克隆启动子方法的比较及应用
几个常用启动子
几个常用的启动子和诱导调控表达系统1.最早应用于的表达系统的是Lac乳糖操纵子，由启动子lacP + 操纵基因lacO + 结构基因组成。
其转录受CAP正调控和lacI负调控。
2.lacUV5突变能够在没有CAP的存在下更有效地起始转录，该启动子在转录水平上只受lacI的调控，因而随后得到了更广泛采用。
lacI产物是一种阻遏蛋白，能结合在操纵基因lacO 上从而阻遏转录起始。
乳糖的类似物IPTG可以和lacI 产物结合，使其构象改变离开lacO，从而激活转录。
这种可诱导的转录调控成为了大肠杆菌表达系统载体构建的常用元件。
3.tac启动子是trp启动子和lacUV5的拼接杂合启动子，且转录水平更高，比lacUV5更优越。
4.trc启动子是trp启动子和lac启动子的拼合启动子，同样具有比trp更高的转录效率和受lacI阻遏蛋白调控的强启动子特性。
5.在常规的大肠杆菌中，lacI阻遏蛋白表达量不高，仅能满足细胞自身的lac操纵子，无法应付多拷贝的质粒的需求，导致非诱导条件下较高地表达，为了让表达系统严谨调控产物表达，能过量表达lacI阻遏蛋白的lacIq 突变菌株常被选为Lac/Tac/trc表达系统的表达菌株。
现在的Lac/Tac/trc载体上通常还带有lacIq 基因，以表达更多lacI阻遏蛋白实现严谨的诱导调控。
6.IPTG广泛用于诱导表达系统，但是IPTG有一定毒性，有人认为在制备医疗目的的重组蛋白并不合适，因而也有用乳糖代替IPTG作为诱导物的研究。
另外一种研究方向是用lacI的温度敏感突变体，30℃下抑制转录，42℃开始发挥作用。
热诱导不用添加外来的诱导物，成本低，但是由于发酵过程中加热升温比较慢而影响诱导效果，而且热诱导本身会导致大肠杆菌的热休克蛋白激活，一些蛋白酶会影响产物的稳定。
7.以λ噬菌体转录启动子PL、PR 构建的载体也为大家所熟悉。
这两个强启动子受控于λ噬菌体cI基因产物。
原核表达个人秘笈
原核表达个人秘笈生物通原核表达技术专辑：表达不同于其它一些实验，比如：提取质粒、PCR、电镜切片，这些人为控制的因素比较多，出问题相对来说也比较好分析。
表达呢，你把质粒克隆好啦，交给细胞，然后有些事情就不全是你要怎样就怎样了。
原核表达在表达当中来说还是比较简单，细菌培养条件简单、生长速度快，需要的仪器和培养基都比较便宜。
当然，它也存在一些缺乏高级修饰、细胞内部还原性过高等缺点。
原核表达从一开始的设计就非常重要，所谓好的开始是成功的一半。
做足准备功夫，可是省去很多将来后悔的事情。
首先，我们要根据是否要求可溶将载体分成两大类，如果希望可以同时尝试多种表达系统，也有许多商业化的系统供选择。
前面已经介绍过许多公司的商业化载体、菌株和多系统表达体系，现在我想先从自己的蛋白分析讲起。
同样的载体、同样的系统，很可能表达这个蛋白表达量奇高，但是另外一个就是做不出来，所以没有万能的载体，只有永恒的分析。
当然如果你的蛋白曾经在原核系统中成功表达出来那是最好的，选择同样的载体表达成功率会高很多。
如果没有也最好尝试找一些曾经表达过和你的蛋白拥有相类似结构的文献。
比如大部分含有哺乳动物src同源的SH2蛋白相互作用域的蛋白都是用pGEX系列载体表达出来的。
根据经验而言，含有较少半胱氨酸和脯氨酸的、平均大小为60kD的单体蛋白较容易表达。
