抗精子抗体的产生及检测原理
抗核抗体的检测方法及原理
抗核抗体的检测方法主要包括间接免疫荧光法、放射免疫法、ELISA测定法和免疫印迹测定法。
以下是这些方法的简要介绍和原理：
1.间接免疫荧光法：此方法是检测抗核抗体的常用方法之一。
原理是将待测标本与细胞底物片（如HEp-2细胞）的相应抗原进行反应，然后加入
荧光素标记的抗人免疫球蛋白抗体（通常为抗IgG抗体），形成抗原-抗体-荧光二抗的复合物。
通过荧光显微镜观察，可以判断待测标本中是否存在针对细胞相关抗原的自身抗体。
2.放射免疫法：此方法常用于检测抗DNA抗体。
原理是用同位素标记DNA，与被检血清中的抗DNA抗体结合，然后通过沉淀和对比沉淀物与上
清液中的放射活性，得到DNA的结合活性。
结合率高于一定值（通常为20%）则判断为阳性。
3.ELISA测定法：即酶联免疫吸附法，是一种常用的固相酶免疫测定方法。
原理是将抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在
固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗去，最后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。
4.免疫印迹测定法：此方法是将混合的抗原作为凝胶电泳分离，然后转印到硝酸纤维素的薄膜上，再用标记抗体进行检测和分析。
以上各种方法都有其特点和适用范围，可以根据实验需求和条件选择合适的方法进行检测。
精子抗体与不育.docx
精子抗体与不育据医院专家介绍：免疫性不育是因抗原抗体反应干扰了受孕过程造成的不育，其中较多见的是抗精子抗体导致的不育。
抗精子抗体在病理情况下可以存在于男性体内或女性体内，从而引起不孕不育。
据报道，低效价抗体不影响生育，而高效价（1:32）抗体可在生殖局部起着抗生育作用。
在男性体内有血-睾丸屏障可使精子与自身免疫系统隔离。
当此屏障作用因疾病或其他原因而受损时，精子或其可溶性抗原可刺激机体免疫系统产生抗自身精子的抗体（ASAB）。
ASAB可抑制精子产生，降低精子活动力及干扰精子与卵子的结合，从而造成男性不孕。
在女性生殖道有一系列酶，它们能降解精子的抗原性，使其不能刺激免疫系统发生免疫反应。
当这种酶系统缺陷或生殖道被破损时，可使进入的精子保持整的抗原性，而刺激机体产生ASAB。
ASAB可使精子在宫颈内凝集或制动。
男性自身免疫反应的产生有以下原因：1）睾丸、附睾或副性腺损伤、感染或发生梗阻时，血睾屏障遭到破坏，精液作为抗原便有机会暴露于自身免疫系统中。
2）精液中男性免疫抑制物的水平低下，降低了对精子抗原的保护作用。
3）免疫活性细胞突变以至对自身抗原产生反应。
男性自身免疫反应的结果，一方面是细胞免疫导致睾丸炎，引起无精子或少精子症。
另一方面产生精子凝集与精子制动抗体，分布在血浆及精浆中，降低了精子的存活率及活动力，在很大程度上降低了精液的质量，抑制精子附着及穿透卵子透明带，阻止精卵结合。
另外，抗精子抗体可作用于胚胎使其被吸收或造成流产，并从多方面干扰受精过程而导致不育。
女子宫颈粘液中存在抗精子抗体时，通过使精子凝集而阻碍其穿过粘液，损伤精子，增强巨噬细胞吞噬精子的功能，使精子不能进入输卵管而导致不孕。
这是由于性交时，精液通过受损的生殖器官进入女方体内引起的同种异体免疫反应造成的。
精子抗体检出率与生殖道感染有密切关系。
