DNA重组技术的基本工具
生物重组dna技术的基本工具
生物重组DNA技术是利用基因工程方法对DNA分子进行重新组合和修改的技术。
下面是生物重组DNA技术中常用的基本工具：限制性内切酶（Restriction Enzymes）：这些酶能够识别DNA的特定序列，并在该序列上切割DNA分子。
限制性内切酶可以用于切割目标DNA和载体DNA，以便进行重组。
DNA连接酶（DNA Ligase）：这种酶能够将两条DNA分子的断裂末端连接在一起，形成一个完整的DNA分子。
DNA连接酶用于将目标DNA片段与载体DNA片段连接起来，构建重组DNA。
DNA聚合酶（DNA Polymerase）：DNA聚合酶能够在DNA模板上合成新的DNA链。
在重组DNA技术中，DNA聚合酶可用于扩增目标DNA片段，进行PCR（聚合酶链式反应）等操作。
电泳装置（Electrophoresis Apparatus）：电泳装置用于将DNA分子按照大小进行分离和纯化。
通过电泳，可以根据目标DNA的大小和电荷特性对其进行分离和检测。
载体（Vector）：载体是用于携带和复制重组DNA的DNA分子，如质粒或病毒。
载体提供了重组DNA在细胞中复制和表达的环境。
转化（Transformation）：转化是将重组DNA导入目标细胞中的过程。
通过转化，重组DNA 可以被细胞摄取并稳定地存在于细胞内。
DNA测序技术（DNA Sequencing）：DNA测序技术用于确定DNA分子的核酸序列。
它是生物重组DNA技术中重要的工具，可用于验证重组DNA的正确性和准确性。
这些基本工具在生物重组DNA技术中起着关键的作用，使研究人员能够对DNA进行精确的操作和修改，从而实现基因的克隆、重组和表达。
1.1 DNA重组技术的基本工具0
切割位点：磷酸二酯键
举 例：EcoRI限制酶能识别 GAATTC序列，并在G和A 之间切开 结果：形成两种末端
限制性内切酶
限制 酶
黏性末端和平末端
限制酶在原核生物中有什么作用？
• 限制酶就是细菌的一种防御性工具，当外源DNA 侵入时，会利用限制酶将外源DNA切割掉，以保而达到保护自 身的目的。 • 限制酶不会将自己的DNA 切割吗？ • 含有某种限制酶的细胞，其DNA分子中或者不具 备这种限制酶的识别切割序列，或者通过甲基化 酶将甲基转移到所识别序列的碱基上，使限制酶 不能将其切开。
1.1 DNA重组技术的基本工具
高二生物组
DNA重组技术的基本工具
• 限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
• DNA连接酶——“分子缝合针”
• 基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
分布：主要在原核生物中 作用特点：特异性，即识别特定核 苷酸序列，切割特定的两个 核苷酸之间的磷酸二酯键。
• DNA连接酶与DNA聚合酶一样吗？为什么？
议一议
1、从化学组成来看，载体应含有什么成分？ 双链DNA 2、能否用SARS病毒作为基因载体？ 不能 3、作为载体，若没有切割位点将怎样？ 不能进行DNA的重组 4、携带目的基因的载体是否进入了受体细胞， 如何鉴定？ 载体上应有标记基因 5、假如目的基因导入受体细胞后不能复制， 将怎样？ 可能造成基因丢失
DNA连接酶——“分子缝合针”
• 种类：两种：
一种是从大肠杆菌中分离得到的，称之为E·coli连接酶。 一种是从T4噬菌体中分离得到，称为T4连接酶。
• 特点：
E·coli连接酶只能连接黏性末端；
T4连接酶既可“缝合”黏性末端，又可“缝合”平末端。
高中生物选择性必修三 第3章 第1节 重组DNA技术的基本工具
科学家采用农杆菌转化法培养出第一例转基因烟草,此后,基 1983 因工程进入迅速发展阶段 1985 穆里斯等人发明PCR,为获取目的基因提供了有效手段
预习反馈 1.判断正误。 (1)通过基因工程产生的变异是不定向的。( × ) 分析该变异类型按人们的意愿进行,是定向的。 (2)通过基因工程改造成的生物为新物种。( × ) 分析通过基因工程改造成的生物,产生了新的性状,该生物与原来 的生物之间不存在生殖隔离,不属于新物种。 (3)基因工程育种与杂交育种相比的优点是打破了生殖隔离。( √ )
探究点一
探究点二
请讨论回答下列问题。
1.转基因抗虫棉是通过基因工程技术培育的,请完善下表,以准确把
握基因工程的概念。
别 名 重组DNA技术 操作环境 生物体外
操作对象
操作水平 DNA分子水平 原理
结果
创造出人类需要的新的生物类型和生物产品, 生物性状
答案基因 基因重组 定向改变
探究点一
探究点二