在下面将列出几个影响表达的因素，大家可以在表达前根据这几个因素自己分析一下：1.翻译起始位点现在大部分的表达载体都提供起始位点，所以它已经把起始密码子与核糖体结合位点的距离进行优化了，一般情况下不需要自己再加，不过还是要留意载体图谱上是否注明有起始密码子和终止密码子2.GC含量表达序列中的GC含量超过70％的时候可能会降低蛋白在大肠杆菌中的表达水平。
GC含量可以利用DNA STAR、Vector NTI Suite等软件进行预测。
3.二级结构在起始密码子附近的mRNA二级结构可能会抑制翻译的起始或者造成翻译暂停从而产生不完全的蛋白。
两种植物组织特异性基因表达方法分析
两种植物组织特异性基因表达方法分析两种植物组织特异性基因表达方法分析多细胞生物体内存在不同类型的器官、组织、细胞，它们有各自的特性，担负着不同的功能。
例如，植物根表皮中的根毛细胞，主要负责从周围土壤中吸收水分与矿质营养。
与这一功能相适应，它们在发育过程中向外突起形成管状结构以增加其表面积和吸收水分、养分的能力;植物根里的内皮层细胞在发育过程中通过特殊的细胞壁加厚和特定部位胼胝质的沉积形成凯氏带 ,阻止矿质养分向维管束和地上部分渗透，控制皮层和维管柱之间的物质运输;在茎和叶片中，保卫细胞可以调节内部叶肉细胞与外部环境之间的气体交换，这一过程需要依赖周围细胞通过K离子交换来创造一个调节气孔关闭与打开的膨压。
这些不同类型器官、组织、细胞的形成，以及它们之间功能的差异，在很大程度上取决于特异性表达的基因。
因此，研究不同器官、组织、细胞中呈特异性表达的基因，对了解植物生长发育调控机理，细胞类型与功能之间的关系都有重要意义。
此外，研究组织特异性表达的基因的调控机理，可帮助我们构建植物组织特异性表达体系，有目的地在特定器官、组织、细胞中表达特定靶基因，以便进行靶基因功能分析。
组织特异性表达技术在植物基因工程中具有一定的应用前景，如利用植物的特定组织细胞合成所需要的代谢产物，还可以用于作物改良的基因工程等。
组织特异性表达技术是近年来植物学研究中的一个重要领域。
主要介绍目前被广泛使用的两种植物组织特异性基因表达方法，即特定启动子驱动法和GAL4UAS激活标签法。
1组织特异性启动子驱动法1.1植物组织特异性启动子启动子是一段位于功能基因5 端上游的DNA序列，包含特定的保守序列，长度因基因而异。
启动子上的多种顺式作用元件能识别RNA 聚合酶，并指导相应类型的RNA聚合酶与模板正确结合，形成转录起始复合体，控制转录的时空特性和强度，从而精确有效地启动基因的表达。
有些启动子，如花椰菜花叶病毒35S启动子、水稻Atin1基因的At1启动子和玉米Ubiquitin基因的Ubi启动子等，其调控的基因不受时空及外界因素的影响，几乎在植物所有组织都有表达，而且表达水平在不同组织部位没有明显差异，被称之为组成型启动子或非特异性表达启动子。
基因编辑方法优劣比较和功能验证
基因编辑方法优劣比较和功能验证基因编辑是一种用于精确改变生物体基因组的方法，它提供了研究机制和治疗疾病的新途径。
随着科技的进步，出现了多种基因编辑方法，如CRISPR-Cas9、TALEN和ZFN等。
本文将对这些方法进行优劣比较，并讨论如何验证编辑的基因功能。
首先，我们来比较几种常见的基因编辑方法。
CRISPR-Cas9是最为常见和经典的方法之一。
它利用CRISPR与Cas9蛋白相结合，形成一个RNA-DNA复合物，指导Cas9切割DNA链。
CRISPR-Cas9具有成本低廉、效率高、技术广泛应用等优点，但也存在一些局限性，如非特异剪切和可能引发的异位效应。