生殖道感染不仅可促使循环ASAB和局部ASAB的产生，而且生殖道局部对病原体产生的相应抗体能与精子表面抗原发生交叉免疫反应，因而影响生育力，在这种情况下对有泌尿生殖道感染者进行及时治疗是很重要的。
抗体检测的原理
抗体检测的原理抗体检测是一种常用的生物学技术，也是临床诊断和研究中不可或缺的一环。
它的原理是利用抗体与抗原之间的特异性结合来检测样品中的特定分子。
抗体检测已经广泛应用于疾病诊断、疾病预防、药物研发等领域，成为现代医学和生物学中不可或缺的技术手段之一。
在抗体检测中，抗原是被检测的分子，它可以是蛋白质、多肽、糖类、核酸等生物大分子，也可以是小分子化合物。
而抗体则是一种特异性结合抗原的蛋白质，它由免疫细胞产生，能够识别和结合与之对应的抗原。
抗体检测的基本原理是将样品与特异性抗体结合，通过检测抗体和抗原之间的相互作用来确定是否存在特定分子。
抗体检测可以分为直接检测和间接检测两种方法。
直接检测是将标记有荧光物质、酶、金颗粒等的抗体直接与待检样品中的抗原结合，通过检测标记物的信号来确定抗原的存在。
这种方法简单、快速，但需要使用特异性极高的抗体，且标记物的稳定性和敏感性也会影响检测结果。
间接检测则是先将样品与未标记的抗体结合，再加入标记有荧光物质、酶等的二抗或多抗，通过检测标记物的信号来确定抗原的存在。
这种方法需要使用两种或多种抗体，但标记物的稳定性和敏感性较高，可以检测低浓度的抗原。
抗体检测的灵敏度和特异性是影响检测结果的重要因素。
灵敏度是指检测方法能够检测到的最低浓度的抗原，而特异性是指检测方法能够区分不同的抗原。
抗体检测的灵敏度和特异性受多种因素的影响，如抗体的选择、标记物的稳定性和敏感性、样品的处理方法等。
在临床诊断中，抗体检测已经成为常用的诊断方法之一。
例如，血清学检测可以通过检测患者血清中的抗体来确定是否感染某种病原体，如病毒、细菌等。
另外，抗体检测还可以用于检测药物代谢产物、肿瘤标志物等。
在药物研发中，抗体检测也是非常重要的技术手段之一。
例如，可以通过检测药物与其靶点的结合情况来确定药物的活性和亲和力。
总之，抗体检测是一种重要的生物学技术，可以用于疾病诊断、疾病预防、药物研发等领域。
抗体检测的原理是利用抗体与抗原之间的特异性结合来检测样品中的特定分子。
抗体检测的原理
抗体检测的原理抗体检测是一种用于检测特定抗体（免疫球蛋白）的方法，可以帮助诊断某些疾病或疾病的病程。
以下是抗体检测的原理，简述其检测方法和应用。
一、原理抗体检测利用了免疫系统对抗外来物质的反应。
当人体暴露于某种外来病原体时，免疫系统会产生相应的抗体来抵御该病原体。
在抗体检测中，我们可以测量血液中的特定抗体，从而判断是否有某种感染或自身免疫疾病。
二、方法（一）ELISA法本方法是最常用的抗体检测方法。
它将需要检测的特定抗原固定在孔板上，加入标记有试剂的抗体去结合。
分析者可以在孔底角度上看到条纹颜色的变化，这个变化可以判断这个样本中是否有特定抗体存在。
（二）荧光免疫分析法荧光免疫分析法是一种基于荧光原理的抗体检测方法。
测试样本被加入进微孔板，然后添加一个标有荧光标记的抗体。
当样本中有特定抗体与该抗体结合时，则产生荧光信号，从而说明样本中存在目标抗体。
（三）侧流法（Lateral Flow Assay）侧流法是一种简单而适用的快速检测方法，适用于在田野等条件下的病原检测。
测试样本通过不同通道，在最后一个通道中可以灵敏地检测出目标抗体。
