免疫组化相关问题-个人总结
免疫室个人工作总结
免疫室个人工作总结
我在免疫室的工作总结如下：
一、工作内容：
1. 负责免疫室的日常运行，包括准备实验材料、操作和维护设备等。
2. 进行细胞培养、细胞分离、细胞凋亡实验等实验工作。
3. 参与免疫检测，包括ELISA、流式细胞术、免疫组化等。
4. 负责记录实验数据和维护实验记录。
5. 参与实验结果分析和结果报告的撰写。
二、工作成果：
1. 成功完成了多项细胞培养实验，保证了实验的进行和可靠性。
2. 参与了多个免疫检测项目，并取得了良好的实验结果。
3. 准确记录了实验数据，并及时整理提交了实验报告。
4. 主动学习并掌握了免疫室的仪器操作和维护，确保设备的正常运行。
5. 在团队协作中积极参与，有效沟通并解决实验中遇到的问题。
三、工作收获：
1. 提高了细胞培养技术和免疫检测技术的实际操作能力。
2. 对数据分析和结果解读有了较深入的了解。
3. 增强了团队合作意识和沟通能力。
4. 学习了实验安全操作规范，提高了实验室安全意识。
四、工作反思：
1. 在实验操作过程中需要更加仔细和细心，以提高实验的准确
性。
2. 进一步加强自己的专业知识和技能学习，以适应免疫室工作的需求。
3. 加强与团队成员的沟通和协作，更好地完成团队任务。
以上是我在免疫室的工作总结，希望能够不断提升自己，在今后的工作中做得更好。
免疫组织化学问题解答
免疫组织化学问题解答免疫组织化学是一种什么方法？免疫组织化学方法是一种把分子水平的物质准确具体表达出来的一种方法，这些分子水平的物质可能与癌细胞，细菌，病毒等等有关。
自从成功地制作出这些特异性的抗体，使组织结构可以从分子水平中显示出来，这些特异性抗体可以与肿瘤细胞中特定的结构结合，这些抗体被称为单克隆抗体。
把这些单克隆抗体孵育在组织切片上，与特定的靶细胞进行特异的反应。
如单克隆抗体可以与癌细胞发生特异性反应，单克隆抗体可以从特定的肿瘤病人血细胞中获得。
在组织切片中结合的抗体可以用棕色或红色显示出来。
比如，对转移到骨组织中的肿瘤细胞进行标记实验，我们可以用前列腺特异性抗体进行标记，如显示出棕色或红色的阳性反应，我们可以明确地判断这个转移性肿瘤来自前列腺癌，有些转移的肿瘤距原发部位可能更远。
免疫组织化学不仅能帮助准确地诊断出肿瘤的性质，还可以预测肿瘤预后的生物学行为。
例如，我们可以知道所有组织细胞的增殖活性。
这不是更有意义的实验吗？我们能够判定在一种肿瘤组织中，80%的细胞增殖抑制了其他10%的肿瘤细胞的增殖，我们可以判定出这种肿瘤细胞增殖率高，要比其他肿瘤生长迅速，进展快。
在其他方面，免疫组织化学染色可以指导某些肿瘤的化疗，如：可以测定女性乳腺癌细胞中携带雌激素受体的含量。
如果癌细胞中雌激素表达阳性，病人可以进行三苯氧胺的治疗，雌激素能够促进乳腺癌细胞的生长，三苯氧胺有封闭癌细胞中雌激素受体的功能。
在此过程中，携带雌激素受体的癌细胞是通过激素促进它生长的，而且，癌细胞增生可以通过三苯氧胺治疗来阻止其生长的。
因此，免疫组织化学测定雌激素受体的表达情况，可以预测三苯氧胺治疗的意义。
这仅仅是免疫组织化学应用中的一个小例子。
免疫组织化学在确定组织起源中的应用前景是无限的。
免疫组化技术是一个复杂的生物技术，对每一个抗体标记物都有独自特定的染色方法，目的是能够明确各种组织起源，判定组织中是否存在特异抗原。
病理医生是如何对癌症做出诊断的?癌症病人就诊时，外科医生会在肿瘤部位取一小块组织，送给病理科医生。
免疫检验室个人总结
免疫检验室个人总结引言免疫检验室是医学实验室中的重要部分，负责检测人体免疫系统的功能和疾病相关指标。
作为一名在免疫检验室工作的人员，我在这里记录了一些个人的总结和体会，希望能对未来的工作有所帮助。
免疫检验的工作内容免疫检验的工作内容包括：血清学检验、自身抗体检测、免疫组化检验、流式细胞术检验等。
具体工作包括样本的接收、处理、准备检测所需试剂和设备、进行检测、结果分析和报告等。
免疫检验所需技能和知识免疫检验涉及到许多专业的技能和知识，包括免疫学、细胞生物学、分子生物学、实验室操作技术等。
