芍药甘草汤有效组分对慢性坐骨神经结扎大鼠IL-6、IL-1β、TNF-α的影响_郑冬明

中华中医药学刊芍药甘草汤有效组分对慢性坐骨神经结扎大鼠IL －6、IL －1β、TNF －α的影响郑冬明1，张娟1，王锐1，吕晨1，郭小文1，王海娜2（1．浙江省中医院，浙江杭州310006；2．浙江中医药大学，浙江杭州310053）摘要：目的:观察芍药甘草汤有效组分(SGM )对慢性压迫性损伤(CCI )大鼠机械痛敏和热痛敏的影响，并研究SGM 对CCI 大鼠脊髓IL －6、IL －1β、TNF －α的影响。

方法:所有大鼠用机械缩足反射阈值(MWT )和热缩足潜伏期(TWL )来分别评价大鼠机械痛敏和热痛敏。

SD 大鼠随机分为5组，即假手术组(Sham 组)、CCI 组和空白组，生理盐水组(NS 组)和芍药甘草汤组(SGM 组)，各组分别在术前和术后第1、3和7d 分别测定MWT 和TWL ，手术结束后提取大鼠脊髓后角测定IL －6、IL －1β、TNF －α的水平。

结果:和空白组及Sham 组相比，CCI 组和NS 组术后MWT 及TWL 均明显下降(P ＜0．01)。

SGM 组与NS 组相比，MWT 和TWL 在术后1、3和7d 均明显增加(P ＜0．01)。

和空白组和Sham 组相比，CCI 组和NS 组IL －6、IL －1β、TNF －α的水平明显增加(P ＜0．01)。

和NS 组比较，SGM 组IL －6、IL －1β、TNF －α的水平明显降低(P ＜0．01)。

结论:SGM 能抑制CCI 大鼠的机械痛敏和热痛敏作用，其镇痛作用可能和减少IL －6、IL －1β、TNF －α的水平有关。

关键词：芍药;甘草;神经病理性疼痛中图分类号：R285．5文献标志码：A文章编号：1673－7717(2013)04－0801－03Administration of the Influence of Shaoyao Gancao Decoction Extracts on IL －6IL －1βand TNF －αin the Chronic Constriction Injury Rat Model of Neuropathic PainZHENG Dongming 1，ZHANG Juan 1，WANG Rui 1，LU Chen 1，GUO Xiaowen 1，WANG Haina 2（1．Zhejiang Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine ，Hangzhou 310006，Zhejiang ，China ；2．Zhejiang Chinese Medical University ，Hangzhou 310006，Zhejiang ，China ）Abstract ：Objective ：To observe the influence of the extracts of Shaoyao Gancao decoction （SGM ）on mechanical allo-dynia and heat hyperalgesia induced by chronic constriction injury （CCI ）of the sciatic nerve in rats and study the effect and the changes of IL －6，IL －1βand TNF －α．Methods ：Mechanical allodynia and heat hyperalgesia were evaluated by mechanical withdrawal threshold （MWT ）and thermalwithdrawal latency （TWL ）respectively．Rats were divided randomly into five groups ：NS group ，sham group ，CCI group ，SGM group and control group．As the treatment groups ，normal saline （2μL ）and SGM （120mg /kg ）were orally administered for 7day after surgery．The TWL and MWT were measured before surgery and on days 1，3and 7after surgery．The levels of IL －6，IL －1βand TNF －αin spinal dorsal horn in rats were measured after surgery．Results ：Compared to control and sham groups ，rats with CCI had significantly decreased PWL and PWT from the first day after surgery to the end of this study （P ＜0．01）．SGM group had evidently increased the MWT and TWL （P ＜0．01）．Compared to control and sham groups ，rats with CCI had significantly increased IL －6，IL －1βand TNF －α（P ＜0．01），SGM group had evidently decreased IL －6，IL －1βand TNF －αin comparison to NS group （P ＜0．01）．Conclusion ：SGM oral administeration can evidently increase the MWT and TWL of CCI rats ．The decreases of IL －6，IL －1βand TNF －αmay be related to the analgesia of SGM．Key words ：Shayao ；Gancao ；neuropathic pain 收稿日期：2012－11－11基金项目：浙江省中医药科技计划项目（2009YA005）作者简介：郑冬明（1971－），男，江西金溪人，主治医师，硕士研究生，研究方向：中西医结合治疗疼痛和临床麻醉工作。

