抗原表位鉴定与作图
生物化学(第三版)第六章 蛋白质结构与功能的关系课后习题详细解答_ 复习重点
第六章蛋白质结构与功能的关系提要肌红蛋白（Mb）和血红蛋白（Hb）是脊椎动物中的载氧蛋白质。
肌红蛋白便于氧在肌肉中转运，并作为氧的可逆性贮库。
而血红蛋白是血液中的氧载体。
这些蛋白质含有一个结合得很紧的血红素辅基。
它是一个取代的卟啉，在其中央有一个铁原子。
亚铁（Fe2+）态的血红素能结合氧，但高铁（+3）态的不能结合氧。
红血素中的铁原子还能结合其他小分子如CO、NO等。
肌红蛋白是一个单一的多肽链，含153个残基，外形紧凑。
Mb内部几乎都是非极性残基。
多肽链中约75%是α螺旋，共分八个螺旋段。
一个亚铁血红素即位于疏水的空穴内，它可以保护铁不被氧化成高铁。
血红素铁离子直接与一个His侧链的氮原子结合。
此近侧His（H8）占据5个配位位置。
第6个配位位置是O2的结合部位。
在此附近的远侧His（E7）降低在氧结合部位上CO的结合，并抑制血红素氧化或高铁态。
氧与Mb结合是可逆的。
对单体蛋白质如Mb来说，被配体（如）O2占据的结合部位的分数是配体浓度的双曲线函数，如Mb的氧集合曲线。
血红蛋白由4个亚基（多肽链）组成，每个亚基都有一个血红素基。
Hb A是成人中主要的血红蛋白，具有α2β2的亚基结构。
四聚体血红蛋白中出现了单体血红蛋白所不具有的新性质，Hb除运载氧外还能转运H+和CO2。
血红蛋白以两种可以相互转化的构象态存在，称T（紧张）和R（松弛）态。
T态是通过几个盐桥稳定的。
无氧结合时达到最稳定。
氧的结合促进T态转变为R态。
氧与血红蛋白的结合是别构结合行为的一个典型例证。
T态和R态之间的构象变化是由亚基-亚基相互作用所介导的，它导致血红蛋白出现别构现象。
Hb呈现3种别构效应。
第一，血红蛋白的氧结合曲线是S形的，这以为着氧的结合是协同性的。
氧与一个血红素结合有助于氧与同一分子中的其他血红素结合。
第二，H+和CO2促进O2从血红蛋白中释放，这是生理上的一个重要效应，它提高O2在代谢活跃的组织如肌肉的释放。
相反的，O2促进H+和CO2在肺泡毛细血管中的释放。
临床医学检验技师初级(师)临床免疫学及检验(放射免疫分析、化学发光免疫分析技术)-试卷1
临床医学检验技师初级（师）临床免疫学及检验（放射免疫分析、化学发光免疫分析技术）-试卷1(总分：72.00，做题时间：90分钟)一、 B1型题(总题数：2，分数：16.00)A．核素标记抗原B．核素标记抗体C．限量D．等量E．过量（分数：8.00）(1).放射免疫分析的标记物是用（分数：2.00）A. √B.C.D.E.解析：(2).免疫放射分析的标记物是用（分数：2.00）A.B. √C.D.E.解析：(3).放射免疫分析中标记物的使用为（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：(4).免疫放射分析中标记物的使用为（分数：2.00）A.B.C.D.E. √解析：解析：放射免疫分析使用核素标记抗原，标记物为限量使用；免疫放射分析使用核素标记抗体；标记物为过量使用。
A．竞争抑制B．非竞争结合C．针对多克隆抗体特异性较低D．针对单克隆抗体特异性较强E．与两种抗体无关（分数：8.00）(1).放射免疫分析的反应模式是（分数：2.00）A. √B.C.D.E.解析：(2).免疫放射分析的反应模式是（分数：2.00）A.B. √C.D.E.解析：(3).放射免疫分析的特异性是（分数：2.00）A.B.C. √D.E.解析：(4).免疫放射分析的特异性是（分数：2.00）A.B.C.D. √E.解析：解析：放射免疫分析反应模式为竞争抑制，反应针对多克隆抗体特异性较低；免疫放射分析反应模式为非竞争结合，反应针对单克隆抗体特异性较强。
二、 A1型题(总题数：26，分数：52.00)1.放射性标记物的放射化学纯度一般要求大于（分数：2.00）A.75％B.85％C.95％√D.98％E.100％解析：解析：放射化学纯度是指单位标记物中结合于被标记物上的放射性占总放射性的百分率，一般要求大于95％。
2.RIA试验中抗原抗体复合物的放射性强度与待测抗原呈（分数：2.00）A.正比关系B.函数关系C.反比关系√D.曲线关系E.正弦关系解析：解析：RIA是采用放射性核素标记的抗原和非标记的待测抗原竞争性结合有限量特异性抗体的反应，故放射强度与待测抗原浓度呈反比。
