五种常用菌-抑菌活性的测定
五种栽培植物上细菌病害的病原菌鉴定及室内药剂筛选
内容摘要
综合以上结果，我们可以得出以下结论：Paenibacillus polymyxa是一种具 有生防潜力的人参病害生防细菌，其通过产生抗菌肽和诱导人参抗性相关酶系来 抑制病害的发生。这一发现为今后开发高效、环保型人参病害生物防治制剂提供 了理论依据。
内容摘要
然而，本研究仍存在一定的局限性。首先，在筛选生防细菌过程中，我们仅 了Paenibacillus polymyxa一种生防细菌，未来研究可以进一步发掘其他具有 生防潜力的人参病害生防细菌。其次，在实验过程中，我们仅针对 Paenibacillus polymyxa的抗菌物质和抗性诱导机制进行了初步研究，其具体 作用机制仍有待深入研究。
内容摘要
综上所述，本研究为人参病害的生物防治提供了一定的理论支持。在今后的 研究中，我们将进一步发掘其他具有生防潜力的人参病害生防细菌，并深入探讨 其作用机制，为实现人参产业的可持续发展提供更多有益的指导。
烟草秸秆中产纤维素酶细菌的筛 选、鉴定及酶活测定
烟草秸秆中产纤维素酶细菌的筛选、鉴定及酶活测定
1、待测药剂：选择了5种具有不 同作用机制的杀菌剂。
1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
2、实验流程：首先制备了细菌悬浮液，然后将待测药剂与细菌悬浮液混合， 在培养皿中培养，并设置空白对照。每个处理重复三次。
1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
3、数据分析：通过计数和比较不同处理组和对照组的存活细菌数量，计算各 药剂对细菌的抑制率。
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1、待测药剂：选择了5种具有不同作用机制的杀菌剂。
经过室内药剂筛选实验，发现5种杀菌剂对不同细菌病害的防治效果存在差异。 其中，某含铜杀菌剂对假单胞杆菌属细菌效果显著，而某氨基糖苷类抗生素对黄 单胞杆菌属细菌防治效果较好。此外，某季铵盐类杀菌剂对两种细菌均有较好的 防治效果。
银杏提取物抑菌效果的研究
黑龙江农业科学2008(1):25～26 Heilongjiang Agricultural Sciences生物技术 黑龙江农业科学25 银杏提取物抑菌效果的研究曲晓华,辛玉峰(曲阜师范大学生命科学学院,曲阜273165)摘要:测定了不同浓度的银杏叶提取物对五种常见菌的抑菌活性,研究了不同的p H 条件和热处理对抑菌活性的影响。
结果表明:随着银杏叶提取物浓度的增加,其抗菌活性也显著增强;细菌的最低抑菌浓度为4%,霉菌的最低抑菌浓度为6%;银杏叶提取物的活性物质具有热稳定性,高温短时间加热不影响其抗菌活性;在p H 为7的条件下,抗菌活性最强。
关键词:银杏叶提取物;抑菌活性;热稳定性中图分类号:S792.95.01 文献标识码:A 文章编号:100222767(2008)0120025202Study on Anti 2microbial Activity of the Extract of Ginkgo bilobaQU Xiao 2hua ,XIN Yu 2feng(Life Science College ,Quf u Normal U niversity ,Quf u 273165)Abstract :The anti 2microbial activities of the extract of G inkgo biloba (EGb )were assayed with the different con 2centration ,the effects of p H and heat treatment on anti 2microbial activity of EGb were also studied.The results showed :With the increase of the concentration of EGb ,the anti 2microbial activity increased significantly.The minimal inhibition concentrations (MIC )were 4%against bacteria and 6%against f ungi.The anti 2microbial activ 2ity of EGb was characterized by its heat stable ability and high temperature did not effect on its anti 2microbial ac 2tivity.When under the condition of p H equaled to 7,the anti 2microobial activity reached the highest level.K ey w ords :extract of gink go biloba (EGb );anti 2microbial activity ;heat stable ability收稿日期:2007206230基金项目:曲阜师范大学科研启动基金资助项目。