三、应用（一）传染病诊断抗体检测可以用于检测多种传染病，如乙型肝炎，艾滋病和结核病等。
（二）自身免疫疾病在自身免疫疾病如类风湿性关节炎和狼疮等，抗体检测可以帮助诊断和监测病情。
（三）药物监测使用某些药物可能会导致产生特定的抗体，抗体检测可用于检测这些抗体并跟踪药物治疗的有效性。
总的来说，抗体检测是一种简单而有效的检测方法，能够帮助鉴别感染病和自身免疫性疾病，以及药物治疗的有效性。
随着技术的不断发展，它将在未来的医疗诊断中发挥着越来越大的作用。
抗体的检测原理
抗体的检测原理
抗体的检测原理是一种常用的生物学技术，用于检测样本中是否存在特定的抗体。
其基本原理是利用抗体与特定抗原发生特异性结合的特性，通过一系列的实验步骤来验证抗体的存在。
首先，采集样本，例如血液或组织细胞，含有待检测抗体的样本被处理并制备成所需的样品。
接下来，将样品添加到试剂盒中，其中包含了特定抗原。
如果样品中存在待检测抗体，它们将与试剂盒中的抗原发生特异性结合。
然后，为了检测抗体的结合，通常使用标记物来标记抗体-抗原结合物。
这些标记物可以是荧光染料、酶或放射性同位素。
标记物的选择取决于具体的检测方法。
在完成标记物的添加后，需要进行洗涤步骤来去除未结合的物质。
然后，根据具体的标记物选择，可以使用特定的仪器或试剂来测量标记物的信号。
例如，荧光标记物可以通过荧光染色仪来检测，酶标记物可以通过酶活性试剂来测量。
最后，通过比较测量结果与已知阳性和阴性对照样品的标准，可以确定待检测样品中是否存在特定的抗体。
阳性样品中将产生特定的信号，而阴性样品中则不会产生相应的信号。
总之，抗体的检测原理是基于抗体与特定抗原发生结合的特异性，通过标记物的添加和信号测量来确定待检测样品中是否存在特定的抗体。
这一技术在医学诊断、生物学研究和疾病监测等领域具有广泛的应用。
第29章 生殖免疫及其免疫检测
一、不孕症的生殖免疫学检测
不孕症：指婚后未避孕，同居2年未曾受孕者。抗精 子抗体，抗透明带抗体是其中重要的免疫性因素。
一、不孕症的生殖免疫学检测
（一）抗精子抗体（AsAb） 1.抗精子抗体产生机制： （1）男性抗精子抗体：自身抗体； （2）女性抗精子抗体：同种异体抗体； 2.抗精子抗体类型： （1）生殖道分泌物中主要为分泌型IgA，血清中以 IgG和IgM为主； （2）临床上通常检测的是血清中的IgG。
（4）酶联免疫吸附法（ ELISA） 是不孕不育的一项初筛试验； 敏感性高，重复性好。
人抗精子抗体ELISA试剂盒
一、不孕症的生殖免疫学检测
（二）抗透明带抗体（AzpAb） 1. AzpAb产生机制 透明带具有抗原性，感染或育龄妇女排卵过程中 透明带反复破裂和吸收，机体处于抗原刺激的敏感状 态，产生AzpAb；
支原体示意图
三、生殖系感染的免疫学检测
3.检测方法 (1) 病原培养 采用间接培养法 (2) 血清学试验 1) 特异性血清学检测方法： 补体结合试验 2) 非特异性血清学检测方 法：肺炎支原体冷凝集试验等
支原体培养基
三、生殖系感染的免疫学检测
(3) 抗原检测 ELISA、间接免疫荧光法、反向间接血凝法等直接 检测分泌物和体液中支原体抗原，具有较高的特异性和 灵敏度。
（一）封闭抗体（blocking antibodies）
1. 定义：是人类白细胞抗（HLA）、滋养层及淋巴 细胞交叉反应抗原（TLX）等刺激母体免疫系统所产生的 一类IgG型抗体。 2. 分类：①抗HLA-DR抗 体②抗TLX抗体； ③抗Fc
受体抗体； ④抗基因抗体； ⑤抗冷B细胞抗体。