作为一名在免疫检验室工作的人员，我们需要具备扎实的理论知识和实践操作能力。
此外，良好的团队合作能力、耐心和细致的工作态度也是必备的素质。
提高工作效率的方法在免疫检验室工作，效率的提高是非常重要的。
以下是我总结的一些提高工作效率的方法：1. 合理安排时间：工作中，我们需要面对各种不同的任务，包括样本处理、设备操作、数据分析等等。
合理安排时间，设立工作目标和时间节点，将有助于提高工作效率。
2. 规范操作流程：不断规范和完善工作流程，使得操作变得更加高效。
熟悉试剂的使用方法、设备的操作步骤，以及相关实验操作规范，可以减少错误和重复操作，提高工作效率。
3. 合理分工与协作：在免疫检验室中，通常需要进行大量的样本处理和检测，这需要人员之间的合理分工和协作。
团队内部的良好沟通和协调，可以大大提高工作效率。
4. 持续学习和进修：免疫学科的发展非常迅速，新的技术和方法层出不穷。
作为免疫检验人员，我们需要持续学习和进修，了解最新的研究进展和技术应用，保持专业素养和竞争力。
工作中的挑战和应对策略在免疫检验室工作中，我们会遇到一些挑战和困难。
以下是我总结的一些应对策略：1. 样本处理的复杂性：不同的样本来源和样本性质会对样本处理带来一定的困难。
在处理样本时，我们需要仔细阅读相关文献和操作手册，学习专业知识和经验，根据实际情况进行适当的优化和改进。
免疫组化实验常见问题及解决方案
解决办法
通透作用破坏了膜
去除缓冲液中的通透剂
固定的方法对抗原不合适
尝试不同的固定剂，关于固定剂的使用选择见补充材料
没有及时固定引起抗原扩散
取材后立即固定
可能原因
解决办法
缺乏抗原
做Western blot检测目标蛋白是否有表达或原位杂交检测mRNA是否有表达
抗体无效
避免反复冻融；用阳性片子进行检测
抗原修复无效
改进抗原修复方法
抗原-抗体结合不足
加大一抗浓度，增加孵育时间
抗体不能穿过细胞
加Triton x-100到封闭液中，通透组织
2，高背景
下图样本是小鼠皮下移植瘤组织，目标蛋白LYVE1，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，B图背景高。
可能原因
解决办法
脱蜡不足
适当延长二甲苯浸泡次数和时间
干片，组织过于干燥
避免干片
抗原修复过度
减少修复时间
内源性酶干扰
添加淬灭操作
Fc受体干扰
用二抗来源的血清取代BSA封闭
抗体浓度过高
适当增加稀释比例
染色时间过长
镜检观察显色，合膜组织，目标蛋白IL-10，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，在与A图相同位置的B图中没有检测到抗原，反而在组织边缘检测到组织表达。
下图样本是人小肠粘膜组织目标蛋白il10a图是我们想得到的结果b图是做出来的实验结果在与a图相同位置的b图中没有检测到抗原反而在组织边缘检测到组织表达
免疫组化实验常见问题及解决方案
1，缺乏染色
下图样本是正常人肝血管组织，目标蛋白是α-平滑机动蛋白，A图是我们想得到的结果，B图是做出来的实验结果，与A图相比，在红圈处并没有检测到抗原。
免疫组化常见问题及解决方法
免疫组化常见问题及解决方法 生物谷网站当免疫组化染色没有出现预期结果时，应系统地查找原因，而每一次只能排除一种可能的原因。
对照/标本无染色①确认是否忽略了应该加的某种试剂，包括一抗、二抗、三抗及底物等。
②确认所有的试剂是否按正确的顺序加入，是否孵育了足够的时间。
③对照抗体的标签确认是否使用了正确的抗体，以及所用的检测系统是否和一抗匹配，这一点是非常重要的。
比如，如果一抗是兔来源的抗体，二抗一定要用抗兔的二抗来匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必须是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。
④检查抗体所使用的稀释度及稀释溶液。
⑤检查抗体的有效期和保存条件，尤其是标记了酶或荧光素的抗体，现在大多数试剂公司的抗体均要求在4~8℃条件下保存，应避免反复冻融，试剂保存时一定要避免与挥发性有机溶剂同放一室，以免降低抗体的效价。