2.不同生物的DNA分子能拼接起来的原因是什么? 提示(1)不同生物的DNA分子的基本组成单位都是4种脱氧核苷 酸;(2)不同生物的双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结 构;(3)不同生物的DNA碱基对均遵循严格的“碱基互补配对原则”。 3.外源基因能够在受体内表达,并使受体表现出相应的性状,为什么? 提示(1)基因是控制生物体性状的结构和功能的基本单位,具有相对 独立性;(2)遗传信息的传递都遵循中心法则;(3)生物界共用一套遗 传密码。
4.重组DNA分子的模拟操作
(1)材料用具:剪刀代表EcoRⅠ(限制酶),透明胶条代表DNA连接酶。
第1节 重组DNA技术的基本工具
第1节重组DNA技术的基本工具学案设计(一)学习目标1.掌握基因工程操作的三种工具(限制酶、DNA 连接酶、载体)。
2.能够准确说出每一种操作工具的特点及用途。
自主预习一、基因工程的概念1.操作场所:生物体外。
2.操作技术:等技术。
3.操作结果:赋予生物新的,创造出更符合人们需要的新的和。
4.操作水平:水平。
二、重组DNA技术的基本工具1.限制性内切核酸酶(简称限制酶)——“分子手术刀”(1)来源:主要来自。
(2)功能:能够识别双链DNA分子的特定,并使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的断开。
(3)大多数限制酶的识别序列由个核苷酸组成,切割的结果是产生末端。
2.DNA连接酶——“分子缝合针”(1)作用:将双链DNA片段“缝合”起来,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的。
(2)3.基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”(1)常用载体:,它是一种裸露的、结构简单、独立于之外,具有能力的分子。
(2)质粒适于用作基因载体的特点Ⅰ.质粒分子上有一个至多个位点,供外源DNA片段插入其中。
Ⅱ.携带外源DNA片段的质粒进入受体细胞后,能在细胞中进行,或上,随受体DNA同步复制。
Ⅲ.质粒上常有特殊的,便于的筛选。
(3)基因工程中使用的载体除质粒外,还有等。
课堂探究课堂探究一:1.已知限制酶Eco R Ⅰ和Sma Ⅰ识别的碱基序列和酶切位点分别为G ↓AATTC 和CCC ↓GGG,在图中写出两种限制酶切割DNA 后产生的末端并写出末端的种类。
Eco R Ⅰ限制酶和Sma Ⅰ限制酶识别的碱基序列 (填“相同”或“不同”),切割位点(填“相同”或“不同”),说明限制酶具有 性。
2.为什么限制酶主要从原核生物中分离纯化而来?推测它在原核生物中的作用是什么?它会不会切割自己的DNA 分子?课堂探究二:1.3.限制性内切核酸酶和DNA 连接酶的作用是否都体现了酶的专一性?课堂探究三:细胞膜上的载体与基因工程中的载体有什么不同?核心素养专练1.下列有关基因工程的叙述,错误的是()A.基因工程产生的变异属于基因突变B.最常用的载体是质粒C.工具酶主要有限制性内切核酸酶和DNA连接酶D.该技术人为地增加了生物变异的范围,实现了物种间遗传物质的交换2.在基因工程操作过程中,DNA连接酶的作用是()A.将任意两个DNA片段连接起来B.将具有相同黏性末端的DNA片段连接起来,包括DNA片段和碱基对之间的氢键C.连接具有相同黏性末端或平末端的DNA片段,即形成磷酸二酯键D.只连接具有相同黏性末端的DNA片段碱基对之间的氢键3.下列有关质粒的叙述,正确的是()A.质粒是广泛存在于细菌细胞中的一种颗粒状细胞器B.质粒是真核细胞细胞核或原核细胞拟核DNA之外,能自我复制的环状双链DNA分子C.质粒只有在侵入宿主细胞后,才能在宿主细胞内复制D.基因工程中常用的载体除了质粒外,还有核DNA、动植物病毒以及噬菌体4.如图所示为限制酶Bam HⅠ、Eco RⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的识别序列,箭头表示每一种限制酶的特定切割位点,切割出来的DNA片段末端可以互补黏合的限制酶及其正确的末端互补序列为()A.Bam HⅠ和Eco RⅠ;末端互补序列为—AATT—B.Bam HⅠ和HindⅢ;末端互补序列为—GATC—C.Eco RⅠ和HindⅢ;末端互补序列为—AATT—D.Bam HⅠ和BglⅡ;末端互补序列为—GATC—5.关于下图所示黏性末端的叙述,正确的是()①②③④A.①与③是由相同限制酶切割产生的B.DNA连接酶可催化①与③的连接C.经酶切形成④需要脱去2分子水D.DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端6.下列有关限制酶和DNA连接酶的叙述,正确的是()A.用限制酶酶切获得一个外源基因时得到两个切口,有2个磷酸二酯键被断开B.限制酶识别序列越短,则该序列在DNA中出现的概率就越大C.序列—CATG↓—和—G↓GATCC—被限制酶切出的黏性末端碱基数不同D.T4 DNA连接酶和E.coli DNA连接酶都能催化平末端和黏性末端的连接7.某细菌质粒上有标记基因(如图所示),通过标记基因可以推知外源基因(目的基因)是否转入成功。
