杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法
纯合体鉴定的原理及方法_
1.T-DNA插入突变体的鉴定T-DNA插入突变体从拟南芥资源中心（Ohio State University，Columbus）索要。
种子被播种在含有卡那霉素（Kan＋）的MS筛选培养基上，待萌发后10天左右，把生长正常的幼苗移置营养土中。
然后取10天后的叶片提取DNA，PCR进一步鉴定。
其原理如下图所示（图5-1）：LP，RP分别为基因的左边界和右边界，LB为T-DNA上的序列。
用三条引物进行PCR扩增，结果如右图所示。
用LP和RP扩不出条带，而用RP和LB能扩出条带的为突变体纯合株。
图5-1 突变体鉴定原理图纯合体鉴定的原理及方法图1：T-DNA插入的位置图2：纯合体鉴定所示条带By using the three primers (LBb1.3+LP+RP) for SALK lines, users for WT (Wild Type - no insertion)should get a product of about 900-1100 bps ( from LP to RP ), for HM (Homozygous lines - insertions in both chromosomes) will get a band of 410+N bps ( from RP to insertion site 300+N bases, plus 110 bases from LBb1.3 to the left border of the vector), and for HZ (Heterozygous lines - one of the pair chromosomes with insertion) will get both bands. The product size should be 200 base larger if using LBa1 instead of LBb1.3. However, the protocol requires the same or similiar TM values for all the LB, LP and RP primers.纯合体鉴定共需两次才能判定是否是真正的纯合体。
医学遗传学名词解释及解答题
医学遗传学名词解释及解答题名词解释健康：是受人体遗传结构控制的代谢方式与人体的周围环境保持平衡。
遗传性疾病：因遗传因素而罹患的疾病。
先天性疾病：婴儿出生时即显示症状的疾病。
家族性疾病：一个家族有多个成员患同一种疾病。
核型：把人体某个细胞中的全部染色体按其大小、形态特征顺序排列所构成的图像称为核型。
嵌合体：同时存在两种或两种以上核型的细胞系的个体。
如：45,X/46,XX。
臂内倒位：染色体发生两处断裂后，中间的断片倒转180度后又重新连接；倒位部分不包括着丝粒而仅限于一臂之内。
臂间倒位：染色体发生两处断裂后，中间的断片倒转180度后又重新连接；倒位部分包括着丝粒脆性位点：染色体上特定位置出现的一种断裂点，但并非完全断裂，而是一种裂隙现象，即在此断裂点上可见有一细丝相连，或者有不着色的染色质相连接。
先证者：指在该家系中首先被确认的遗传病患者。
外显率：是指一群具有某种致病基因的人中，出现相应病理表现型的人数百分率。
外显率是一个全或无的概率，是个质的问题。
表现度：是指基因表达的程度，大致相当于临床严重程度。
分为重型，中型，轻型及顿挫型等。
表现度是个量的问题。
顿挫型：当一种畸形疾病或综合征的表现极为轻微而无临床意义时。
亲代印迹：是指同一基因会随着它来自父源或母源而有不同的表现。
亲缘系数：是指有共同祖先的两个人,在某一位点上具有同一基因的概率。
限性遗传：常染色体致病基因的表达仅限于一种性别受累者。
偏性遗传：虽非X连锁遗传的疾病，但在两性中的表达，其程度和频率均有不同。
显示杂合子：X伴性隐性遗传的女性杂合子表现出临床症状。
遗传异质性：有些临床症状相似的疾病，可有不同的遗传基础。
遗传早现：有些遗传病在世代传递过程中有发病年龄逐代超前和病情症状逐代加剧的现象。
拟表型：环境因素引起的疾病模拟了由遗传决定的表现型。
遗传度：遗传因素即致病基因在决定多基因遗传病表现型中所起作用的大小。
易感性：由遗传素质决定一个个体得多基因遗传病的风险。
肾上腺皮质肿瘤良恶性鉴别方法探究