⑥检查标本的储存条件，最好用已知阳性的标本来同时做阳性对照。
⑦检查色原/底物溶液，最简单的检测方法是将一滴标记有酶的抗体加入到制备好的底物溶液中，如果底物发生预期的颜色变化，则可排除底物的因素。
需要注意的是，有些底物在制成工作液后应在一定时间内用完，否则会失效。
⑧检查冲洗液是否和反应试剂匹配，溶液的pH值很重要，与过氧化物酶底物匹配的溶液中不应含有叠氮钠。
⑨检查复染剂和封片剂是否和所使用的色原匹配。
弱阳性如果阴性对照没有染色而阳性对照标本弱阳性，除了考虑上述因素外，还应考虑：①标本的固定方式，不当的固定方式或固定时温度过高，都会影响到所检测的抗原的数量和质量。
②不适当的抗原修复方式，由于石蜡切片在制作的过程中固定剂对抗原的封闭作用，必须用抗原热修复或酶消化或两种同时使用的抗原双暴露法，至于使用哪一种方法，应参照生产厂家的说明，同时结合标本的具体情况而定。
③抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间是否正确。
一般试剂生产厂家都会对试剂给出一定的使用范围，但是由于使用者的标本来自各种组织，处理过程也不尽相同，所以应参照使用范围，对所使用的一抗进行梯度测试，找出最佳的使用浓度。
资料：免疫组化成功的经验和失败的教训汇总
提醒0» »窗体顶端版内版内全站搜索窗体底端1...【原创】免疫组化成功的经验和失败的教训汇总 [精华]丁香园版主2007-09-22 10:37 分享分享到哪里？本人最近已做石蜡切片的免疫组化多次，多是成功的，但也遇到许多预想不到的结果和现象，现汇总问题如下，望高手们参与讨论，给出正确的、完整的、权威答案。
同时也希望大家补充问题，共同交流经验、体会、感悟。
1. 石蜡切片在染色过程中出现脱片现象？2. DAB显色后发现切片着色不均匀：如一片着色，一片不着色或染色浅？3. 免疫组化结果老是出现阴性结果？4. 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？5. 一抗从4度拿出后，为什么有人说要37度复温，目的是什么？6. 免疫组化中抗原修复的最佳条件是什么？尤其是微波修复。
7. 有人在一抗孵育前用tritonX100来通透细胞，对石蜡切片需要否？8. 苏木素复染的时间应该是多少？复染过度咋办？9. 抗原修复应在灭活POD之前还是之后？10. DAB显色时间到底多少为最佳？一定要是3~10分钟吗？11. DAB呈色后到底什么样染色是特异性染色？。
相关链接：【整理】免疫组化技术资料大全（原理、步骤、注意事项、教程及常见问题解答）【整理】免疫荧光组织（细胞）化学和免疫胶体金技术大全（原理、试剂和器材、操作流程、常见问题及其解决方法）【原创】免疫组化技术常见问题及其解答集锦票数论文版历年精品荟萃wh2008 edited on 2008-07-20 19:26 •2007-09-22 10:56 分享分享到哪里？丁香园版主针对问题2着色不均匀：1. 脱蜡不充分。
可以60度烤20min，立即放入新鲜的xylene1－2；2. 水化不全。
应经常配制新鲜的梯度乙醇；3. 抗体没混匀。
用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂；4. 抗体孵育时，切片放倾斜；5. 抗体孵育后PBS冲洗不充分。
6. 制片厚薄不均匀等问题。
总结：PD-L1免疫组化检测难点与要点
总结：PD-L1免疫组化检测难点与要点PD-L1(programmed death ligand 1)全称程序性死亡受体配体1，是PD-1（programmed cell death 1,程序性死亡受体1）的配体。
PD-L1属于细胞膜上的⼀个跨膜蛋⽩，表达在T细胞、B细胞等免疫细胞以及肿瘤细胞上，研究表明当肿瘤细胞膜上的PD-L1与T细胞等免疫细胞上的PD-1结合后，肿瘤细胞发出抑制性信号，进⽽T细胞不能识别肿瘤细胞和对肿瘤细胞产⽣杀伤作⽤，机体的免疫功能受到抑制。