肠道益生菌体外抑菌活性的研究
抑菌剂效力测定
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一、概述
抑菌剂效力检查法系用于测定灭菌、非灭菌制剂中抑菌剂的活性，以 评价最终产品的抑菌效力，同时也可用于指导生产企业在制剂研发阶 段抑菌剂的确定。
如果药物本身不含有充分的抗菌活性，那么应根据制剂特性（如水溶 液制剂）添加适宜的抑菌剂，以防止制剂在正常储存和使用过程中可 能发生微生物污染和大量繁殖尤其多剂量包装的制剂，避免因药物微 生物污染及对患者造成伤害。
抑菌剂效力测定
举例
1、氯化钠注射液、碳酸氢钠注射液不含抑菌剂加入菌从初始到 6h就开始无限增加，不具抑菌力，抗病毒口服液从初始到24 h对 数值无变化，72h后明显降低，具一定的抑菌力。
2、呋麻滴鼻液、硫糖铝混悬液、阿昔洛韦滴眼液、鲸脂滴耳液、 洁尔阴洗液从初始值到7天后计算值大于1.0 lg降低值，从初始值 到14天后计算值大于3.0 lg,具较强的抑菌效力。
取白色念珠菌、黑曲霉孢子各50～100cfu，分别注入无菌平皿中， 立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿， 混匀，凝固，置20～25℃培养72小时，计数；
同时，用对应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。
结果判定
被检培养基的菌落数与对照培养基菌落数相比大于70%，菌落 形态大小应与对照培养基上的菌落一致。判该培养基的适用性 检查符合规定。
菌液的制备同控制菌培养基适用性检查
培养基的适用性检查
适用性检查
取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌各50～100cfu，分 别注入无菌平皿中，立即倾注胰酷胨大豆琼脂培养基，每株试验菌 平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数；
抗菌抗病毒常用实验研究方法
抗菌抗病毒常用实验研究方法细菌、病毒性疾病是目前国内外流行的主要传染病,尤其是近两年来,由冠状病毒引起的SARS及由流感病毒引起的禽流感给动物及人类带来的严重危害,是人所共知的"由于各种疫苗的不断出现,虽然一些细菌、病毒病已得到了有效的控制,但是其治疗尚无有效的解决方法因此研制高效、低毒的新型中药抗菌、抗病毒制剂已成为巫待解决的问题。
1、常用的抗菌方法1、1稀释法1、1、1试管稀释法培养基内抗生素的含量按几何级数稀释并接种适量的细菌，经孵育后，观察能引起抑菌作用最低抗生素浓度，称最低抑菌浓度(MIC)为该菌对药物的敏感度。
稀释法所获得的结果比较准确，常被用作校正其他方法的标准。
如以下黄贝贝等的青钱柳抗菌作用的实验研究和黄利权等的火绒草的抗菌活性研究的实验方法:1、应用试管稀释法,测定青钱柳提取物对试验菌的抑菌效果,检验不同浓度下青钱柳提取物对细菌、霉菌的抗菌作用。
结果:青钱柳提取物在体外对金黄色葡萄球菌、乙型溶血性链球菌等革兰氏阳性菌具有较强的抗菌作用;而对大肠埃希氏菌、铜绿假单孢菌等革兰氏阴性菌的抗菌作用不明显;对黄曲霉、烟曲霉等霉菌的抗菌作用不明显[1]。
2、采用试管稀释法,分别测定了火绒草水煎液、水提醇沉液、醇提物、醇提石油醚部分、醇提乙酸乙酯部分、醇提正丁醇部分、醇提水溶部分等7种提取物对大肠杆菌C83882、大肠杆菌C83903、大肠杆菌C83914、沙门氏菌C79-20、金黄色葡萄球菌Newbould S-305、金黄色葡萄球菌临床分离株等6株病原菌的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。
试验结果表明,火绒草醇提物及其石油醚部分和乙酸乙酯部分对两种金黄色葡萄球菌具有较强的抑制作用,其MIC为0114 mg/ml生药浓度,MBC为0127 mg/ml生药浓度,而其它部分对金黄色葡萄球菌的抑制作用较弱。
火绒草醇提正丁醇部分和水溶部分对3株大肠杆菌和1株沙门氏菌具有较强的抑制作用,其MIC为2170 mg/ml生药浓度,MBC为2170 mg/ml 生药浓度,显示了较强的抗菌活性[2]。
