常用血细胞化学染色原理及应用
细胞化学染色
细胞化学染色检验前言细胞化学是细胞和化学相结合的一门科学。
细胞化学染色是根据化学反应的原理，应用涂片染色的方法，观察细胞的化学成分及其变化的重要方法。
在病理情况下，血细胞的化学成分可发生改变。
因此，细胞化学染色不仅对研究血细胞的代谢活动、生理功能，而且对生理和病理情况下血细胞的化学成分的变化、各种类型血细胞的鉴别、某些血液病的鉴别诊断、疾病的疗效观察以及发病机制的探讨均有重要意义。
研究血细胞的化学物质较多，如各种酶类、脂类、糖元、铁等。
下面主要介绍血液学中常用的一些细胞化学染色方法。
瑞氏染色法：瑞氏染色液的配制：瑞氏染料（粉）1g纯甲醇60ml将染料放在乳钵内加少量甲醇研磨使染料溶解，然后将已溶解得倒入洁净的玻璃瓶内，剩下未溶解的再加少量甲醇研磨，如此继续操作，直到全部染料溶解及用完甲醇为止。
制配好的染液保存于温室中一周便可应用。
新鲜配制的染液偏碱性，放置后可呈酸性，染液储存愈久染色愈好。
缓冲液的配制及其作用:1% KH2PO4 (即1g KH2PO4+100ml蒸馏水) 30ml1% Na2HPO420ml加蒸馏水至1000mlPH 6.4~6.8过氧化物酶染色一、原理：细胞中的过氧化物酶（POX）分解底物过氧化氢（H2O2）产生新生态氧，后者使联苯胺氧化为联苯胺蓝沉淀而定位于POX活性部位。
二、过氧化物酶染色法染液的配制：（1）联苯胺（Benzidine）0.3g95%乙醇（Ethye alcohol）99ml36%亚硝基铁氰化钠（Sodium Nitroprusside）1ml (0.36g+1ml蒸馏水，置于37℃水浴箱中促溶。
)（2）30%mlml过氧化氢溶液：30%双氧水，吸取一滴约0.05ml放入50ml蒸馏水内，每次用时必须新鲜配制。
三、结果判断：细胞质中有蓝色颗粒的为阳性细胞。
四、临床意义：粒细胞中除早期原粒细胞呈阴性反应外，晚期原粒细胞及以后各阶段粒细胞均呈阳性反应，细胞越成熟反应越强。
临床血液学检验-血细胞化学染色简单记
血细胞化学染色简单记1.过氧化酶染色：检测过氧化酶。
胞质中无颗粒为阴性，出现细小颗粒分布稀疏为弱阳，出现密集粗大颗粒为强阳性。
强阳性（嗜酸性粒细胞）、弱阳或阴（单核粒细胞）、阴性（淋、红、巨、浆、嗜碱）；临床意义：辅助诊断急淋非急淋、鉴别急淋急粒。
注意：（1）过氧化物酶染色急性粒细胞白血病为阳性，急性淋巴细胞白血病是阴性。
（2）粒细胞中原始粒细胞是阴性，嗜碱性粒细胞是阴性。
2.过碘酸-雪夫反应：检测糖类物质。
胞质中出现紫红色颗粒、块状或弥漫状红色为阳性反应。
阳性（淋、粒、单、巨、血小板）（嗜酸特异颗粒间胞质为阳性、嗜碱粒细胞特异颗粒为阳性）阴性（分化差的原粒、幼红和红）。
临床意义：红白血病和骨髓异常增生综合征时幼红可呈阳性反应，良性贫血幼细胞多数为阴性。
戈谢细胞为强阳性，尼曼-匹克细胞呈阴性。
注意：（1）急性粒细胞白血病为阴性，急性淋巴细胞白血病是阳性。
（2）戈谢细胞为阳性，尼曼-匹克细胞为阴性。
3.碱性磷酸酶染色：只有中性粒细胞为阳性，临床意义碱性磷酸酶（NAP）的生理及病理增多减少。
注意：（1）慢性粒细胞白血病积分降低，类白血病积分升高。
4.氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（原粒、嗜酸）；阳性或强阳（早幼粒至成熟中幼粒、嗜碱）。
临床作用：急粒为阳性、急单和急淋为阴性。
注意：（1）该染色是粒细胞特异性染色。