肾上腺皮质肿瘤良恶性鉴别方法探究熊蔚蔚;郭菁;张成义;陈曦【摘要】肾上腺皮质肿瘤（Adrenocortical Tumor,ACT）是一种常见的肿瘤,存在于人体的内分泌系统中,并且是引发肾上腺皮质癌（Adrcnocortical Carcinoma,ACC）进而导致死亡的主要原因.经典的＂Weiss系统＂在诊断明确性上存在种种无法解决的问题,但随着科技水平的发展,人们开始探索新的途径来鉴别ACT的良恶性,于是开始有了影像学和分子生物学技术等特异性的检查方法,从而进一步增强了诊断的明确性.现通过对比的方式,探究肾上腺皮质肿瘤（Adrenocortical Tumor,ACT）影像学检查和分子生物学技术检查的结果,从而能更准确地鉴别其良恶性.%Adrenocortical Tumor（ACT） is one of common endocrine tumors and the main cause of Adrcnocortical Carcinoma（ACC）leading to death.There are lots of problems in the clarity of diagnosis that can not be solved in the application of the classic Weiss system.With the development of science and technology,people have begun to explorenew ways to identify whether an ACT is benign or malignant so that there some new specific methods now,such as imageology and molecular biology techniques,which can be used to further improve the clarity of ACT diagnosis.The results with the imageology and molecular biology techniques for the identification of the tumors are discussed in a comparative way so as to identify whether an ACT is benign or malignant.【期刊名称】《北华大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2011(012)006【总页数】5页(P669-673)【关键词】ACC;ACT;鉴别;影像学;分子生物学【作者】熊蔚蔚;郭菁;张成义;陈曦【作者单位】北华大学基础医学部,吉林吉林132013;吉林省前卫医院,吉林长春130012;北华大学药学院,吉林吉林132013;北华大学基础医学部,吉林吉林132013【正文语种】中文【中图分类】R736.6ACT是内分泌系统中常见的肿瘤，其恶性发展是演变为ACC的主要原因，ACC的发病率大约为(1～2)/100万，约占所有已知恶性肿瘤的0.02%［1］.从全球范围内的统计数据来看，ACT 的整体发病率较低，再加上患者临床表现以及在微生物学上病理形态的非特异性，给ACC的诊断及治疗造成了较大困难［2-3］.1984 年，Weiss等［4］对 43例ACT患者(含转移的和未转移的)通过对比的方式进行了组织学研究，由此发现了一系列良性和恶性ACT在组织学上的差异，基于Weiss等得出的结论，医学界逐步开始采用组织学特征对ACT的良恶性进行鉴别，这就是著名的“Weiss系统”.随着此系统在临床应用中的不断深入，研究者逐渐发现“Weiss系统”存在着一些难以克服的问题.首先，由于当时医学欠发达，构建“Weiss系统”时所选取的样本数太少，无法包括一些临床应用中出现的特例情况，其次，根据“Weiss系统”进行诊断的标准不明晰，在实际应用中还需依靠病理医生个人的主观判断作为确诊的依据，这样就缺乏了评判的客观性［5-6］.针对这些问题，研究者们不断通过自己的实践经验对该系统做了一定的修改和补充，虽然这些改进使“Weiss系统”在诊断的明确性和实践性上有所提高，但是该系统本质上的缺憾却无法修补，所以在临床应用上仍然存在误诊和漏诊的问题，给患者的生命健康带来损失.随着医学技术的不断进步，人们开始利用影像学技术对该病进行诊断，但是由于技术等方面的原因，诊断率仍不能达到满意的水平.