如何筛选可能获益于PD-1/PD-L1抑制剂疗法的患者是临床最关注的问题。
PD-L1免疫组化检测是预测PD-1/PD-L1抑制剂疗效的⼀种简单有效的⽅法。
⽬前，已被FDA/NMPA批准的PD-1/PD-L1抑制剂的适应症、PD-L1检测平台和判读⽅法见下表。
作为PD-1/PD-L1 免疫检查点抑制剂药物的疗效预测标志，PD-L1 检测已经获FDA批准作为免疫治疗的伴随诊断或补充诊断。
⽬前，PD-L1免疫组化检测试剂盒/抗体主要有五种：22C3、28-8、SP263、SP142和73-10，分别在两个免疫组化平台Dako和Ventana进⾏检测。
FDA只批准了Dako 22C3 pharmDx的PD-L1检测作为K药的伴随诊断，Dako 28-8和 Ventana SP142则分别为O药和T药（Atezolizumab）的补充诊断。
Ventana SP263 被欧盟认证作为三种免疫抑制剂的补充诊断。
当前⾯临的检测难题：1 不同抗体要求使⽤不同的检测平台主流检测平台为两家公司的4种抗体检测平台，分别为DAKO 22C3和28-8检测的AutoStainerLink 48平台和Ventana SP142和SP263检测的Ventana Benchmark Ultra平台。
2 不同的抗体检测结果判读标准不同⽬前主要PD-L1检测抗体使⽤的判读⽅法有TPS、CPS以及分别计算TC和IC判读⽅法，不同判读⽅法的主要差异在与是否计算肿瘤区域阳性表达的免疫细胞数量。
免疫组化经验总结
免疫组化经验总结免疫组化经验总结冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么？1、从一抗的选择方面来看。
有的一抗既能做石蜡切片又能做冰冻切片，而有的一抗只能做冰冻切片，关键取决于所要检测的抗原稳定性，有的抗原不稳定，经过组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等一系列的做石蜡切片的步骤，所检测的抗原易被破坏，这时只能用冰冻切片来做，检测这类抗原的一抗只能做冰冻切片，而那些稳定的抗原，能经受住石蜡切片的的考验，一般来讲也可以用冰冻切片来做，总得来讲，对于既可以用冰冻切片也可以用石蜡切片检测的抗原，用石蜡切片检测的染色效果要比冰冻切片好一些。
2、从研究目的来看。
石蜡切片对组织细胞的定位很准确，而长期冻存组织的冰冻切片可能因冰晶的形成破坏组织细胞形态的结构，并造成抗原的弥散，从而定位不准确。
3、从抗原的保真性来看。
冰冻切片对抗原的保真很好，而石蜡切片在组织固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、脱蜡等过程中可能会对抗原的性质造成影响。
4、从操作步骤的繁琐程度看。
染色过程冰冻切片简单，而石蜡切片要求脱蜡入水、抗原修复等过程，比较繁琐。
5、总之，石蜡切片对标本的长期保存较合适，且组织细胞形态结构保持好；而冰冻切片适合对新鲜组织的制片，然后立即固定、染色效果较好，且免疫荧光中可以相对避免石蜡自发荧光的干扰。
如何避免荧光素提前衰退？1、从荧光标记的二抗孵育开始、二抗孵育后的清洗、保存均要进行避光；2、选择质量好的荧光素标记的二抗：亲和力强且衰退时间延长；3、用含有抗荧光萃灭的封片液来封片；4、拍照时尽量缩短激发光对切片的照射时间，最好在暗场环境；5、保存要用指甲油封固后4度避光保存。
6、荧光素标记的二抗浓缩液一定要避光保存：没加石蜡，最后-70度以下低温保存；若加了石蜡油，则-20度保存即可。
普通荧光显微镜的操作指南和注意事项？1、操作指南：（1）关闭房间内的电灯，开启显微镜汞灯。
为延长汞灯的使用寿命，汞灯开启不到15-30分钟的请在15-30分钟后关闭汞灯。
(完整word版)免疫组化常见问题.doc
免疫组化常见问题与回答集锦一、石蜡切片和冰冻切片的比较？1.要求做冰冻切片的不一定能做石蜡切片，这是我向一老师请教得出的结论。
因为作石蜡切片时要高温烤片，可能会破坏组织的抗原性，如果组织的抗原性较稳定，则可作石蜡切片；但是要求做石蜡切片的，可作冰冻切片。