5.α-醋酸萘酚酯酶染色：阴性或弱阳（粒系、淋巴系、红系）；阳性（单核系、巨核、血小板）注意：（1）所有抑制试验中只有单核细胞会受抑制，所有可以用来鉴别粒细胞白血病和单核细胞白血病。
6.醋酸AS-D萘酚酯酶染色：基本同与α-醋酸萘酚酯酶染色。
注意：（1）同α-醋酸萘酚酯酶染色。
血细胞常用的染色方法
血细胞常用的染色方法
导入新课
导言：在学习完显微镜使用以及血涂片制备课程之后，我们借助于显微镜观察到了细胞，但是显微镜下细胞都是圆形的，如何将这些细胞区分开呢？我们可以借助于染色技术将血细胞染上颜色，这样我们就能在显微镜下观察到它们的形态了
【板书】
五、血细胞常用的染色方法
1、瑞氏染色法
【讲解策略及方法】：图示法讲解
瑞氏染色法是临床检验血细胞检查中最常用的染色技术，简要介绍其历史再从试剂组成、染色原理、染色方法、染色结果、影响因素等方面进行讲解。
试剂组成：酸性染料伊红E-和碱性染料美蓝M+
染色原理：化学的亲合作用+物理的吸附作用（配合图例进行讲解）
染色方法：涂片、染色、水洗
染色结果：结合图例进行讲解
影响因素：pH
讲解中应注意重点突出，对染色原理、染色结果做重点讲解。
影响因素是本段的难点，可以对蛋白质的化学结构进行分析，加深学生理解。
其余略讲。
2、吉姆萨染色法
【讲解策略及方法】：简单介绍。
医学资料血细胞化学染色的临床应用
医学资料血细胞化学染色的临床应用血细胞化学染色是一种常见的临床实验室技术，通过使用不同的染色剂和方法，可以对血液中的细胞进行显微观察和分析。
这一技术在临床上有着广泛的应用，可以用于诊断和监测多种疾病，包括白血病、贫血和感染性疾病等。
本文将介绍血细胞化学染色的临床应用，并阐述其意义和优势。
一、血细胞化学染色在白血病诊断中的应用白血病是一种常见的白血细胞恶性肿瘤，血细胞化学染色在其诊断中起着重要的作用。
通过对骨髓细胞的染色观察，可以评估细胞的形态学特征和生化变化，进而确定白血病的类型和分级。
在血细胞化学染色中，Wright染色是最常用的染色方法之一。
通过该染色方法，可以鉴定不同种类的白血细胞，如嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞等。
同时，还可以观察到细胞内的特殊颗粒和细胞器，以进一步诊断和分类白血病的亚型。
二、血细胞化学染色在贫血的诊断和监测中的应用贫血是指红细胞数量或功能减少导致血液携氧能力下降的一类疾病。
血细胞化学染色可以提供有关贫血病因和类型的重要信息，帮助医生进行正确的诊断和治疗选择。
常见的一种血细胞化学染色方法是Perl染色，它可以检测铁的沉着情况。
贫血患者中，铁的代谢异常可能导致铁沉积，通过Perl染色可以观察到这种铁的沉淀情况，进一步了解贫血的病因。
此外，血细胞化学染色还可以检测血红蛋白含量和形态等指标，并通过与临床数据比对，评估贫血的程度和类型。
这对于监测疾病进展和治疗效果具有重要意义。
三、血细胞化学染色在感染性疾病中的应用血细胞化学染色在感染性疾病的诊断和治疗中也具有一定的应用价值。
通过观察血液中的细胞形态和染色情况，可以判断感染的类型和严重程度，并选择相应的治疗方案。
在感染性疾病的诊断中，Giemsa染色是常用的方法之一。
它可以染色细菌、病毒和寄生虫等病原体，以及宿主细胞的形态特征，通过显微镜观察，可以对感染病因进行初步判断。
此外，血细胞化学染色还可以评估炎症反应，如白细胞数量和活性的变化。
医学检验基础知识之血细胞化学染色的临床应用
