龙麻金宁方对热哮大鼠肺组织PKBmRNA、α-SMAmRNA表达的影响-方向明,严郑元,李泽庚,刘静
芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺血管Bax、Bcl-2表达的影响
芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺血管Bax、Bcl-2表达的影响石孟瑶;朱洁;方莉;童佳兵;王小乐;高雅婷;刘桐;李泽庚【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2022(50)4【摘要】目的:研究芪白平肺胶囊改善COPD痰瘀阻肺证大鼠肺血管重构与增殖/凋亡相关分子Bax/Bcl-2的关系。
方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、芪白平肺胶囊组,采用烟熏联合低氧法复制COPD痰瘀阻肺证大鼠模型,芪白平肺胶囊组给予1 g/kg芪白平肺胶囊灌胃,正常组和模型组给予等体积生理盐水灌胃。
HE染色法观察肺组织形态学特征,ELISA法检测大鼠血清中VEGF水平,荧光定量PCR及Western blot法检测肺血管中Bax和Bcl-2的mRNA和蛋白表达。
结果:与正常组相比,模型组肺血管中Bax的mRNA及蛋白表达降低(P<0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),血清中VEGF表达水平升高(P<0.01);与模型组比,芪白平肺胶囊组Bax的mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2的mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.01),VEGF表达水平降低(P<0.01)。
结论:芪白平肺胶囊可能通过提高COPD痰瘀阻肺证大鼠肺血管中Bax的mRNA及蛋白水平、降低Bcl-2的mRNA及蛋白和血清VEGF水平,调整肺血管的凋亡/增殖失衡状态,从而促进肺血管内皮细胞凋亡,改善COPD肺血管重构。
【总页数】5页(P23-27)【作者】石孟瑶;朱洁;方莉;童佳兵;王小乐;高雅婷;刘桐;李泽庚【作者单位】安徽中医药大学;安徽中医药大学第一附属医院【正文语种】中文【中图分类】R285.5【相关文献】1.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证大鼠血清CAM-2和VEGF的影响2.芪白平肺胶囊对COPD痰瘀阻肺证大鼠肺动脉Rock-1表达的影响3.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证大鼠血清CAM-2和VEGF的影响4.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证大鼠肺部炎症和肺功能的影响5.芪白平肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病痰瘀阻肺证大鼠血清Rock-1、Rock-2表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
交泰丸对血管性痴呆模型大鼠学习记忆能力及脑组织胆碱能机制的影响
+ 近年来该 方 的 应 用 范 围 不 断 拓 展 # 本项目课题
组在临床中已运用交泰丸治疗血管性疾 呆 $ # N ? 8 , J F ? @0 > B > 9 A 2 ? 多年并取 得 满 意 疗 效 # 但其确切的作用机理并不十分清 % &% ". 楚+本研 究 采 用 龚 彪 等 制 备 方 法 进 行 制 备 大 脑 中 动 脉 $ 阻塞后再灌注 % 采用 ’( ’S +% & 大鼠模型 # ) $ * 迷宫测试法 观察交泰丸对 % 大鼠学习 记 忆 , 脑 组 织 乙 酰 胆 碱$ & ? , > A F , 1 ) H # % 含量及乙 酰 胆 碱 酯 酶 $ # 活 F 2 9 > + , ? , > A F , 1 F 2 9 > 8 A > @ ? 8 > + , .% H 海马组织病 理 学 改 变 的 影 响 # 探讨该方改善 % 性变化 , & 大鼠 学习记忆的作用机制 + ?! 材料与方法 % 动物 ! 健康 清 洁 级 T 雌 雄 兼 用# 体质量 ?4 ?! 材料 ! $ 3 & 大鼠# # 由广西医科大学实验动物 中 心 提 供 +$ 药物! 交 $ ! # # #I $% !" 泰丸由黄连 , 肉桂 $ 黄连 U 肉桂 V3 % 组成 # 其有效部位 群 总 #U3 提取物 # 由广西中医学院中药化学教研室提供 # 为棕黄色粉 末 # 人 日用量 #4 " # 临床成人日用生药量为 3 & 喜得镇片 # $I W 64 !I I $ 批准文号 ! 国药准字 / 产品批号 ! % # 天津华津 3 # 3 # # ! <# # ! # 3 : : 每片3B # 成 制药厂和瑞士诺华制药有限公司合作生产 产 品 # I 人日用量 "!6 B +以 上 药 品 实 验 前 用 蒸 馏 水 配 制 成 溶 液# I
天麻活性成分减轻大鼠神经元氧糖剥夺
天麻活性成分减轻大鼠神经元氧糖剥夺/复糖复氧损伤的作用机制Δ王锦1＊，夏霜莉1，杨媛2，代蓉1 #（1.云南中医药大学中药学院，昆明 650500；2.昆明医科大学第一附属医院临床药学中心，昆明 650032）中图分类号 R 965 文献标志码 A 文章编号 1001-0408（2023）23-2886-05DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2023.23.12摘要 目的 研究天麻活性成分3，4-二羟基苯甲醛（3，4-DD ）对大鼠脑微血管内皮细胞（BMECs ）-大鼠肾上腺嗜铬细胞PC 12共培养体系氧糖剥夺/复糖复氧（OGD/R ）损伤的改善作用机制。
方法 采用Transwell 小室共培养BMECs 与PC 12细胞，然后分为对照组、模型组、丁苯酞组（阳性对照组，0.1 mmol/L ）、3，4-DD 组（0.1 μmol/L ），除对照组外，其余各组共培养体系均复制OGD/R 损伤模型。
同时，共培养体系以相应药物或培养基干预BMECs 24 h ，然后检测体系跨膜电阻（TEER ）以及PC 12细胞中乳酸脱氢酶（LDH ）活性、脑源性神经营养因子（BDNF ）水平以及TrkB 、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA 表达水平。
结果 与对照组比较，模型组共培养体系TEER 以及PC 12细胞中LDH 活性、BDNF 水平均显著降低（P ＜0.01），PC 12细胞中TrkB 、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA 表达水平均显著升高（P ＜0.01）；与模型组比较，3，4-DD 组、丁苯酞组共培养体系TEER 以及PC 12细胞中LDH 活性、BDNF 水平和TrkB 、Plc-γ、Map-2、GAP-43 mRNA 表达水平均显著升高（P ＜0.05或P ＜0.01）。
结论 3，4-DD 可通过作用于BMECs 减轻神经元OGD/R 损伤，其作用机制可能与激活BDNF/TrkB 信号通路有关。
蒙药绍沙-7味丸防治大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用