与CRISPR-Cas9相比，TALEN是一种利用核酸酶与特定DNA序列结合的方法。
TALEN具有高度的特异性和效率，并且可以在不受启动子和重复序列影响的情况下实现基因编辑。
然而，TALEN仍然存在制备困难和较高的技术门槛等缺点。
另一种基因编辑方法是锌指核酸酶（ZFN）。
ZFN是一种通过将酶结合蛋白与特定序列的DNA结合，实现基因组编辑的技术。
与其他方法相比，ZFN具有精确性高和特异性好的优点，但需要特殊的蛋白工程技术来制备ZFN，因此技术门槛较高。
在选择适合的基因编辑方法时，关键因素包括编辑效率、特异性、成本和操作简便性等。
CRISPR-Cas9由于其高效性和低成本而在基因编辑领域被广泛使用。
然而，对于某些需要特定的精准编辑事件的应用，如单碱基编辑，可能需要使用其他方法，如ZFN。
接下来我们讨论如何验证编辑的基因功能。
在进行基因编辑后，需要通过功能验证来确认目标基因的变化是否确实导致了期望的效应。
一种常用的方法是通过细胞系途径。
将编辑后的细胞与野生型细胞或对照组进行比较，分析目标基因的表达差异，以及与该基因相关的信号通路的变化。
此外，可以使用CRISPRi或CRISPRa等方法来实现基因的抑制或激活，进一步验证目标基因的功能。
除了体外细胞模型，功能验证也需要在动物模型中进行。
目的基因的分离方法
目的基因的分离方法摘要：介绍了基因工程中分离所需目的基因的主要策略和最新进展。
总结了基因分离中的各种方法，主要有：直接酶切分离法，化学合成法，序列克隆法，功能克隆法，作图克隆法，表型差异克隆法，计算机辅助分离法等，并对其特点和适用范围进行了简单评述。
关键词：目的基因分离方法基因的分离方法都是根据基因的基本特性创建的，包括基因核苷酸顺序的特异性、基因在染色体上的位置特异性、基因编码的mRNA的特性和基因的差异表达等。
每种方法运用这些特性的一种或者多种，产生了各种各样的分离方法。
这些方法又相互之间组合，从而产生了可以在不同条件下有效分离目的基因的分离策略。
1 直接提取纯化此法只适用于分离多拷贝基因，而不适用于单拷贝基因。
并且所得到的目的基因纯度较低。
但是操作简单，对设备的依赖性很低，即使在很简陋的实验室里也能完成操作。
2 在体外用化学合成或酶促合成的方法取得目的基因通过对表达产物的分析和测序，可以预测目的基因的核苷酸序列，然后按照DNA碱基序列顺序，先合成DNA短片段，再通过DNA连接酶作用，将这些短片段依次连接成一个完整的基因。
人工合成基因的最大优点是能够根据需要合成突变基因，而且，所合成的是单基因，无其它有害基因，比较完整；缺点是只适用于较短的基因，操作比较难，费用也比较大。
目前这种方法主要用于PCR引物的合成，一些突变基因的合成等。
3 序列克隆——根据已知基因的序列克隆基因3．1 PCR扩增克隆当已知目的基因的序列时，通常采用PCR的方法来克隆基因。
基本原理和方法是：利用已知目的基因的序列，设计并合成一对寡核苷酸引物，提取所要从中分离基因的染色体DNA(RNA需要在逆转录酶的作用下合成cDNA的第1条链)，然后通过PCR反应来扩增特定的DNA片段。
扩增的片段经过纯化后，连接到合适的载体上，用酶切分析和序列分析测定所得到的重组子，并与已知基因的序列进行比较，来进行鉴定。
鉴定之后的DNA可以用于基因的表达。
真核生物启动子的鉴定方法
立，近 年来 关于该方 法的优化 有许 多报道 ［４－５］ｏ其基 本原理是首 以在高分 辨率 的变性 聚丙烯酰胺 凝胶 电泳上 观察抗性 片段的大