抑菌圈实验报告
一、实验目的1. 了解抑菌圈实验的基本原理和操作步骤。
2. 通过抑菌圈实验，探究不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。
3. 掌握抑菌圈直径的测量方法，并分析抗生素的抑菌活性。
二、实验原理抑菌圈实验是微生物学中常用的一种实验方法，用于测定抗生素对细菌的抑菌效果。
实验原理是：将含有抗生素的纸片放置在已接种有细菌的琼脂平板上，抗生素会通过扩散作用渗透到琼脂中，抑制细菌的生长，形成透明圈，即抑菌圈。
抑菌圈的大小可以反映抗生素的抑菌活性。
三、实验材料与仪器1. 材料：金黄色葡萄球菌、青霉素、链霉素、头孢噻肟钠、肉汤培养基、琼脂、无菌生理盐水、无菌棉签、无菌镊子、无菌培养皿、无菌滤纸、酒精灯、放大镜等。
2. 仪器：恒温培养箱、天平、电子显微镜、显微镜等。
四、实验方法1. 制备菌悬液：将金黄色葡萄球菌接种于肉汤培养基中，37℃恒温培养24小时，用无菌生理盐水调整菌悬液浓度为1×10^8 CFU/mL。
2. 准备平板：将熔化的琼脂倒入培养皿中，待凝固后，用无菌棉签将菌悬液均匀涂布于平板表面。
3. 制备抑菌圈：将含有不同抗生素的纸片分别放置于平板表面，用无菌镊子轻轻按压使其与琼脂表面紧密接触。
4. 培养平板：将平板倒置放入恒温培养箱中，37℃培养24小时。
5. 测量抑菌圈直径：用放大镜观察平板，用尺子测量抑菌圈的直径，取平均值。
五、实验结果与分析1. 实验结果：实验结果显示，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，抑菌圈直径分别为15mm、12mm、10mm；而其他抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果较差。
2. 结果分析：抑菌圈直径越大，说明抗生素的抑菌活性越强。
根据实验结果，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌的抑菌活性较强，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。
六、实验结论通过抑菌圈实验，我们成功探究了不同抗生素对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。
实验结果表明，青霉素、链霉素、头孢噻肟钠对金黄色葡萄球菌具有较强的抑菌作用，可作为治疗金黄色葡萄球菌感染的首选抗生素。
细菌素抗菌活性的检测
（1）排除有机酸的影响将发酵液在4000r/min下离心20min，除菌体。
取上清液，调pH至5.0，排除有机酸干扰。
旋转蒸发浓缩10倍后，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性（2）排除过氧化氢的影响将过氧化氢酶溶解在50mmol/L pH 7.0的磷酸缓冲液中配成母液，加入到排除菌体和有机酸后的发酵液中，使过氧化氢酶的终浓度为5mg/mL，置于37℃的水浴中温浴2h后取出，以不用过氧化氢酶处理的发酵液为空白对照，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌的抑菌活性。
（3）抑菌物质的蛋白质本质的确定把胰蛋白酶、胃蛋白酶和蛋白酶K分别溶解在3mmol/L pH 7.5的磷酸缓冲液中配成母液，分别加入到排除菌体、有机酸和过氧化氢作用后的发酵液中，使它们的终浓度为0.5 mg/mL，在37℃水浴中温浴2h后取出，以不用蛋白酶处理的发酵液为空白对照，采用琼脂扩散法，测定对金黄色葡萄球菌的抑菌活性[9]。
细菌素抗菌活性的检测细菌素抗菌活性的检测采用牛津杯法。
双碟的制备：取直径90 mm 的培养皿，注入灭菌的营养琼脂（1.5%）15 mL，水平放置使之凝固，作为底层，取指示菌培养基（浓度为0.8%，冷却至50 ℃）与指示菌菌液适量混匀，取6 mL 铺在底层培养基上，水平放置使之凝固，作为菌层。
用无菌镊子夹取已灭菌的牛津杯，打开皿盖，放在培养基上。
在牛津杯中加满相同量的抗菌液（300μL），每个样品3 个重复。
将加完样的培养皿小心放入37 ℃恒温箱内，培养18 h 后（其中以真菌做指示菌的培养时间为30 ℃、3 d）取出测量抑菌圈直径。
琼脂扩散法：先将指示菌固体培养基融化，冷却后倒平板。
待平板凝固后，均匀放入牛津杯。
再将指示菌半固体培养基融化，冷却至45～50℃，把指示菌液先稀释至10-2后，吸取50μL接入指示菌半固体培养基中，倒平板。
待平板凝固后将牛津杯拔出，在孔中加入50μL发酵液。
30℃培养24h，观察有无抑菌圈产生[56]。
人参黑斑病菌拮抗菌的筛选及抑菌活性测定