蒙药绍沙 ７味丸防治大鼠心肌缺血／再灌注损伤的作用杨向君１，２＋，王 羽３＋，Ｅ．巴雅日玛４，赵 明２△，Ｓ．贺希格扎日嘎拉１△（１．蒙古国国立医科大学国际蒙医学院，乌兰巴托９９９０９７ １５１６０，蒙古；２．内蒙古民族大学附属医院，通辽０２８００２，中国；３．内蒙古民族大学医学院，通辽０２８０００，中国；４．蒙古国国立医科大学生物医学院，乌兰巴托９９９０９７ １５１６０，蒙古）【摘要】 目的：探讨蒙药绍沙 ７味丸对心肌缺血／再灌注损伤大鼠的防治作用及机制。
方法：６０只大鼠随机分成６组：假手术组、模型组、蒙药绍沙 ７味丸低、中、高剂量组以及阳性药对照组，每组１０只；蒙药绍沙 ７味丸低、中、高剂量组分别灌胃０．４ｇ／ｋｇ、０．８ｇ／ｋｇ、１．６ｇ／ｋｇ蒙药绍沙 ７味丸，阳性药对照组灌胃０．３ｇ／ｋｇ复方丹参片，假手术组和模型组灌胃２ｍｌ／１００ｇ蒸馏水，均连续灌胃１５ｄ，１次／日；１５ｄ后，模型组及治疗组大鼠开胸结扎冠状动脉３０ｍｉｎ后，解开结扎线行再灌注１２０ｍｉｎ后关闭胸腔处理；６组大鼠术后行心电图检查后处死大鼠取心脏行ＨＥ染色、ＴＴＣ染色，观察梗死面积及病理变化。
ＥＬＩＳＡ法检测血清中ｃＴｎＩ、ＣＫ ＭＢ、ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ ＰＸ及ＴＮＦ α、ＩＬ １８、ＩＬ ６、ＩＬ １β的水平，免疫组化法检测心肌组织ＮＦ кＢ水平。
结果：与假手术组相比，心肌缺血／再灌注损伤大鼠心肌梗死面积增大，同时血清中ｃＴｎＩ、ＣＫ ＭＢ、ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＧＳＨ ＰＸ及ＴＮＦ α、ＩＬ １８、ＩＬ ６、ＩＬ １β的含量明显增加（Ｐ＜０．０１），ＳＯＤ的含量则明显降低（Ｐ＜０．０１），心脏组织中的ＮＦ кＢ水平增加；与心肌缺血／再灌注损伤大鼠相较，蒙药绍沙 ７味丸改善大鼠心律失常现象及病理变化，减少梗死面积；血清中ｃＴｎＩ、ＣＫ ＭＢ、ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＧＳＨ ＰＸ及ＴＮＦ α、ＩＬ １８、ＩＬ ６、ＩＬ １β的含量明显降低（Ｐ＜０．０１），ＳＯＤ的含量明显增加（Ｐ＜０．０１），心脏组织中的ＮＦ кＢ水平降低。
行气消癥方对子宫肌瘤大鼠治疗作用的研究
行气消癥方对子宫肌瘤大鼠治疗作用的研究杨荣兰;李凤灵;魏青;彭必龙;吴子杰;陈锡明;徐萌萌【期刊名称】《中医学》【年(卷),期】2024(13)3【摘要】目的:探讨行气消癥方对子宫肌瘤大鼠激素水平的影响及机制研究。
方法:取40只SD大鼠,随机分为正常组、模型组、米非司酮组、行气消癥方低剂量和高剂量组。
除正常组外采用雌孕激素联用法造模。
治疗后计算子宫系数,HE染色检测子宫组织病理学变化;酶联免疫法检测定血清中的雌二醇(E2)、孕激素(P)、促卵泡素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平;免疫组化法和Western-blot法检测子宫组织水通道蛋白1、2、3 (AQP1, 2, 3)的分布和表达水平。
结果:模型组大鼠血清E2、P、FSH和LH水平显著升高,子宫系数高于正常组。
与模型组相比,各给药组子宫系数降低,病理变化有不同程度改善,子宫AQP1、2、3表达水平显著降低(P P < 0.01)。
结论:行气消癥方可下调血清性激素水平改善子宫肌瘤,其机制可能与下调子宫AQP1、2、3的表达相关。
【总页数】9页(P515-523)【作者】杨荣兰;李凤灵;魏青;彭必龙;吴子杰;陈锡明;徐萌萌【作者单位】贵州中医药大学第一临床医学院贵阳;贵州中医药大学药学院贵阳;贵州中医药大学基础医学院贵阳【正文语种】中文【中图分类】R73【相关文献】1.针刺联合活血消癥方治疗子宫肌瘤对患者卵巢功能、子宫肌瘤体积的影响2.理气消癥汤联合米非司酮、他莫昔芬治疗子宫肌瘤的临床观察3.益气消癥方治疗子宫肌瘤的验案探析4.益气消癥方对子宫肌瘤大鼠血液流变学和免疫功能的影响5.益气消癥方对子宫肌瘤大鼠子宫组织ER、PR、VEGF、VEGFR1、VEGFR2表达的影响因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
化栓通脉方调节自噬抗动脉粥样硬化的实验研究
2194 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October 2023,Vol.16,No.11㊃基础研究㊃基金项目:国家中医心血管病临床医学研究中心专项科研基金(CMC2022010);国家自然科学基金联合基金(U22A20372)作者单位:100029 北京中医药大学研究生院[路爱梅(硕士研究生)㊁李洪峥(博士研究生)㊁彭煜暄(硕士研究生)];中国中医科学院西苑医院心血管科[杨文文(博士研究生)㊁魏玥(硕士研究生)㊁曲华㊁付长庚],老年病科(龙霖梓);北京了未元中医药研究有限公司(吴汉涛)作者简介:路爱梅(1996-),2021级在读硕士研究生㊂研究方向:中西医结合心血管疾病研究㊂E⁃mail:570633591@ 通信作者:付长庚(1981-),博士,主任医师,博士生导师㊂研究方向:中西医结合心血管疾病研究㊂E⁃mail:fucgbs@化栓通脉方调节自噬抗动脉粥样硬化的实验研究路爱梅 李洪峥 杨文文 彭煜暄 魏玥 龙霖梓 曲华 吴汉涛 付长庚【摘要】 目的 观察化栓通脉方对ApoE 基因敲除(ApoE knockdown,ApoE -/-)小鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)的影响,并初步研究其抗AS 的作用机制㊂方法 10只8周龄C57BL /6J 小鼠设为对照组,全程普通饲料喂养;43只同品系ApoE -/-小鼠高脂饲料喂养8周制备体内AS 模型㊂造模成功后随机分为4组:模型组㊁辛伐他汀组(3mg /kg)㊁化栓通脉方低剂量组(6g /kg)㊁化栓通脉方高剂量组(12g /kg)㊂第9周各组开始相应药物灌胃,对照组和模型组采用等体积生理盐水,连续灌胃6周后分离血清和主动脉㊂使用全自动生化分析仪测定各组血清总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁甘油三酯(triglyceride,TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL⁃C)水平;采用ELISA 法检测各组血清白细胞介素(interleukin,IL)⁃1β㊁γ干扰素(interferon gamma,IFN⁃γ)㊁IL⁃10㊁IL⁃4水平;采用油红O 染色评价整体主动脉内膜斑块分布情况并测定相对斑块面积;采用苏木素 伊红染色评价主动脉窦斑块病理形态并量化斑块区域;采用Russell⁃Movat 染色分析小鼠主动脉窦斑块成分;采用免疫荧光染色检测小鼠主动脉窦组织溶酶体关联膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein 2,LAMP2)㊁轻链蛋白3A /B(light chain 3A /B,LC3A /B)㊁P62蛋白的表达㊂结果 化栓通脉方调节血脂效果较为突出,可明显降低AS 小鼠血清TC㊁TG㊁LDL⁃C 水平,提升HDL⁃C 水平,高㊁低剂量组都显示出显著的优势(P <0.01);相比于模型组,化栓通脉方高剂量组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著降低,斑块面积㊁泡沫细胞和胶原纤维相对占比明显减小,P62蛋白表达显著减少,IL⁃10㊁IL⁃4含量显著升高,LAMP2㊁LC3A /B 表达明显增加,差异具有统计学意义(均P <0.05)㊂结论 化栓通脉方可显著调节AS 小鼠血脂和炎症因子水平,减少主动脉组织中泡沫细胞㊁胶原纤维和斑块的生成,通过促进LC3A /B㊁LAMP2的表达和P62的降解,调控细胞自噬,从而延缓AS 的发生发展㊂【关键词】 化栓通脉方; 动脉粥样硬化; 自噬; 降脂; 抗炎【中图分类号】 R285.5 【文献标识码】 A doi:10.3969/j.issn.1674⁃1749.2023.11.006Experimental study of Huashuan Tongmai decoction regulating autophagy against atherosclerosis LU Aimei ,LI Hongzheng ,YANG Wenwen ,PENG Yuxuan ,WEI Yue ,LONG Linzi ,QU Hua ,WU Hantao ,FU ChanggengThe Graduate School of Beijing University of Chinese Medicine ,Beijing 100029,China Corresponding author :FU Changgeng ,E⁃mail :fucgbs@【Abstract 】 Objective To observe the effect of Huashuan Tongmai decoction on atherosclerosis环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112195 (AS)in ApoE knockout(ApoE knockdown,ApoE-/-)mice,and to study the mechanism of action againstAS.Methods 108-week⁃old C57BL/6J mice were treated as the control group and fed general diet,and43ApoE-/-mice were fed high⁃fat diet for8weeks to prepare in vivo AS model.After successful modelmaking,they were randomly divided into4groups:model group,Simvastatin group(3mg/kg),low dosegroup(6g/kg),and high dose group(12g/kg)of Huashuan Tongmai decoction.On week9,the controlgroup and the model group were received volume saline intragastric administration,the other groups weretreated with the drug intragastric administration,and serum and aorta were obtained after continuous gavagefor6weeks.The serum levels of TC,TG,LDL⁃C,and HDL⁃C in each group were determined by an automatic biochemical analyzer;the serum levels of IL⁃1β,IFN⁃γ,IL⁃10,and IL⁃4in each group were measured by ELISA;oil red O staining was used to evaluate the overall aortic endometrial plaque distribution and determine the relative plaque area;the method of Hematoxylin⁃eosin(HE)staining wasused to evaluate the aortic sinus plaque pathological morphology and quantify the plaque areas;the plaque components of the mouse aortic sinus were analyzed by Russell⁃Movat staining;the expression of LAMP2,LC3A/B,and P62in mice aortic sinus tissues were detected by immunofluorescence staining.Results The effect of Huashuan Tongmai decoction was prominent,which could significantly decreased the levels ofTC,TG,and LDL⁃C,and increased the level of HDL⁃C in AS mice serum,both the high and the low dosegroups showed significant advantages(P<0.01);compared with the model group,the high dose groupwas decreased significantly in the levels of IL⁃1βand IFN⁃γ,plaque area,the relative proportion of foamcells and collagen fibers,and the expression of P62,meanwhile,increased significantly in the levels ofIL⁃10and IL⁃4,and the expression of LAMP2and LC3A/B(P<0.05).Conclusion Huashuan Tongmai decoction can significantly regulate serum lipids and inflammatory factors in AS mice,reduce the generationof foam cells,collagen fibers and plaques in aortic tissue,and regulate cell autophagy by promoting the expression of LC3A/B and LAMP2and depressing the expression of P62,thus delaying the occurrence and development of AS.