细胞培养基的基本要求
细胞培养操作规范
细胞传代方法： 传代指针： 观察培养基颜色：当培养基的颜色由红色渐渐褪成橙黄色，颜色清亮，无杂质，无浑浊 显微镜观察细胞生长状态：细胞生长状态良好，铺满培养瓶80%以上，细胞透亮，形态清晰，间隙无杂质，确认无细菌真菌污染
传代方法：
将新的培养皿、吸管、废液缸放入工作台开启细胞培养房及工作台紫外消毒20分钟， 开启恒温水浴箱，培养液、消化液预热 关毕紫外灯，开灯，通气，点燃酒精灯 吸弃培养基，PBS清洗两次 加入2ml消化液晃动培养瓶使消化液覆盖整个细胞界面后吸弃培养液 肉眼观察细胞培养瓶底部出现一层云雾状，轻轻敲打底部有块状物脱落，显微镜下观察看到细胞间隙变大，细胞回缩变圆少量漂浮后加入10ml含血清培养基终止消化，吹打管吹打数次 将细胞悬液吸至离心管，1000rpm离心5分钟 吸弃上清，加入PBS吹打混匀， 1000rpm再次离心5分钟 吸弃上清，加入新鲜培养基，吹打混匀，按比例接种到细胞培养瓶
细胞消化时间的控制：Leabharlann 细胞冻存：胰酶消化
细胞计数
贰
壹
叁
细胞计数
细胞计数板计数室构造 数红色边框标记的四个方格内的细胞总数（如有压线则计上不计下，计左不计右） 细胞数/ml=（4个大方格细胞总数/4）×104×稀释倍数
四、细胞培养注意事项
实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射20-30分钟灭菌，以75 %酒精 擦拭无菌操作抬面，并开启无菌操作台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。
每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75 %酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作
动物细胞的培养条件和培养基
• 2、合成培养基：优点是成分明确，组分稳定，可 大量生产供应。动物细胞培养中常用的有BME、 MEM、DMEM、HAM F12、RPMI 1640以及 ISOCOV、199和McCoy等。
• 缺点：无法替代一些未知成分。 • 解决途径合成培养基中添加小牛血清，彼此互补
的胎牛血清。
• 血清的作用机制可能为：（1）提供有利于细胞生 长增殖所需要的各种生长因子和激素；（2）提供 有利于细胞贴壁所需要的贴附因子和伸展因子； （3）提供可识别金属、激素、维生素和脂类的结 合蛋白；（4）提供细胞生长所必须的脂肪酸和微 量元素。
• 3、无血清培养基
• 无血清培养基的优点如下：①提高了细胞培养的可 重复性，避免，避免了由于血清批之间差异的影响； ②减少了由血清带来的病毒、真菌和支原体等微生 物污染的危险；③供应充足、稳定；
动物细胞的培养条件和培养基
• 为了使细胞培养在体外培养成功，需要一些 基本条件：
（1）绝对无菌操作； （2）足够的营养供应，排除有害物质包括极其
微量的离子掺入； （3）适量氧气供应；
（4）随时清除细胞代谢中产生的有害产物； （5）有良好的适于生存外界环境，包括pH、渗透
压和离子浓度等； （6）及时分种，保持合适的细胞密度。
6、空气
二、动物细胞培养基的 种类和组成
• 细胞种系不同对培养基的要求亦有差异，主要 有三类：天然培养基、合成培养基和无血清培 养基。 1、天然培养基：在细胞培养的早期阶段使用的 培养基，主要为来自天然的材料如血浆凝块、 血清、淋巴液、胚胎浸液以及羊水、腹水等。
• 优点：营养价值高 • 缺点：成分复杂、来源有限、成本较高
细胞培养基的基本要求
细胞培养基的基本要求体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。
营养成分：1.氨基酸：所有细胞都需要12 种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。
2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。
细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。
体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12 都是培养基常有的成分。
4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
5.促生长因子及激素：o 各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。
有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。