吉林农业科技学院学报 Ｖ １ ０Ｎ ． ｏ． ， ｏ３ ２ Ｊｕｎ ｌ ｇｃｌｒ ｃ ｎｅａｄＴｃｎｌ ｙ ｎ ｅｓｙＳｐｅ ｂｒ２ １ ｏｒａ ｏ Ｊ ｎＡ ｒｕｕａ Ｓｉ ｃ ｎ ｅｈｏ ｇ ｉ ｒｔ ｅｔ ｅ，０ １ ｌ ｆｉ ｉ ｉ ｔ ｌ ｅ ｏ Ｕ ｖ ｉ ｍ
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人参 黑斑病菌拮抗菌 的筛选及抑菌活性测定
崔立萍 丁元元 刘天鹤 何成龙 高郁芳２ ， ， ， ，
（． １ 吉林农业科技学院 ２Ｏ 级 中药学专业学生 ， Ｏ７ 吉林 １２ １２ 吉林 农业科 技学 院中药学院 ， ３１ ；． ０ 吉林 １ １１ ３ ０） ２
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五种常用菌-抑菌活性的测定
基础材料：
18×180试管 200 μL枪头 LB固体培养基
打孔器 1000 μL枪头 LB液体培养基
1000 μL移液枪 无菌牙签 无菌水
200 μL移液枪 无菌平板 0.9%生理盐水
涂布棒 接种环 酒精灯
菌种及培养基：
常用五种菌：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、假单胞杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄
色葡萄球菌
LB固体培养基：10 g胰蛋白胨+5 g酵母浸粉+10 g氯化钠+15 g琼脂粉+1 L蒸
馏水
LB液体培养基：10 g胰蛋白胨+5 g酵母浸粉+10 g氯化钠+1 L蒸馏水
实验步骤：
一、准备阶段（材料灭菌）
取洁净锥形瓶，配制LB液体培养基，磁力搅拌器加速溶解，另取洁净锥形瓶，
配制LB固体培养基，在LB液体培养基基础上添加琼脂粉即可，锥形瓶需要加塞
（棉塞）后用牛皮纸/报纸（4层）包扎。取数支18×180试管，将混匀的LB液体培
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养基分装进试管，每管10 mL，加塞（试管塞），另取数支18×180试管，每管装入9
mL 9%的生理盐水，加塞。准备足量两种型号的枪头，装入枪头盒中用牛皮纸/报纸
包扎。准备一瓶无菌水，同样锥形瓶加塞包扎。最后再将足量平板装入平板桶或牛
皮纸/报纸包扎。上述物品一同121℃高压灭菌20 min，取出备用。
二、活化细菌
灭菌完毕，瓶中LB固体培养基的琼脂在冷凝后分布不均匀，使用前需要用电热
套或电热炉，将LB固体培养基加热至完全融化并沸腾后使用，沸腾后将锥形瓶移走
并轻轻摇匀，待气泡消失，继续加热沸腾，累计三次。
超净工作台使用前需要紫外杀菌30min，材料（除菌外）也需要一同进行紫外照
射，将沸腾过三次的LB固体培养基冷却至手可握住的温度，用75%酒精喷洒消毒
后放入超净台中，并趁热倒入灭菌后的平板里，待平板冷凝后，将保藏的五种菌分
别接种（四区划线）于LB固体培养基上，放置于37℃的培养箱中培养。
挑取长势优良的单个菌落，接种至已灭菌的LB液体培养基试管中，震荡均匀，
于37℃恒温箱中培养8-12 h，采用比浊法（如大肠杆菌，根据600nm下吸光值判断
近似浓度）判断浓度，如果培养过度，可用9%的生理盐水稀释菌悬液浓度至含菌体
约1×10
6
CFU/mL，备用。
三、抑菌活性的测定
将稀释或生长好的菌悬液分别移取100 μL，打入灭菌后的空平板中，并倒入冷
却（防止高温杀死细菌）的LB固体培养基（沸腾三次），匀速晃动（左三圈右三
圈）平板，使加入的菌液均匀分布，待培养基凝固，用直径8 mm打孔器在培养基上
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均匀间隔打孔，无菌牙签用于挑取打孔器未能带出的培养基，每个平板可打3-5个
孔，每孔移液枪加样20 μL，个数依据待测样品的数目而定，分别是阳性对照（2
mg/mL的抗生素溶液）、阴性对照（无菌水）和自己的样品。
操作完毕，保鲜膜密封平板，放置于恒温箱中37℃条件下，培养12 h后取出，
观察并测量抑菌圈的直径，沿孔的不同方向测量2次，取平均值，记录数据，拍
照。
注意事项：
① 灭菌前，不同规格的锥形瓶装液上限：500 mL锥形瓶→200 mL，250 mL锥形瓶
→100 mL，以此类推。
② 固体培养基使用前，需要沸腾三次。目的是融化培养基，并使琼脂分散均匀，有
利于平板的凝固。沸腾时注意，不要离开加热中的培养基，佩戴手套以防烫伤。
③ 培养基倾倒时，应保证瓶底温度已经降至单手可承受的状态，以避免过热杀死供
试菌和产生水汽，同时也要确保培养基未凝固。
④ 以防万一，培养基和试管可以额外准备备用组。