【Key words】 Huashuan Tongma decoction; atherosclerosis; autophagy; lipid⁃lowering; anti⁃inflammation 2019年全球疾病负担研究结果表明,以缺血性心脏病和卒中为主的动脉粥样硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease,ASCVD)是引起全球人口死亡的首要原因,占全球总死亡人数的三分之一[1],给人类健康带来严重的危害㊂动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是ASCVD的病理基础,其成因复杂,其中脂质代谢紊乱㊁免疫和炎症贯穿AS病变始终[2⁃3]㊂自噬是在自噬相关基因的调控下,利用溶酶体自我降解后再利用,维持细胞能量稳态的过程[4],对AS的调控更具有双向作用 在AS早期内皮通过自噬调节脂质代谢㊁减轻炎症反应,从而抑制斑块的形成,晚期随着斑块的进展而变得功能失调[5]㊂因此,维持自噬的动态平衡对抑制AS的恶性发展极为重要㊂化栓通脉方是本课题组根据临床治疗AS患者总结而来的经验方,用于改善冠状动脉㊁颈动脉粥样硬化斑块,临床疗效确切㊂但其在动物体内研究中,是否具有抗AS效应及其作用机制有待进一步研究㊂有鉴于此,本实验从血清脂蛋白㊁炎症因子㊁斑块面积等方面,综合评价化栓通脉方调节ApoE 基因敲除(ApoE knockdown,ApoE-/-)小鼠主动脉粥样硬化斑块的效应,并初步探索其是否通过调控自噬而发挥抗AS作用㊂1 材料与方法1.1 实验动物及实验环境8周龄SPF级雄性C57BL/6J小鼠10只,同品系ApoE-/-小鼠43只,体质量(22±2)g,购于斯贝福(北京)生物技术有限公司[许可证号:SCXK(京) 2019⁃0010]㊂小鼠饲养于北京了未元医药科技公司动物实验中心[许可证号:SYXK(京)2022⁃0007],温度(22±2)℃,湿度(50±10)%,明/暗周期(12/12)小时㊂动物自由进食㊁饮水㊂动物伦理审查批号:SYXK2022⁃0007㊂高脂饲料(83.5%基础饲料+15%猪油+1.5%胆固醇)和普通饲料均由北京华阜康生物科技有限公司[许可证号:SCXK(京)2019⁃0008]提供㊂实验过程中,动物灌胃致死3只,剔除各组离群2196 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.11值,各组统计数量均为7只㊂1.2 实验药物辛伐他汀片(杭州默沙东制药有限公司,规格:20mg/片,批号:U04517)㊂化栓通脉方药物组成及剂量:金银花15g㊁山楂15g㊁鸡血藤15g㊁制何首乌15g㊁生白芍7.5g㊁生甘草4g㊂中药饮片皆购于九州通医药集团股份有限公司,经北京中医药大学吴嘉瑞教授鉴定,均符合2020版‘中国药典“要求㊂辛伐他汀片用生理盐水配置成混悬液,浓度为0.3mg/mL㊂化栓通脉方各药物按组方比例,称取715g,用2000mL蒸馏水煎煮2次,然后浓缩至715mL的中药混悬液,每毫升含生药量1g,浓度为1g/mL,4℃保存,备用㊂用药剂量参考公式:高剂量给药剂量=成人(70kg)临床常用量×12(按人 小鼠体表面积折算等效剂量系数)㊂以成人(70kg)每日金银花15g㊁山楂15g㊁鸡血藤15g㊁制何首乌15g㊁生白芍7.5g㊁生甘草4g,共71.5g,生药计算高剂量组小鼠每日等效剂量为12g/kg,高㊁低剂量组给药剂量按2∶1设置,低剂量组小鼠每日给药剂量为6g/kg㊂辛伐他汀片成人给药剂量为每日20mg,换算获得辛伐他汀组小鼠每日灌胃剂量为3mg/kg㊂1.3 主要试剂与仪器白细胞介素(interleukin,IL)⁃1β㊁γ干扰素(interferon gamma,IFN⁃γ)㊁IL⁃10㊁IL⁃4ELISA试剂盒(武汉赛维尔生物科技有限公司,批号分别为EK201BHS⁃96㊁EK280/3⁃96㊁EK210/4⁃96㊁EK204HS⁃96);油红O染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G1016);苏木素 伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G1120);Russell改良Movat五色染色试剂盒(北京索莱宝科技有限公司,批号G3701);抗⁃SQSTM1/ P62兔pAb㊁抗⁃LAMP2兔pAb㊁抗LC⁃3A/B兔pAb (武汉赛维尔生物科技有限公司,批号分别为GB11239⁃1㊁GB11330㊁GB11124)㊂台式高速冷冻离心机(大龙,型号D3024R),酶标检测仪(美国BioTeK公司,型号Epoch),全自动生化分析仪(深圳雷杜生命科技,型号分别为Chemray240㊁420㊁800),荧光显微镜(宁波舜宇仪器有限公司,型号2204926),光学显微镜(DMi1,型号Leica),组织切片机(浙江省金华市科迪仪器公司,型号KD⁃ST5500)㊂1.4 动物分组㊁给药及取材适应性喂养1周,10只C57BL/6J小鼠作为对照组,全程采用普通维持饲料喂养㊂43只ApoE⁃/⁃小鼠采用高脂饲料喂养8周后,随机抽取3只取材,主动脉窦病理切片HE染色显示:主动脉管腔狭窄,内膜明显增厚,有明显斑块形成,提示早期AS体内模型建立成功㊂造模后的ApoE-/-小鼠随机分为4组:模型组㊁辛伐他汀组(3mg/kg)㊁化栓通脉方低剂量组(6g/kg)㊁化栓通脉方高剂量组(12g/kg),每组10只,继续高脂饲料喂养,用药组同时予以相应药物灌胃,对照组和模型组予等体积生理盐水灌胃以保证组间一致性,每日灌胃1次,连续6周㊂最后一次灌胃后,禁食㊁不禁水12小时㊂用3%戊巴比妥钠腹腔麻醉,球后静脉(眼眶静脉丛)取血,室温静置2小时,4℃4000r/min离心10分钟,分离上层血清,-80℃下冻存㊂取血后打开小鼠胸腔及腹腔,经PBS充分灌流,整体分离自主动脉根部至髂总动脉分叉处主动脉,并剥离周围多余结缔组织和脂肪组织,投入液氮或组织固定液中保存,用于后续相关实验㊂1.5 指标检测1.5.1 酶标法测定小鼠血脂水平 每组取7只小鼠,使用全自动生化分析仪测定各组小鼠血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)㊁甘油三酯(triglyceride,TG)㊁低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL⁃C)㊁高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL⁃C)的水平㊂1.5.2 ELISA法检测血清炎症因子水平 每组取7只小鼠,根据ELISA试剂盒说明书操作,检测小鼠血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ㊁IL⁃10㊁IL⁃4的水平㊂1.5.3 大体油红O染色测定整体主动脉相对斑块面积 每组取3只小鼠,在光学显微镜下将小鼠主动脉纵剖面固定,水洗,油红O染色后将血管平铺于黑色橡胶板,迅速拍照,利用Image J软件分析以主动脉相对斑块面积来评价主动脉斑块严重程度㊂相对斑块面积(%)=主动脉斑块面积/血管内膜总面积×100%㊂1.5.4 HE染色评价主动脉窦病理形态 每组取3只小鼠,4%多聚甲醛固定主动脉于4℃冰箱24小时,梯度脱水后石蜡包埋,并连续切片(5μm),HE 常规染色后封片拍照,于光学显微镜下检测AS小鼠主动脉窦病理形态的变化,测量并计算斑块面积占血管内膜面积百分比㊂相对斑块面积(%)=斑块环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112197面积/内膜总面积×100%㊂1.5.5 Russell⁃Movat染色评价主动脉窦斑块成分 每组取3只小鼠,主动脉石蜡切片处理,切片厚度5μm,连续切片至观察到3个主动脉瓣完全融合开始留取10张切片,切片脱蜡至水,经五色法染液进行染色,脱水封片,在光学显微镜下观察主动脉窦斑块各成分变化,染色后的细胞核和弹性纤维呈黑色,胶原纤维呈红色,泡沫细胞呈淡紫色,蛋白聚糖呈蓝色㊂测量并计算斑块内泡沫细胞及胶原纤维的占比㊂1.5.6 免疫荧光法评价主动脉窦溶酶体关联膜蛋白2(lysosomal associated membrane protein2, LAMP2)㊁轻链蛋白3A/B(light chain3A/B,LC3A/ B)㊁P62蛋白的表达 每组取3只小鼠,主动脉窦石蜡切片,常规脱蜡㊁水化㊁抗原修复后,血清室温封闭30分钟,滴加一抗4℃孵育过夜,PBS浸洗3次,次日滴加荧光二抗25℃避光孵育1小时,PBS浸洗3次,滴加DAPI避光孵育5分钟复染细胞核,PBS 