微生物复习知识点
微生物知识点一、名词解释第一章绪论微生物：指在自然界广泛分布的个体微小，结构简单，肉眼不能看到，需借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍，几千倍，甚至几万倍才能看到的微小生物的统称。
菌株（又称品系）：表示由一个独立分离的单细胞繁殖而成的纯菌群。
第二章细菌原生质体：在人为条件下，用溶菌酶处理或在含青霉素的培养基中培养而抑制新生细胞壁合成而形成的仅由一层细胞膜包裹的，圆球形，对渗透压变化敏感的细胞，一般由革兰氏阳性细菌形成。
球状体（原生质球）：针对革兰氏阴性细菌加溶菌酶和EDTA处理后而获得的残留部分细胞壁的球形体。
芽孢：某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量极低，抗逆性极强的休眠体。
伴孢晶体：少数芽孢杆菌在其形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形或双锥形的碱溶性蛋白晶体。
鞭毛：某些细菌从细胞内向细胞外伸出地细长波状弯曲的丝状物。
是细菌的运动器官。
培养基：培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的营养物质。
外毒素：病原细菌，主要是一些革兰氏阴性菌，在生长过程中合成并分泌到细胞外的毒素，化学本质是蛋白质。
类毒素：因外毒素对热和某些化学物质敏感，可以脱毒形成类毒素。
内毒素：革兰氏阴性菌的细胞壁物质，主要成分是脂多糖，当菌体裂解时释放发挥毒性，即内毒素。
放线菌：是一类介于细菌和丝状真菌之间，在形态上具有分支状菌丝，菌落形态和霉菌相似，以孢子进行繁殖，革兰染色多为阳性的单细胞原核细胞型微生物。
生长曲线：将一定数量的细菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞的数量，以培养时间为横坐标，以菌数的对数为纵坐标作图，得到一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。
热原质：泛指那些能引起机体发热的物质，依据其来源不同可分为内源性热原质和外源性热原质。
第四章病毒毒粒（病毒颗粒）：病毒的细胞外颗粒形式，也是病毒的感染性形式。
病毒的复制：病毒感染敏感宿主细胞后，病毒核酸进入细胞，通过其复制与表达产生子代病毒基因组和新的蛋白质。
量值溯源——精选推荐
第二节量值溯源临床实验室通过校准为其检测系统确定标准值。
为保证检测结果的准确性和一致性，必须保证参考物设定值可溯源到可能的参考方法和/或可能的高一级参考物质，以使常规的检测系统对患者样本的检测，在计量单位一致的前提下，得到和参考系列相同的检测量值。
一、量值溯源的概念通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测定结果或标准值能够与规定的参考标准（通常是国家标准或国际标准）联系起来的特性，称为量值的溯源性（traceability）。
溯源顺序通常采用溯源等级图来描述。
要求校正常规方法的参考物必须溯源到国家或国际规定的参考方法上，最好是溯源到SI（国际单位制），SI单位表示了该物质量值的准确性达到计量基准，它具有非常小的不确定度。
除了保证参考物的溯源性外，临床实验室和生产厂商必须对检测系统各组分（仪器、试剂、参考物、和操作程序）实行严格的标准化程序，才能实现患者检验结果的溯源性。
二、量值溯源的意义临床医生通常将实验室检验结果与参考区间和医学决定水平进行比较，结合患者其它医学信息做出临床判断。
但如果实验室间的检验结果一致性不好，使参考区间和医学决定水平有差异，将混淆临床医生的医学判断，并可能导致错误的医学决策。
特别对于由科学家或专业协会建议和提倡运用共同判断标准对治疗进行干预，例如在高胆固醇血症和糖尿病的治疗指南中，提出根据检验结果的临床诊断值、干预值和目标值等。
实验室间的检验结果一致性不好，可能导致对检验结果的错误解释和对疾病的错误干预。
因此，有必要开展量值溯源和检测系统的标准化，以实现各实验室测定结果的一致性或不同医院的实验室检验结果的互认性，也即改进试验结果在空间和时间上的可比性。
三、参考物的量值溯源在临床实验室的定量分析中，通过不同级别的测量程序、参考物和校正物，实现连续测量。
用一个测量程序为某种物质定值，该物质用作下一级测量程序的校正物。
