保健食品中总蒽醌的测定(精)

保健食品中总蒽醌的测定

1 仪器及试剂

1.1仪器

(1 分析天平(感量 0.00001g ;

(2 分光光度计(751型 ;

(3 水浴锅;

(4 刻度吸管。

1.2试剂

1.2.1对照品:1, 8-二羟基蒽醌(中国生物制品鉴定所 ;

1.2.2 5%氢氧化钠— 2%氢氧化铵混合碱液:10%氢氧化钠溶液与 4%氢氧化铵溶液等量混合;

1.2.3标准品溶液:精密城区 25mg 1, 8—二羟基蒽醌对照品,置 200ml 容量瓶中,用乙醚溶解并稀释至刻度,摇匀,备用;

1.2.4氯仿;

1.2.5乙醚;

1.2.6 5N硫酸;

1.2.7蒸馏水。

2 测定步骤中

2.1标准曲线的绘制:精密量取上述标准溶液 1ml 、 2ml 、 3ml 、 4ml 、 5ml ,分别至于 25ml 容量瓶中,在水浴上挥净乙醚,放凉,分别加 5%氢氧化钠— 2%氢氧化

铵混合碱液至刻度,摇匀,以 5%氢氧化钠— 2%氢氧化铵混合碱液为空白对照,在490nm 下,以 1cm 比色杯测定吸光度,用回归法求标准曲线方程。

2.2供试品溶液的制备及总蒽醌含量的测定:取本品 50粒, 倾出内容物, 精密称定供试品内容物 3g , 于 250ml 烧瓶中,加 5N 硫酸 45ml ,直火加热水解 2h ,加入氯仿40ml ,萃取 3次(40ml , 30ml , 30ml ,萃取液用蒸馏水洗涤 2次(20ml , 20ml ,再用 5%氢氧化钠— 2%氢氧化铵混合碱液振摇萃取 4次(30ml , 20 ml , 20ml , 20ml ,合并萃取液,用氯仿洗涤数次至氯仿层无色,弃去氯仿层,用 5%氢氧化钠— 2%氢氧化铵混合碱液定容至 100ml ,摇匀,以 5%氢氧化钠— 2%氢氧化铵混合碱液为空白对照,在490nm 下,以 1cm 比色杯测定吸光度,由线性方程计算即得供试品溶液的浓度。

2.3结果计算:

C1(μg/ml ×5ml×100ml

C2 =————————————×(μg/100mg

m ×10

C=C2×1×100(g/Kg

式中

C :1kg 分析样品中含蒽醌量(g

C2:100mg 分析样品中含蒽醌量(μg

C1:由回归方程计算所得 5ml 容量瓶中蒽醌的浓度(μg/ml

M :所用分析样品的重量(g

蒽醌类化合物按结构的不同可分成羟基蒽醌类、氧化蒽酚及蒽酚类、二蒽酮类。目前其提取方法主要采用溶剂提取法,如浸渍、渗漉、连续回流提取等方式,所用的溶剂主要有乙醇、甲醇、氯仿、乙醚、苯、石油醚、吡啶、丙酮、硫酸溶

液、盐酸溶液及氢氧化钠、碳酸钠、碳酸氢钠、氢氧化铵等溶液。其含量测定方法有重量法、荧光法、比色法、极谱法、薄层扫描法、高效液相色谱法等,而单味植物药或其复方制剂中的蒽醌化合物含量,一般以大黄素或大黄酸、 1, 8-二羟基蒽醌为标准测定游离蒽醌或总蒽醌,结合蒽醌的量等于总蒽醌减去游离蒽醌。

1 比色法

根据蒽醌类及其苷大多数是黄色或橙红色的, 羟基蒽醌能溶于碱溶液中而显红或紫红色; 蒽酚和二蒽醌与碱液不显红色,只能呈黄色,需经氧化成羟基蒽醌后才与碱作用显红色;羟基蒽醌类因结构不同与醋酸镁的

甲醇溶液反应可显橙、红、蓝、紫等色的性质而比色测定。

1.1 标准曲线的绘制:取经五氧化二磷干燥 24 h的大黄素 (或大黄酸、 1, 8-二羟基蒽醌对照品适量用碱液 (1 mol/L 氢氧化钠溶液或其与 2%氢氧化铵溶液的混合溶液或 0.5%~1%醋酸镁甲醇溶液定溶,在 500~ 550 nm波长处扫描, 在最大吸收波长处测定吸收度, 以吸收度对浓度绘制标准曲线, 线性范围 4~24 μg/ml。 1.2 游离蒽醌的测定:取药物细粉或其制剂粉末适量 (约相当于游离蒽醌 1.5 mg加乙醚 (或氯仿溶解或用索氏提取器回流提取至提取液无色。将乙醚挥干,残渣用甲醇溶解,加醋酸镁甲醇溶液至定容;或将乙醚提取液移入分液漏斗中,用碱液提取并定容 [1],比色测定,依标准曲线计算含量。

1.3 总蒽醌的测定

1.3.1 先水解后提取:取供试品适量 (约相当于总蒽醌 1.5 mg ,用酸液 (1~7.5

mol/L硫酸溶液或 1.5~6 mol/L盐酸溶液 20~30 ml[2, 3, 4],水浴回流 1~2 h,以使结合态的蒽醌苷水解,使蒽醌游离,再用乙醚 (或氯仿萃取,并将过滤的药物残渣及滤纸经50℃干燥后用乙醚回流提取,待索氏提取器内提取液无色,合并乙醚液,照游离蒽醌测定法测定。

对含还原型蒽酮苷 (如番泻苷的样品,根据其可被三氯化铁氧化,酸水解成氧化型蒽醌苷元这一原理,称取供试品适量, 加水 30 ml超声处理 15~30 min(提高溶解、

提取效率, 大大缩短溶解、提取时间 , 加 10.5%三氯化铁溶液 20 ml,回流 20~60

min[3],再加盐酸 1~3 ml继续回流 30 min,放冷,再进行萃取与测定。因蒽醌类与碱

液显色后, 过氧化氢不能使其褪色, 而其它有色物质可被其氧化褪色的原理, 对含有干扰测定成分的碱萃取液 [2],加 1%过氧化氢溶液少量,在沸水浴中加热 4 min氧化,冷却,定容,比色测定。 1.3.2 先提取后水解:取供试品适量, 加甲醇 (或乙醇、氯仿等 , 对含蒽醌的浸膏制剂, 超声处理 30 min[5], 使溶解,对含蒽醌的原植物药粉末制剂,应置索氏提取器中回流提取,至提取液无色,将甲醇回收至干,残渣用酸液水解,乙醚 (或氯仿萃取,依法测定。

如果对以上检测方法不满意,可以查阅药典上的检测方法。