二、反复自然流产的免疫学检测
内 分 泌 异 常
抗精子抗体正常值
抗精子抗体正常值【导读】在不孕不育症中，男女都有可能出现抗精子抗体阳性。
一般根据检测的数据来衡量判断病症，是否在抗精子抗体正常值之间将作为判断的依据。
男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，从而致不孕。
抗精子抗体检测结果超出抗精子抗体正常值是怎么回事？抗精子抗体正常值，也是平时所说的参考值，在0-75之前，具体仍需医生给出指导意见。
抗精子抗体混合凝集≤10%，判为阴性；10%，判为阳性；≥40%，判为强阳性，AsAb可以引起的免疫性不育所以有检查的必要性。
如果是阴性的结果，不必担心。
25%～30%不育症病人的抗精子抗体试验阳性。
但本试验还需结合精液量、精子计数、精子活动力、精子形态等生殖功能的检查，才能有效判断男性生育能力。
抗精子抗体阴性是什么意思去进行抗精子抗体检查了？结果显示为阴性？恭喜，这是正常的！抗精子抗体阴性是免疫性不孕不育的一种检测结果，（-）代表是阴性，那是正常的情况，表明体内不存在抗精子抗体，用于不孕不育病因的筛查诊断。
反之，如果呈（+）代表是阳性，及早治疗是关键。
抗精子抗体阴性，说明体内不存在抗精子抗体，用于排除不孕不育的致病病因。
因此，不孕不育患者需及早检查明确不孕不育的其它原因。
抗精子抗体（AsAb）是一个复杂的病理产物，男女均可罹患，其确切原因尚未完全明了。
男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，而致不孕。
抗精子抗体阳性是什么意思听到很多不孕事件的发生的原因是“抗精子抗体阳性”，抗精子抗体阳性究竟是什么意思呢？抗精子抗体阳性，它是由于血睾屏障被理化及生物因素破坏后，在精子抗原漏出的同时，单核吞噬细胞进入睾丸和附睾，吞噬精子，并把精子抗原传递给T或B淋巴细胞，产生体液和细胞免疫应答，从而产生抗精子自身免疫。
男性的精子、精浆，对女性来说皆属特异性抗原，接触到血液后，男女均可引起免疫反应，产生相应的抗体，阻碍精子与卵子结合，而致不孕。
抗体检测的应用原理是
抗体检测的应用原理是1. 什么是抗体检测抗体检测是一种用于检测目标物质（例如病原体、药物、蛋白等）存在与否的方法。
它基于免疫学原理，利用特异性抗体与目标物质的相互作用来进行检测和诊断。
2. 抗体的结构与功能抗体是由免疫系统产生的一种蛋白质，具有特异性结合目标物质的能力。
它是由两个重链和两个轻链组成的Y型分子，其中重链和轻链之间通过二硫键连接。
抗体有多种功能，包括中和病原体、激活免疫细胞、调节免疫反应等。
其中最重要的功能是其与目标物质的特异性结合。
3. 抗体检测的原理抗体检测的原理基于抗原-抗体反应。
当目标物质存在时，与其相关的抗原会刺激免疫系统产生特异性抗体。
利用这些特异性抗体，可以对目标物质进行定量或定性分析。
抗体检测通常分为直接检测和间接检测两种方法。
3.1 直接抗体检测直接抗体检测是指将标记有特异性抗体的试剂直接与目标物质结合。
常用的标记物包括荧光染料、酶和放射性同位素等。
当目标物质存在时，与其特异性结合的抗体-标记物复合物可以通过检测标记物的信号来判断目标物质的存在与数量。
3.2 间接抗体检测间接抗体检测是指利用已经与目标物质结合的特异性抗体来检测目标物质的存在。
这种方法常用于检测抗体的产生，或者作为诊断某些疾病的方法。