先构建 噬菌体 Ｍ１３衍生 型质粒 ，该质粒包括 含有假定 转录起 始 小。此方法必须解决 的一 个问题是 探针的长度，探针越长 ，分析
位点和其下游 的部分核苷 酸的基 因区域 、限制性酶切位点。将引 就越灵敏，但长探针形成二级结构 的概率大 ，将 导致背景信号 和
ｍＲＮＡ序 列设计 合成寡 核 苷酸引物 ，并将引物 的 ５ 末端 用 ３２ｐ 有效 定位无 效转 录基 因或其他方法不适用 的基 因转录起始位 点 ；
标 记。在根据经验确定 的反应条件下，使过量 的放射性标 记引物 缺 点是 ＰＣＲ可能优 先扩增不代表真正转 录物 ５ 末端 的产物 ，从
与总 ＲＮＡ中特异的 ＲＮＡ分 子或经过 寡聚 ｄＴ纯化的 ｍＲＮＡ退火 。 而使定位的准确性 降低 。
产物大小 ，最后进行放射 自显影或磷酸成像分析。抗性产物的长 伸至 ｍＲＮＡ ５ 末端。利用 ＲＮＡ连接酶将序列 已知 的寡聚核苷 酸
度应该与从探 针的 ５ 末 端到转 录起始位 点的距离相等。这种方 片段和 ｃＤＮＡ的 ３ 末 端连 接，再利 用和连接 上的寡 聚核 苷酸 片
法 的缺点是杂交分子易发生瞬间解离 ，产生相当多的背景条 带。 段 互补 的上游 引物和用于合成上述 ｃＤＮＡ的引物稍靠 内的下游 引
物和单链噬菌体 ＤＮＡ进行 退火，加入 Ｋｌｅｎｏｗ和 ｄＮＴＰｓ，其 中一 无效杂交 ，而且较长的探针还可能包括 噬菌体聚合酶不能有效延
种 ｄＮＴＰ经 放射性标记 ，以产生放 射性标记 的探针。利用限制性 伸 的 ＤＮＡ区域。为避 免产生大 量不完全转 录物，通常 需要对较
利用原核和真核系统在重组蛋白质表达中的比较
利用原核和真核系统在重组蛋白质表达中的比较当今生物科学领域中，蛋白质表达技术的发展一直备受关注。
利用原核和真核系统来重组蛋白质，是常见的两种方法。
这两种系统在蛋白质表达中有着各自的优势和适用范围。
一、原核系统的蛋白质表达原核系统主要指大肠杆菌（Escherichia coli，简称E.coli）等细菌，并且是最常用的蛋白质表达系统之一。
原核细胞具有复制速度快、易于培养、表达量高等特点，使其成为研究人员的首选。
在原核系统中，通常使用表达载体质粒将目标基因插入到细菌细胞中，并利用细菌自身的转录、翻译系统来实现蛋白质的合成。
在表达载体上，一般包含启动子、转录终止子、选择性标记等功能元件，以控制目标基因的表达和纯化。
原核系统的蛋白质表达具有高效、简便、经济等优势。
然而，由于原核细胞的风险素材含量高，存在内源性的蛋白质翻译后修饰机制有限等局限，某些复杂蛋白质的表达可能会受到限制。
二、真核系统的蛋白质表达真核系统主要指哺乳动物细胞（如CHO细胞）、昆虫细胞（如Sf9细胞）等，相对于原核系统，真核系统具有更接近生物体内蛋白质表达的环境，更能实现复杂蛋白质的表达。
在真核系统中，常用的蛋白质表达包括稳定转染和瞬时转染两种方式。
稳定转染是将目标基因整合到宿主细胞的基因组中，从而实现长期稳定的表达。
而瞬时转染则是将目标基因引入宿主细胞的质粒中，通过短时间高表达来获得大量蛋白质。
真核系统的蛋白质表达能够实现更多的翻译后修饰，如糖基化、磷酸化、乙酰化等。
这些修饰对于某些蛋白质功能的发挥至关重要。
此外，真核细胞中包含更多复杂的蛋白翻译机制和分子伴侣蛋白，有利于蛋白正确折叠和纯化。
然而，真核系统的蛋白质表达过程更为复杂，所需时间和成本也相对较高。
此外，真核细胞具有更严格的质控机制和蛋白降解系统，蛋白质的表达稳定性较差。