进入21世纪，科技水平日新月异，尤其是在生物技术领域的发展，许多学者提出了特异性鉴别肾上腺肿瘤良恶性的新方法，通过对新方法的探索来提高对ACT的诊断及治疗.1 影像学检查1.1 B 超B超能够很准确地发现ACT的存在，在发现ACT的准确率上可高达80% ～90%.B超是国内较早采用的诊断ACT的仪器，因为B超具有价格便宜，使用范围广泛，可重复性强等特点，所以一般医院均有配备，是早期仪器诊断的不二之选.使用B超进行ACT的检查还可以通过比较声像图的特点来确认是囊性肿瘤还是实质性肿瘤，同时还能检测邻近器官有无侵犯.正因为如此，B超检测作为ACT的常规检查手段而被广泛应用，但对肿瘤的定性诊断率并不高［7］.1.2 CT继B 超之后进入ACT 检查领域的是CT 检查，由于CT 自身的特点，对0. 5 cm 以上的ACT 发现准确率在95% 以上，并且成像较B 超清晰，通过CT 检查可以准确定位ACT 的部位. 在实际临床应用中发现： ACT 的直径大于6 cm 并有局部侵犯时，在其他组织学检查配合下，如发现出血、坏死、钙化等特点时，就可以认定是恶性肿瘤［8］.1.3 MRIMRI在检查ACT的准确性方面略高于CT，但是MRI在整体鉴别和诊断上是否比CT更优秀还有待进一步通过实践的检验.另外，MRI可以检查肿瘤对血管的侵袭情况，在这方面MRI要强于其他影像学检查方法，尤其是在检查下腔静脉、肾静脉和肾上腺静脉时还可以发现瘤栓，这对于治疗ACT有着重要意义［9］.有研究学者通过比较肿瘤和肝脏在MRI中的信号强度比值，开发出了一套能够精确辨别肿瘤类型的方法，如在MRI的T2加权像上是低的信号值则表明可能是无功能的腺瘤，如果是中到高的信号强度则可能是原发性的ACC，如果信号强度极高则提示应注意是否为嗜铬细胞瘤.因此，MRI检查可以通过信号强弱很明确地鉴别肿瘤类型［10］.2 分子生物学技术检查2.1 流式细胞学技术(FCM)流式细胞学技术可以显示被测细胞的DNA类型与细胞周期，还可检测其 DNA含量，并通过FCM技术来确定肿瘤细胞是否具有侵袭性.有研究者［11-12］认为：ACC中 DNA均为非整倍体，而良性的腺瘤为二倍体，因此，可通过此方法判别肿瘤的良恶性，同时在临床实践中也发现一些DNA含量为非整倍体的肿瘤同样为良性的，而一些恶性肿瘤却出现了二倍体的情况，因此此结论并不确切.Camuto等［13］指出，肿瘤的良恶性与其DNA是否是整倍体并不具有确切的联系，且病情预后及激素的异常分泌等与DNA是否为整倍体也无多大关系.这些研究表明：用DNA倍体数目区分ACT的良恶性并不完全可靠，流式细胞学技术的特异性检测方法还有待于探索.2.2 免疫组织化学技术(Immunohistochemistry)免疫组织化学技术是近几年发展较快的一种病理辅助诊断手段，该技术在大型医院已经得到了应用，特别是在对肿瘤良恶性鉴别上发挥着重要作用. 有学者应用了多种抗体来研究这项技术，比如Ki-67、cyclinDl、mdm-2、Bcl2、p16、p21、p27、p53、pRB、survivin、Topoisomerase IIα、人端粒酶反转录酶( hTERT) 、D11 及CK 等［14-16］，从研究的结果来看，通过比较相应基因表达蛋白质产物的方法可以为肿瘤的判别提供一定的依据，比如vimentin( 波形蛋白) 的表达率如果偏高则很有可能为恶性肿瘤，与此同时，如果keratins( 角质素) 的表达率偏低则提示该肿瘤可能有侵袭性［17-18］.另外一些研究也发现：Ki-67阳性细胞所占比例在临床应用中也有实际意义，如果Ki-67所占比例大于5%时，联合应用hTERT检查可以明确得知该肿瘤具有侵袭性或潜在恶性的生物学行为［19］.p53基因是人体自身的一种抑制癌症基因，研究统计发现：有接近50%的人类恶性肿瘤的发生与p53基因异常或过度表达有关，但是由于ACT的特殊性，使得p53是否可以用于ACT的特异性诊断仍存在争议［20］.Bemini等［21］对 ACT的研究表明：p53所表达的蛋白在ACT和肾上腺皮质正常组织中无表达，而在16例ACC中，有15例呈高表达.尽管如此，由于样本较少，不排除个体存在差异性，所以有不少学者并不同意以上观点.因此，找到一种或多种蛋白联合应用来作为特异性诊断ACT的指标，仍有许多工作需要完成.2.3 比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization，CGH)CGH是1992年由Kallioniemi创立的一套全新的细胞遗传学分析方法，该方法旨在通过染色体层面对基因组进行分析，从而获取染色体中缺失或获得的元素，该方法具有快速准确的特征［22］.通过现阶段在临床上的应用来看，只需要一次杂交实验，实验者就可以检测患者所有染色体的异常(包括缺失和获得)情况［23］.