“重组DNA技术的基本工具”教学设计
“重组DNA技术的基本工具”教学设计目录一、课程概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21.重组DNA技术简介．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．22.重组DNA技术的重要性．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．33.课程目标．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4二、重组DNA技术的基本原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．41.DNA的组成与结构．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．62.重组DNA技术的核心原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．73.基因克隆与表达的基本原理．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．7三、重组DNA技术的基本工具．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．91.工具概述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．9（1）基因工程刀具．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．10 （2）分子生物学仪器．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．11 （3）实验室常规设备．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．112.工具的应用与操作．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．12（1）基因工程刀具的使用技巧．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．13 （2）分子生物学仪器的操作流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．14 （3）实验室常规设备的使用注意事项．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．15 四、重组DNA技术的操作流程．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．161.DNA的提取与纯化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．172.目的基因的扩增与克隆．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．183.载体构建与转化．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．194.重组子的筛选与鉴定．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．21五、实验设计与操作示例．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．221.实验设计思路．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．232.实验操作示例一．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．243.实验操作示例二．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．24六、课程总结与拓展学习建议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．251.课程总结与回顾．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．262.拓展学习建议与实践项目方向．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．27一、课程概述本节课旨在为学生提供一个全面了解重组DNA技术基本原理与工具的平台，通过理论讲解与实验操作相结合的方式，使学生能够掌握这一现代生物技术的核心概念和应用范围。