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医疗人才招聘网对医疗卫生事业单位考试医学检验学的部分知识做了汇总，今天我们来学习医学检验基础知识-血细胞化学染色的临床应用之氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色，希望对大家的复习有所帮助。
(1)原理：血细胞内的氯乙酸AS-D萘酚酯酶将基质液中的氯乙酸AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，进而与基质液中的坚牢蓝GBC偶联，形成不溶性红色沉淀，定位于胞质内。
(2)结果判断：阳性结果为胞质内出现红色沉淀
①(—)胞质无色。
②(十)胞质呈淡红色。
③(++)鲜红色沉淀布满胞质。
④(+++)深红色沉淀充满胞质。
(3)正常血细胞的染色反应
①粒细胞系统：自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均为阳性反应，也称“粒细胞酶或特异性酶”。
②单核细胞为阴性反应，个别呈弱阳性。
(4)临床意义：主要鉴别急性白血病的类型。
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4血细胞化学染色(2)
4血细胞化学染色（2）铁染色
1，原理：幼稚红细胞内的铁和细胞外的含铁血黄素，与酸性亚铁氰化钾生成蓝色颗粒沉淀（亚铁氰化铁）。
2，细胞内铁的染色：观察100个中幼红、晚幼红，计100个幼红细胞中所见到的铁粒幼红C占的%。
3，铁粒幼红细胞：指内含有蓝色铁颗粒的幼稚红细胞。
据铁颗粒多少可分为4个型别和环形铁粒幼红C。
I型为多见，
环形铁粒幼红C：指幼红细胞胞质中出现蓝色铁颗粒的数量≥6个，并围绕核周50%以上者叫….
铁粒红细胞：指成熟红细胞中出现铁颗粒者。
4，正常参考值：细胞外铁是（+）—（++）
铁粒幼RBC的阳性率是19—44%，I型多见，少有II型。
（Ret以外周中的IV型为主）
5，缺铁性贫血：骨髓外铁减少或消失；铁幼粒细胞%减少，有效治疗后，细胞外铁增加。
细胞内外铁都减少。
是铁缺乏。
6，铁粒幼贫血：有较多环形铁粒幼，铁粒幼也增多，可见铁粒红细胞。
细胞内外铁都增多。
是铁利用障碍。
新生儿的贫血分类标准：出生10天内：≤145g/L，
1个月以上：≤90g/L，
4个月以上：≤100g/L，
6个月到6岁：≤110g/L。
第 四 章 血细胞化学染色的临床应用
图17 引自刘志洁、黄文源主编：实用临床血液细胞学图谱科学出版社 1996年1月第1版 （4）临床意义 1）帮助鉴别急性白血病的类型：①急性粒细胞白血病时，白血病性原始粒细胞可呈阳性反应，阳性颗粒一般较多，较粗大，常呈局限性分布；急性淋巴细胞白血病时，原始淋巴细胞和幼淋巴细胞均呈阴性反应；急性单核细胞白血病时，白血病性原始单核细胞呈阴性反应，有时虽少数可呈弱阳性反应，但阳性颗粒少而细小，常弥散分布。②小型原始粒细胞和原始淋巴细胞不易区别，如果小型原始细胞呈过氧化物酶阳性反应，可确定为小型原始粒细胞。③急性早幼粒细胞白血病有时须与急性单核细胞白血病鉴别，如果白血病细胞呈过氧化物酶强阳性反应，应确定为急性早幼粒细胞白血病。④急性单核细胞白血病有时须与组织细胞白血病或恶性组织细胞病鉴别，异常组织细胞的过氧化物酶呈阴性反应，而白血病性幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应。
第 四 章 血细胞化学染色的临床应用
?