2.冰冻切片的优点是能够较好的保存组织的抗原免疫活性，做免疫组化时不需抗原修复这一步。
缺点是细胞内易形成冰晶而破坏细胞结构，可能会使抗原弥散；切片厚度较石蜡的厚，做的片子没石蜡的漂亮。
当你买一抗时，目录上都写着做什么样的切片，如果它写着只能做冰冻，就不能做石蜡，如写着两者都可，那就都能做。
3.石蜡切片的优点是可以保持组织细胞的形态结构，且容易存放在室温，而冰冻切片比较麻烦，一定要存在 -80oC 的低温冰箱中，尤其是用来做原位杂交的切片，为了防止RNA 降解，保存一贯很重要。
由于石蜡切片可以切到 4 μm 左右，所以原位杂交探针容易渗透到组织中去，容易成功，而且得到的颜色 /形态都较冰冻切片好。
二、一抗的选择要点和技巧是什么？1.单克隆和多克隆抗体的选择。
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。
单克隆抗体能目标明确地与单一的特异抗原决定簇结合，就像导弹精确地命中目标一样。
另一方面，即使是同一个抗原决定簇，在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体，形成好几种单克隆抗体混杂物，称为多克隆抗体。
在抗原抗体反应中，一般单克隆抗体特异性强，但亲和力相对小，检测抗原灵敏度相对就低；而多克隆抗体特异性稍弱，但抗体的亲和力强，灵敏度高，但易出现非特异性染色（可以通过封闭等避免）。
2.应用范围的选择。
有的一抗只能用于 WB ( Western blotting ）或免疫组化、免疫荧光、免疫沉淀等；甚至表明石蜡切片或冰冻切片。
3.种属反应性的选择。
这一点很重要，表明这种抗体可能存在种属差异，且这种抗体适合检测哪种种属动物体内的抗原。
4.种属来源，一般兔来源的多是多克隆；而小鼠来源的多是单克隆，但也有另外。
免疫组化实战经验总结
免疫组化实战经验总结1、切好的切片最好放在4摄氏度左右冰箱里，抗原较不容易丧失。
把要做的切片先分好，做几个抗体可分几盒，还有不正常组织与正常组织要分开。
其余做预实验用。
2、选择实验要做的抗体时，要结合他们的正常组织和癌组织的分别表达率。
3、试剂盒的选择可结合生物素强弱的情况。
如：肝组织生物素含量高，S-P试剂盒生物素含量也高，故不能配合使用。
4、关于抗体试剂等购买，可多家比较，尽可能询问详细。
最好买下该公司的阳性片。
切记尽可能不要先付钱，等预实验成功后再付，还有尽可能节省，因为会有太多你意想不到的情况，都是需要花钱解决的。
买的量尽可能一次性到位，能省就省，风险大的尽量不要省。
若实验过程有问题，大可尽量与该公司技术部联系，寻求解决方案。
若是怀疑抗体质量问题，可要求换货，态度要强硬，协议流程一次到位，不可被对方牵着鼻子走，否则最终结果只能是浪费时间。
若是抗体浓缩液，个人觉得国内的应该都可以做出阳性来，不是国内买不到的话，可考虑国产的，可便宜很多。
5、每次开始做时，都必须先清点实验的必需品是否齐全。
想好可能发生的意外，并先想好补救措施。
6、首次预实验先拿出多张不同的组织切片按最常规的条件进行，若没阳性再拿多张不同组织片（可以与首次相同），条件要适当改进，可先找出一个阳性区域，再深入改进。
7、烤片（单一或综合）程度要适情况而定，可中途拿出甩一甩，尽可能先放在烤箱里烤3小时以上。
切勿把片烤得太久了。
程度刚好，脱蜡效果才会好。
注意做好不同条件的切片标记。
注意温度稳定，再烤片。
8、抗原修复与烤片：温度高低，缓冲系统。
9、二甲苯脱蜡，若是天气太冷，可先把二甲苯整罐放进烤箱加热，同时也可把片放在二甲苯里一起加热脱蜡，这样会更彻底，效果会更好，若是天气不会太冷，那还是室温下脱蜡，要不可能会适得其反。
时间也是适情况而定。
10、脱水与水化。
酒精梯度不同。
高低相反。
11、甲醛固定会导致蛋白之间交联及醛基的封闭作用，从而失去抗原性。
