不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1_Th2类细胞因子分泌的影响_黎同明

200第13卷 第8期 2011 年 8 月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 13 No. 8

Aug .，2011

不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子分泌的影响黎同明1，朱章志1，王桂香2（1.广州中医药大学，广东 广州 510405；2.广东药学院，广东 广州 510006）

收稿日期：2011-05-26作者简介：黎同明(1971-)，男，河南光山人，副教授，研究方向：方剂配伍规律。通讯作者：王桂香（1974-），女，讲师，研究方向：药学教育及研究工作。E-mail：wgx306@syahoo.com.cn。

哮喘是由嗜酸性粒细胞（Eos）活化并在肺内募集所导致的气道慢性炎症，并伴有气流的可逆性受限和气道高反应性，其中最主要的免疫异常是Thl/Th2平衡失调，Th2细胞及其所释放的细胞因子在诱导哮喘特征性病理生理中起了关键作用。麻杏甘石汤经历代医家验证是治疗哮喘的有效古方，本研究通过大鼠哮喘模型，观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘模型大鼠肺组织及血液中

摘 要：目的：观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠Th1/Th2类细胞因子分泌的影响。方法：选取Wistar大

鼠，随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、麻杏甘石汤1高剂量组（简称麻1组）、麻杏甘石汤2高剂量组（简称麻2组）。观察不同配比麻杏甘石汤对哮喘大鼠BALF中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、外周血中IL-4、IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ比值比较、肺组织中IFN-γ、IL-4和内参照激动蛋白cDNA扩增后半定量和电泳结果的影响。结果：与哮喘模型组比较，不同配比的麻杏甘石汤组大鼠BAIF和外周血中IL-4水平下降（P<0.05，

P<0.01），效果与地塞米松组相似（P>0.05）、IL-4/IFN-γ比值也相应降低，IFN-γ水平升高。麻杏甘石汤组大

鼠RT-PCR结果显示，IFN-γ mRNA表达水平明显高于地塞米松组的IFN-γ mRNA（P<0.05），而地塞米松

组IL-4 mRNA与正常组相比表达减少（P<0.05），与哮喘组相比IL-4 mRNA的表达明显减少（P<0.01）。IFN-γ

mRNA的表达与正常组相比表达无明显差异（P>0.05），与麻杏甘石汤组相比IFN-γ mRNA的表达明显减少

（P<0.01）。麻1、2高剂量组间比较无显著差异（P>0.05）。结论：不同配比麻杏甘石汤可能通过抑制IL-4水平及提

高IFN-γ水平，使Thl/Th2失衡得到一定程度的纠正，从而控制气道炎症，减缓哮喘发作。不同配比比较无显著差异（P>0.05）。

关键词：麻杏甘石汤；IL-4；IFN-γ

中图分类号：R-322 文献标识码：A 文章编号：1673-842X (2011) 08- 0200- 04

Different Proportions of Maxing Ganshi Tang on Asthmatic Rats Secretion of Th1/Th2 Cytokines

LI Tong-ming1，ZHU Zhang-zhi1，WANG Gui-xiang2（1. Guangzhou University of Chinese Medicine，Guangzhou 510405，Guangdong，China；2. Guangdong Pharmaceutical University，Guangzhou 510006，Guangdong，China）

Abstract：Objective：To observe different proportions of Maxing Ganshi Tang on asthmatic rats secretion

of Th1/Th2 cytokines. Method：Wistar rats were randomly divided into five groups：normal control，model，dexamethasone，the high dose Ma 1 and Ma 2. To observe different proportions of Maxing Ganshi Tang on BALF，peripheral blood and lung of asthmatic rats compared IL-4，IFN-γlevels and the ratio IL-4/IFN-γ and the internal reference results of electrophoresis semi-quantitative of actin cDNA after the amplification.Result：Compared with the asthma model group，different proportions of Maxing Ganshi Tang on asthmatic rats

which BALF and peripheral blood levels of IL-4 decreased（P<0.05，P<0.01）. Results：Were similar with

dexamethasone（P>0.05），IL-4/IFN-γratio is also reduced accordingly，and elevated levels of IFN-γ. RT-

PCR results in rats of the group of Maxing Ganshi Tang was that IFN-γmRNA expression was significantly higher than the dexamethasone group（P<0.05）. IL-4 mRNA expression of Dexamethasone group was

less than the normal group（P<0.05）and that was significantly less than the model group（P<0.01）. The

expression of IFN-γ mRNA of Dexamethasone group compared with the normal group showed no significant difference（P>0.05）and that was significantly less than the group of Maxing Ganshi Tang（P<0.01）.The

high dose Ma 1 group compared with the Ma 2 showed no significant difference（P>0.05）.Conclusion：

Different proportions of Maxing Ganshi Tang may inhibit IL-4 levels and increase levels of IFN-γ，so Thl/Th2 imbalance correct to some extent，to control airway inflammation and reduce asthma attacks. And compared with different proportions of Maxing Ganshi Tang showed no significant difference（P>0.05）