三、原核与真核系统的比较原核和真核系统的选择应根据具体的研究目的和需求。
如果目标是表达小分子量、水溶性和结构简单的蛋白质，原核系统是较好的选择。
T-a克隆说明书
pUCm T-载体试剂盒组成编号规格SK2211 1 µgSK2212 5 µg保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pUCm-T Vector是一种高效克隆PCR产物（T Cloning）的专用载体。
本载体由pUC系列载体改建而成，在pUC载体的多克隆位点处插入特殊的限制性内切酶识别位点，酶切后能在载体的3’端形成悬挂的“T”末端。
很多DNA 聚合酶在进行PCR扩增时会在PCR产物双链DNA每条链的3’端加上一个突出的碱基A。
这样，pUCm-T载体的两端就可以和PCR产物的两端进行正确的AT配对，在连接酶的催化下，就可以把PCR产物连接到pUCm-T载体中，形成含有目的片断的重组载体。
大大提高了3’末端A突出PCR产物的连接、克隆效率。
pUCm-T载体图谱及多克隆位点序列pSG-TS19载体试剂盒组成编号规格SK2221 1 µgSK2222 5 µg保存方法及注意事项该产品低温运输，-20°C保存，有效期为一年。
产品介绍pSG-TS19 Vector是用于克隆含有A末端PCR产物的理想载体。
该载体基于pUC19的T simple载体，与现行T载体相比，消除了多克隆位点区大多数酶切位点，避免载体上存在的位点和插入片段中设计的位点发生干扰。
在T突出两端设计两个Hin d III位点，可以用单一的酶Hin d III进行插入子鉴定，该位点的设计使得载体具有如下特点：A、对于有插入片段的载体，Hin d III酶切后将切下和插入片段大小一致的片段；B、对于掉T自连的载体，Hin d III不能切割；C、对于酶切不完全自连的载体，Hin d III酶切后掉下25 bp片段，大小可以在琼脂糖凝胶上分开。
由于Xcm I酶切不完全或者因为两端掉T的情况，载体自连所产生的转化子均为蓝斑，从而降低假阳性率。
插入位点两侧的距离经过优化，如使用M13通用引物进行测序，在获得良好的序列读取的同时，尽量减少载体序列残留。
基因定位常用的方法
基因定位常用的方法基因定位是指通过一系列方法和技术确认、标定和描述基因在染色体上的相对位置。
它对于研究基因的功能、结构和演化以及遗传病的诊断和治疗都至关重要。
下面将介绍几种常用的基因定位方法。
1.遗传连锁图谱法：遗传连锁图谱法是一种早期应用广泛的基因定位方法。
通过观察不同基因的遗传连锁关系，查看它们在染色体上的距离，从而确定基因的相对位置。
这种方法需要大量的家系结构和大规模的家系分析来确定基因的连锁关系。
2.连锁不平衡分析法：连锁不平衡指的是染色体上两个以上基因的组合在多个个体中的频率比预期的频率要高或者低。
通过分析连锁不平衡信息，可以确定基因的精确定位位置。
这种方法是通过分析大规模人群的基因型和表型数据来实现的。
3.瓶颈扩大法：瓶颈扩大法是基于起源研究的一种基因定位方法。
它假设一个繁衍历史上的能够产生其中一疾病相关基因变异的细胞个体群通过瓶颈效应限制了群体的大小，从而使得该变异在群体内被广泛扩大，进而形成基因浮游。
通过分析该基因浮游的遗传差异，可以获得基因的定位信息。
4.启动子活性测定法：启动子活性测定法是一种通过观察基因的启动子（调控基因转录的DNA区域）活性来确定基因定位的方法。
这种方法利用了启动子活性与基因的转录活性之间的关联。