依此类推，形成了一条不间断的比较链，也称溯源链。
图3-3描述了多层次多水平相互交错的测定方法和校准物质，箭头方向表示相互的关系。
第3讲 免疫球蛋白(第4章)
Ig功能区的功能
VH+VL CH+CL
一个抗原结合位点 ——结合抗原 种属型标志 ——Ig的免疫原性 ——结合补体
(IgG)CH2 (IgM)CH3 C1q的结合位点 结合胎盘ＦcRn (IgG)CH2 (IgG)CH3 结合FcR
(MC,M,B,NK)
——介导IgG通过胎盘
——调理作用 ADCC
⊕单克隆抗体(monoclonal antibody, mAb)
(一)多克隆抗体(polyclonal antibody, PcAb)
多克隆抗体----一般指血清抗体，是由含多种抗 原表位的抗原物质，刺激、活化多个B细胞克隆所 产生的针对多种不同抗原表位的不同抗体的混合。
来源广泛、制备容易。 特异性不高，常出现交叉反应。
②膜型Ig---构成了B细胞表面的抗原受体。
与抗体有关的诺贝尔奖获得者
1901
1908 1972 1977 von Bering Ehrlich & Metchnikoff Edelman & Poter Yalow Koler,Milstein & Jerne Tonegawa 血清治疗 抗体生成、吞噬 抗体分子结构 放射免疫测定 单克隆抗体 Ig基因结构
[复习思考题]
第3章 抗原 1. 半抗原的含义及种类举例。 2. 固有免疫和适应性免疫的特点比较。 3. 如何理解异物性？ 4. 如果用某种抗原免疫动物，影响血清抗体产生水平的 因素有哪些？ 5. 表位的概念 。T表位和B表位的特点比较。 6. 为什么用牛痘病毒制备的牛痘疫苗可以预防天花病毒 感染？ 7. TD-Ag和TI-Ag的概念及比较。 8. 为什么使用动物免疫血清之前必需做皮试？ 9. 什么是超抗原？有何意义？ 10. 常见作用于人的T、B细胞丝裂原有哪些？
WHO对HPV疫苗质量、安全性及有效性指导原则
欢迎阅读GUIDELINESTOASSURETHEQUALITY,SAFETYANDEFFICACYOFREC OMBINANTHUMANPAPILLOMA VIRUSVIRUS?LIKEPARTICLEV ACCIN ESHPV二、Specialconsiderationsection:在生产、非临床及临床中过程中的考虑因素：1、 VLP 1) 2)3) 4) L1VLP 。
5) 纯化后的L1VLP 要进行生化及免疫上的鉴定，并测定L1的浓度、纯度及组聚情况。
6) 如加入了防腐剂，应对其免疫性进行验证，并确认不会有负作用2、 非临床方面：关键就是要证明其免疫原性，并能否产生免疫中和抗体。
3、临床方面：（略）三、生产指导（PartA.Guidelinesonmanufacturing）3.1定义definitions3.1.1国际名称和专有名称3.1.2重组基因型3.1.33.2术语hichdoesnotcontainviralDNAandwhichiscomposedofregulararraysofL1pentamericcaps omers.Parentalyeastc ell:Yeasthostcelltobemanipulatedfortheexpressionofprotein(s)togiv erisetoarecombinantyeastproductionstrain.Inoculumintermediate:Aquantityofrecombinantbaculovirusofuniformcomposition, derivedfromtheworkingseedlot.Theinoculumintermediatehasadefinedshelf?life.Itisinten dedtobeusedtoinitiatetheproductionofrecombinantL1proteins.Cellbank:Acollectionofampoulescontainingaliquotsofasuspensionofcellsfromasin glepoolofcellsofuniformcomposition,storedfrozenunderdefinedconditions(typically<?6 