有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。
6.渗透压：细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。
鼠细胞渗透压在320mOsm/kg左右。
对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260～320mOsm/kg的范围都适宜。
7.pH、气体：是细胞生存的必需条件之一，所需气体主要是氧和二氧化碳。
氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。
一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。
在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。
二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH 有直接关系。
动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7.2 ～7.4 ，在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，pH 值发生变化。
细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项
【1】细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项细胞培养是生物学实验中常见的一项重要技术，它广泛应用于细胞生物学、分子生物学、药理学等领域。
通过细胞培养，科研人员能够研究细胞的生长、分化、凋亡等生物学过程，同时也可以进行药物筛选、生物学效应观察等实验。
然而，细胞培养是一项复杂的工作，需要严格遵循一系列步骤和要求，并且需谨慎对待各项注意事项。
在本文中，我将以从浅入深的方式，全面探讨细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项，帮助你更深入地理解这一技术。
【2】细胞培养的具体步骤和要求让我们来了解细胞培养的具体步骤。
通常情况下，细胞培养的主要步骤包括：细胞分离、细胞计数、细胞传代、培养基准备、细胞接种、培养条件控制等。
具体来说，细胞培养的步骤包括收获细胞、细胞解聚、细胞计数、调整细胞密度、接种细胞、培养细胞、处理细胞等。
在进行这些步骤时，需要保持实验操作台面清洁整洁，常备所需培养工具、培养耗材和培养试剂，并且要准确记录实验过程中的重要参数和数据。
细胞培养的要求也是至关重要的。
要选择合适的细胞系，确保来源纯净、鉴定正确、培养活力好。
培养基的选用也十分重要，要根据不同细胞类型的需求来选择适当的培养基，并添加必要的生长因子、氨基酸、维生素等。
培养条件的控制也十分重要，包括温度、湿度、二氧化碳浓度、通风情况等。
细胞培养的灭菌和无菌操作更是必不可少，细胞培养过程中的任何污染都可能对实验结果产生影响。
【3】细胞培养的注意事项在进行细胞培养时，需要特别注意一些细节和注意事项。
要保持室内整洁，操作台面、培养箱、生物安全柜等工作台要保持干净，并且要经常消毒。
要做好个人防护工作，戴口罩、手套、工作服等，避免人体细胞对培养的影响。
要定期检查培养箱、生物安全柜等设备的运行情况，确保培养环境的稳定性和安全性。
对细胞的培养时间、传代次数、细胞密度等也需要严格控制，不可随意增加培养时间或传代次数，以免细胞出现突变或异常。
【4】对细胞培养的个人观点和理解从事细胞培养工作多年，我深知细胞培养的重要性和复杂性。
细胞培养基的基本要求
细胞培养基的基本要求细胞就像一群娇贵的小食客，而细胞培养基呢，那就是为这些小食客精心准备的美食大餐。
这培养基啊，得满足不少要求呢，就像大厨做菜得考虑食客的各种挑剔口味一样。
首先，营养成分得齐全。
这就好比做菜要有肉有菜有主食。
细胞需要的糖啊、氨基酸啊、维生素啊，一样都不能少。
糖就像是细胞的能量小糖果，没有它细胞就像没加油的汽车，只能原地趴窝。
氨基酸则是构建细胞大厦的小砖块，缺了它细胞这房子可就盖不起来啦，说不定还会塌成一片废墟呢。
维生素更像是神奇的小调料，虽然量少，但没了它细胞就像吃菜没放盐，总感觉缺了点啥，整个人生都不完整了，哦不，是整个细胞生都不完整了。
再者，渗透压得合适。
这渗透压就像是细胞周围的压力包围圈。
如果渗透压太高，细胞就像被一群大汉紧紧围住的小可怜，都要被挤扁了；要是渗透压太低呢，细胞又像在空荡荡的大广场上迷失的小孩，到处乱晃悠，形状都变了，简直是细胞界的“变形金刚”，但这可不是啥好事。
pH值也很关键。
pH值就像细胞生存环境的温度调节器。