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一般的sp法步骤啊，具体如下：1、烤片，68℃，20分钟，2. 脱蜡：依次将载玻片放入二甲苯-二甲苯-100%酒精-100%酒精-95%酒精-90%酒精-80%酒精-70%酒精，起脱蜡作用的主要是二甲苯,依据的是相似相溶的原理.一般在每个试剂中放10min,天气热可以少放几分钟,相反,天气较冷的话,就要适当延长脱蜡时间,一般为12-15min.3. 抗原修复：脱蜡后在清水中冲洗一段时间，加入3%H2O2-甲醇溶液浸泡10min，从而除去内源性的过氧化氢酶，然后倒掉H2O2，在清水中洗两次，再加入柠檬酸缓冲液，放入微波炉中蒸煮3min（中火），一般刚到沸腾即可，冷却至室温，然后再蒸煮一次，冷却至室温，蒸煮的目的是为了使抗原的位点暴露出来。
4. 血清封闭：冷却至室温后，将柠檬酸缓冲液倒掉，水洗2次，并将载玻片置于PBS 中5min，洗2次，擦干组织周围的PBS液，马上加上血清，使一些非特异性的位点封闭起来，然后放入37°C温箱中半小时。
血清稀释10倍（900µlPBS：100µl血清封闭液）。
5. 加一抗：将温箱中的载玻片取出，用吸水纸擦干载玻片反面和正面组织周围的血清，不洗，加一抗，如果做对照实验，就在对照的组织上加PBS。
加完一抗后于4°C冰箱中保存过夜(≥18h)。
6. 加二抗：将载玻片从冰箱中取出，4℃过夜后在37℃复温45分钟，放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上二抗,然后置于37°C温箱中半小时。
7. 加SABC:将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS 后加上SABC, 然后置于37°C温箱中半小时。
SABC稀释100倍（990µlPBS：10µlSABC）。
8. 加显色剂：将片子从温箱中取出, 放入PBS中洗3次，每次5min，擦干组织周围的PBS后加上显色剂。
（显色剂的配置：在1ml水中加1滴显色剂A，摇匀，然后加1滴显色剂B，摇匀，再加1滴显色剂C，摇匀）A：DAB B：H2O2 C：磷酸缓冲液9. 复染：将显色后的片子用清水冲洗一段时间后，浸泡于苏木精中染色，一般动物组织为半分钟，植物组织3-5min。
然后盐酸酒精分化。
10. 脱水：将复染后的片子置于水中冲洗后，依次将载玻片放入70%酒精-80%酒精-90%酒精-95%酒精-100%酒精-100%酒精-二甲苯-二甲苯。
每个试剂中放置2min，最后浸泡在二甲苯中，搬到通风柜中。
11. 封片：用中性树胶滴在组织旁边，再用盖玻片盖上，要先放平一侧，然后轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好片子后置于通风柜中晾干。
1. 固定最好用4%的多聚甲醛固定液。
对于冰冻切片，甲醛固定有时比冰冻丙酮好；但对于不同的组织和抗原，可选用不同的固定液。
有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液，请于购置前注意说明书。
（1）BouinS固定液：饱和苦味酸750ml，甲醛250ml，冰醋酸50ml，其对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整，但因偏酸，对抗原有一定损害，且组织收缩明显，不适于组织标本的长期保存。
（2）PLP液：即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛，适于固定石蜡切片。
适于富含糖类组织，对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。
2. 组织脱水、透明时间不能太长，否则在切片时容易碎片，切不完整。
3. 切片时展片有些组织在切片后难以在水中展开，这时可适当地在水中加入几滴乙醇。
4.烤片60℃ 30分钟或37℃过夜，温度太高或时间太长，抗原容易丢失。