芍药甘草汤方出自《伤寒论》，由芍药和甘草二药组成。

国内外研究已证实本方具有明显的镇痛和抗炎等作用。

本方药味虽少，却具多种配伍作用。

除酸甘化阴、用补阴血和柔肝益脾外，该方还有缓急止痛的功效。

临床上用芍药甘草汤治疗各种神经病理性疼痛（neuropathic pain ，NP ），如糖尿病后神经病变、三叉神经痛和带状疱疹后神经痛等取得良效。

本课题研究组发现芍药甘草有协同作用，108中华中医药学刊以比例为3ʒ1时为作用最佳（文章待发表），故选取该比例作为本实验用药。

炎性细胞因子IL－1β、IL－6、TNF－α与慢性炎症性痛密切相关，，这些细胞因子的重要作用在不同的神经源性疼痛动物模型中都得到了证实，本实验通过研究芍药甘草汤有效组分对慢性坐骨神经结扎大鼠的免疫细胞因子IL－1β、IL－6、TNF－α影响情况，以进一步明确其镇痛的可能机制。

1材料1．1动物健康雄性SD大鼠，体重（200ʃ10）g，动物许可证号：SCXK（沪）2008－0016，由浙江中医药大学动物实验中心提供。

1．2试剂白芍和甘草购自浙江，由浙江中医药大学中药制剂室许家鸾主任鉴定，白芍（Radix Paeonia Alba）经鉴定为毛莨科植物芍药（Paeonia Lactiflora Pall）的干燥根。

甘草（RadixGlycyrrhizae）经鉴定为豆科植物（Glycyrrhiza UralensisFisch）的干燥根及根茎。

芍药甘草汤有效组分（SGM）为褐黄色粉末，由芍药：甘草以3ʒ1组成，采用水提后大孔树脂纯化制备，批号：010210，1g相当于生药12g。

以120mg/kg给予（参照前一部分实验，相当于每日成人的推荐剂量）。

Taq DNA聚合酶、琼脂糖、Trizol、逆转录试剂盒购买自日本Takara公司。

引物为上海生工生物制品有限公司产品。

1．3设备大鼠白细胞介素－1β（iL－1β）酶联免疫检测试剂盒（R＆D公司），大鼠白细胞介素－6（iL－6）酶联免疫检测试剂盒（R＆D公司），大鼠肿瘤坏死因子α（TNF－α）酶联免疫检测试剂盒（R＆D公司），蒸馏水；Bio－TekELX8000全自动酶标仪，37度恒温箱，微量移液器（京君龙实验仪器北京有限公司），以及小试管、离心管、玻璃器皿、吸水纸等。

2方法2．1坐骨神经慢性压迫损伤（chronic constriction injury，CCI）模型的建立参照Bennett等方法［1］建立CCI模型。

大鼠在戊巴比妥钠麻醉下，消毒大鼠的右下肢，于股后暴露右侧坐骨神经主干，在接近其分叉之前用四根320的铬制羊肠线间隔1mm进行松结扎，要求不阻断神经血供，然后逐层缝合切口。

假手术组仅切开暴露并分离坐骨神经不结扎，然后进行缝合。

2．2动物分组及给药SD大鼠随机分为5组，即空白组；假手术组（Sham组）；CCI组，生理盐水组（NS组），芍药甘草汤组（SGM组）。

NS和SGM组于模型成功建立后第一天起给予0．9%生理盐水SGM120mg/kg直至术后第7d。

2．3行为学测定用von Frey细丝测定大鼠的机械性缩足反射阈值（me-chanical withdrawal threshold，MWT）和热辐射法测定大鼠热缩足潜伏期（thermal withdrawal latency，TWL）来分别评价大鼠机械痛敏和热痛敏。

所有各组大鼠在手术前两天测定基础痛阈，并在术后1、3和7d分别测定MWT和TWL。

2．3．1MWT的测定MWT的测定方法是置大鼠于机械测痛仪的有机玻璃箱中（22cmˑ12cmˑ22cm），0．5cmˑ0．5cm孔径的铁丝网，实验之前适应15min，以不同折力的Von Frey细丝分别刺激大鼠足底，观察缩足反应，大鼠在折力达到一定值时，足底移开Von Frey针出现快速的缩足反应，此时的折力记录为缩足反射阈值，每次测量3次，每次测量间隔1min，求平均值代表痛阈。

待大鼠反应完全消失后再给下一次刺激。

2．3．2TWL的测定TWL的测定用辐射热痛觉测试仪的聚光光源照射其足底部，记录由照射到大鼠缩脚的时间作为其TWL，单位为秒（s）。