太酸的话，细胞感觉自己像是掉进了醋坛子，被酸得晕头转向；太碱呢，又像是掉进了碱水湖，那滋味肯定也不好受。
得把pH值调整到细胞觉得最舒服的那个范围，就像把家里的空调调到最适宜的温度一样。
然后，无菌也是个硬要求。
细菌就像不请自来的小混混，闯进细胞的美食派对。
要是培养基里有细菌，那细胞可就惨了，细菌会在里面胡作非为，就像强盗冲进了宝库，把细胞的营养物质抢个精光，细胞只能在一旁哭唧唧。
另外，还得有合适的生长因子。
生长因子就像是细胞成长的小魔法药水，有了它细胞就像吃了菠菜的大力水手，能茁壮成长。
没有它，细胞就只能慢慢悠悠地生长，像个老态龙钟的小老头，一点活力都没有。
细胞培养基还得是可溶的。
要是不溶，那就像把石头混进米饭里给细胞吃，细胞肯定是吃不下的，只能对着这一堆“怪东西”干瞪眼。
还有啊，培养基得稳定。
不能今天是一个样，明天又变了个样。
这就像一个厨师做菜不能今天咸明天淡，要是这样细胞肯定要闹脾气的，说不定还会绝食抗议呢。
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求
动物细胞培养及胚胎培养培养基的要求动物细胞培养时对培养基的要求：培养基按其来源可分为天然培养基和合成培养基。
天然培养基的营养成分与细胞在体内所需条件比较接近，但就细胞在体外生存的环境来说，合成培养液也有其独特之处，譬如成分便于控制和标准化。
体外培养的细胞直接生活于培养基中，无论何种培养基都应该能满足细胞生长所需的营养与生理的基本要求。
(1)营养成分：1）氨基酸合成培养液中的氨基酸以12种必需氨基酸为主，这些氨基酸不能由细胞自身合成，必需由培养液供给。
在氨基酸的成分中谷氨酰胺的作用特别重要，细胞需要谷氨酰胺合成核酸和蛋白质，在配制各种培养液中应补加一定量的谷氨酰胺。
2）单糖葡萄糖是最常用和最好的单糖3）维生素维生素在细胞代谢过程中必不可少，主要可以提供辅酶和辅基。
生物素、叶酸、泛酸、核黄素、维生素B12等等4）其他成分：细胞生长过程中除需钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素外，还需要一些微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼等。
此外，为优化细胞生存环境，合成培养基中有时还添加些其他成分，包括核酸降解物、抗氧化剂等。
（2）促生长因子及激素各种激素、生长因子对于促进细胞生长、维持细胞功能、保持细胞的状态具有十分重要的作用。
如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用。
各种生长调节因子的作用更加明显并具有特异性。
（3）pH大多数细胞的适宜pH为7.2-7.4，偏离此范围对细胞将产生有害影响。
造成培养基pH 波动的主要物质是细胞代谢产生的二氧化碳。
解决这一问题可采取两种方法：一是用具有一定缓冲能力的培养基，如使用NaHCO3-CO2缓冲系统，二是采用开放式培养的方法，使细胞代谢产生的二氧化碳及时逸出培养皿。
（4）渗透压细胞必须生活在等渗的环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定的耐受性。
注：天然培养基主要指来自动物体液或利用组织分离提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡胚浸出液等。
合成培养基是人工配制的培养基，给细胞提供一个近似体内生存的环境，又便于控制和标准化的体外生存环境，但合成培养基尚未成为十分完全的培养基。
第一讲 细胞培养的基本要求
① 天然培养基
天然培养基是指来自动物体液或利用组织分离
提取的一类培养基，如血浆、血清、淋巴液、鸡
胚浸出液等。组织培养技术建立早期，体外培养
细胞都是利用天然培养基。
但是由于天然培养基制作过程复杂、批间差异
大，因此逐渐为合成培养基所替代。目前广泛使
用的天然培养基是血清。
血清(serum)
血清种类:主要是牛血清，培养某些特殊细胞也用人血
培养基的配制
RPMI-1640/DMEM培养粉 碳酸氢钠 1袋 2.0 g
青、链霉素
加三蒸水 至 1000ml，4℃过夜
各100单位／毫升
过滤除菌。
调节pH值至7.2
加血清（终浓度 10％）
完全培养基的组成
体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养
基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、 渗透压、pH等诸多方面的要求。
基础培养基(1640或DMEM) 血清
80％一95％ 5％一20％
NaHCO3
P.
2.0 －3.7 g/L
各100单位／毫升
S.