而CGH方法用于肿瘤检测领域时间不长，从现在的研究数据来看，常见的染色体丢失是：1、2、3、6、9、17、18、22 号，染色体获得常见于：1、4、5、7、8、9、11、12、13、17、20 号.由此，有研究者推测，染色体的异常程度与肿瘤大小、良恶性以及扩散速度有关［24-26］.针对 ACT，Kjellman［27］对22 例(8 例恶性，14 例良性)ACT 进行了检测，其中有6例中没检测到染色体变异现象，而这6例ACT肿瘤直径均未超过5 cm，由此可以通过检查染色体是否变异来判断肿瘤大小.另外一些研究者发现在ACC中，易发生基因获得的染色体比一般肿瘤少，为 4、5、7、12、14、19 号，其中19号染色体最易获得，易发生基因缺失的染色体也不尽相同，为 1、2、11、17 号［28-29］.2.4 杂合性缺失(Loss of Heterozygosity，LOH)LOH是指一个基因位点上两个多态性的等位基因中的其中一个发生突变或缺失的现象.发生杂合性缺失的基因其转录正常蛋白质的功能也发生改变，在肿瘤细胞中，肿瘤抑制基因发生LOH而不表达相应的蛋白，致使肿瘤发生演变，因此LOH在肿瘤中尤其常见，这也提示检测细胞中是否有肿瘤抑制基因发生，LOH将会是一个检测肿瘤的重要标志［30］.从研究中发现：肾上腺皮质恶性肿瘤中基因位点11ql3、7p13、11p15和17p13发生LOH的可能性很高，同时其等位基因也极易失衡，在这三个位点中17p13发生LOH与肿瘤表现出侵袭性有很大的关联.一项针对ACT患者的大样本研究也表明：7p13、11p15的LOH与肿瘤复发有关，而且与ACT相比，在ACC中的发生频率更高.另一项试验则显示：75% ～100%的 ACT具有11q13位点的LOH，因此联合检测以上位点的LOH有可能成为一个新的检测指标［31-34］.还有研究表明：LOH在17p13、1lpl5及 IGF-II上提示肿瘤多倾向于恶性［35］.2.5 基因芯片或DNA微阵列(Gene Chip)此技术是指在固相载体上有序的高密度的固定大量靶基因或寡核苷酸片段与探针杂交，通过激光共聚焦显微镜扫描，再用计算机系统将荧光信号转化成数字信号，并对转化出来的数字信号做出比较和检测.利用现代计算机高速运算能力可以同时分析上千种基因的翻译表达情况，从而实时监测肿瘤在发生过程中不同基因的变异情况，为肿瘤病理基因分类提供了一种便捷的方法.通过该方法对基因的实时监测可以发现早期肿瘤，尤其是在肿瘤相关基因的发现和肿瘤进展的诊断指标筛选中已经取得了丰硕成果［36］.Slatcr等［37］利用基因芯片技术检测ACC、ACT及正常肾上腺组织，发现恶性ACT中大部分细胞的 IGF-II基因均过度表达.Thomas等［38］利用基因芯片对 11 例 ACC、4 例ACT、3例正常肾上腺皮质组织以及1例大结节样增生组织的转录谱进行了研究，通过对10 500个独特基因的检测研究发现：相对于ACT和正常组织，91个基因在 ACC中上调.IGF-II、osteopontin(骨桥蛋白)和丝氨酸-苏氨酸激酶是癌中上调最明显的基因，并且发现IGF-II在75%的ACC中高表达，在83%的ACT中低表达，而HSD3B1(3B-羟类固醇脱氢酶1)在81%的ACC中低表达，在93%的ACT中高表达.以上研究表明：基因芯片技术在预防肿瘤发生、肿瘤辅助诊断、肿瘤早期诊断及肿瘤治疗方面具有巨大的发展潜力.3 结论通过比较，分子生物学技术还有种种不足，但是对比传统影像学技术的优势已经日益凸显出来，在基因水平上的各种生物学技术的发展对ACT的诊断已经有了很大的帮助.有一点可以肯定，ACC与ACT在基因水平上有显著变化，尽管目前还未能找到特异性的方法来区分ACT的良恶性，或预测其恶性潜能的公认指标，但是随着研究的不断深入和科技水平的提高，基于基因水平上的鉴别方法将会越来越完善，结果一定会越来越清晰.由于ACT的综合发病率低下，更需要建立全球化的研究网络来增强全球各国的医疗工作者和研究人员的信息交流，如此必将会对ACT的研究产生巨大的促进作用.目前已建立起欧洲ACT研究网络(European Network for the Study of Adrenal Tumours，ENSAT)［39］就是一个很好的范例.我国近年来在相关领域的研究也得到了一定的进展，随着ACT诊断手段的不断进步，特异性ACT诊断方法的建立将成为医学科学发展的必然.【相关文献】［1］Tupikowski W，Bednarek-Tupikowska G，Florazak A.Adrcnocortical Carcinoma and Its Treatment［J］.Postepy Hig Med Dosw，2004，58：27-36.