在间接抗体检测中，首先将已知与目标物质结合的抗体与样本中的目标物质结合。
然后，添加与第一抗体结合的二抗，二抗通常与酶或荧光染料结合。
最后，通过检测酶或荧光染料的信号来确定目标物质的存在。
4. 抗体检测的应用抗体检测广泛应用于医学研究和临床诊断，具有许多重要的应用领域。
4.1 感染病原体的检测抗体检测可以用于检测传染病的病原体，如病毒、细菌和寄生虫等。
通过检测特异性抗体的存在，可以确定感染的病原体类型和数量，以便进行治疗和控制传播。
4.2 肿瘤标记物的检测抗体检测还可以用于检测肿瘤标记物，这是一种在肿瘤细胞或血液中存在的特定蛋白质。
通过检测肿瘤标记物的水平变化，可以帮助早期诊断肿瘤，评估治疗效果。
精浆生化检测与男性不育
（三）、精液检查
精液检查是诊断男性不育最基础和最重要的检查项目
正常精液标准（WHO 第五版） ———————————————————————————————— 体积 ≥2.0ml PH ≥7.2 精子密度 ≥15×106/ml 精子总数 ≥40 ×106/一次射精 活力 前向运动精子≥32% 精子形态 严格标准下正常形态的精子≥4% 精子活率 ≥50%的精子存活 白细胞 <1×106/ml 免疫珠实验（IBT） 活动精子结合免疫珠<20% 混合抗球蛋白反应（MAR） <50%精子有凝集 ———————————————————————————————— ﹡根据Kruger和menkfeld标准。
浙江大学医学院附属妇产科医院
现状
二、男性不育的病因
男性不育
睾丸前因素
睾丸因素
睾丸后因素
下丘脑疾病
垂体疾病
内源性或外源 性激素异常
先天性异常
外源性损害
全身疾病
输精管道梗阻
免疫因素
性功能障碍
Kallmann LH或FSH缺乏
垂体功能不足 高催乳素血症
雌、雄激素过多 糖皮质激素过多 甲状腺功能异常
染色体异常 隐睾 雄激素抵抗
如何合理诊断及治疗 虽然诊断手段众多，但仍 然有75%的患者无法明 确诊断。 合理利用目前的手段诊断 男性不育是一个难题。 重点：精浆生化分析
浙江大学医学院附属妇产科医院
性功能及射精功能 正常 抗体包裹的精子 阴性 精子的各参数 异常
异常 阳性 正常 正常 异常 是 医源性因素 是 是 是 是 是 是 是
保留中性α-葡糖苷酶活性，后者分解底物生成终
产物对硝基酚，对硝基酚在405nm波长有最大
精液常规检查
稠性很高，4.黏稠度 【检测原理】 （1）直接玻棒法：将玻璃棒插入精液标本，提棒 时可拉起黏液丝。精液黏稠度分为3级：①Ⅰ级： 30 min精液基本液化，玻璃棒提拉精液呈丝状黏 稠度。②Ⅱ级：60 min精液不液化，玻璃棒提拉 可见粗大黏稠丝，涂片有较明显黏稠感。③Ⅲ级： 24h精液不液化，难以用玻璃棒提拉起精液，黏涂 片困难。
3.精子形态 （1）湿片法：精子计数后，用高倍镜或相差显微镜 （600×）直接检查精子形态。 （2）染色法：将液化精液涂成薄片，经干燥、固定后作 H-E、吉姆萨、改良巴氏、勃力-利染色(Bryan-Leishman staining)和肖尔染色（Shorr staining）等。油镜下观察计数 200个精子，报告形态正常和异常的精子百分率。 现已有预先固定染料的商品化载玻片，在载玻片上直接滴 加5～10ul液化精液，加盖玻片，数分钟后精子着色，可以 清楚地显示精子形态结构。 正常精子形态（图7-9、图7-10）：①头部呈椭圆形，长约 4.0～5.0μm，宽约2.5～3.5 μm/顶体的界限清