Key words：Maxing Ganshi Tang；IL-4；IFN-γ201

13卷 辽宁中医药大学学报

细胞因子Th1/Th2的影响，以探讨其疗效及作用机制。1 实验材料1.1 实验动物Wistar大鼠40只，雄性，体重（180±20）g，由广州中医药大学实验动物中心提供。1.2 药品与试剂 麻杏甘石汤源自汉代张仲景的《伤寒论》，由麻黄10g，杏仁10g，石膏20g，炙甘草6g四味药组成，麻杏甘石汤1组按原方麻黄：石膏（1：2）比例及煎煮要求在蒸馏水煎汁后用生理盐水配成不同浓度的两种药液（相当于生药2.33g/mL、0.77g/mL）；麻杏甘石汤2组麻黄：石膏=1：5为比例，煎煮及浓度配置比例同1组；卵蛋白(OVA)干粉由深圳华美公司提供；无水乙醇，分析醇，广州化学试剂厂，批号：20061001-2；三氯甲烷(氯仿)，分析醇，广州化学试剂厂，批号：20061201-2；异丙醇，分析醇，广州化学试剂厂，批号：20061101-2；焦碳酸二已酯(DEPC)，进口分装；TRIzol，Invitrogen公司生产，Lot No：1251695。SuperScriptTM III First-stand Synthesis System for RT-PCR(两步法逆转录试剂盒)，美国Invitrogen公司生产，Lot No：1291971，1302182，System Component：oligo (dT) 20 (50μM) 50μL，Random hexamers (50ng/μL) 250μL，10× RTbuffer 1mL，25mM MgC12500μL，0.1M DTT 250μL，10mM DNTP mix 250μL，SuperscriptTM III RT (200U/μL) 50μL，RNase OutTM(40U/μL)100μL，E. xol i RNase H (2U/ μL) 50μL，DEPC-treated water 1.2mL，Total Hela RNA 20μL(10 μM)，Sense control primer(10μM)25μL，Antisense control primer(10μM)25μL。PCR试剂盒，北京天为时代科技有限公司，2×Taq Platinum PCR Master Mix；IL-4，IFN-γ和B-actin的引物(广州达晖基因有限公司合成)；琼脂糖(进口分装)；Tris(进口分装)；EDTA(进口分装)；GoldeViewTM核酸染料，北京百赛盛基因技术有限公司生产；100bp DNA Ladder北京百赛盛基因技术有限公司生产。1.3 仪器BENCHMAR型酶标仪，BIORAD制造；超低温冰箱MDF-382E，日本SANY00产；低温高速离心机BIOFUGE28RS，德国HERAEUS；台式高速离心机，TGL16G型，上海医用分析仪器厂生产；PCR仪PE9600，美国PERKIN ELMER；紫外光分光光度计，美国Beckman公司生产；凝胶图像分析仪，GDS7600，英国UVP公司生产；电泳仪DYY-6C，北京市六一仪器厂；不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器，YXQ. SGD46. 280C型，广州市华南医疗器械公司分厂生产；生物显微镜，SFC-18型，厦门麦克奥迪公司生产；粤华牌超声雾化器，汕头市粤华医疗器械厂产品。2 实验方法2.1 动物分组及哮喘模型的复制 大鼠随机分为5组，空白组（A）；哮喘模型组（B）；地塞米松组（C）：1mg/kg；麻杏甘石汤（1）高剂量组（D），麻杏甘石汤（2）高剂量组（E），每组8只。采用卵白蛋白（OVA，Sigma公司）致敏法制备动物模型。除空白组外，其他4组动物第1天用含OVA 10mg、Al（OH）干粉200mg、灭活百日咳菌苗6×109个的生理盐水混悬液1mL腹腔注射致敏，第8天重复致敏1次，第15天开始除A组外各组动物超声雾化1％OVA进行激发，约30min/次，于每天早上8~9时进行。直至大鼠出现哮喘样发作，共3周。雾化时见大鼠出现烦躁不安、打喷嚏、大小便失禁、抓耳朵、紫绀等症状，说明哮喘模型复制成功。B组于激发前30min腹腔注射生理盐水，C组和D、E、F各组于每次激发前30min分别给予灌胃地塞米松0.5mg/kg和各剂量麻杏甘石汤。A组在相同时间腹腔注射、雾化吸入0.9％生理盐水。最后1次雾化吸入后1h进行实验。取右肺中叶常规切片，HE染色以证实模型建立。2.2 动物标本的收集与处理 最后一次雾化吸入后24h，以1％戊巴比妥钠46mg/kg腹腔注射麻醉大鼠，仰卧位固定，切开颈部皮肤，钝性分离出颈总动脉，结扎远端，从近侧颈总动脉取血2mL后结扎血管近端。钝性分离出气管，横向剪一小口，插入外径2mm的塑料管并固定，以PBS 10mL分5次灌洗支气管肺泡，收集BALF，经双层纱布过滤后，灌洗液回收率均>90%。外周血及BALF均于40℃，200r/min离