浸洗4次,最后用含抗荧光的淬灭剂封片㊂使用荧光显微镜观察主动脉窦的LAMP2㊁LC3A/B㊁P62蛋白荧光表达,并采集图像,利用Image J分析处理数据㊂1.6 统计学方法实验所得数据为计量资料,使用SPSS24.0统计软件进行处理㊂数据经检验均符合正态分布且方差齐,以均数±标准差(x±s)表示㊂多组间比较采用单因素方差分析,两两比较用LSD法,P<0.05表示差异具有统计学意义㊂2 结果2.1 化栓通脉方对小鼠血脂水平的影响相比于对照组,模型组小鼠血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C水平明显升高,HDL⁃C水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);相比于模型组,辛伐他汀组和化栓通脉方低㊁高剂量组血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C水平均显著降低,HDL⁃C水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)㊂见表1㊂2.2 化栓通脉方对小鼠血清炎症因子水平的影响与对照组相比,模型组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著上升,差异具有统计学意义(P<0.01), IL⁃10㊁IL⁃4含量也有所升高,但无统计学意义(P>0.05);与模型组相比,化栓通脉方高剂量组血清中IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量显著降低,IL⁃10㊁IL⁃4含量显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01);化栓通脉方低剂量组较模型组IFN⁃γ含量降低,IL⁃4含量升高,差异有统计学意义(P<0.01),IL⁃1β含量降低, IL⁃10含量升高,差异无统计学意义(P>0.05)㊂见表2㊂表1 各组AS模型小鼠血脂水平比较(x±s,mmol/L)组别鼠只TC TG LDL⁃C HDL⁃C对照组7 2.75±0.160.66±0.030.36±0.03 1.99±0.10模型组724.74±0.96b 4.17±0.34b15.28±1.50b 1.43±0.30a 辛伐他汀组717.88±2.90bc 2.21±1.07bc11.13±1.66bc 2.96±0.82bc 化栓通脉方低剂量组718.74±2.23bc 2.06±0.45bc11.82±2.23bc 2.83±0.31bc 化栓通脉方高剂量组718.21±1.37bc 1.44±0.35ac10.17±2.16bc 3.39±0.52bc 注:与对照组相比,a P<0.05,b P<0.01;与模型组相比,c P<0.01㊂表2 各组AS模型小鼠血清炎症因子比较(x±s,pg/mL)组别鼠只IL⁃1βIFN⁃γIL⁃10IL⁃4对照组70.61±0.3153.44±21.3435.66±18.26 1.30±0.31模型组7 5.97±1.65a214.70±87.64a72.92±28.44 2.89±0.85辛伐他汀组7 3.93±2.06ab129.80±95.78b90.36±28.06a7.64±5.92化栓通脉方低剂量组7 4.79±2.05a61.71±21.39b93.33±33.28a11.81±4.02ab 化栓通脉方高剂量组7 2.03±0.74b61.89±23.34b140.80±59.54ab22.24±7.69ab 注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂2198 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112.3 化栓通脉方对小鼠整体主动脉斑块面积的影响主动脉大体油红O染色显示,对照组小鼠主动脉血管壁大体光滑㊁平整,呈半透明状,见有少量点状斑块散在分布;高脂饲料喂养14周,模型组小鼠主动脉管腔病理性扩增,管壁存在大量的红染的点片状脂质斑块,且多分布在主动脉弓及血管分叉处㊂相比对照组,模型组主动脉窦部斑块面积明显增加(P<0.01);相比模型组,化栓通脉方低㊁高剂量组小鼠主动脉窦部斑块面积均明显减少(P<0.01)㊂见图1及表3㊂2.4 化栓通脉方对小鼠主动脉窦病理形态的影响主动脉窦HE染色显示,对照组小鼠主动脉内膜光滑完整,内膜下无明显泡沫细胞和脂质沉积形成,中层平滑肌细胞排列整齐;模型组小鼠主动脉内膜增厚明显,内膜下可见大量泡沫细胞和脂质沉积,中层平滑肌细胞增殖且排列紊乱;与模型组相比,化栓通脉方高剂量干预后,小鼠主动脉窦内膜厚度㊁泡沫细胞数量及脂质沉积明显减轻(P<0.01)㊂见图2,表4㊂表3 各组小鼠AS模型小鼠斑块面积占比(大体油红O染色)(x±s)组别鼠只主动脉相对斑块面积占比(%)对照组3 1.98±0.98模型组312.55±4.05a辛伐他汀组3 2.65±0.99b化栓通脉方低剂量组3 6.46±3.31b化栓通脉方高剂量组3 2.75±0.29b注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图1 各组AS模型小鼠主动脉大体油红O染色结果注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图2 各组AS模型小鼠主动脉窦HE染色结果(×100)环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112199表4 各组小鼠AS模型小鼠斑块面积及成分占比(x±s)组别鼠只主动脉窦相对斑块占比(HE染色,%)泡沫细胞占比(Movat染色,%)胶原纤维占比(Movat染色,%)对照组3000模型组351.00±4.00a17.00±2.00a18.33±2.08a 辛伐他汀组336.80±1.76ab12.00±2.94ab9.75±3.50ab 化栓通脉方低剂量组332.40±7.96ab13.80±3.56a11.33±0.58ab 化栓通脉方高剂量组325.67±10.40ab11.00±4.00ab8.33±1.53ab 注:与对照组相比,a P<0.05;与模型组相比,b P<0.01㊂ 主动脉窦Russell⁃Movat染色结果显示,对照组内膜未见明显斑块,内皮细胞结构完整,弹力纤维弯曲连续,富有弹性,中膜血管平滑肌排列整齐,周围分布少量胶原纤维和网状纤维结构;模型组可见内膜斑块显著突向管腔,斑块内部有大量泡沫细胞和脂质堆积,斑块表面有大量炎症细胞浸润黏附,平滑肌细胞大量增生,排列紊乱,血管中膜失去连续性,弹力纤维绷直㊁失去弹性,胶原纤维㊁网状纤维排布错乱㊂化栓通脉方干预后主动脉窦Movat染色显示:斑块炎症细胞浸润黏附有所减轻,脂质堆积有所减少,胶原纤维结构稳定,覆盖包裹在脂质表面,血管中膜连续性较模型组有所改善(P<0.05),表明化栓通脉方促进斑块稳定,减少AS的发展㊂见图3,表4㊂2.5 化栓通脉方对小鼠主动脉窦自噬相关蛋白表达的影响免疫荧光结果显示,与对照组相比,模型组小鼠主动脉中LAMP2㊁LC3A/B㊁P62的表达升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,化栓通脉方高剂量干预后,AS模型小鼠主动脉窦中LAMP2㊁LC3A/B表达升高(P<0.01),P62的表达降低(P>0.05)㊂见图4,表5㊂3 讨论在AS的中医药防治中,瘀与毒是导致易损斑块形成及破裂的主要病理因素㊂稳定斑块和血栓属于 内阻瘀血”,各种炎症因子属于 