戊二醛(二)
偶连技术
蛋白质交联是指将小分子物质（如药物、半抗原等）或大分子物质（如酶、蛋白毒素等）一共价键的方式连接于蛋白质分子四大行，以制备人工抗原酶标抗体等。
但标志交联方法首先发展于人孔抗原的制备研究。
自70年前Landsteiner第一次合成人工抗原以来，人们将许多没有抗原性的小分子物质如化学药物，神经递质等与蛋白质或多糖等载体大分子物质共价结合，使其具有抗原性，以诱发动物产生特异性抗体，用于放射免疫分析等。
目前经常采用的的偶联方法主要有重氮法，戊二醛法，戊二酸酐法，碳化二亚胺法等。
现将我对上述方法的理解研究归结如下重氮法（1）（2）芳香族伯胺在低温（0～5℃）和强酸（盐酸或硫酸）溶液中与亚硝酸钠作用，生成重氮盐的反应称为重氮化反应。
若环上具有-N02或-SO3H等的芳胺可以高一些（40~60℃）温度进行重氮化反应。
在芳香重氮正离子中，键呈线形结构，键中的一个π 轨道与苯环上的π轨道形成共轭体系，电子离域，使重氮盐在低温、强酸介质中能稳定存在。
苯环上有吸电子基团的重氮盐较为稳定，这是由于强化了与苯环的共轭，重氮盐在弱酸、中性或碱溶液中与芳胺或酚类作用，由偶氮基(－N=N－)将两个分子偶联起来，生成偶氮化合物的反应，称为偶联反应。
可合成偶氮染料。
偶联反应是亲电取代反应，重氮阳离子是弱的亲电试剂，它进攻苯环上电子出现几率密度比较大的碳原子。
重氮盐与酚在微碱性溶液中很快发生偶联反应。
这是由于：带负电的氧原子比中性的羟基更能使苯环活化。
但溶液PH>10:所以在进行偶联反应时，可考虑到多种因素，既考虑到的活性，又要考虑到和酚的活性，选择最适宜的反应条件，才能收到预期的效果。
戊二醛法戊二醛是带有两个活性基团双功能的连结剂，它借助两端的醛基与载体和半抗原的氨基以共价键连接，其反应如下：反应机制脂肪族醛、酮与氨、伯胺的反应可生成亚胺，也称为西佛碱（Schiff base)：脂肪族醛、酮生成的亚胺中含的C=N双键在反应条件下不是很稳定的，它易于发生进一步的聚合反应。
检验科实验室消毒安全规程
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3、消毒处理方法 4.注意事项
（四）HEPA过滤 空气经HEPA滤器过滤、更新后,
可在试验室内再循环使用。
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（五）电离辐射灭菌
1.特征 是利用r射线或电子加速器产生高
能电子束杀死微生物方法。其与惯用高压
蒸汽灭菌及环氧乙烷熏蒸等灭菌方法相比，
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感 激 您 聆 听
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（1）加热熏蒸法 （2）化学熏蒸法
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（二）戊二醛
1、特征 属于高效消毒剂。 2、适用范围 适合用于不耐热医疗器械 和精密仪器。 3.使用方法 （1）消毒液配制 （2）消毒处理方法
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（三）过氧乙酸
1、特征 又叫醋酸，是高效消毒剂。
2、适用范围 耐腐蚀物品灭菌、环境及空气等
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2.彻底消毒 对需消毒物品应采取彻底消毒办
法，不留死角。用消毒剂浸泡消毒时要 确保被消毒物品全部浸没在消毒剂中。 用消毒剂擦拭消毒时，要确保全部需要 消毒表面都被均匀地擦拭到。
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3.有效消毒
（1）要依据消毒对象和微生物种类选
择适当消毒和灭菌方法
视为有较大危险, 应停顿工作, 按要求处理后, 安 全撤离, 对当事人进行一定医疗观察。