0°Cforyeast,andinliquidnitrogenforinsectormammaliancelllines).Mastercellbank(MCB):Acollectionofcontainerscontainingaliquotsofasuspension ofcellsfromasinglepoolofcellsofuniformcomposition,storedfrozenunderdefinedconditioaterialsusedintheircultures,thatmayincludebacteria,fungi,mycoplasmas,andendogenous andexogenousvirusesthathavebeenunintentionallyintroduced.Fermentationcellpaste:Asuspensionofcellsharvestedattheendoftheyeastfermentat ionstoredfrozen(<?60°C).Singleantigenharvest:Acell?suspensioncontainingtheintendedHPVantigensofonevi rustypeharvestedfromcellculturespreparedfromasingleproductionrunSingleharvestpool:AhomogenouspoolofmultiplesingleharvestsoftheintendedHPVa ntigensofonevirustype,collectedintoasinglevesselbeforeclarification.Purifiedmonovalentantigenbulk:AbatchofpurifiedantigenofthesameHPVtype.Di fferentbatchesofpurifiedmonovalentantigenbulksmaybepooledbeforecollectionintoasin glevessel.3.3应分别生产，同时，还要有充分的清洁验证。
免疫检验重点
1.免疫防御功能异常可导致（感染、免疫缺陷）疾病。
2.抗原抗体反应的特点有（特异性、比例性、可逆性、阶段性）3•抗原抗体反应的温度一般以（15〜40 C）为宜，最适温度为（37 C）4•影响抗原抗体反应的环境因素主要有（电解质、pH、温度）5•某些特殊的抗原抗体反应对温度有一些特殊的要求，如冷凝集素在（4C）左右与红细胞结合最好，（20 C）以上反而解离。
6•抗原抗体的结合分子间的引力包括（静电引力、范德华引力、氢键引力和疏水作用力），其中作用最强的是（疏水作用力）1•间接凝集反应的类型包括（正向间接凝集、反向间接凝集反应、间接凝集抑制反应和协同凝集反应）四种类型。
2•参与凝集反应中的抗原称为（凝集原），抗体称为（凝集素），常用的直接凝集试验有（玻片法、试管法、玻片法）3•在间接凝集反应中正向凝集反应是用（抗原）致敏载体以检测标本中相应的（抗体），而反向间接凝集反应是用（抗体）致敏载体以检测标本中相应（抗原）4•间接抗球蛋白试验可用已知抗原型红细胞检测血清中的（不完全抗体）,可用于输血前的（交叉配血）试验。
1．免疫沉淀反应是（可溶性抗原）与（相应抗体）的特异性结合 2．棋盘格法（抗原）和（抗体）同时稀释，可一次完成（抗原）和（抗体）的滴定 3．单向琼脂扩散是待测抗原从含有定量（抗体）的（凝胶）内自由向周围扩散，抗原抗体特异性结合，在两者比例合适的部位，形成（沉淀环）。
4．Maneini 曲线适用于（大分子抗原）的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，抗原浓度与（扩散环直径的平方）呈线性关系，常用（普通）坐标纸作图。
5．Fahey 曲线适用于（小分子抗原）的测定，在一定范围内，沉淀环随时间延长而扩大，沉淀环直径与（抗原浓度的对数）呈线性关系，常用（半对数）坐标纸作图。
6．双向琼脂扩散试验可对抗原或抗体的存在、含量和相对分子量进行分析，沉淀线靠近抗原孔指示（抗体含量较高）；靠近抗体孔则指示（抗原含量较高）；不出现沉淀线则表明（无对应的抗原和抗体）。
生物信息学重点
名词解释：1、基因组：生物有机体的单倍体细胞中所有DNA,包括核中的染色体DNA和线粒体、叶绿体等亚细胞器中的DNA。
2、蛋白质组：指一个基因组所表达的全部蛋白质。