通过测定基因的转录活性，可以间接确定其启动子的位置。
6.比较基因组分析法：比较基因组分析法是一种通过比较不同物种或相同物种不同个体的基因组序列来确定基因位置的方法。
通过分析基因组序列上的保守区域和变异区域，可以确定基因在染色体上的位置。
以上是一些常用的基因定位方法。
随着研究技术的不断进步和发展，基因定位方法也在不断更新和完善。
这些方法的应用不仅可以帮助我们更好地理解基因的功能和结构，还可以为人类遗传病的诊断和治疗提供重要的帮助。
siRNA的制备方法及各种方法优缺点分析
siRNA的制备方法及各种方法优缺点分析越来越多的研究人员开始采用小分子干扰RNA（small interfering RNAs，siRNAs)来抑制特定的哺乳动物基因表达。
siRNA是一种短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA 为靶目标降解特定的mRNA，这个过程就是RNA干扰途径（RNA interference pathway）。
RNAi的应用包括功能基因组学，药物靶筛选，细胞信号传导通路分析等等。
目前为止较为常用的5种制备siRNAs的方法包括·化学合成·体外转录·长片断dsRNAs经RNase III 类降解(e.g. Dicer, E. coli, RNase III)·siRNA表达载体或者病毒载体在细胞中表达siRNAs·PCR制备的siRNA表达框在细胞中表达前面3种方法包括体外制备siRNAs然后经过转染或者电转导入哺乳动物细胞后面两种方法则依赖能够表达siRNAs的DNA载体或者表达框转染到细胞中。
每种方法都有自己的优点和缺点。
哪种是最好的方法，其实取决于实验目的。
这里简单介绍这5种方法，优点和缺点，以及它们最适合的应用。
siRNA的设计除了方法3以外，其他的方法都在制备siRNA 前都需要单独设计siRNA序列。
关于怎样设计siRNA以及siRNA设计对siRNA功能的影响，尽管我们不断掌握越来越多有关设计原则的信息。
但这仍然不是精确的。
通常来说，每个目标序列设计3—4对siRNAs，在后面的实验中选择最有效的那个。
网上有提供免费的siRNA设计工具。
体外制备1.化学合成尽管化学合成是最贵的方法，但是却是最方便的——研究人员几乎不需要做什么工作。
包括Ambion和Qiagen公司都可以根据用户要求提供高质量的化学合成siRNA。
主要的缺点包括价格高，定制周期长，特别是有特殊需求的。
由于价格比其他方法高，为一个基因合成3—4对siRNAs 的成本就更高了，比较常见的做法是用其他方法筛选出最有效的序列再进行化学合成。
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接头 Ｐ Ｒ、交错热不对称 Ｐ Ｒ等 ，为克隆启动子提供 了更可靠，更合理 的方法。文章着重介绍 了几种启动子的克 Ｃ Ｃ
隆 方 法 ，分析 了 它们 的 优 缺 点 ，并展 望 了今后 的研 究前 景 。 关键 词 ：启 动 子 ；反 向 Ｐ Ｒ；锚 定 Ｐ Ｒ；交错 热 不对 称 Ｐ Ｒ Ｃ Ｃ Ｃ
重要。文章就近几年来克隆植物基因启动子的各种 方法 做一综 述 ，为启 动子分 离技 术 的应用提 供理 论
参考 。
Ｗａｇ 根据 Ｇ ｎ ａｋ中拟 南 芥基 因组序 列 中 ｎ等 ｅＢ ｎ
ａ ｌ 核 酮糖 一 ，５ 二磷 酸 羧 化 酶小 亚 基 ） 因的 ｔ Ａ（ ｓ １ 一 基