HEPES
2.0 －5.98 g/L
血清抑制胰蛋白酶
培养基
细胞的生长需要一定的营养环境，用于维持细胞
生长的营养基质称为培养基，即指所有用于各种 目的的体外培养、保存细胞用的物质，就其本意 上讲为人工模拟体内生长的营养环境，使细胞在 此环境中有生长和繁殖的能力。它是提供细胞营 养和促进细胞生长增殖的物质基础。
无毒、无污染
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没
液变绿应重新配制。
或干热（160度2小时）
◆ 冲洗 洗涤装置与手工烘干、包装、高压（15磅20分钟）
细胞培养基质量标准及检验方法
细胞培养基质量标准及检验方法中国医药生物技术协会二0一一年四月编写说明一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。
二、本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。
三、本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。
四、结果评定依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。
细胞培养基质量标准及检验方法一、细胞培养基质量标准细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。
表1 技术要求二、检验方法除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。
2.1 澄清度的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。
按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。
2.2 pH值的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。
按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。
2.3 干燥减量的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅶ L 干燥失重测定法进行。
2.4 渗透压的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。
按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。
不同细胞对培养基的组分的要求
不同细胞对培养基的组分的要求
不同细胞对培养基的组分有不同的要求，这取决于细胞类型和生长特性。
以下是一些常见细胞类型对培养基组分的要求的例子：
1. 细菌细胞：
-碳源：细菌通常需要碳源来进行能量和生物合成。
-氮源：氨基酸或无机氮化合物用于蛋白质合成和细胞增殖。
-矿物质和微量元素：提供必需的矿物质和微量元素，例如镁、铁、钙等。
2. 哺乳动物细胞：
-基本营养物质：哺乳动物细胞通常需要含有葡萄糖、氨基酸、维生素和矿物质的培养基。
-生长因子和激素：某些细胞类型需要额外添加生长因子（如表皮生长因子、胰岛素样生长因子等）和激素来促进细胞增殖和特定功能的表达。
-血清或替代物：大多数哺乳动物细胞需要血清中的成分或替代物来提供必要的生长因子、蛋白质
和激素等。
3. 昆虫细胞：
-蛋白酶抑制剂：昆虫细胞对蛋白酶敏感，因此培养基中常添加蛋白酶抑制剂以防止细胞损伤。
-脂质和类固醇：某些昆虫细胞类型需要额外的脂质和类固醇来满足其生长和代谢需求。
4. 植物细胞：
-碳源：植物细胞通常使用蔗糖、葡萄糖或其他碳源作为能源和碳供应。
-植物生长调节剂：培养植物细胞时，通常需要添加植物生长调节剂，如植物激素（如生长素、激动素）和维生素等。
这只是一些示例，不同细胞类型有不同的要求。
因此，在培养不同类型的细胞时，需要根据其特定需求和生理特性来优化培养基的配方。
细胞培养基的技术要求
细胞培养基的技术要求细胞培养基是一种提供细胞生长和繁殖所需的营养物质和环境条件的培养液。
它在细胞培养和细胞实验中起着至关重要的作用。
为了保证细胞培养基的质量和有效性，有一些技术要求需要遵守。
细胞培养基的配制需要严格按照配方比例进行。
不同类型的细胞需要不同的培养基配方，因此需要根据细胞类型的要求来选择合适的培养基。
培养基的配制过程中应注意避免外源性污染，如细菌、真菌和病毒等。
同时，培养基的配制过程中应避免使用含有抗生素的培养基，以免影响细胞生长和实验结果。
细胞培养基的pH值需要控制在适宜范围内。
pH值的过高或过低都会对细胞的生长和繁殖产生不利影响。
一般来说，细胞培养基的pH 值应在7.2-7.4之间。