本章考点 1.常用血细胞化学染色的原理及意义 2.血细胞化学染色的临床应用 （1）急性白血病类型的鉴别 （2）贫血类型的鉴别 重点： 过氧化物酶染色、过碘酸-雪夫反应、碱性磷酸酶染色、非特异性酯酶染色和铁染色原理及临床意义。 难点： 1.各种化学染色的原理。 2.化学染色在鉴别各类急性白血病中的作用。 各类血细胞的化学成分，分布和含量不同，可利用化学染色的方法加以区分；在病理情况下，血细胞的化学成分可发生变化，可利用它们的变化识别不同的病态细胞。因此，骨髓细胞化学染色是临床血液病诊断和研究中不可缺少的手段。 一、常用血细胞化学染色的原理及意义 1.过氧化酶染色（POX） （1）原理 血细胞内的过氧化酶分解H2O2 ，释出初生态氧，使无色联苯胺氧化成蓝色联苯胺，后者进一步变成棕黑色化合物，沉着于胞质内。 （2）结果判断 阳性结果为胞质内出现棕黑色颗粒。①（一）无颗粒。②（±）颗粒细小、弥散分布。③（+）颗粒较粗、局灶分布。④（++）颗粒粗大、密集、分布较广，占胞质的1/2～2/3。⑤（+++）颗粒粗大、成团块，几乎布满胞质。⑥（++++）颗粒成团块状，充满胞质，并覆盖胞核。 （3）正常血细胞的染色反应 1）粒细胞系统：原始粒细胞大多呈阴性反应，有的可出现少量蓝黑色颗粒。自早幼粒细胞至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，随细胞的成熟，阳性反应的程度逐渐增强。中性分叶核粒细胞为强阳性反应，嗜酸性粒细胞阳性反应的程度最强，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光性，嗜碱性粒细胞呈阴性反应。 2）单核细胞系统：原始单核细胞呈阴性反应，幼单核细胞和单核细胞呈弱阳性反应，阳性颗粒少而细小，弥散分布，有的也可呈阴性反应。 3）其他细胞：淋巴细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞、浆细胞和组织细胞均呈阴性反应。有的吞噬细胞可呈阳灶反应。
血液学血细胞化学染色
B图：急性单核细胞白血病 α-NAE氟化钠抑制染色
原始、幼稚单核细胞阳性反应被氟化钠抑制 （与A图为同一标本）
B
.
79
【临床评价】
主要用于鉴别急性白血病类型
急单 急粒 急性早幼粒 急粒单 急淋
α-NAE +++或 -或 ++ ++++ 弱+
.
13
原理
酸性环境
铁 ＋亚铁氰化钾
亚铁氰化铁
普鲁士蓝 反应
(蓝色沉淀在含Fe部位)
骨髓小粒中的含Fe血黄素（细胞外铁）
骨髓中贮存铁
幼红细胞内的Fe（细. 胞内铁）
14
二、结果判断
1. 细胞外铁(骨髓小粒－含铁血黄素) 铁颗粒、铁小珠、铁团块
.
15
细胞外铁(低倍镜观察)
（－）：无颗粒
（＋）：有少量铁颗粒或偶见铁小珠
.
4
二、必要性
从形态学观察，存在较多的主观性； 有些原始细胞形态较相似，难以鉴别； 结合细胞化学染色，提高疾病的诊断率。
.
5
三、临床应用
1. 辅助判断急性白血病的细胞类型 2. 辅助血液系统疾病的诊断和鉴别
诊断 3. 观察疾病的疗效和预后 4. 疾病发病机制的探讨
.
6
白血病的诊断：MICM分型
.
71
α-醋酸萘酚
（基质液中）
【原理】
水解 α-醋酸萘酚酯酶 （细胞内）
α-萘酚
重氮盐
（坚牢蓝B）
胞浆不溶性灰黑色 或棕黑色沉淀
.
72
【结果判断】
胞浆内有灰黑色或棕黑色弥散性颗粒状 沉淀为阳性。
.