《DNA 重组技术的基本工具》 教学设计
《DNA 重组技术的基本工具》教学设计一、教学目标1、知识目标（1）简述 DNA 重组技术所需三种基本工具的作用。
（2）理解限制酶的来源和作用特点。
（3）理解 DNA 连接酶的作用。
（4）说出载体需要具备的条件。
2、能力目标（1）通过对限制酶、DNA 连接酶和载体的学习，培养学生的逻辑思维和分析问题的能力。
（2）通过对 DNA 重组技术基本工具的操作模拟，提高学生的动手能力和实践操作能力。
3、情感态度与价值观目标（1）认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。
（2）关注基因工程的发展，形成对科学技术的正确态度。
二、教学重难点1、教学重点（1）限制酶的作用特点和作用结果。
（2）DNA 连接酶的作用。
（3）载体需要具备的条件。
2、教学难点（1）限制酶的作用特点。
（2）载体的作用机制。
三、教学方法讲授法、讨论法、直观演示法、实验法四、教学过程1、导入新课通过展示一些基因工程应用的实例，如转基因抗虫棉、胰岛素的生产等，引出 DNA 重组技术，提问学生 DNA 重组技术是如何实现的，从而导入本节课的主题——DNA 重组技术的基本工具。
2、讲授新课（1）限制酶①介绍限制酶的来源，主要是从原核生物中分离出来的。
②展示限制酶的作用示意图，讲解限制酶的作用特点，如特异性识别特定的核苷酸序列，并在特定的切点切割 DNA 分子。
③举例说明不同的限制酶识别和切割的序列不同，如 EcoRⅠ和HindⅢ。
④让学生通过观察和分析，总结限制酶的作用结果，产生黏性末端或平末端。
（2）DNA 连接酶①讲解DNA 连接酶的作用，即将切割后的DNA 片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键。
②比较 DNA 连接酶和 DNA 聚合酶的异同，帮助学生加深对 DNA 连接酶作用的理解。
③强调 DNA 连接酶连接的是具有互补黏性末端或平末端的 DNA片段。
（3）载体①介绍载体的作用，是将目的基因送入受体细胞。
②讲解载体需要具备的条件，如能够在受体细胞中稳定保存并自我复制；具有一个或多个限制酶切点，便于目的基因的插入；具有标记基因，便于筛选含有目的基因的受体细胞等。
DNA重组技术的基本工具PPT课件
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基因工程的工具酶
1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”
(1)来源
主要来自于 原核生物
。
(2)特点
① 识 别 双 链 DN特A 定核分苷酸子 的 某 种
序列；
磷酸二酯键
②使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的
断裂。
(3)作用结果
中心轴线两侧
①黏性末端：在所识别序列的
将
DNA的两条链分别切开时形成中的心末轴端线。
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基因进入受体细胞的载体—— “分子运输车”
1．载体的种类有 质粒 λ噬、菌体
动植的物衍病生毒物、
等。
2．常用载体——质粒
(1)质粒是一种自裸我露复的制、结构简单双、链独环立状于DN细A 菌拟核DNA之外，
并具有
限制酶切割 能 力 的
分子外。源
(2)质粒DNA分子上有标一记至基多因个
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A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割 B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割 C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割 D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割 思维导图：
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2024/10/15
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3．载体的种类 (1)细菌质粒，它是细菌拟核DNA以外的小型双链环状DNA，有 的细菌只有一个，有的细菌有多个。 (2)λ噬菌体的衍生物和某些动植物病毒的DNA。 一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人 们根据不同的目的和需求，对某些天然的载体进行人工改造。