内生毒邪”,瘀为常,毒为变,由常生变,因瘀致毒,毒瘀互结,AS 易损斑块在瘀血基础上 毒邪”致病,治当以解毒化瘀[6⁃9]㊂化栓通脉方以金银花为君,解毒清热,直击病本;山楂行气散瘀化浊,鸡血藤祛瘀养血通络,制何首乌㊁白芍养血益精,敛阴止痛,共为臣药;甘草清热解毒,调和诸药㊂上述药物合用,共奏解毒化瘀㊁养血通络之效㊂注:A对照组;B模型组;C辛伐他汀组;D化栓通脉方低剂量组;E化栓通脉方高剂量组㊂图3 各组AS模型小鼠主动脉窦Movat染色结果(×100)表5 各组AS模型小鼠主动脉窦自噬蛋白表达情况比较(x±s)组别鼠只P62LC3A/B LAMP2对照组3 1.98±0.987.04±0.2938.23±8.04模型组312.55±4.05b10.60±2.7866.13±16.30a 辛伐他汀组3 2.65±0.99ac14.27±3.93b108.60±15.36bc 化栓通脉方低剂量组3 6.46±3.31b8.66±0.6573.54±8.85b 化栓通脉方高剂量组3 2.75±0.29b17.05±2.34bc109.80±8.34bc 注:与对照组相比,a P<0.05,b P<0.01;与模型组相比,c P<0.01㊂2200 环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October 2023,Vol.16,No.11注:A 对照组;B 模型组;C 辛伐他汀组;D 化栓通脉方低剂量组;E 化栓通脉方高剂量组㊂图4 各组AS 模型小鼠主动脉窦免疫荧光染色结果(×100) 现代药理学研究指出,化栓通脉方通过多成分㊁多靶点㊁多途径,发挥抗AS 作用 金银花㊁山楂㊁鸡血藤㊁白芍都具有抗炎㊁抗氧化㊁抗血小板聚集的作用[10⁃12],山楂还可调节血脂代谢及改善血管内皮功能,鸡血藤可调节造血系统[13⁃14],制何首乌可补血㊁抗衰老㊁降血脂[15],白芍可通过调节免疫㊁抑制细胞凋亡㊁促进胆固醇流出等途径抗AS [16⁃17]㊂由此可知,化栓通脉方中药物成分可能通过抑制斑块内炎症反应㊁改善脂质代谢和血流动力学,从而降低斑块恶化破裂风险㊂故本研究旨在通过探讨化栓通脉方对ApoE -/-小鼠抗AS 的作用及其机制,为其临床应用提供理论依据和数据支撑㊂3.1 化栓通脉方通过降脂㊁抗炎实现抗AS 作用AS 是一种慢性炎症性血管疾病,脂质代谢紊乱与炎症因子升高会导致血管内皮功能受损,引起血管内壁脂质堆积及斑块和血栓的形成,与AS 的生成与发展密切相关[3,18],促炎和抗炎机制的平衡决定着AS 的结局,是病情转化和恶化的关键[19]㊂有鉴于此,调节血脂代谢㊁抑制炎症反应在AS 的治疗中占有重要地位㊂本研究表明,化栓通脉方可调节血清脂蛋白㊁炎症因子水平㊂研究结果指出,相比于模型组,高㊁低剂量化栓通脉方组血清中TC㊁TG㊁LDL⁃C 水平均显著下降,HDL⁃C 水平显著上升,促炎因子IL⁃1β㊁IFN⁃γ含量降低,抑炎因子IL⁃10㊁IL⁃4含量升高,斑块面积㊁泡沫细胞和胶原纤维相对占比明显减小,且随化栓通脉方浓度升高而存在一定差异㊂由此表明,化栓通脉方可能通过调节血脂代谢㊁降低血清炎症因子水平,减少主动脉斑块面积,实现抗AS 作用㊂3.2 化栓通脉方抗AS 作用可能与诱导细胞自噬有关自噬是细胞自身的分解代谢机制,对AS 具有重要影响,其水平主要通过自噬标志物(自噬体和自噬溶酶体)和自噬蛋白标志物的水平进行评价[20⁃21]㊂自噬体作为自噬过程的标志性结构,是检测自噬的唯一金标准,而LC3是最可靠的自噬体标志物,其表达水平与自噬体数量呈正相关;LAMP2是溶酶体标志物,其表达水平与自噬溶酶体亦呈正相关;P62是自噬的特异性底物,其表达水平与自噬潮呈负相关㊂本研究免疫荧光结果显示,模型组较对照组具有高水平的LC3A /B㊁LAMP2共定位,表明自噬的募集是对新兴斑块的应激反应㊂化栓通脉方组较模型组LC3A /B㊁LAMP2的表达上调㊁P62的表达下调,且高剂量组比低剂量组自噬蛋白表达更为显著,表明化栓通脉方可增加自噬通量,升高自噬水平,起到抗AS 作用,并与剂量呈相关关系㊂综上所述,化栓通脉方可能通过诱导细胞自环球中医药2023年11月第16卷第11期 Global Traditional Chinese Medicine,October2023,Vol.16,No.112201噬,调节脂质代谢㊁减弱炎症反应,从而抑制斑块形成与进展,达到防治AS的作用,具体机制通路有待进一步实验验证㊂参考文献[1] Roth G A,Mensah G A,Johnson C O,et al.Global burden ofcardiovascular diseases and risk factors,1990⁃2019:update fromthe GBD2019study[J].J Am Coll Cardiol,2020,76(25):2982⁃3021.[2] Wolf D,Ley K.Immunity and Inflammation inAtherosclerosis[J].Circ Res,2019,124(2):315⁃327.[3] LU Y,CUI X,ZHANG L,et al.The Functional Role ofLipoproteins in Atherosclerosis:Novel Directions for Diagnosisand TargetingTherapy[J].Aging Dis,2022,13(2):491⁃520.[4] Kim K H,Lee M S.Autophagy⁃a key player in cellular andbodymetabolism[J].Nat Rev Endocrinol,2014,10(6):322⁃337.[5] Ouimet M,Ediriweera H,Afonso M S,et al.microRNA⁃33Regulates Macrophage Autophagy in Atherosclerosis[J].Arterioscler Thromb Vasc,Biol,2017,37(6):1058⁃1067. [6] 徐浩,史大卓,殷惠军,等. 瘀毒致变”与急性心血管事件:假说的提出与临床意义[J].中国中西医结合杂志,2008,28(10):934⁃938.[7] 史大卓,徐浩,殷惠军,等. 瘀”㊁ 毒”从化 心脑血管血栓性疾病病因病机[J].中西医结合学报,2008,6(11):1105⁃1108.[8] 张莹,马晓娟,史大卓.冠心病瘀毒理论与血小板 血栓 炎症网络[J].中国中西医结合杂志,2018,38(3):375⁃378. [9] 王铭铭,李平,李瑞杰,等.基于心脉癥瘕谈慢性冠脉综合征的中医病因病机[J].环球中医药,2023,16(1):103⁃106. [10] 熊乐文,金莹,王彦予,等.金银花酚酸类化学成分㊁药理活性及体内代谢研究进展[J].中成药,2022,44(3):864⁃871.[11] 吴娇,王聪,于海川.金银花中的化学成分及其药理作用研究进展[J].中国实验方剂学杂志,2019,25(4):225⁃234. [12] 杜叶青,段治康,董舒卉,等.基于网络药理学的金银花活性成分抗炎作用机制的研究[J].中国药物化学杂志,2019,29(2):96⁃102.[13] 秦双双,朱艳霞,韦坤华,等.鸡血藤的本草沿革与黄酮类成分及其药理学研究进展[J].中国中药杂志,2018,43(11):2216⁃2223.[14] 王春丽,潘春柳,姚李祥,等.鸡血藤的化学成分和药理作用研究进展[J].现代中药研究与实践,2021,35(2):96⁃102. [15] 林艳,肖榕,李春,等.生/制/发酵何首乌化学成分㊁药理作用及肝毒性研究进展[J].中药新药与临床药理,2018,29(5):661⁃672.