（3）精子存活率（sperm motility rate）：用活精 子所占比例表示。常用染色法：用伊红Y或台盼蓝 等染料对液化精液染色，在高倍镜下观察200个精 子，以不着色精子的百分率报告。通常，精子死 亡后，细胞膜完整性受损，失去屏障功能，很容 易着色。当精子活动率低于50%时，应检查精子 存活率。 【方法学评价】 湿片法和干片法均简单，适合临 床应用。
5.酸碱度 【检测原理】 用精密pH计测定液化精液。 【方法学评价】 pH试纸法简便，pH计法准确。 【质量保证】 测定精液pH值应在射精1h内完成，精液放 置时间过长会影响测定结果。细菌污染可以使精液pH呈碱 性。 【参考值】 7.2～8.0（平均7.8） 【临床意义】 ①pH<7.0并有精液减少，可能是输精管道 阻塞、射精管和精囊腺缺如或发育不良所致。②pH>8.0， 常见于急性前列腺炎、精囊炎或附睾炎，可能是精囊腺分 泌过多或前列腺分泌过少所致。
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抗精子抗体的产生及检测原理
抗精子抗体（antispermatozoa antibody, AsAb）既可在男性又可在女性体内产生。
男性产生的主要机制是血睾屏障因疾病或创伤受损，使隐蔽的精子或其可溶性膜抗原溢出，
刺激机体免疫系统产生抗精子自身抗体。抗精子抗体的产生可以抑制精子的活动和受精，造
成男性不育。
女性产生的主要机制是正常生殖道中能降解精子抗原的酶系统缺陷，致使进入的精子抗原得
以保持完整，而作为同种异体抗原刺激女性免疫系统产生抗精子抗体影响生育。
抗精子抗体按对精子的作用分为凝集性、制动性、和结合型三类。据这些特点设计了多种方
法，目前常用的方法有：
1. 试管－玻片凝集试验测定抗精子抗体：
原理：精子悬液与待测血清在缓冲盐水中反应，待测血清中的AsAb与精子表面抗原结合，
使精子出现头对头，尾对尾或头对尾的凝集现象。
2. 精子制动试验测定抗精子抗体：
原理：在补体存在的条件下，精子制动抗体与精子表面抗原反应，使补体火花，导致精子失
去活动能力。
3. ELISA法测抗体：
原理：以特异性精子可溶性抗原包被反应板微孔，待测血清中如存在AsAb，则可与之结合，
再加入酶标抗人IgG抗体和酶底物/色原溶液，出现呈色反应。呈色强度可反应AsAb的水
平。
4. 间接免疫荧光法测定抗精子抗体：
原理：将正常人精子充分洗涤后，包被于载玻片上，依次加待测血清河异硫氰酸荧光素标记
得抗人IgG、IgA、IgM多价或单价抗体，反应后洗涤，置荧光显微镜下观察。
5. 免疫珠试验测定抗精子抗体：
原理：免疫珠试验是WHO推荐用于检测精子表面IgG、IgA、IgM类抗精子抗体（直接免
疫珠试验）或检测待测血清（精浆，宫颈粘液）中抗精子抗体（间接免疫珠试验）的一种方
法。直接法是将待测精子悬液与包被有兔抗人Ig（总免疫球蛋白）或包被有抗人IgG、抗人
IgA、抗人IgM的聚丙烯酰胺微珠悬液混合，如精子表面有抗精子抗体，则可粘附相应的免
疫珠。包被有兔抗人Ig多价抗体的免疫珠可用于筛查试验，而包被有抗Ig不同类别糠秕的
免疫珠则可用于精子表面抗体的分类。间接法是将待测血清与正常精子悬液和免疫珠悬液混
合，如待测血清中有抗精子抗体，可与精子结合，精子即可黏附免疫珠。用包被的抗人总
Ig或包被抗人IgG、IgA、IgM抗体的免疫珠试验，可达到待测血清中AsAb筛查和分类的
目的。