人教版高中生物选择性必修第3册 精品讲义 3.1 重组DNA技术的基本工具(教师版)
3.1 重组DNA 技术的基本工具教学目标教学重点1.重组DNA 技术所需的三种基本工具的作用。
2.DNA 粗提取和鉴定。
教学难点1. 基因工程载体需要具备的条件。
2. DNA 的粗提取和鉴定。
知识点01 基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
从技术操作层面看，由于基因工程是在课程标准目标解读 基因工程是一种重组DNA 技术。
1. 概述基因工程是在遗传学、微生物学、生物化学和分子生物学等学科基础上发展而来的。
2. 阐明DNA 重组技术的实现需要利用限制性核酸内切酶、DNA 连接酶和载体三种基本工具。
1. 阐明重组DNA 技术所需的三种基本工具的作用。
2. 认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。
3. 进行DNA 的粗提取和鉴定。
知识精讲目标导航DNA分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组DNA技术、基因拼接技术。
操作对象：基因操作水平：DNA分子水平操作原理：基因重组操作环境：体外基本过程：剪切→拼接→导入→表达操作结果：定向地改造生物的遗传性状，获得符合人们需要的新的生物类型和生物产品优点：定向改造生物体的性状，目的性强（与诱变育种相比）育种周期短，克服远缘杂交不亲和障碍（与杂交育种相比）知识点02 基因工程的基本工具1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶（限制酶）（2）种类：约4000种（3）作用:识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。
（4）限制酶识别序列的长度最常见的为6个核苷酸，也有少数限制酶的识别序列由4个、8个、或其他数量的核苷酸组成。
①在中轴线两侧切割，形成黏性末端。
如：EcoRI限制酶能识别GAATTC序列，为6个核苷酸，并在G和A之间切开。
②在中轴线处切割，形成平末端。
如：Sma I限制酶能识别CCCGGG序列，为6个核苷酸，并在G和C之间切开。
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第一章基因工程
1．1 DNA重组技术的基本工具
【教学目标】1、简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用
2、认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新
【分层问题一】什么是基因工程？如何解读？
1．基因工程的原理：基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，通过体外和，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
由于基因工程是在水平上进行设计和施工的，因此又叫做。
2.根据你的理解，填写下表：
【分层问题二】基因工程需要哪些工具？各有何特点？
1、限制性核酸内切酶
（1）切割DNA的工具是，又称。
（2）这类酶的主要来源是，约种。
【互动探究】这类酶存在于原核生物中的作用是什么？
（4）它们能识别DNA分子中某种，并且使特定部位的两个核苷酸间的断开。
例如，EcoRI酶识别序列。
SmaI酶识别序列
（5）DNA分子经限制酶切割产生的DNA片段，末端通常有两种形式，即和。
【精讲点拨1】下列关于限制酶的说法正确的是（）
A、限制酶广泛存在于各种生物中，但微生物中很少
B、一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列
C、不同的限制酶切割DNA后都会形成黏性末端
D、限制酶的作用部位是特定核苷酸形成的氢键
2、DNA连接酶——“分子缝合针”
根据DNA连接酶的来源不同，可以将它分为两类：
一类是从大肠杆菌中分离得到的，称为coli
E⋅DNA连接酶只能
E⋅DNA连接酶。
coli
将连接起来，不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。
另一类是从分离出来的，称为T4DNA连接酶。
T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的，又可以“缝合”双链DNA片段的，但连接之间的效率比较低。
【互动探究】DNA连接酶和DNA聚合酶是一回事吗？为什么？
【精讲点拨2】下图为DNA分子的切割和连接过程。
(1)EcoRI是一种酶，其识别序列是，切割位点是
与之间的键。
切割结果产生的DNA片段末端形式为。
(2)不同来源DNA片段结合，在这里需要的酶应是连接酶，此酶的作用是在与之间形成键，而起“缝合”作用的。