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（四）在高等组级生物安全试验室关键 区、半污染区以外发生洒溢
视为有很大危险, 可定位普通事故。
（五）防护服被污染
视为有很大危险, 应立刻就近进行局部消毒。
主管检验师临床医学检验免疫学和免疫检验 第十一章 生物素-亲和素放大技术
第十一章生物素-亲和素放大技术第一节生物素的理化性质与标记生物素（biotin）、亲和素（avidin）是一对具有高度亲和力的物质，它们的结合迅速、专一、稳定并具有多级放大效应。
生物素-亲和素系统（BAS）是一种以生物素和亲和素具有的多级放大结合特性为基础的实验技术，它既能偶联抗原抗体等大分子生物活性物质，又可被荧光素、酶、放射性核素等材料标记。
生物素（biotin，B）广泛分布于动、植物组织中，常从含量较高的卵黄和肝组织中提取。
一、活化生物素利用生物素的羧基加以化学修饰可制成各种活性基团的衍生物，称为活化生物素。
生物素活化后，可容易地与各种抗原、抗体、酶及核酸分子中相应基团偶联形成生物素化标志物。
（一）标记蛋白质氨基的活化生物素此种活化生物素的制备方法是将生物素与N-羟基丁二酰胺在碳二亚胺的作用下进行缩和，生成生物素N-羟基丁二酰亚胺醣（BLAHS）。
BLAHS分子酯键中的—C-=0基团可与蛋白质分子中赖氨酸的氨基形成肽键。
从而使蛋白质标记上生物素。
（二）标记蛋白质醛基的活化生物素用于此类标记的活化生物素有两种：生物素酰肼（BHZ）和肼化生物胞素（BGHZ）。
BHZ是水合肼与生物素的合成物，主要用于偏酸性糖蛋白的生物素标记。
（三）标记蛋白质巯基的活化生物素3-（N-马来酰亚胺-丙酰）-生物胞素（MPB）是能特异地与蛋白质巯基结合的活化生物素试剂。
（四）标记核酸的活化生物素活化生物素可通过缺口移位法、化学偶联法、光化学法及末端标记法等技术使生物素的戊酸侧链通过酰胺键与核酸分子相连，构成生物素标记的核酸探针。
二、生物素标记蛋白质（一）生物素化蛋白质衍生物的特性生物素化蛋白质衍生物有两类：1.生物素化的大分子活性物质，如抗原、抗体。
2.标记材料（如酶）结合生物素后制成的标志物。
（二）标记方法1.标记抗体、抗原选用第二抗体进行生物素标记，制备的标志物具有通用性。
2.标记酶生物素标记辣根过氧化物酶第二节亲和素、链霉亲和素的理化性质与标记亲和素和链霉亲和素是生物亲和素的天然特异性结合物。
第二节 清洁、消毒、灭菌思维导图
对醇类过敏者慎用
性质 黄棕色至红棕色固体粉末、有碘气味
碘与聚醇醚和聚乙烯呲咯酮类表面活性剂形成的络合物，能迅速而持久地 作用原理 释放有效碘，使细菌体等蛋白质氧化失活，从而达到连续杀菌的目的
适用范围 手、皮肤、黏膜及伤口的消毒
擦拭法、冲洗法
碘伏浓度：2-10g/L
黏膜消毒：250-500mg/L
含碘消毒剂——碘伏 （中效）
适用范围 适用于物品、环境、物品表面及空气的消毒
常用浸泡法、擦拭法，时间30min
含氯消毒剂——二氧化氯 （高效）
使用方法
细菌繁殖体污染 100-250mg/L 乙肝病毒、结核杆菌污染 500mg/L
消毒液浓度根据被污染微生物的种类决定
细菌芽孢污染 1000mg/L
空气消毒时 500mg/L,按20-30mg/m3作用30-60min
耐热、耐湿的诊疗器械、器具和物品——压力蒸汽灭菌法
耐热的玻璃器材、油剂类的干粉材料——干热灭菌法
不耐热、不耐湿的物品——低温灭菌法
腐蚀性小的灭菌剂 注意防锈
金属器械的浸泡灭菌
根据消毒物品的性质选择消毒或灭菌方法
（二）消毒、灭菌方法的选择原则
光滑表面——紫外线消毒器近距离照射或用化 学消毒剂擦拭
多孔材料表面——浸泡法或喷雾消毒法
其他
低温蒸汽消毒法
可用于不耐热的物品：如内镜、塑料制品
蒸汽温度73-80℃ 持续10-15min
巴氏消毒法：用于乳类、酒类消毒
液体加热到61.1-62.8℃
保持30min
加热到71.7℃
保持15-16s
适用于医疗器械、器具和物品手工清洗后的初步消 毒，餐饮具和部分卫生用品等耐热、耐湿物品的消毒