血细胞染色原理及过程
血细胞染色原理及过程
血细胞染色是通过染色剂的特殊作用将血液中的细胞染色，以便进行形态学和功能学
研究。
常用的染色方法有：吉姆萨染色、瑞曼染色、偏碱性嗜酸性染色等。
1、吉姆萨染色原理
吉姆萨染色法通常是先用苏木精染色，再用伊红染色的方法，又称为改良双染色法。
苏木精能染色核酸，伊红能染色蛋白质。
因此，吉姆萨染色主要用于染色形态较大的细胞，如红细胞、白细胞和血小板等。
红细胞染色后呈现粉色，核显微镜下不可见；白细胞核染
色呈现紫色，细胞浆和红血球呈现粉色。
2、瑞曼染色原理
瑞曼染色法是将染色剂直接使用于干涂片上进行染色。
这种方法使用的染料是甲基绿
与其他染料的混合物，它们的化学性质与吉姆萨染料不同，具有更强的染色能力。
瑞曼染
色适用于对白细胞进行形态学细胞学的鉴定。
淋巴细胞染色后呈现深蓝色或淡蓝色，核呈
圆形或卵形；单核细胞呈现深蓝色，核呈圆形或椭圆形；多形核白细胞呈现深蓝色，核呈
多个不规则分叶状。
3、偏碱性嗜酸性染色原理
偏碱性嗜酸性染色是一种特殊的染色方法，它是根据细胞内容物的某些化学特性进行
染色的。
嗜酸性染色剂能够染色嗜酸性细胞颗粒，如嗜酸性粒细胞的嗜酸性细胞颗粒；偏
碱性染色剂能染色嗜碱性细胞颗粒，如嗜碱性粒细胞的嗜碱性细胞颗粒。
总之，血细胞染色是现代医学中非常重要的一项技术手段，它通过染色剂的特殊作用
为医学研究提供了非常珍贵的研究材料和数据，对于临床诊断和治疗提供了非常重要的参
考价值。
实验十二常用血细胞化学染色
实验十二常用血细胞化学染色Cytochemistry stain for blood cells一、过氧化物酶染色染色原理粒细胞和部分单核细胞的溶酶体颗粒中含有髓过氧化物酶(myeloperoxidase, POX或MPO),能将底物H202分解，产生新生态氧，新生态氧可氧化四甲基联苯胶成联苯胺蓝。
联苯胺蓝自我脱氢氧化形成棕色的四甲基苯酿二胺，后者与亚硝基铁氧化纳结合，再进一步氧化形成稳定的蓝色颗粒，沉淀于细胞质内酶所在的部位。
试剂器材1．1%TMB(3,5,31,5f一四甲基联苯胶)乙醇溶液:0.1g TMB溶于100mL88%乙醇溶液中，置棕色瓶内，冰箱保存。
2．亚硝基铁氧化锅饱和溶液在少量蒸馏水中加入亚硝基铁氰晶体，至不再溶解为止，置棕色瓶内，冰箱保存。
3．1%过氧化氢溶液取30%H2021mL加入蒸馆水29mL。
4．稀过氧化氢溶液1%H2021滴，加10 mL蒸馏水稀释(新鲜配制)。
5．瑞氏(Wright)染色液。
6．新鲜涂片(骨髓或血片)、染色架、洗耳球、光学显微镜等。
操作步骤1．取0.1%TMB乙醇溶液1mL，加亚硝基铁氰化钠饱和溶液10μL，溶液呈淡棕黄色，染色液应临用前配制。
2．在新鲜干燥的血片或骨髓涂片上，加0.1%TMB一亚硝基铁氰化钠饱和溶液0.5mL，放置lmin，再加稀H202溶液0.7mL，吹匀，染色6min。
3．自来水冲洗，待干，用瑞氏染液复染15~20 min。
4．自来水冲洗，待干，用油镜镜检。
注意事顶1．血涂片或骨髓涂片应新鲜制作，涂片应厚薄适宜。
2．TMB配制在85%~88%的乙醇溶液中染色效果较好，勿用90%~95%乙醇，否则细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗入而导致染色效果差。
3．H202需新鲜配制，其浓度与加入量不能随意更改。
涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示H202过浓。
若H202加于血片上不产生气泡，则示无效。
4．染色液pH应为5.5。