[16] 杨山景,封安杰,孙越,等.白芍总苷的药理作用及机制研究进展[J].中国现代应用药学,2021,38(13):1627⁃1633. [17] 徐佳新,许浚,曹勇,等.中药白芍现代研究进展及其质量标志物的预测分析[J].中国中药杂志,2021,46(21):5486⁃5495.[18] Soehnlein O,Libby P.Targeting inflammation in atherosclerosis⁃from experimental insights to theclinic[J].Nat Rev DrugDiscov,2021,20(8):589⁃610.[19] Bäck M,Yurdagul A Jr,Tabas I,et al.Inflammation and itsresolution in atherosclerosis:mediators and therapeuticopportunities[J].Nat Rev Cardiol,2019,16(7):389⁃406. [20] XU F,LI X,HUANG X,et al.Development of a pH⁃responsivepolymersome inducing endoplasmic reticulum stress and autoph⁃agyblockade[J].Sci Adv,2020,6(31):eabb8725. [21] HAN B,HE C.Targeting autophagy using saponins as atherapeutic and preventive strategy against humandiseases[J].Pharmacol Res,2021,166:105428.(收稿日期:2023⁃06⁃22)(本文编辑:张楠)。
穿山龙对哮喘大鼠气道炎症的影响
・２５０・ 中国中医药科技２０１３年５月第２Ｏ卷第３期Ｍａｙ ２０１３ Ｖｏ１．２０ Ｎｏ．３ 穿山龙对哮喘大鼠气道炎症的影响水 王媛 陈晓庆 王 非 骆仙芳 （ 浙江中医药大学附属第一医院・杭州３１０００６ 山东省莱芜市人民医院・莱芜２７１１００） 摘要 目的：观察穿山龙对哮喘大鼠肺内嗜酸粒细胞（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ，Ｅｏｓ）及肺组织病理学变化的影响。 方法：５０只大鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、穿山龙组及穿山龙＋醋酸泼尼松组。采用 卵白蛋白（ＯＶＡ）致敏激发法建立哮喘大鼠模型，分组给药７天，镜下观察各组大鼠肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中 Ｅｏｓ数量及大鼠肺组织病理形态学改变、Ｅｏｓ浸润情况并计算病理炎症程度积分。结果：穿山龙各治疗组 大鼠ＢＡＬＦ及肺组织中Ｅｏｓ数量明显低于模型组（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．Ｏ１）；穿山龙各治疗组肺组织病理形 态学改变较模型组明显减轻，病理炎症程度积分较模型组明显降低（Ｐ＜０．０５或Ｐ＜０．０１）。结论：穿山 龙能减少哮喘大鼠气道内Ｅｏｓ的浸润，能够明显减轻哮喘气道炎症。 主题词 哮喘／中医药疗法 穿山龙／治疗应用 大鼠
支气管哮喘（简称哮喘）是最常见的气道疾病之一，以 气道高反应性及可逆性气道阻塞为临床特征，病理上是以嗜 酸粒细胞（Ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ，Ｅｏｓ）为主的多种细胞和细胞组分参 与的气道慢性炎症性疾病 Ｊ，干预治疗以控制哮喘气道炎 症为主。目前临床以糖皮质激素应用最广，并取得了显著疗 效，但是长期应用存在诸多副作用，且部分患者疗效欠佳。 不少医家积极探索中西医结合治疗哮喘的途径，取得不小成 绩。 中药穿山龙在临床上治疗哮喘取得一定疗效，在此基础 上笔者通过建立哮喘大鼠模型，观察哮喘大鼠支气管肺泡灌 洗液（ＢＡＬＦ）中白细胞总数及Ｅｏｓ计数、肺组织病理变化及 炎症程度，探讨中药穿山龙对哮喘大鼠气道炎症的影响，为 ｌ临床用药提供实验依据。 １实验材料 １．１实验动物选取清洁级ＳＤ雄性大鼠５０只，体重２００ ～２５０ｇ，由浙江中医药大学动物实验中心提供，于动物实验 中心三级实验动物房内分笼饲养。环境温度２５￣Ｃ，湿度 ７０％，光照黑暗各１２小时，喂食无菌大鼠专用颗粒饲料，自 由饮水，检疫１周，无不良反应，进食、饮水、活动正常，确认 为健康大鼠。 １．２实验试剂及药品ＯＶＡ（Ｖ级）：Ｓｉｇｍａ公司；多聚甲醛： Ｓｉｇｍａ公司。穿山龙浸膏：由浙江中医药大学附属第一医院 中药制剂室制备，提供浓度为１ｇ／ｍｌ；醋酸泼尼松片：浙江仙 居制药厂，批号：０７１０８９。 ２实验方法 ２．１哮喘模型的建立及分组给药 采用卵白蛋白（ＯＶＡ） 注射雾化吸入致敏及激发法复制哮喘大鼠模型。实验第１ 天与第８天，将大鼠以九点注射法（腹腔注射０．４ｍｌ、双侧足 跖皮下各０．０５ｍｌ、双侧腹股沟皮下各０，０５ｍｌ、双侧胸前皮下 ０．１ｍｌ、颈部皮下０．１ｍｌ、背部皮下０．１ｍ１）注射新鲜配制的 浙江省中医药科技计划项目Ｎｏ．２００８ＣＡ０２０ ０．０１％ＯＶＡ＋１０％Ａ１（ＯＨ） 生理盐水混悬液共ｌｍｌ以致敏； 第１５天起，将大鼠分别置于玻璃容器中，以１％ＯＶＡ生理盐 水溶液超声雾化，自然吸入２Ｏ分钟，诱发哮喘，每天１次，共 ７天。以呼吸急促深快、烦燥呛咳及点头运动等症状出现为 激发成功。造模大鼠随机分成模型组、醋酸泼尼松组、穿山 龙组、穿山龙＋醋酸泼尼松组，每组１Ｏ只。另设正常对照组 ｌ０只用等量生理盐水替代进行腹腔注射和雾化吸入。 各组分别于实验第１５天灌胃给药，根据体表面积比等 效剂量换算比率计算，穿山龙治疗组分别给穿山龙流浸膏 ５ｍｌ・ｋｓ （相当于５ｇ・ｋｇ。生药），醋酸泼尼松组给醋酸泼 尼松混悬液１０ｍｇ・ｋｇ～，穿山龙＋醋酸泼尼松组给穿山龙 流浸膏５ｍｌ・ （相当于５ｇ・ｋｇ 生药）和醋酸泼尼松混 悬液５ｍｇ・ｋｇ～，正常对照组、模型组给生理盐水，各组均于 雾化吸入２小时后给药，每天１次，连续给药７天。 ２．２观察指标及检测 于末次雾化激发后（造模后第２２ 天）２４小时，将各组大鼠全部处死。 ２．２．１支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）白细胞和Ｅｏｓ计数常 规消毒，开胸暴露气管至左右分支处，结扎右肺；再经颈部气 管插入留置针，灌注０．９％生理盐水，每次５ｍｌ，轻轻按摩胸 部２０～３０秒后回抽，共６次，回收量大于９０％。将ＢＡＬＦ放 入离心管中１０００ｒ／ｍｉｎ，４￣Ｃ离心ｌ０分钟，离心的细胞沉淀用 含体积分数为５％胎牛血清（ＦＣＳ）的ＰＲＭＩ一１６４０培养基冲 洗３次，调整培养液为１ｍｌ，进行自细胞总数和Ｅｏｓ计数。 ２．２．２肺组织病理学观察无菌操作下切取右肺上叶肺组 织置于４％多聚甲醛溶液中固定，行常规石蜡包埋、切片。 分别行Ｇｉｅｍｓａ及ＨＥ染色染色观察肺组织中Ｅｏｓ浸润情况 及病理形态学改变。根据光镜下肺组织炎症细胞浸润和上 皮脱落的程度分为“一、＋、＋＋、＋＋＋”４级。“一”未见明 显炎症细胞浸润；“＋”少量炎症细胞浸润，气管结构完整； “＋＋＋”大量炎症细胞浸润，并可见管壁破坏及（或）上皮 脱落；“＋＋”界于“＋”和“＋＋＋”之间。分别记为０、１、２、 ３分，累计做病理学积分。 中国中医药科技２０１３年５月第２０卷第３期Ｍａｙ ２０１３ Ｖｏ１．２０ Ｎｏ．３ ・２５１・ ２．３统计方法采用ＳＰＳＳＩ３．０统计软件分析处理数据，所 得结果用均数±标准差（ ± ）表示。