第六章普通微生物学课后习题及答案2
一、名词解释灭菌：指采用某种强烈的理化因素杀死物体中所有微生物的措施，包括病原微生物和非病原微生物。
消毒：只利用某种较温和的方法以杀死、消除或降低材料或物体上的病原微生物，使之不能引起疾病的方法；它可以起到防止感染或传播的作用。
防腐：指在某些化学物质或物理因子作用下，能防止或抑制微生物生长繁殖但又未完全致死微生物的一种措施，它能防止食物腐败或防止其他物质霉变，这是一种抑菌作用。
共生关系：两种微生物紧密结合在一起形成一种特殊的共生体，在组织和形态上产生了新的结构，在生理上有一定的分工。
互生关系：两种可以单独生活的生物，当它们生活在一起时，通过各自的代谢活动而有利于对方，或偏利于一方的生活方式。
寄生关系：指一种生物生活在另一种生物的体内或体表，从中取得营养和进行生长繁殖，同时使后者蒙受损害甚至被杀死的现象。
前者称为寄生物，后者称为寄主或宿主。
拮抗关系：由某种生物所产生的某种代谢产物可抑制他种生物的生长发育甚至杀死它们的关系。
分批培养：将微生物置于一定容积的培养基中，经过培养生长，最后一次收获的培养方式。
连续培养：又称开放培养在一个恒定的容积的流动系统中培养微生物，一方面以一定速率不断加入新的培养基，另一方面有以相同的速率流出培养物，以使培养系统中的细胞数量和营养状态保持恒定。
纯培养：在适宜条件下培养纯种得到的培养物。
微生物纯种分离：将多种混杂微生物经某种技术或方法分离成纯种的过程。
混菌培养：两种或两种以上的微生物加以调节控制，不会互相干扰，生长不受抑制，生长在一起的培养方法。
二元培养：由两种具有特定关系的微生物组成的混合培养物。
同步培养：使培养物中所有的微生物细胞都处于相同的生长阶段的培养方法连续培养：又称开放培养在一个恒定的容积的流动系统中培养微生物，一方面以一定速率不断加入新的培养基，另一方面有以相同的速率流出培养物，以使培养系统中的细胞数量和营养状态保持恒定。
恒浊连续培养：根据培养器内微生物的生长密度，并借光电控制系统来控制培养液流速，以取得菌体密度高、生长速度恒定的微生物细胞的连续培养方法。
化学消毒2
8、碘伏
1适. 用范围：皮肤、粘膜、创面、物品 等.
2. 常用浓度：0.5%～2.0%：皮肤消毒 0.05%：粘膜、创面消毒.
3.
常用方法：涂擦、冲洗、浸泡. 4. 注意事项：
1）避光密闭保存于阴凉、干燥 处；
2）宜现用现配；
3）皮肤消毒后勿需乙醇脱碘；
4）不能消毒金属制品。
9、乙醇
1.适用范围：皮肤、 物品表面及医疗器械 等.
6 刷洗指尖
5 刷洗指缝
刷洗手指
消毒洗手
——消毒液浸泡法
二、手的消毒
双手浸泡于 消毒液中
反复擦洗 或两手相互搓擦
2min
擦干或烘干双手
流水冲净消毒液
消毒洗手
二、手的消毒
——消毒液擦拭法
0.3%～0.5% 碘伏或快速手消毒剂 揉搓双手2min，任其自干
注意事项： 二、手的消毒
1．刷手时身体应与水池保持一定距离，以免污染水池或水 溅到身上。
含
3.中效消毒剂
氯消毒剂、过氧化氢等。 能杀灭除细菌芽孢以外的细菌繁
殖体，如乙醇、碘消毒剂等。
4.低效消毒剂 只能杀灭细菌繁殖体，如氯已
定。
（四） 化学消毒剂的使用方法
（1） 浸泡法
（2） 擦拭法
常用于耐湿、 不耐热的物 品，如锐利 器械、精密 仪器的消毒
用于桌椅 、墙 壁、地面的消 毒
应用2%碱性戊二醛与邻苯二甲醛在消化内镜消毒中的综合研究
【 Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ 】 Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｉ ｔ ｖ ｅ Ｔ ｏ ｄ ｉ ｓ ｃ ｕ ｓ ｓ ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ａ ｓ ｏ ｎ ａ ｂ ｌ ｅ ａ ｐ ｐ ｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ ｄ ｉ ｇ ｅ ｓ ｔ ｉ ｖ ｅ ｅ ｎ ｄ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ｄ ｉ ｓ ｉ ｎ ｆ ｅ ｃ ｔ ｉ ｏ ｎ ｗ ｉ ｔ ｈ ２ ％ｇ ｌ ｕ ｔ ａ ｒ ａ ｌ ｄ ｅ ｈ ｙ ｄ ｅ