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常用血细胞化学染色原理及应用Document number：NOCG-YUNOO-BUYTT-UU986-1986UT常用血细胞化学染色原理及应用（1）过氧化物酶染色的原理和临床意义（POX）[原理]粒细胞和单核细胞胞浆中含有的过氧化物酶能将底物过氧化氢分解，产生新生态氧，它将四甲基联苯胺氧化为蓝色联苯胺。
后者进一步变成黑色化合物，沉积于胞质内。
正常血细胞的染色反应：1.粒细胞系---原粒大多数呈阴性反应，有点渴出现少量蓝黑色颗粒。
自早幼粒致成熟中性郡城阳性反应，细胞月成熟，阳性越强。
中性分叶核强阳性，嗜酸性粒细胞阳性反应最强，其阳性颗粒比中性粗大，有折光性。
定位于胞质内。
嗜碱性粒细胞呈阴性反应。
2.单核细胞系-原始单核呈阴性反应，幼稚单核及单核呈弱阳性,阳性颗粒少而细小，均匀分布，有时也可呈阴性反应。
3.红细胞系、淋巴细胞系、巨核细胞系、浆细胞系---均呈阴性。
有的巨噬细胞可呈阳性。
（2）过碘酸-雪夫染色的原理和临床意义（PAS）[原理]过碘酸-雪夫又称糖原染色。
胞浆内存在的糖原或多糖类物质（如黏多糖、黏蛋白、糖蛋白、糖酯等）中的乙二醇基经过碘酸氧化，转变为二醛基，与雪夫试剂中的无色品红结合，形成紫红色化合物而沉积于胞浆中糖原类物质所存在的部位。
该反应称为过碘酸-雪夫（PAS）阳性反应。
正常血细胞的染色反应：1.粒细胞系-----原粒细胞多呈阴性,至早幼粒至中性分叶核粒细胞呈阳性反应，并随细胞熟，阳性反应的强度逐渐增强。
嗜酸粒细胞本身不着色，而颗粒之间的胞浆呈红色，嗜碱粒细胞为阳性反应，阳性物质为大小不一的紫红色颗粒。
2.单核细胞系---原单位阴性，幼单为（+）阳性反应，单核细胞为（+）~（++）阳性反应。
3.淋巴细胞系---大多数淋巴细胞为阴性反应，少数淋巴细胞可为（+）阳性反应。
4.红细胞系----红细胞系的各个阶段皆呈阴性反应。
5.巨核细胞系--巨核细胞和血小板呈弥散性和粗大颗粒状强阳性反应。
6.其他----浆细胞呈阴性反应,少数呈较弱阳性。
巨噬细胞可呈阳性反应。
均定位于胞质内。
1[临床意义]1）急性白血病类型的鉴别红白血病的幼红细胞PAS染色多呈阳性反应，阳性率高，反应强；成熟红细胞有时亦可为阳性；急性淋巴细胞白血病的原、幼淋巴细胞PAS染色多为红色颗粒或块状阳性反应；急性粒细胞白血病的原粒细胞呈阴性或胞质呈弥漫淡色阳性反应；急性早幼粒细胞白血病异常早幼粒细胞的PAS染色为阳性反应；急性单核细胞白血病原、幼单核细胞PAS染色阳性反应呈弥漫分布的红色细颗粒，巨核细胞白血病原巨核细胞PAS染色呈阳性或强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。
2）各类贫血的鉴别MDS、缺铁性贫血、珠蛋白生成障碍性贫血（曾称地中海贫血）的幼红细胞PAS染色多为阴性反应，有时可出现阳性反应；巨幼红细胞贫血、溶血性贫血、再障的幼红细胞PAS染色为阴性。
3）其他细胞类型的鉴别戈谢细胞呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞PAS染色为弱阳性，空泡中心阴性。
非霍奇金淋巴细胞PAS染色呈阳性反应；R-S细胞则为弱阳性或阴性反应。
骨髓内转移的腺癌细胞PAS染色呈强阳性反应，表现为红色颗粒或块状。
（3）中性粒细胞碱性磷酸酶染色的原理和临床意义（偶氮耦联法）（NAP）[原理]中性粒细胞内碱性磷酸酶在时，能水解磷酸萘酚钠，释放出磷酸与萘酚，再以重氮盐与萘酚耦联成不溶性有色沉淀于胞质内酶所存在的部位。
阳性—（+）1分：胞质见浅红色，无颗粒或有少量细小颗粒但小于胞质1/4面积。
（++）2分：胞质见红色，有较粗红色颗粒但小于胞质1/2面积。