［2］Kopf D，Goretzki P，Lehnert H.Clinical Management of Malignant Adrenal Tumors ［J］.Journal of Cancer Research and Clinical Oncology，2001，127(3)：143-155.［3］Sidhu S，Sywak M，Robinson B，et al.Adrenocortical Cancer：Recent Clinical and Molecular Advances［J］.Current Opinion in Oncology，2004，16(1)：13-18.［4］Weiss L parative Histologic Study of 43 Metastasizing and Nonmetastasizing Adrenocortical Tumors［J］.American Journal of Surgical Pathology，1984，8(3)：163-169.［5］Sasano H，Suzuki T，Moriya T.Recent Advances in Surreal Pathology of Adrenal Incidentaloma［J］.Biomedecine and Pharmaceutical，2000，54(1)：169-174.［6］Volante M，Buttigliero C，Greco E，et al.Pathological and Molecular Features of Adrenocortical Carcinoma［J］.Journal of Clinical Pathology，2008，61(33)：787-793. 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遗传名词解释简答
重点：染色体核型分析，染色体数目异常和结构畸变的主要类型及其产生机制、遗传学效应，常见染色体病。
异常血红蛋白病和地中海贫血的发病机制。
单基因肿瘤，肿瘤的标志染色体，癌基因、抑癌基因的概念和作用机制名词概念：核型:一个体细胞中的所有染色体按其大小形态等特点有规律依次排列而成的图像.核型分析:将待测细胞的全套染色体按照Denver体制配对、排列，分析确定其是否正常的过程.（分析识别染色体过程）.常规核型分析:即染色体非显带核型分析，将人类体细胞的46条染色体按其相对长度（大小）和着丝粒位置分为23对，7个组(A～G组),其中22对为男女共有，称常染色体，以其长度递减和着丝粒位置依次编为1～22号；另1对X和Y染色体与性别形成有关，随性别而异，称为性染色体，46,XX代表正常女性，46,XY代表正常男性。
识别染色体的依据：大小、着丝粒类型;识别染色体的目的：配对、分组、性别确定。
显带核型分析：用特殊的染色方法使染色体臂上显示出一条条明暗交替或深浅交替的横纹(带)的核型分析方法。
识别染色体的依据：带纹分布特征;识别染色体的目的：识别染色体及其结构畸变类型等带型：指应用显带技术将人类24种染色体（22种常染色体、X和Y染色体）显示出的各自特异的带纹的总和。
染色体组：人类的配子细胞即精子或卵子各自含有的一套完整染色体。
chr数目23。
单倍体:含有一个染色体组的细胞或个体。
chr数目23，“n”表示。
如人类配子细胞（精子或卵子）。
多倍体:含有三个及三个以上染色体组的细胞或个体。
chr数目大于等于2n 。
单体型:亚二倍体，45条，2n-1，性染色体如45,X三体型:超二倍体，47条，2n+1；性染色体如47,XXY或47,XXX；常染色体如47,XX(XY)+21 多体型:性染色体如48,XXXX（超雌）；48,XYYY（超雄）嵌合体:体内同时存在两种或两种以上不同核型细胞系的个体同源嵌合体:复合非整倍体，为体内不同核型的细胞系起源于同一受精卵的个体。
医学遗传学名词解释
第一章绪论无第二章遗传的细胞学基础1.常染色质：间期核内纤维折叠盘曲程度小、分散度大、能活跃地进行转录的染色质。
异染色质：间期核内纤维折叠盘曲紧密、呈凝聚状态，一般无转录活性的染色质，又分为结构异染色质和兼性异染色质两大类。
兼性异染色质：是在特定细胞的某一发育阶段由原来的常染色质失去转录活性，转变成凝缩状态的异染色质，二者的转化可能与基因的表达调控有关。
Lyon假说：（1）雌性哺乳动物体细胞内仅有一条X染色体有活性，其他的X染色体在间期细胞核中螺旋化而呈异固缩状态的X染色质，在遗传上失去活性。