为了保持细胞培养基的稳定性，可以将培养基放置在含有二氧化碳的培养箱中，以维持适宜的pH值。
第三，细胞培养基的温度需要适当控制。
细胞的生长和繁殖对温度非常敏感，一般来说，细胞培养基的温度应保持在37摄氏度。
为了保持培养基的稳定温度，可以使用恒温箱或培养箱来控制温度。
此外，还可以在细胞培养过程中定期检测培养基的温度，确保温度的稳定性。
细胞培养基的贮存也是关键的一步。
细胞培养基应保存在低温下，一般在-20摄氏度或更低的温度下保存。
同时，细胞培养基的密封性也非常重要，以避免污染和营养物质的损失。
在使用细胞培养基前，需要先检查其外观和质地，确保没有异常情况发生。
细胞培养基的使用过程中需要注意无菌操作。
细胞培养基应在无菌条件下进行配制和使用，以避免细胞培养基被细菌、真菌等微生物污染。
在使用细胞培养基的过程中，操作人员应佩戴合适的防护设备，如实验手套、口罩和实验服等，以减少外源性污染的可能性。
细胞培养基的技术要求可以总结为以下几点：严格按照配方比例配制、控制pH值在适宜范围内、保持温度稳定、妥善贮存以及无菌操作。
遵守这些技术要求可以保证细胞培养基的质量和有效性，为细胞培养和细胞实验提供良好的条件。
在细胞培养研究中，细胞培养基的选择和使用是至关重要的，只有掌握了这些技术要求，才能更好地进行细胞培养和研究工作。
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体外培养的细胞直接生活在培养基中，因此培养基应能满足细胞对营养成分、促生长因子、激素、渗透压、pH等诸多方面的要求。
营养成分
1.氨基酸：所有细胞都需要12种必须氨基酸：缬、亮、异亮、苏、赖、色、苯丙、蛋、组、酪、精、胱氨酸。
2.单糖：六碳糖是主要能源，也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。
细胞对葡萄糖的吸收能力最高，半乳糖最低。
体外培养动物细胞时，几乎所有的培养基或培养液中都以葡萄糖作为必含的能源物质。
3.维生素：生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素
B12都是培养基常有的成分。
4.无机离子与微量元素：细胞生长除需要钠、钾、钙、镁、氮和磷等基本元素，还需要微量元素，如铁、锌、硒、铜、锰、钼、钒等。
促生长因子及激素
各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。
有些激素对许多细胞生长有促生长作用，如胰岛素，它能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸。
有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素有促进乳腺上皮细胞生长作用等。
渗透压
细胞必须生活在等渗环境中，大多数培养细胞对渗透压有一定耐受性。
人血浆渗透压290mOsm/kg, 可视为培养人体细胞的理想渗透压。
鼠细胞渗透压在
320mOsm/kg左右。
对于大多数哺乳动物细胞，渗透压在260－320mOsm/kg 的范围都适宜。
pH、气体
也是细胞生存的必需条件之一，所需气体丰要是氧和二氧化碳。
氧参与三羧酸循环，产生能量供给细胞生长、增殖和合成各种成分。
一些细胞在缺氧情况下，借糖酵解也可获取能量，但多数细胞缺氧不能生存。
在开放培养时，一般置细胞于95％空气加5％二氧化碳的混合气体环境中培养。
二氧化碳既是细胞代谢产物，也是细胞所需成分，它主要与维持培养基的pH有直接关系。
动物细胞大多数需要轻微的碱性条件，pH值约在7．2~7．4℃在细胞生长过程中，随细胞数量的增多和代谢活动的加强，二氧化碳不断被释放，培养液变酸，PH值发生变化。
由于NaHCO3容易分解为二氧化碳，很不稳定，致使缓冲系统难以精确地控制。
故这一缓冲系统适合密闭培养。
HEPES结合碳酸氢钠使用，可提供更有效的缓冲体系，主要是防止pH值迅速变动，但最大缺点是在开放培养或观察时难以维持正常的pH值。
造成pH波动主要是代谢产生的CO2，在封闭式培养过程中CO2与水结合产生碳酸，培养基pH很快下降。
为解决这一问题，合成培养基中使用了NaHCO3-CO2缓冲系统，并采用开放培养，使细胞代谢产生的CO2及时溢出培养瓶，再通过稳定调节温箱中CO2浓度（5％），与培养基中的NaHCO3处于平衡状态。
无毒、无污染
体外生长的细胞对微生物及一些有害有毒物质没有抵抗能力，因此培养基应达到无化学物质污染、无微生物污染（如细菌、真菌、支原体、病毒等）、无其他对细胞产生损伤作用的生物活性物质污染（如抗体、补体）。
对于天然培养基，污染主要来源于取材过程及生物材料本身，应当严格选材，严格操作。
对于合成培养基，污染主要来源于配制过程，配制所用的水，器皿应十分洁净，配制后应严格过滤除菌。