选修三现代生物科技专题

例5.（2011·山东济南一模）下列关于基因工程的叙述，
D 错误的是( )
A.目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物
B.限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶
C.人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活
性
D.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促
进目的基因的表达
为自己争气，为母校争光
二、基因工程基本操作程序 1.目的基因的获取途径 (1)直接分离：从自然界已有的物种中分离，如从基因库 中获取。 (2)人工合成目的基因 常用的方法有： ①已知核苷酸序列的较小基因，直接利用DNA合成仪用 化学方法合成，不需要模板。 ②以RNA为模板，在逆转录酶作用下人工合成。
为自己争气，为母校争光 2.基因表达载体的构建（基因工程的核心）
翻译检测：抗原—抗体杂交法
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例6（2011.天津模拟）用于判断目的基因是否转移成功的
方法中，不属于分子检测的是（ A ）
A.通过害虫吃棉叶看其是否死亡 B.转基因生物基因组DNA与DNA探针能否形成杂交带 C.转基因生物中提取的mRNA与DNA探针是否能形成杂交 带 D.转基因生物中提取的蛋白质能否与抗体形成杂交带
作用结果
形成黏性末 端或平末端
形成重组 DNA分子
形成新的 形成单链 DNA分子 DNA分子
为自己争气，为母校争光 (2)限制酶与DNA连接酶的关系
为自己争气，为母校争光
2.载体 (1)种类 ①质粒：一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA 之外，能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 (2)作用 ①作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞内。 ②利用它在宿主细胞内复制，对目的基因进行大量复制 。
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选修三 现代生物科技专题
专题一 基因工程
为自己争气，为母校争光
一、与DNA分子相关的几种酶及基因工程的其他工具
1.与DNA分子相关的酶
(1)几种酶的比较
项目 种类 作用底物
限制酶
DNA连接 DNA聚合
酶
酶
DNA分子
DNA分子片
段
脱氧核苷酸
解旋酶 DNA分子
作用部位 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键
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(3)具备的条件 ①能在宿主细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因，以便进行筛选。
例3.(2011.江苏高考)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割 同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1000个碱基 对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割 位点。
C.显微注射
D.细胞融合
（4）过程②采用的生物技术是__胚__胎___移___植_。技术
例4.（2010·安徽池州调研）如图是将人的生长激素基因导入 细菌B细胞内制造“工程菌”的示意图。已知细菌B细胞内不
C 含质粒A，也不含质粒A上的基因。判断下列说法正确的是(
)
A.将重组质粒导入细菌B常用的方法是显微注射法 B.将完成导入过程后的细菌涂布在含有氨苄青霉素的培养基上， 能生长的只是导入了重组质粒的细菌 C.将完成导入过程后的细菌涂布在含有四环素的培养基上，能 生长的就是导入了质粒A的细菌 D.目的基因成功表达的标志是受体细胞能在含有氨苄青霉素的 培养基上生长
肠杆菌首先需要在含_氨__苄__青__霉__素__的培养基上进行。
（2）能使人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控序
A 列是___________（填字母代号）。
A.启动子
B.tetR
C.复制原点
D.ampR
C （3）过程①可采用的操作方法是_______（填字母代号）。
A.农杆菌转化
B.大肠杆菌转化
别和结合的部 位
在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_C__a_2+_处理大肠杆菌，以
利于表达载体进入：为了检测胰岛素基因是否转录出了
mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA杂交， 该杂交技术称为__分__子__杂__交___技__术___。为了检测胰岛素基因转录
的mRNA是否翻译成__蛋_白__质___，常用抗原-抗体杂交技术。 （3） 如果要将某目的基因通过农杆菌传话法导入植物细胞， 先要将目睹基因插入农杆菌Ti质粒的__T_—__D_N__A__中，然后用该 农杆菌感染植物细胞，通过DNA重组将目的基因插入植物细 胞的染__色__体__D_N__A上。
重
取卵（受精卵） 组表达载体与感
受
获得 感受态细胞吸收
具有新性状的动 DNA分子
物
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4.目的基因的检测与鉴定 （1）分子水平检测 ①导入检测：DNA分子杂交技术，即使用放射性同位素 标记的含目的基因的DNA片段作探针检测。
②表达检测
转录检测：分子杂交法，即目的基因作探 针与mRNA杂交
综合练习
1、（2011.海南高考）（15分） 回答有关基因工程的问题：
（1） 构建基因工程表达载体时，用不同类型的限制酶切割
DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生__平___末端。若要在
限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能
使二者产生相__同___（相同，不同）粘性末端的限制酶。
（2） 利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的表达载体含有人 胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是_R_N__A_聚。合酶识
P180 例2
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3.将目的基因导入受体细胞
生物种类 常用方法 受体细胞
转化过程
植物细胞
动物细胞
Biblioteka Baidu
微生物细胞
农杆菌转化法
显微注射技术
Ca2+处理法
体细胞
受精卵
原核细胞
将目的基因插入到Ti 质粒的T-DNA
导入植物 整合到受体 细胞的DNA 表 达
将含有目的基因 Ca2+
的表达载体提纯
2 （2010·天津理综）下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺
生物反应器的技术路线。图中tetR表示四环素抗性基因， ampR表示氨苄青霉素抗性基因，BamH Ⅰ、Hind Ⅲ、Sma
Ⅰ直线所示为三种限制酶的酶切位点。
.
据图回答：
（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用_H_i_n_d__Ⅲ__和___限 制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含B有a重m组H载Ⅰ体的大