5. 蜡块及切片的保存最好在4℃保存.6. 脱片问题Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化染色工作中最常用的一种防脱片剂，6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释成60ml的工作液，适合于需要酶消化、微波、高温高压的防脱片处理。
如不行，可用双重处理（APES和Poly-L-Lysine）的切片。
在以上两种条件都行不通的情况下，可用如下方法：切片在脱蜡前，放在APES 1:50 丙酮溶液中浸泡3分钟，晾干，即可进行下一步。
7. 灭活内源性酶（1）HRP系统：3%双氧水灭活（2）AP系统：3%HAc灭活。
8. 暴露抗原对于石蜡切片的免疫组化实验时，必须采用高温加热抗原修复，这将有助于暴露抗原决定簇，从而增加免疫组化染色的强度(不同抗体的最佳修复液请参阅抗体说明书)。
对于不同的组织，不同的抗原，不同的抗体，所采用的方法应不一样，可进行热修复、胰酶消化、既不修复也不消化。
胶原还可以用胃蛋白酶消化等。
9. 封闭在山羊血清封闭，非特异性染色仍然较强时，可延长封闭时间或用浓缩血清封闭10. 抗体稀释应遵循“现用现配”的原则，对于PBS稀释的抗体一定要当天使用。
11. 背景高在抗体浓度、反应时间、反应温度等合适的条件下，如果背景依旧高，可采用含1‰ Tween20的PBS洗，特别是在显色之前要多洗。
12. 返蓝在苏木素复染后，可用碱性缓冲液（如PBS）或Na2HPO4的饱和溶液返蓝。
13. 显色一定要在显微镜下观察，注意控制背景。
14. 在整个操作过程中，切片千万不能干燥，否则会有非特异性染色。
15. 拍照免疫组化切片一般染色不太深，因此拍摄出的照片颜色较浅，就让它浅。
拍摄出的照片中空白部位应尽可能呈现纯白色。
测量其灰度应在250左右。
如果呈现淡蓝色，一般是相机自动白平衡在起作用。
另外一个因素是显微镜灯光电压不正确。
要使灯光本身的色温正确。
既不偏黄，也不偏蓝。
一、柠檬酸钠法1. 把玻片放在玻璃固定架上，再将架子放在盛有600ml的10mM柠檬酸钠（pH6.0）的容器中。
2. 微波中高火6-8min。
3. 室温冷却。
4. 用PBS洗涤3次，每次5min。
二、蛋白酶K法1. 配制新鲜溶液：25μl 20mg/ml蛋白酶K；2.5ml 1MTris-HCl（pH8.0）；0.5ml 0.5M EDTA（pH8.0）；加水定容到50ml。
2. 37℃下，将玻片放在架子上孵育5min（蛋白酶K不要预热）。
3. 用PBS洗涤3次，每次5min。
三、尿素法1. 把玻片放在玻璃固定架上，再将架子放在盛有600ml 的1M尿素（新鲜配制）的容器中。
2. 微波10min，20min或者30min，每5min补充一次蒸发掉的水。
3. 冷却30min到1h。
4. 用蒸馏水洗涤4次，每次3min,再用PBS洗涤3min。
1.烤片，68℃，20分钟,2. 常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；二甲苯I 20min --二甲苯II 20 min--100%酒精I 10min --100%II 10min --95% 5min-- 80% 5min-- 70% 5min3.阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10min，PBS冲洗3X5min；4. 抗原修复:置0.01M枸橼酸缓冲液（PH 6.0）中用煮沸（95℃，15－20min），自然冷却20min 以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。
5. 正常羊血清工作液封闭，37℃10 min，倾去勿洗.6. 滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min（用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照）；滴加生物素标记二抗, 37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;7. 滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min, PBS冲洗3X5min;8. DAB/ H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。