（+++）3分：胞质见粗大红色颗粒，可达胞质面积3/4以上。
（++++）4分：胞质见粗大深红色颗粒，达胞质全部面积甚至可掩盖于胞核上。
正常血细胞的染色反应：1.碱性磷酸酶主要存在于成熟中性粒细胞，除巨噬细胞可呈阳性反应外，其他细胞均呈阴性反应。
2.成熟中性粒细胞碱性磷酸酶积分的计算100（包括分叶核和杆状核粒细胞），参考值为7-51。
[临床意义]生理变化：①新生儿高，老年低；②应激状态可增高；③月经前期高，行经后降低；④妊娠后逐月增高NAP积分增高：1.细菌感染,凡革兰阳性球菌感染、活力显着升高；病毒感染无明显变化。
鉴别细菌性感染和病毒感染。
2.慢粒NAP积分明显减低，常为“0”，缓解时上升。
类白血病,由化浓性球菌引起的类白反应,NAP活力明显升高。
鉴别慢粒和类白血病反应及观察慢粒疗效。
3.急性粒细胞白血病NAP减低，急性淋巴细胞性白血病可见NAP中度增加,鉴别急粒和急淋。
4.急单减低。
5.再生障碍性贫血,NAP活力持续增加,经治疗缓解时可有下降趋势。
对再障的诊断疗效观察和估计病情均有一定意义。
阵发性睡眠性血红蛋白尿NAP减低，可鉴别PNH和再障。
6.真性红细胞增多症,NAP活力持续增加,而继发性红细胞增多症NAP无明显变化，鉴别真红和继发红细胞增多症。
7.骨髓增生异常综合征NPA减低。
8.红白血病NAP减低，镰形细胞型贫血，家族地磷酸酶血症减低；慢淋、骨髓纤维化、原发性血小板增多和红血病增高。
9.其它应用肾上腺皮质激素、雌激素、和ACTH后NAP增高。
（4）氯乙酸AS-D萘酚酯酶染色的原理和临床意义NAS-DCE[原理]细胞内的氯乙酸AS－D萘酚酯酶（NAS-DCE）水解基质液中的氯乙酸AS－D萘酚，产生AS－D萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。
3正常细胞反应:1.粒细胞系---中性粒细胞(除原粒细胞外)均可呈阳性或强阳性,且酶活性并不随细胞成熟而增强，定位于胞浆内。
嗜酸粒细胞为阴性和弱阳性，嗜碱为阳性。
2.单核为阴性，个别阳性。
淋巴细胞系、浆细胞系、幼红细胞系、血小板均呈阴性。
[临床意义]临床上主要用于急性白血病类型的鉴别急性粒细胞白血病时，白血病性原粒细胞可出现阳性反应；急性单核细胞白血病、急性淋巴细胞白血病：白血病性细胞为阴性反应；（5）α-醋酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义（α-NAE）[原理]血细胞中的α-醋酸萘酚酯酶（α-NAE）水解基质液中的α-醋酸萘酚，释放出α-萘酚，进而与基质液中的重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所在的部位。
正常细胞阳性反应:1.粒细胞系----各期粒细胞均为阴性，少数粒细胞可呈阳性反应,不被NaF抑制。
2.单核细胞系—原单为阴性或弱阳性，单核和幼稚单核为阳性,被NaF抑制。
3.巨核细胞系--巨核细胞和血小板为阳性。
4.其他红细胞系-----幼红和淋巴一般为阴性，少数可可呈弱阳性，不被NaF抑制，浆细胞阴性。
[临床意义]主要用于急性白血病类型的鉴别。
单核细胞阳性受氟化钠抑制，其他不受抑制。
（6）碱性α-丁酸萘酚酯酶染色的原理和临床意义α-NBE[原理]细胞内的α-丁酸萘酚酯酶（α-NBE）在pH碱性条件下水解基质液中的α-丁酸萘酚，释放出α-萘酚，后者与基质液中的重氮盐耦联形成不溶性的有色沉淀，定位于细胞质内酶所存在的部位。
本试验常用的重氮盐为坚牢紫酱GBC，形成的有色沉淀为红色。
α-NBE主要存在于单核细胞中，其阳性产物能被氟化钠抑制，而其他细胞系列的阳性产物不能被氟化钠抑制。
4正常细胞阳性反应:1.粒细胞系----各期粒细胞均阴性。
