常用血细胞化学染色原理及应用

常用血细胞化学染色原理及应用

（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）

[原理] 粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。

正常血细胞的染色反应：

1. 粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。定位于胞质内。嗜碱性粒细胞呈阴性反应。

2. 单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。

3. 红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。有的巨噬细胞可呈阳性。

（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）

[原理] 过碘酸-雪夫又称糖原染色。胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。

正常血细胞的染色反应：

1. 粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性, 至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。

2. 单核细胞系---原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。

3. 淋巴细胞系---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。

4. 红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。

5. 巨核细胞系-- 巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应。

6. 其他----浆细胞呈阴性反应,少数呈较弱阳性。巨噬细胞可呈阳性反应。均定位于胞质内。

1

[临床意义]

1）急性白血病类型的鉴别

红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；

急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；

急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；

急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；

急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。

2）各类贫血的鉴别 MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。

3）其他细胞类型的鉴别戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞PAS染色为弱阳性，空泡中心阴性。非霍奇金淋巴细胞PAS染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应。骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。

（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法）（NAP）

[原理] 中性粒细胞内碱性磷酸酶在pH9.4-9.6时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。

阳性—（+）1分：胞质见浅红色，无颗粒或有少量细小颗粒但小于胞质1/4面积。

（++）2分：胞质见红色，有较粗红色颗粒但小于胞质1/2面积。

（+++） 3分：胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积3/4以上。

（++++）4分：胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积甚至可掩盖于胞核上。

2

正常血细胞的染色反应：

1.碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他细胞均呈阴性反应。

2.成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分的计算100（包括分叶核和杆状核粒细胞），参考值为7-51 。

[临床意义]

生理变化：①新生儿高，老年低；②应激状态可增高；③月经前期高，行经后降低；④妊娠后逐月增高

NAP 积分增高：

1. 细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、活力显著升高；病毒感染无明显变化。鉴别细菌性感染和病毒感染。

2. 慢粒NAP积分明显减低，常为“0”，缓解时上升。类白血病,由化浓性球菌引起的类白反应,NAP活力明显升高。鉴别

慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效。

3. 急性粒细胞白血病NAP减低，急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,鉴别急粒和急淋。

4. 急单减低。

5. 再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。对再障的诊断疗效观察和估计病情均有一定意义。阵

发性睡眠性血红蛋白尿NAP减低，可鉴别PNH和再障。

6. 真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,而继发性红细胞增多症NAP无明显变化，鉴别真红和继发红细胞增多症。

7. 骨髓增生异常综合征NPA减低。

8. 红白血病NAP减低，镰形细胞型贫血，家族地磷酸酶血症减低；慢淋、骨髓纤维化、原发性血小板增多和红血病增高。

9. 其它应用肾上腺皮质激素、雌激素、和ACTH后NAP增高。

（4）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理和临床意义NAS-DCE

[原理] 细胞内的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS－D萘酚，产生AS－D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。

3

正常细胞反应 :

1. 粒细胞系---中性粒细胞(除原粒细胞外)均可呈阳性或强阳性,且酶活性并不随细胞成熟而增强，定位于胞浆内。嗜酸粒细胞为阴性和弱阳性，嗜碱为阳性。

2. 单核为阴性，个别阳性。淋巴细胞系、浆细胞系、幼红细胞系、血小板均呈阴性。

[临床意义]

临床上主要用于急性白血病类型的鉴别急性粒细胞白血病时，白血病性原粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病：白血病性细胞为阴性反应；

（5）α-醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义（α-NAE）

[原理] 血细胞中的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）水解基质液中的α-醋酸萘酚，释放出α-萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。

正常细胞阳性反应:

1.粒细胞系----各期粒细胞均为阴性，少数粒细胞可呈阳性反应,不被NaF抑制。

2.单核细胞系—原单为阴性或弱阳性，单核和幼稚单核为阳性, 被NaF抑制。

3.巨核细胞系--巨核细胞和血小板为阳性。

4.其他红细胞系-----幼红和淋巴一般为阴性，少数可可呈弱阳性，不被NaF抑制，浆细胞阴性。

[临床意义] 主要用于急性白血病类型的鉴别。单核细胞阳性受氟化钠抑制，其他不受抑制。

（6）碱性α-丁酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义α-NBE

[原理] 细胞内的α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH碱性条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者与基质液中的重氮盐耦联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。α-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。

4