周丽华， 邓 琼， 阳云超 ， 秦 芩
（ 四川省人 民医院消化 内镜 中心 ， 四川 成都 ６ １ ０ ０ ７ ２ ）
【 摘要 】 目的 探讨在 消化 内苯二 甲醛 的方法。方法
将２ ０ １ ２年 １ 月１
日一 ５月 ３ １日使 用 的 消 化 内镜 设 为 对 照 组 ， ２ ０ １ ２年 ６月 １日 ～１ ２月 ３ １日使 用 的 消化 内镜 设 为 实验 组 ， 对 照 组 消化 内镜
使用２ ％碱性 戊二醛 消毒 ， 实验组 消化 内镜使用邻苯二 甲醛 消毒 ； 随机现 场采样 ， 对比分析 两组 内镜 的 消毒效果 、 时间、 工
作效率。结果 两组 内镜消毒效果对 比无 统计 学差异 （ Ｐ＞ ０ ． ０ ５ ） ； 消毒 时间与效 率对比差异 有统计 学意 义（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。
四川医学 ２ ０ １ ３年 ８月第 ３ ４卷（ 第 ８期 ） Ｓ ｉ ｃ ｈ ｕ ａ ｎＭｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ， ２ ０ １ ３， Ｖ ｏ １ ． ３ ４， Ｎ ｏ ． ８
・１ １ ３ ７・
论 著 应用 ２ ％ 碱 性 戊 二 醛 与 邻 苯 二 甲醛 在 消 化 内镜 消 毒 中 的 综 合 研 究
邻苯二甲醛消毒液的特点及使用方法
朗索邻苯二甲醛的特点及使用方法
一般来说，软式内镜高水平消毒可选用邻苯二甲醛、过氧乙酸、戊二醛、二氧化氯、酸性氧化电位水等；软式内镜灭菌可选用灭菌设备或过氧乙酸、戊二醛等。
一、朗索邻苯二甲醛又被称为新型高效消毒剂OPA,可全面替代戊二醛，其有如下5特点：
1、更快速：即开即用，无需激活、混合或稀释；5min实现高水平消毒；比戊二醛节省50%-75%时间；缩短了内镜消毒循环周期，提高周转率。
2、更安全：无需特殊的通风装置；无OSHA允许暴极限；无吸入毒性，黏膜毒性；近十年广泛使用至今未见急性毒性、致畸变、致突变报道。
3、更高效：广泛杀菌效力；5分钟即可杀灭2%戊二醛耐受的分枝杆菌尤其是龟型分支杆菌菌株。
4、更温和：不含任何表面活性剂；接近中性PH值；广泛的材料相容性。
5、更持久：在高负荷使用，平均可持续使用的消毒循环＞戊二醛(戊二醛约40个循环)。
朗索邻苯二甲醛消毒液适用于不耐热内镜的高水平消毒。
配合内镜清洗消毒机及内镜清洗消毒剂相同程序的手工清洗消毒对内镜进行高水平消毒。
二、使用方法：。
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戊二醛
一步氧化法
一步氧化法采用空气、过氧化氢以及酮的过氧化物作为氧化剂，以过氧化氢为氧化剂的方法最具开发前景。
这是因为，过氧化氢价廉易得，且氧化过程条件温和，无需高温高压装置,工艺路线短，产物分离容易，无污染。
所用催化剂通常是钼化合物、钨化合物和杂多酸。
以钨酸为催化剂，叔丁醇为溶剂，在35°C下反应24h,戊二醛收率达80%;氧化催化剂有钼催化剂、钨硼共催化剂、杂多酸催化剂、钨催化剂等。
以30%或50%的过氧化氢水溶液为氧化剂，在叔丁醇存在下使CPE氧化成戊二醛，收率在55%~60%(25%的粗戊二醛水溶液）。
使用该催化剂不仅突破了不能使用水基介质和低浓度双氧水的限制，而且反应条件温和，戊二醛的收率也得到了大幅度的提高。
与其他方法相比，此法具有较大的优越性和工业价值。
以环戊烯为原料，采用钨酸催化剂合成戊二醛。
以双氧水的水溶液为氧化剂，在叔丁醇溶剂中进行均相反应制得戊二醛，可以突破以往研究不能使用水基介质和低浓度双氧水的限制，同时将部分反应中间体转化成戊二醛，反应过程总收率达到65%以上。