（2）失活发生在胚胎发育的早期（人胚第16天）；在此之前所有体细胞中的X染色体都具有活性。
（3）X染色体的失活是随机的，但是是恒定的。
剂量补偿：由于正常女性体细胞中的1条X染色体发生了异固缩，失去了转录活性，这样就保证了男女性个体X染色体上的基因产物在数量上基本一致，这称为X染色体的剂量补偿。
遗传的分子基础外显子和内含子：真核生物的基因为断裂基因，即结构基因是不连续排列的，中间被不编码的插入序列隔开，编码序列称为外显子，编码序列中间的插入序列称为内含子。
单一序列和高度重复序列：单一序列是在一个基因组中只出现一次或少数几次，大多数编码蛋白质和酶类的基因即结构基因为单一序列。
重复序列是指在基因组中有很多拷贝的DNA序列，有些重复序列与染色体的结构有关。
基因突变：是指基因在结构上发生碱基对组成或排列顺序的改变。
转换和颠换：转换是指一个嘌呤被另一个嘌呤所取代，或是一个嘧啶被另一个嘧啶所取代。
颠换指嘌呤取代嘧啶，或嘧啶取代嘌呤。
同义突变：是指碱基替换使某一密码子发生改变，但改变前后的密码子都编码同一氨基酸，实质上并不发生突变效应。
错义突变：是指碱基替换导致改变后的密码子编码另一种氨基酸，结果使多肽链氨基酸种类和顺序发生改变，产生异常的蛋白质分子。
无义突变：是指碱基替换使原来为某一个氨基酸编码的密码子变成终止密码子，导致多肽链合成提前终止。
非小细胞肺癌中MTAP与p16纯合缺失与突变分析
非小细胞肺癌中MTAP与p16纯合缺失与突变分析李邦印;张开泰;霍艳英;胡迎春;徐勤枝;周平坤;吴德昌【摘要】目的研究非小细胞肺癌中MTAP与p16纯合性缺失与点突变发生频率,探讨MTAP与肺癌的相关性.方法提取44例原发性非小细胞肺癌标本(21例腺癌和23例鳞痛)的基因组DNA;设计MTAP、p16基因外显子及其参照基因MTAP 的引物,以基因组DNA为模板,进行PCR扩增,通过SSCP分析基因点突变现象,通过PCR-ELISA分析基因纯合性缺失现象.结果 SSCP方法分析发现在44例原发性肺癌标本中,p16和MTAP没有点突变现象;PCR-ELISA分析发现p16基因的纯合性缺失频率为6.8%,MTAP的纯合性缺失频率9.1%,统计学分析表明二基因之间的缺失频率无显著性差异,但二者均与非小细胞肺癌显著相关.结论与p16类似,MTAP纯合性缺失是原发性非小细胞肺癌中发生的重要事件之一,有其肿瘤生物学基础.【期刊名称】《临床肺科杂志》【年(卷),期】2007(012)006【总页数】3页(P547-548,555)【关键词】MTAP,p16;非小细胞肺癌;纯合性缺失【作者】李邦印;张开泰;霍艳英;胡迎春;徐勤枝;周平坤;吴德昌【作者单位】100091,北京,解放军总医院第二附属医院;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所;100850,北京,军事医学科学院辐射与放射医学研究所【正文语种】中文【中图分类】医药卫生临床肺科杂志 2007 年 6 月第 12 卷第 6 期547 非小细胞肺癌中 MTAP 与 p16 纯合缺失与突变分析李邦印张开泰霍艳英胡迎春徐勤枝周平坤吴德昌［摘要］目的研究｜非小细胞j肺癌中 MTAP 与 pl6 纯合性缺失与点突金发生频，书，探讨MTAP 与肺癌的相关性方法挺取 44 例!JJ-发性非小细胞肺癌标本（21 {91J腺癌和 23 例鳞癌）的基肉组 D叫A ；设计 MTAP、pl6 基肉外显子及其参照基冈MTAP 的引物，以基因组 DNA 为模板，进行 PCR 扩培，通过 SSCP 分析必网点突变现象，通过 PCR-ELISA 分析基因纯合性缺失现象。
一视网膜母细胞为例说明二次突变论
以视网膜母细胞瘤为例，说明肿瘤的二次突变论学说和抑癌基因的杂合性丢失现象视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)发病情况：1/15000～1/28000；大多在2岁前发病；恶性程度高。
临床症状：早期猫眼；后期失明。
基因定位：13q14.1-q14.2。
可分为遗传型和非遗传型。
癌基因：癌基因(oncogene，onc)是指正常人体和动物细胞以及致癌病毒体内所固有的能引起细胞恶性转化的核苷酸序列（DNA片段或RNA片段）。
抑癌基因：肿瘤抑制基因，是人类正常细胞中存在的能够抑制肿瘤发生的一类基因，也称抗癌基因。
抑癌基因杂合丢失现象：当抑癌gene的杂合子（如RB/rb）再发生一次突变成为隐性纯合子（rb/rb）时（即两个等位gene都发生突变或缺失而丧失功能），细胞内正常的抑癌作用消失，最终导致细胞的恶性转化，此即抑癌gene的杂合性丢失（细胞癌变的关键）二次突变论学说：二次突变学说：一些细胞的恶性转化需要两次或两次以上的突变。