方差齐性两两比较采 用ＬＳＤ联合ＳＮＫ法检验；若不符合正态分布及方差齐性，则 两两比较采用Ｔａｍｈａｎｅ’ｓ 法，组间多重比较用Ｍａｎｎ— Ｗｈｉｔｎｅｙ法。 ３实验结果 ３．１各组大鼠ＢＡＬＦ中白细胞总数及Ｅｏｓ计数结果见表 １。 表１ 各组大鼠ＢＡＬＦ中自细胞、Ｅｏｓ计数（：±ｓ，ｎ＝１Ｏ） 与正常组比较△Ｐ＜０．０５，ＡＡＰ＜０．叭；与模型组比较｝ｆＰ＜ ０．０５．＃＃Ｐ＜０．０１；与穿山龙组比较＋Ｐ＜Ｏ．０５，＋・Ｐ＜Ｏ．０１ ３．２各组大鼠肺组织病理形态学变化正常对照组：ＨＥ染 色见支气管管腔光滑、上皮完整、气道黏膜无水肿，肺泡间隔 正常，气道及』缸管周围偶见Ｅｏｓ，见图１。Ｇｉｅｍｓａ染色见肺组 织结构正常，各级支气管黏膜上皮完整，炎性细胞浸润很少， 偶见Ｅｏｓ，见图２。 模型组：ＨＥ染色见支气管、细支气管管腔狭窄，上皮细 胞增生明显，平滑肌增厚，肺间质充血水肿，气道周围血管扩 张充血，血管周围组织、肺泡壁及肺泡腔内有大量炎性细胞 浸润，以Ｅｏｓ为主，见图３。Ｇｉｅｍｓａ染色见支气管管腔狭窄， 管壁增厚，气管黏膜及黏膜下层见大量Ｅｏｓ浸润，见图４。 醋酸泼尼松组与穿山龙＋醋酸泼尼松组：ＨＥ染色可见 肺泡间隔变薄，肺间质轻度充血水肿，细支气管及血管周围 少量Ｅｏｓ浸润，但较模型组明显减轻，见图５、图７；Ｇｉｅｍｓａ染 色可见细支气管管壁Ｅｏｓ浸润明显减少，见图６、图８。 穿山龙组ＨＥ染色见肺问质充血水肿，细支气管管壁有 炎症细胞及Ｅｏｓ浸润，但较模型组减轻，见图９；Ｇｉｅｍｓａ染色 见细支气管壁仍有少量Ｅｏｓ浸润，见图１０。
黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响
黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响刘树民;张琳;李颖;罗明媚【期刊名称】《中药药理与临床》【年(卷),期】2006(000)004【摘要】目的:观察单用黄药子和黄药子配伍当归后对大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定大鼠肝CYP1A2、CYP2E1基因mRNA在给药后的变化.结果:黄药子组明显诱导CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达,黄药子配伍当归后mRNA表达受到抑制. 结论:黄药子诱导P450酶系CYP1A2和CYP2E1mRNA的表达,导致肝中毒.当归配伍黄药子后抑制mRNA表达拮抗肝中毒.【总页数】2页(P97-98)【作者】刘树民;张琳;李颖;罗明媚【作者单位】黑龙江中医药大学中医药研究院,哈尔滨,150040;黑龙江中医药大学中医药研究院,哈尔滨,150040;哈尔滨医科大学营养与食品卫生学教研室;黑龙江中医药大学中医药研究院,哈尔滨,150040【正文语种】中文【中图分类】R28【相关文献】1.黄药子与甘草配伍对大鼠肝脏CYP3A1、CYP2E1mRNA表达的影响 [J], 赵艳;朴宏鹰;褚晓杰;王欣2.黄药子与当归配伍对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1基因mRNA表达的影响 [J], 刘树民;张琳;李颖;罗明媚3.甘草与海藻大戟芫花配伍对大鼠肝脏CYP2E1酶活性及mRNA表达的影响 [J], 徐芝秀;石苏英;金科涛;王宇光;高月4.黄药子配伍甘草对大鼠肝脏CYP1A2、CYP2E1蛋白表达影响的实验研究 [J], 华碧春;刘娇;黄智锋;史道华;廖华军;林芳5.黄药子与甘草配伍对大鼠肝脏CYP450基因表达的影响 [J], 华碧春;黄智锋;刘娇;程心玲;陈小峰;王英豪;卓实;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
基于SIRT3β-cateninPPARγ信号通路探讨芪参益气滴丸治疗急性心肌梗死模型大鼠的作用机制
2020年12月第22卷第6期December2020,Vol.22,No.6湖北中医药大学学报Journal of Hubei University of Chinese Medicine•9•基于SIRT3/p-catenin/PPAR y信号通路探讨茂参益气滴丸治疗急性心肌梗死模型大鼠的作用机制邢少杰，郑淑霞，卞丹丹，曹兴旺，李旭(首都医科大学电力教学医院感染性疾病科，北京100073)摘要：目的基于沉默信息调节因子3(SIRT3邓-连环蛋白(p-catenin)/过氧化物酶体增殖物激活受体丫(PPARy)信号通路探讨英参益气滴丸治疗急性心肌梗死(AMI)模型大鼠的作用机制。
方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、阿司匹林组、英参益气滴丸组。
建立AMI模型术后48h,各组给予相应的治疗处理。
观察各组左心室射血分数(LVEF)、左心室短轴缩短率(LVFS)、左心室质量指数(LVMI)、微血管密度(MVD),检测各组白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)、核因子-k B(NF-k B)、SIRT3、p-catenin.PPARy mRNA的表达水平。
结果与正常组相比，模型组LVEF、LVFS显著下降(均P<0.01),LVMI显著增高(P<0.01);与模型组相比，阿司匹林组、英参益气滴丸组LVEF、LVFS显著增高(均P<0.01),LVMI显著下降(P<0.01)；与阿司匹林组相比，英参益气滴丸组LVEF、LVFS均显著增高(均P<0.01),LVMI显著下降(P<0.05)。
与正常组相比，模型组MVD显著增高(P<0.01)；与模型组相比，阿司匹林组、英参益气滴丸组MVD显著增高(P<0.01)；与阿司匹林组相比，英参益气滴丸组MVD显著增高(P<0.01)。
与正常组相比，模基金项目:北京市自然科学基金资助项目(项目编号:7204303)作者简介:邢少杰(1964-),男，首都医科大学电力教学医院感染性疾病科主治医师.研究方向：急诊社区肺炎的分布状况。
瓜蒌薤白汤对博来霉素致大鼠肺纤维化内质网应激反应的影响
ｆａｎ１０１１＠１６３．ｃｏｍ
１ 材 料 １．１ 实 验 动 物 健 康 清 洁 级 雄 性 Ｗｉｓｔａｒ大 鼠 ４０ 只 ，购 于 安 徽 医 科 大 学 实 验 动 物 中 心 ［动 物 生 产 许 可 证号 为 ＳＣＸＫ（皖）２０１１００２，动 物 使 用 许 可 证 号 为 ＳＹＸＫ（皖）２０１１００７］，体质量１６０～２００ｇ，周龄 ６～ ７周，所有大鼠均不带有人兽共患 病 原、烈 性 传 染 病 病原、常见传染病 病 原 及 对 动 物 危 害 大 和 对 研 究 干 扰大的病原，且 所 有 大 鼠 具 有 相 同 遗 传 背 景。 实 验 前对其进行１周的 适 应 性 喂 养，保 证 大 鼠 可 自 由 进 食、饮水，维持正常的昼夜 规 律，设 置 环 境 湿 度 ５０％ 左右，温度２４ ℃左 右。大 鼠 所 用 饲 料 为 标 准 饲 料， 由安徽中医药大学实验动物中心提供。 １．２ 实验用药 强的松（批号 １１０４６５）由 浙江仙 琚 制药股份有 限 公 司 生 产；瓜 蒌 （批 号 ２０１２１１０３）、薤 白（批号 ２０１２１０１５）均由深南中药饮片公司提供，购 入后均由安徽中医药大学第一附属医院主任中药师 李 立 华 进 行 相 应 鉴 定 ，鉴 定 标 准 参 考 《中 华 人 民 共 和 国药典》２０１５年版。瓜蒌薤白汤 是 通 过 正 交 试 验 验 证的提取方案获得的浓缩醇提取物。临用时由生理
林 家 猛１，李 立 华２
（１．云南省玉溪市中医院药学部，云南 玉溪 ６５３１００； ２．安徽中医药大学第一附属医院药学部，安徽 合肥 ２３００３１）