郝迪荻 ，赵 琳 ，陈李淼 ，李 文滨
（ 东北农业大学大豆生物学教 育部重点实验室，大豆研究所 ，东北农业大学农学院 ，哈尔滨 １０ ３ ５ ０ ０）
摘
要：基 因的表达调控 已成 为分子生物学研 究热点之 一。启 动子是基 因表达调控的重要顺式元件 ，启动子
的克隆对于研 究基 因表达调控 、构建基 因工程载体、表达 目的蛋白有着重要 的意 义。启动子克隆的方法很 多，从 常用的启动子 陷阱技术 筛选启动子到 Ｐ Ｒ方法的应用 ，基于 Ｐ Ｒ克隆启动子技术有 ：载体锚 定 Ｐ Ｒ、反向 Ｐ Ｒ、 Ｃ Ｃ Ｃ Ｃ
１ 启 动 子 克 隆 的几 种 方 法
１１ Ｐ Ｒ技 术克 隆启动 子 ． Ｃ
对 于序 列 已知 的启 动子 ，即根 据发 表 的基 因序
列 ，设 计 引 物 ，用 Ｐ Ｒ技 术 克 隆基 因 的启 动 子 。 Ｃ
由于 Ｐ Ｒ法简便快捷 ，近年来被较多应用于克隆 Ｃ
基 因启 动 子 。
ｂｏｏ ｙ ｉｌｇ ．Ｐｒ ｍＯ ｅ ｓ ａ ｍｐ ｔ ｔｃｓａｃｉｇ ｅｌ ０ ｔ ｒｉ ｎ ｉ ｏｒ ｉ— ｔ ｅｍｅ ｔｔ ｅ ｌｔ ｅ ｅ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｎ ｐａ ｔ ａｎ ｎ ｎ ｏ ｒ ｇｕａｅ ｇ ｎ ｘ ｒ ｓ ｉｎ ｉ ｌｎ ．Ｔｈ ｒ ｒ ｅｅ ａｅ ａ
第 ４ 卷 第 ３期 １
２１ ０ ０年 ３月
东
北
农
业
大
学
学
报
４１３：１ ４￣ ６ （） ５ １ ０
Ｍａ ．２ １ ｔ ００
Ｊ ｕ ａ ｆＮ０ ｔｅ ｓ Ａ ｃ ｌｕａ ｉｅｓｔ ｏ ｒ ｌｏ ｒｈ ａｔ ｎ ｕ ｔｒｌＵｎｖ ｒｉ ｙ
克 隆启 动 子 方 法 的 比较 及 应 用
ｗｅｒ ｓ ｕ ｓ ｄ ａ ｄ ａ ｐ ｏ ｐ ｃ ｓ ａ ｄ ｅ ｓ ｄ． ｅｄｉｃ ｓ ｅ ｎ ｒ ｓ ｅ ｔ ｗａ ｄ ｒ ｓ ｅ
Ｋｅ ｏ ｄ ： ｒ ｍｏ ｅ ； － ＣＲ； Ｐ ｙ ｗ ｒ ｓ ｐｏ ｔｒＩ Ｐ Ａ— ＣＲ； Ａ Ｌ Ｐ Ｔ Ｉ — ＣＲ
ห้องสมุดไป่ตู้
随着基 因工程 的发 展 ，常 常需 要 构建一 种能 高 水平表 达异 源蛋 白质 的表达 载体 。启 动子对 外源基 因 的表 达水 平 影 响很 大 ，是 Ｒ Ａ 聚合 酶 能够 识 别 Ｎ 并与其 结 合 、从 而起 始基 因转 录的一 段 Ｄ Ａ序列 ， Ｎ 是基 因工 程表达 载体 的重要 元件 。基 因启动 子 的克 隆 ，对研 究植 物基 因表达 调控 和构建 表达 载体 至关
中图分类号 ：Ｑ ｏ ５３
文献标 志码 ：Ａ
文章编号：ｌＯ — ３ ９ ２ Ｌ） ３ ０ ５ — ７ Ｏ ５ ９ ６ （Ｏ Ｏ ０ — １４ ０
Ｃｏ ａ ｉｏ ｎ ｐ ｌ ａ ｉ ｎ ｏ ｒ ｍｏ ｅ ｌ ｎ ｍｐ ｒ ｎ ａ ｄ ａ ｐ ｉ ｔ ｆ ｐ ｏ ｔ ｒ ｃｏ ｅ ｍｅ ｈ ｄ ／ Ａ ｉｕ Ｚ Ａ ｓ ｃ ｏ ｔｏ ＳＨ Ｏ Ｄ ｉ Ｈ Ｏ ｑ，
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ｂ ａｎ Ｒｅ ｅａ ｃｈ ｎｓｉ ｔ ｅ ｓ ｒ Ｉ ｔ ｕ ｅ，Ｃｏｌ ｅ ｏ ｒ ｌ ｒ ｔ ｌ ｆ Ａｇ ｉ ｔ ｅ，Ｎｏｒｈ ａｓ ｅｇ ｃｕ ｕ ｔ ｅ ｔ Ａｇｒ ｕｌ ａｌ ｉ ｔ ｃ ｕｒ Ｕｎｉｅｒ ｉ ｖ ｓｔ ｙ，Ｈａｒ ｎ ０ ０， ｂｉ １ ０３ ５