第一次突变可能发生在生殖细胞或由父母遗传得来(合子前突变)，也可能发生在体细胞。
第二次突变则均发生在体细胞本身。
二次突变学说对一些遗传性肿瘤的发生做出了很好的解释。
视网膜母细胞瘤具有遗传性（约40%为家族性母细胞瘤）和散发性；遗传性视网膜母细胞瘤家族连续传递时，已经携带了一个生殖细胞的RB1突变，此时若在体细胞内再发生一次体细胞突变，即可产生肿瘤，这种时间较易发生，所以发病年龄较早，通常累及双眼；而散发性的视网膜母细胞瘤是一个细胞内的两次体细胞RB1突变，发生率较低，所以发病一般较晚，通常单眼发病。
某些视网膜母细胞瘤患者基因突变是由于13q14.1—q14.2区域缺失或易位。
这些患者其他组织或正常细胞中许多基因是杂合的，但相同基因再肿瘤细胞中却是纯合的，所以肿瘤组织中DNA样本中只含有一对13号同源染色体中的一条染色体上的等位基因，表现出杂合性丢失或缺失积阴德完全表现，在遗传性视网膜母细胞瘤中，这个缺失或获得保留的异常13号chr基因往往从患病双亲中遗传而来。
植物变异的机制
又叫定向选择。是变异曲线的一个尾部被选中，另一尾部被排斥，其结果是曲线的均值稳定增高。具体来说单向选择是把趋于某 一极端的变异保留下来，淘汰掉另一极端的变异，使种群朝某一变异方向逐步改变。
这种选择多见于生境条件逐渐发生变化的生境中，人工选择大多数属于这一类型。如上述的桦尺蛾工业黑化现象。
• 个体选择论：达尔文认为，自然选择的基本单位是个体，“生存斗争”是个体之间的事情。 • 群体选择论：韦恩∙爱德华兹提出，至少就有社群行为的生物的进化而言，选择的单位是群体，而
不是个体。
Hale Waihona Puke 、随机遗传漂变• 随机遗传漂变是指在进化过程中，基因频率的随机波动的现象。比如在小群体中，不同基因型个体所生子女数 目不尽相同，致使子代的等位基因数发生改变，在处于相对隔离状态的小群体中会产生基因频率的随机波动。
1、环境饰变(Environmental modification)
• 表现型=基因型+环境影响，虽然植物的性状是由基因所决定，但基因是否能够得到表达与环境具有密 切的关系。
• 由环境饰变引起的植物性状的变异是不能够遗传的，因此没有分类学及系统学意义。分类学者的一个 重要任务是判定植物性状的变化是否属于环境饰变。
• 过去，由于研究材料有限，分类学着常根据少量标本建立新分类群，随著研究样本的扩大，研究的深入，发现 过去的错误，修正类群的名称，该过程在分类学上称之为订正。
• 单一的性状差异，无论有多大，都不能作为划分类群的依据，类群的划分和建立必须依赖于一系列性状的差异。
• 核型在系统学上的重要意义。染色体是遗传物种的载体，在减数分裂时同源染色体配 对，因此，染色体基数相同、核型相似的近缘物种容易进行杂交，染色体基数相同， 但核型差异大的近缘种杂交杂后形成的后代常为不育；由于没有性染色体的分化，染 色体基数不同的近缘种杂交后常会形成多倍体新种，在植物界，多倍体物种形成具有 较高的比例。在减数分裂过程中，除了同源染色体的分离外，染色体的交叉亦会造成 遗传重组，但其所占比例较小。
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杂合性缺失、纯合性缺失、点突变的原理与检测方法
缺失，就是基因缺失，简单地说是没有了，实际上是不能表达某一蛋白了，或者干脆少了这一个位置。
杂合性缺失：实际就是杂合子，一对染色体上某一个染色体上基因缺失，与之配对的染色体上仍然存在。
纯合性缺失：实际就是纯合子，一对染色体上两个基因都缺失。
根据这个基因的特点，表现出来的形状完全不同，比如人类一些疾病就是这样，如果这个缺失基因是隐性基因，杂合子或杂合性缺失会表现出来缺失。
实际上这个基因不能继续表达。
因为隐性基因只能在纯合子中表现（个别例外，如性染色体）。
如果这个基因是显性基因，那么这种缺失可能不表现出来。
因为显性基因不仅在纯合子中表现，在杂合子也表现。
具体应用过程，杂合子可以通过回交等方式，获得纯合子。
一般来说，对于一个确定的基因要检测在某种病中的突变情况，方法比较成熟，PCR测序、PCR-SSC P PCR-RFLP等。
如果样本量较少且你所研究的目的基因较小，采用PCR或RT-PCR的方法获得目的片段后直接测序是很可行的方法（目前测序一个反应只有不到60 元人民币）；但如果样本量较大且所研究的目的基因较大的话，直接测序可能费用较高，一般可采用PCR-SSC、PPCR-RFLP。