SP法1）脱蜡、水化；2）PBS洗2～3次各5分钟；3）3%H2O2（80%甲醇）滴加在TMA上，室温静置10分钟；4）PBS洗2～3次各5分钟；5）抗原修复；6）PBS洗2～3次各5分钟；7）滴加正常山羊血清封闭液,室温20分钟。
甩去多余液体。
8）滴加Ⅰ抗50μl，室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。
9）4℃过夜后需在37℃复温45分钟。
10）PBS洗3次各5分钟；11）滴加Ⅱ抗40～50μl，室温静置，或37℃1小时；12）II抗中可加入0.05%的tween-20。
13）PBS洗3次各5分钟；14）DAB显色5～10分钟，在显微镜下掌握染色程度；15）PBS或自来水冲洗10分钟；16）苏木精复染2分钟，盐酸酒精分化；17）自来水冲洗10～15分钟；18）脱水、透明、封片、镜检。
SABC法1)脱蜡、水化。
2)PBS洗两次各5分钟。
3)用蒸馏水或PBS配置新鲜的3%H2O2，室温封闭5～10分钟，蒸馏水洗3次。
4)抗原修复。
5)PBS洗5分钟。
6)滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。
甩去多余液体。
7)滴加Ⅰ抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。
8)PBS洗三次每次2分钟。
9)滴加生物素化二抗,20℃～37℃20分钟。
10)PBC洗3次每次2分钟。
11)滴加试剂SABC，20℃～37℃20分钟。
12)PBS洗4次每次5分钟。
13)DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
14)蒸馏水洗。
苏木素复染2分钟、盐酸酒精分化。
15)脱水、透明、封片、镜检。
石蜡组织切片的HE染色1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。
2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min →100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。
3．苏木素染色5min，自来水冲洗。
4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。
5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。
6．置伊红液2min。
7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。
1. Harris苏木紫液：甲液：苏木素1g，无水乙醇10ml。
乙液：硫酸铝钾（或铵）20g，蒸馏水200ml，加温溶解。
甲、乙二液分别溶解后混合，加热煮沸，沸后去火，待溶液不沸腾时即加入氧化汞0.5g（此时有大量气泡生成，故容器宜大，以免液体溢出）。
然后染液迅速冷却，冷却后过滤，即可应用。
用时每100ml 加冰醋酸4ml；2. Mayer苏木素液：将苏木素0.1g 放入蒸馏水100ml 中煮沸溶解，再加入硫酸铝钾5g，和碘酸钠0.02g，搅动直到全部溶解，加入水合氯醛5g 和枸椽酸0.1g，加煮沸5min，冷却、过滤，放置过夜，即可应用。
染色时间约10~20min；3. Ehrlich苏木素：将苏木素2g 溶于无水乙醇100ml 中；将硫酸铝钾15g 溶于蒸馏水100ml 中，加入甘油100ml，将二液混合，最后加入冰醋酸10ml，充分混匀后，盛于无色小口瓶内，暴露于日光下，使其自然成熟，约需3 个月。