试验例如下：
在装有搅拌器、冷凝管的250mL密闭反应器中，按比例依次加入10mL环戊烯（CPE)、50mL叔丁醇（TBA)、钨酸催化剂0.5g,在38°C下，滴加与CPE化学计量比的双氧水，搅拌反应4.5h,得到戊二醛反应液。
氧化反应结束后，按一定配比加入沉淀剂反应6~7h,溶液中戊二醛质量分数为12%~14%。
抽滤除崔化剂及沉淀剂，所得混合液经减压蒸馏除去溶剂，同时将反应液浓缩得到质量分数
为25%的戊二醛产品。
复旦大学开发的环戊二烯氧化法是用C4馏分中的环戊二烯为原料，经部分加氢生成环戊烯，然后用双氧水进行氧化、裂解得戊二醛。
第一步加氢反应采用气-固或液-固相反应，环戊烯收率达90%以上。
然后再在水基介质中，以固体酸为催化剂，双氧水为氧化剂一步氧化制得戊二醛。
该法反应条件温和，操作简便，流程短，在戊二醛的反应、分解、蒸馏过程中，产品收率有大幅度提高，总收率达55%~60%。
在从环戊二烯制备戊二醛的氧化反应中，在合适的催化剂体系和操作条件下，一步氧化制戊二醛的收率大于60%。
该法对设备无特殊要求，可利用气-固相加氢装置与流动床。
采用液-固相反应，也可使用传统的反应釜，仅要求密封以防止低沸点物料泄漏。
利用价廉的环戊二烯制备戊二醛，投资少，效率高，且消耗定额低，如果生产厂家自产双氧水，则生产成本还可大幅度下降，为双氧水氧化环戊烯制备戊二醛的研究实现工业化带来了希望。
日本在环戊烯氧化制戊二醛时，所用的氧化催化剂有杂多酸、砷酸、过渡金属氧化物。
德国和俄罗斯在解聚方面申请的专利较多。
随着乙烯生产装置的大型化，以廉价、丰富的乙烯装置副产物CPD(环戊二烯）为原料制备戊二醛，可使产品成本大辐度降低，是较为理想的合成路线。
以双氧水为氧化剂的环戊二烯一步氧化法具有很大的发展潜力，在不久的将来必将占据主导地位。
实际用途
戊二醛在0.01%的浓度时就开始表现出杀菌活性。
戊二醛在碱性介质中杀菌效果较好，1%的戊二醛异丙醇溶液：在加碱后才表现出活性。
在使用戊二醛时加入0.3%的小苏打可以提高其杀菌能力。
提高温度可以増加戊二醛的杀菌和杀孢子能力。
这一特点对酸性戊二醛来说表现尤为显著。
碱性戊二醛在提高温度时，由于聚合速度的增加，在某些情况下，如加热时间过长，甚至会降低其杀菌能力。
戊二醛最好在酸性pH值3~5条件下储存，也可加入稳定剂。
需要在碱性条件下使用时，最好在使用之前临时调节pH值，而且在任何情况下都不能使pH值高于8.5。
使用不完的酸性戊二醛最好在低温下储存。
戊二醛是一种快速、高效、广谱的化学灭菌剂，对繁殖型的细菌、病毒、分枝杯菌、致病性霉菌和细菌芽孢有高度杀灭效果，且对人畜的毒性很低，无致畸性，是第三代化学灭菌剂。
在羟丙基甲基纤维素（HPMC)存在下，戊二醛能保持杀菌性能不变，其杀菌效果与70%乙醇和含季铵盐的杀菌剂一致。
戊二醛是卫生部推荐的无毒速效杀菌消毒剂，对杀灭乙型肝炎等病毒有奇效。
因而，戊二醛在此方面具有广阔的市场前景。
碱性戊二醛溶液，不仅能快速高效地杀灭大多数细菌、细菌繁殖体、真菌、芽孢和病毒等，而且不腐蚀金属器械和玻璃及塑料制品，并对人体毒性很低，被世界卫生组织推荐为B 型肝炎病毒消毒剂，广泛用于生态环境的消毒灭菌。
工业冷却水中微生物的生长、繁殖会在水处理系统中形成黏泥，它们附着在水冷器的管壁上，影响水侧传热效果，降低换热效率。
它们还会形成氧浓差电池，引起垢下腐蚀。
此外，有些细菌的代谢产物还直接对金属产生腐蚀。
如厌氧性硫酸盐还原菌的还原物硫化氢可直接腐蚀金属，铁细菌可直接将Fe2+氧化成Fe2+,加速金属的腐蚀。
冷却水中微生物的腐蚀形态，可以是严重的均匀腐蚀或点蚀，也可以是缝隙腐蚀，氢脆和应力腐蚀破裂。
从20世纪80年代起，国外用戊二醛作冷却水杀生剂的工厂日益增加。
戊二醛是一种高效、广谱的杀菌灭藻剂，作用迅速，药效持续时间长，对生物黏泥也有一定的剥离作用。
戊二醛水处理杀生剂，适用于碱性水处理系统，同磷系水处理药剂具有良好的兼容性。
开发新型戊二醛抗菌剂，对抗菌剂应用的普及具有推动作用，其国内市场发展潜力巨大。