不管采用哪种方法检测基因的点突变都涉及到PCF T增目的片段，因而涉及到
引物设计，引物设计由你的研究材料、研究方法、目的基因等决定：如果你能得到患者的病灶部位组织材料的话（从这些材料中提取RNA，可根据基因的cDNA序列设计引物（如果目的基因太大，则需要设计多条引物；如果采用PCR-SSC 的方法检测突变，则需要每200bp左右设计一对引物）；如果你只能获得患者的血样的话，就从血样中提取基因组DNA检测基因突变时，必须每个外显子设计一对引物，对于较大的外显子，还需设计多条引物，当然如果采用PCR-SSC 的方法检测突变，同样需要在基因的外显子上每200bp左右设计一对
引物。
如果你想检测外显子内含子之间的剪接位点突变，可根据目的基因所在的基因组序列设计引物。
对于缺失（杂合缺失或纯合缺失）的检测方法，一般来说，就是PCR或RT-PCR然后进行普通的琼脂糖凝胶电泳即可。
首先根据缺失部位两侧设计一
对引物，然后以基因组DNA或RNA为模板，进行PCR或RT-PCF扩增，普通的
琼脂糖凝胶电泳后，可通过扩增产物及大小直接判断：只得到一条扩增产物且扩增产物与目的片段大小一致的患者，为不存在此部位缺失的患者；只得到一条扩增产物且扩增产物较小的患者，即为纯合缺失；有2条扩增产物，一条与野
生型大小相同，另一条与缺失的相同，即为杂合缺失。
关于杂合性缺失的检测
vitzj ：检测杂合性缺失通常用定量荧光检测str 不同重复次数的峰值. 如果两个峰值之前的比例是1:1, 说明一对等位基因都存在,未缺失; 如果比值不是1:1, 且差别比较大, 说明可能有杂合性缺失; 如果只有一个峰, 有两种可能:
1. 正常基因组是有两个峰的, 那么有缺失.
2. 正常基因组只有一个重合峰, 则看标本的峰是不是将近两倍高,如果是说明是正常,如果峰值比较低,不到两倍,那有可能是缺失,但这样判断不精确,通常需要换一个位点再看.
vitzj ：
纯合性缺失, 就是染色体上的一对等位基因一起缺失;
杂合性缺失,顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因,另一条还在,通常如果另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达, 如果发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤.
检测方法有FISH,str, 和snp
fish 就不多说了, 结果判断简洁明了, 但贵, 而且操作难度大.
str
一对同源染色体上同一str 位点的重复次数不一定相同,pcr 扩增str 全长, 再跑胶,如果出现两条带, 就说明该str 位点是杂合子, 假如你在肿瘤细胞中只看到一条带, 那说明有杂合性缺失发生了.
但如果该位点本来就是纯合子, 那该位点被认为是信息不够丰富,需要结合其他位点来看, 所以做str 需要多个位点.
从上面分析可以知道，如果没有正常DNA故对照，就算你跑出来全都是单峰，也不能说明问题, 万一他就是个全纯合子呢?
以上说得是跑page胶的方法，用测序仪做会简单些，但原理一样的•结果判断上面的帖子讲了.
snp 原理也类似, 不多说了
自己的电脑不在身边, 只能大概相关地推荐你看看.
Genome-WideGenetic Characterization of Bladder Cancer: A Comparison of
High-Density Single-Nucleotide Polymorphism Arrays and PCR-based Microsatellite Analysis
这篇文章讲到了检测杂合性缺失比较常用的方法snp和str
做snp可能需要MGE探针,会贵些,做str如果你有测序仪就比较方便.如果没有的话就pcr再跑page胶,麻烦但很便宜
纯合性缺失, 就是染色体上的一对等位基因一起缺失;
杂合性缺失,顾名思义就是只丢失了一条同源染色体上的基因,另一条还在,通常如果另一条上的基因突变或者甲基化了就使基因彻底不能表达, 如果发生在抑癌基因上就可能导致肿瘤.
这个说法不太准确吧，杂合性丢失，
是vitzj 所说的丢失了一条，一对抑癌基因丢失了其中之一，变成了杂合子，这是第一次突变，一般发生在出生前，后来再发生第二次突变时，就是杂合子变成了纯合子，也就是杂合性缺失，抑癌基因缺失，与肿瘤的发生相关。
指肿瘤基因组中特定染色体上的某种DNA多态标记的等位基因片段，由同一患者正常组织基因组的两种变成一种，即等位基因型由杂合子变成纯合子. 而不是丢失了一条同源染色体的基因。
其实这个也就是肿瘤发生学中的“二次突变学说”。