还有一种连接平末端的连接酶是。
3、基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”
（1）基因操作过程中使用载体两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制。
（2）现在通常使用的载体是，它是一种相对分子质量较小、独立于拟核DNA之外的环状DNA，有的细菌中有一个，有的细菌中有多个。
（3）质粒通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以复制，也可整合细菌拟核DNA中，随着拟核DNA的复制而复制。
（4）其他载体还有和等。
（5）在实际操作过程中的运用的质粒，都是在天然质粒基础上进行。
【互动探究】作为载体必须具备哪些条件？
【精讲点拨3】以下是两种限制酶切割后形成的DNA片段，分析回答问题。
(1)其中①和是由一种限制酶切割形成的末端，两者要重组成一个DNA分子，所用DNA连接酶通常是。
(2) 和是由另一种限制酶切割形成的末端，两者要形成重组DNA片段，所用DNA连接酶通常是。
【迁移应用】
（一）选择题
1、关于限制酶的说法中，正确的是（）
A、限制酶是一种酶，只识别GAATTC碱基序列
B、EcoRI切割的是G—A之间的氢键
C．限制酶一般不切割自身的DNA分子，只切割外源DNA
D．限制酶只存在于原核生物中
2、DNA连接酶催化的反应是( )
A．DNA复制时母链与子链之间形成氢键 B．黏性末端碱基之间形成氢键C．两个DNA片段黏性末端之间的缝隙的连接 D．A、B、C都不正确
分析C还可能有平末端
3、作为基因的运输工具——载体，必须具备的条件及理由是( )
A、能够在宿主细胞中稳定地保存下来并大量复制，以便提供大量的目的基因
B、具有多个限制酶切点，以便于目的基因的表达
C．具有某些标记基因，以便为目的基因的表达提供条件
D、能够在宿主细胞中复制并稳定保存，以便于进行筛选
4、质粒是基因工程最常见的载体，它的主要特点是( )
①能自主复制②不能自主复制③结构很小④是蛋白质⑤是环状RNA
⑥是环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
A、①③⑤⑦
B、②④⑥ C．①③⑥⑦ D．②③⑥⑦
5、在受体细胞中能检测出目的基因是因为( )
A、目的基因上有标记
B、质粒具有某些标记基因
C、重组质粒能够复制 D．以上都不正确
6、关于质粒的叙述正确的是( )
A、质粒是能够自我复制的环状DNA分子
B、质粒是唯一的载体
C、重组质粒是目的基因
D、质粒可在宿主外单独复制
7、基因工程中可用作载体的是( )
①质粒②噬菌体③病毒④动物细胞核
A、①②③
B、①②④ C．②③④ D、①③④
8、下列关于基因工程中所选用的质粒的说法，错误的是( )
A、不能没有标记基因
B、是小型链状的DNA分子
C、能够自我复制 D．可与目的基因重组
9、下列黏性未端属于同一限制酶切割而成的是( )
A、①②
B、①③
C、①④ D．②③
10、要使目的基因与对应的载体重组，所需的两种酶是( )
(1)限制酶 (2)连接酶 (3)解旋酶 (4)还原酶
A、(1)(2)(3)
B、(1)(2)(4)
C、(1)(2)
D、(1)(3)
（二）填空题：
11、把目的基因与质粒DNA缝合时，中间的碱基对靠连接起来，而两链上的磷酸、脱氧核糖则在的作用下连接起来。
质粒是基因操作中经常用的。
12、基因工程又叫做技术或技术。
这种技术是在生物体外，通过对DNA分子进行人工和，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所需要的基因产物。
13、治疗糖尿病用的胰岛素，在过去主要是从动物(如猪、牛)体获得的。
自20世纪70年代基因工程发展起来以后，人们开始采用高新技术生产胰岛素，其操作过程如图1—5所示：
(1)图中的质粒存在于细菌细胞中，从其分子结构看，可确定它是一种。
(2)请根据碱基互补配对的原则判断，在连接酶的作用下，甲与乙能否拼接起来，并说明理由。
(3)细菌丙进行分裂后，其中被拼接的质粒也由一个变成两个，两个变成四个……质粒的这种增加方式在遗传学上称为。
目的基因通过表达后，能使细菌产生胰岛素，这是因为基因具有控制合成的功能。
1．1 DNA重组技术的基本工具
例1B、例2、答案：限制酶 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌吟脱氧核苷酸磷酸二酯键黏性末端coli
E⋅DNA 鸟嘌呤脱氧核苷酸腺嘌吟脱氧核苷酸磷酸二酯键 T4DNA连接酶例3、答案：③平T4DNA连接酶②④黏性E⋅DNA连接酶
coli
四、课堂巩固
答案；
11、氢键 DNA连接酶载体 12、基因拼接 DNA重组剪切拼接
1．13、DNA分子能二者具有相同的黏性末端。