2.单核细胞系—分化差的原单阴性，分化好的原单阳性，幼稚及成熟单核细胞呈阳性，被NaF抑制。
3.淋巴细胞----T、非T非B淋巴细胞可呈阳性，B淋巴细胞阴性。
4.其他细胞——幼红细胞、巨核细胞系、浆细胞均呈阴性或弱阳性。
组织细胞可以呈阳性，但不被NaF抑制。
[临床意义]与α-NAE临床意义相同，敏感性不如α-NAE，而特异性较差，是急性白血病常用的化学染色。
（7）酸性磷酸酶染色的原理和临床意义[原理]细胞内的酸性磷酸酶在酸性条件下，将基质中的磷酸萘酚AS－BI水解，释出萘酚AS－BI，再与重氮盐耦联，形成不溶性有色沉淀，定位于胞浆中。
[临床意义]1）白血病类型鉴别多毛细胞白血病的多毛细胞ACP染色呈强阳性或中度阳性反应，并耐L－酒石酸抑制作用；慢性淋巴细胞白血病和淋巴瘤的淋巴细胞ACP染色也可阳性，但可被L－酒石酸抑制，有助于与多毛细胞鉴别。
2）鉴别T淋巴细胞和B淋巴细胞T淋巴细胞ACP染色呈阳性反应；B淋巴细胞ACP染色呈阴性反应。
3）戈谢细胞和尼曼－匹克细胞的鉴别戈谢细胞ACP染色呈强阳性反应；尼曼－匹克细胞呈阴性或弱阳性反应。
（8）酯酶双染色的原理和临床意义[原理]血细胞内的醋酸AS-D萘酚酯酶与重氮盐偶联，形成不溶性蓝色沉淀，定位于胞质内。
氟化钠抑制试验是以相同方法制备2份基质液，其中一份加入适量NaF，另一份不加NaF作对照。
将已固定的2张相同标本的涂片混入这2种不同基质液中，分别作醋酸AS-D萘酚酯酶染色。
属于非特异性酯酶染色。
用油镜观察计数100或200个被检细胞，分别计算出抑制前和抑制后的阳性率和阳性积分，按下述公式计算出抑制率。
抑制率（%）=（抑制前阳性率或阳性积分-抑制后阳性率或阳性积分）/抑制前阳性率或阳性积分×1005[临床意义]鉴别急性白血病类型，除单核细胞被NaF抑制，都不受抑制。
都阳性。
（9）骨髓铁染色的原理和临床意义[原理]骨髓中的含铁血黄素（细胞外铁）和幼红细胞胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀，定位于细胞内外铁存在的部位。
细胞外铁：观察骨髓小粒重点铁，呈弥散蓝色、颗粒状、小珠状或块状。
分为（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）细胞内铁：观察100个中幼红细胞和晚幼红细胞计算出铁粒幼细胞的百分比。
根据蓝色铁粒的多少分为Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及环铁粒幼红细胞（指幼红细胞胞质内蓝色颗粒在6颗以上，围绕核周二分之一以上者）。
1.正常人骨髓细胞外铁为+-++。
2.大多数为++铁粒幼细胞阳性率为19%-44%。
铁染色（ironstain；IS）中的细胞外铁反映骨髓中铁的储存量，细胞内铁反映骨髓中可利用铁的量。
[临床意义]1）鉴别缺铁性贫血骨髓细胞外铁减少甚至消失，铁粒幼细胞的阳性率明显减低，经有铁剂治疗后，细胞外铁增多。
作为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的方法。
2）有助于铁粒幼细胞贫血的诊断和鉴别诊断。
铁粒幼细胞贫血时出现较多的环形铁粒幼细胞，铁粒幼细胞也增多，所含的铁颗粒数目也较多，颗粒也粗大，有时还可见铁粒红细胞。
作为诊断铁粒幼细胞贫血的重要方法。
3）骨髓增生异常综合征是铁粒幼细胞的百分比可增高，其所含铁颗粒的数目可增多，环铁粒幼细胞常见。
4）非缺铁性贫血如溶血贫、营养性巨幼贫、再障和白血病细胞外铁正常或增高，铁粒幼细胞正常或增高，。
5）感染、肝硬化、慢性肾炎及尿毒症、血色病及多次输血后，骨髓细胞外铁增加。
6。