Objective:ToestablishthebestpurificationtechnologyofYiqiHuayuBushenRecipeMethods:Optimizethebestpurificationtechnologythroughthecomprehensiveevaluationofphysicochemicalandpharmaceuticalcomposition.Results:Thetar-
#1556# 辽宁中医杂志2009年第36卷第9期 getsisAstragalosideÔcontentIcariincontentmouseauricletumefactiondegreeandmousepaininhibitiondegree.Conclusion:thebestpurificationtechnologyisreasonableandfeasible.Keywords:yiqihuayubushenrecipe;purification;physicochemicalandpharmaceuticalcomposition
益气化瘀补肾方为治疗腰椎间盘突出症的中药复方制剂,由黄芪、淫羊藿、川芎等中药组成,具有益气补肾,化瘀通络、消炎止痛的作用。现代药理实验研究证明该复方制剂能增加椎间盘局部微循环,增加椎间盘营养供应,降低退变椎间盘中PGE2等炎症介质和局部免疫反应,降低胶原酶、中性蛋白多糖酶的活性;可以促进雪旺细胞的再生,加快神经肌肉接合部运动终板的重建,提高与乙酰胆碱受体接合速度,缩短神经再生与修复时间,充分证明该复方制剂不仅具有治疗腰椎间盘突出症的功能,而且具有减缓椎间盘退变、预防复发的作用[1-8]。课题组对方中黄芪等药味进行水提,考虑到传统的水提工艺会将药物中很多高分子物质提取出来,可造成成品混浊、病患服用量较大以及损伤胃黏膜等现象,因此拟采用水提醇沉法或壳聚糖澄清法对水提工艺得到的提取液进行纯化,以黄芪甲苷、淫羊藿苷含量、药效指标为考察因素,综合评价不同纯化方法对该工艺的影响,以确定最佳纯化方法。1 纯化方法比较(化学指标)根据文献及实验研究,选择了3种醇沉浓度(50%、60%、70%)、2种壳聚糖含量(0101%、0105%、011%、012%)和直接离心法做比较,以黄芪甲苷含量为指标,确定最佳纯化方法。111 材料与仪器黄芪、淫羊藿:购自上海市养和堂药业有限公司;壳聚糖:药集团化学试剂有限公司;黄芪甲苷标准品、淫羊藿苷标准品:含量测定用,由中国药品生物制品检定所提供;Agilent1100色谱工作站;高速离心机:上海锐仪生物仪器有限公司。112 方法与结果11211 样品制备 精密称取8组药材,按最佳水提工艺进行提取,提取液浓缩至与药材比1B1,第一组加入乙醇使含醇量达50%;第二组加入乙醇使含醇量达60%;第三组加入乙醇使含醇量达70%;第四组加入配置好的0101%的壳聚糖溶液;第五组不做处理;第六组加入0105%的壳聚糖溶液;第七组加入011%的壳聚糖溶液;第八组加入012%的壳聚糖溶液,以上八组样品充分搅匀后静置,冷藏过夜。置高速离心机中离心(3000r/min,15min),取上清液,定容。精密移取适量按黄芪甲苷、淫羊藿苷测定所需的样品处理方法进行处理,供含量测定。11212 指标成分的含量测定 (1)黄芪甲苷的含量测定条件:色谱柱:ThermoHypersi-lKeystone(250mm@416mm,5Lm);流动相:乙腈B水=33B67;流速:1mL/min;蒸发光散射检测器检测,蒸发温度100e,汽化温度80e,气体流速115L/min。(2)淫羊藿苷的含量测定条件:色谱柱:Agilentzorbaxsb-c18(416mm@250mm,5Lm);流动相:乙腈B水=32B68;流速:1mL/min;检测波长:270nm。11213 测定结果 见表1。表1 各纯化组指标成分含量组别得膏率(%)黄芪甲苷含量(mg/g)淫羊藿苷含量(mg/g)50%醇沉组9.680.215.4760%醇沉组11.460.227.7370%醇沉组12.720.39.29直接离心组16.590.38.10.01%壳聚糖组16.610.246.490.05%壳聚糖组16.940.286.520.1%壳聚糖组16.710.206.920.2%壳聚糖组15.470.256.61 检测结果表明,若以黄芪甲苷计,则纯化后黄芪甲苷保留率由大到小分别为直接离心组>70%醇沉>0105%壳聚糖>012%壳聚糖>0101%壳聚糖>60%醇沉>50%醇沉>011%壳聚糖;若以淫羊藿苷计,则纯化后淫阳藿苷保留率由大到小分别为70%醇沉>直接离心组>60%醇沉>011%壳聚糖>012%壳聚糖>0105%壳聚糖>0101%壳聚糖>50%醇沉。2 纯化方法比较(药效指标)该复方制剂治疗腰椎间盘突出症的治则为益气补肾,化瘀通络、消炎止痛。根据其治则本试验选择小鼠耳廓肿胀率和小鼠热板疼痛抑制率2个指标为药效学筛选指标。211 动物用药的制备称取药材,按最佳水提工艺进行提取,分别进行纯化处理,得8组供试品。取芬必得1粒,加水60mL溶解,得芬必得供试品。212 抗炎止痛实验(小鼠热板及耳廓肿胀实验)21211 实验动物与分组 来源:昆明种雌性小鼠,由上海中医药大学动物中心提供,上海医学实验动物管理委员会颁发的医学实验动物合格证书。体重:(20?2)g;动物数:每组小鼠10只。随机分为:对照组、芬必得组、直接离心组、70%醇沉组、0105%壳聚糖组、011%壳聚糖组、012%壳聚糖组、0101%壳聚糖组、60%醇沉组、50%醇沉组。21212 给药剂量 每10g体重给药011mL,给药3天,末次给药1h后进行药效实验。21213 测试仪器 GJ-8402型热板测定仪,中国宁海白石电子医药仪器厂;YSD-4型多用仪的电子秒表;9mm直径打孔器。21214 统计软件 应用SPSS1110软件。21215 小鼠耳廓肿胀法 乙醚麻醉下,将混合致炎液涂在小鼠左耳前后两面,约涂1%二甲苯011mL,右耳作对照。致炎后015h将小鼠断颈处死,沿耳廓基线剪下两耳,用9mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片,天平称重。计算各组肿胀率。