3、信号肽：新合成多肽链中用于指导蛋白质的跨膜转移（定位）的N-末端的氨基酸序列（有时不一定在N端）。
4、启动子：一段特定的直接与RNA聚合酶及其转录因子相结合，决定基因转录起始与否的DNA序列。
同源序列一般是相似的，相似序列不一定是同源的5、引物：（primer）指一段较短的单链RNA或DNA，它能与DNA的一条链配对提供游离的3’-OH末端以作为DNA聚合酶合成脱氧核苷酸链的起始点。
6、直向同源、垂直同源：（Orthologous ）描述在不同物种中来自于共同祖先的基因。
Orthologous基因可能有相同的功能，也可能没有。
7、GenBank：是美国国家生物技术信息中心管理的核酸序列数据库，汇集并注释了所有公开的核酸序列。
8、ORF：一组连续的含有三联密码子的能够被翻译成为多肽链的DNA序列。
它由起始密码子开始，到终止密码子结束。
9、CDS：是编码一段蛋白产物的序列。
10、BLAST：是一个基于局部比对的序列相似性搜索工具。
11、EST：（表达序列标签）就是cDNA的一个片段，即一个基因编码序列的一小段。
12、PDB：（蛋白质结构数据库）是美国国家实验室创建并管理的收录生物大分子晶体结构的数据库。
13、Homology：（同源性）14、Similarity：（相似性）15、Orthologous：（直向同源、垂直同源）描述在不同物种中来自于共同祖先的基因。
Orthologous基因可能有相同的功能，也可能没有。
16、Entrez：是NCBI网站的数据库查询系统，它集成了文献数据库、核酸序列数据库、结构数据库、基因图谱数据库，是有效利用NCBI数据库资源的工具。
17、EMBL：是欧洲分子生物学实验室创建的核酸序列数据库。
18、DDBJ：日本国立遗传研究所创建的核酸序列数据库。
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抗原表位鉴定与作图
抗原表位鉴定与作图
抗原表位，又称抗原决定簇，是抗原分子抗原性的基础。正确而
详细地绘制抗原表位图谱对疾病地诊断、设计无毒副作用地多表位疫
苗以及免疫治疗试剂等具有积极的意义。因此目前在预防医学领域许
多关于以表位为基础的，如表位疫苗和特异性诊断试剂等的研究也就
成了热点。
而噬菌体展示技术作为近年来新兴起的研究蛋白质抗原表位的有
利工具，已经成功地鉴定出了多种病原微生物地抗原表位。
这就为揭示一些病原体未知地抗原表位，从而进一步达到预防和
控制疾病地发生提供了条件。表位作图可用于检测免疫反应特异性或
不同抗体的鉴别，亦可用来确定蛋白质的特性，如蛋白质的位点、蛋
白质片段的来源以及蛋白质在细胞中的定位。
表位可根据其功能的不同分为两种不同类型：①线性表位(1inear)：
为小的线状肽链序列，约为5～20个氨基酸；②构象表位
(conformational)：由蛋白折叠而形成的较大的区域。抗原—抗体结
合晶体结构研究表明存在两种类型的表位。
线性表位的抗体结合位点与其氨基酸侧链骨架之间形成了较强的
多样性结构，并与相邻的肽链序列连接在一起，这些表位也被称为连
续性表位。事实上线性表位需要某些局部的结构变形或为紧密的、但
并非连续的氨基酸序列，如那些兼性。螺旋结构。因此，所谓线性表
位的描述是不够确切的。所有与抗体结合位点功能相关的结构，均位
于一个肽链片段之中。而来自于该片段之外的其他序列，对于抗体结
合位点的构成并非重要。
构象表位宜对较大的蛋白区表位作图。这些表位表现出侧链间的
相互作用，虽然在折叠蛋白质结构中构象表位彼此非常靠近，但其间
被较长的线性序列相互隔开。连续性表位或接近连续性的氨基酸序列
对蛋白质的降解作用有抵抗能力。而那些非连续性表位结构在蛋白质
未能折叠的情况下将会失去活性，这也是两种不同表位在功能上不同
的关键所在。
通过新型生物合成肽法进行抗原表位鉴定与表位作图，与传统的
噬菌体文库展示相比，生物合成肽法既可鉴定单抗表位又能鉴定多抗
表位，且能获知靶蛋白上全部且精细线性B细胞表位。
目前的表位鉴定技术能够实现：
①单抗药物及诊断用单抗的制备；
②研制包括“通用”目标在内的治疗性和预防性重组多价肽疫苗；
③研制单表位或重组多表位肽检测抗原；
④筛选基于表位基序的疾病、肿瘤等新的特异诊断标志物；
⑤高通量发现同源蛋白中全部保守性和特异性表位
⑥筛选功能性抗体表位或者抗体中和性及可及性表位；
⑦为表位水平分析病毒遗传进化和变异，提供抗原漂
移和转移的直接证据。