抗原表位研究的金指标方法
B细胞抗原表位的研究进展及其应用
原表位分析的研究方法， 以及 抗 原表 位 在 流 感 流 行 预 测 及 疫 苗 安全 性 方 面 的应 用 。 ［ 关 键 词 ］ Ｂ细 胞 表 位 ； 进展 ； 应用 ［ 中 图分 类 号 ］ Ｒ ３ ９ ２ ． １ １ ［ 文献标识码］ Ａ ［ 文章编号］ １ ０ ０ ９ — ０ ０ ０ ２ （ ２ ０ １ ３ ） ０ ２ — ０ ２ ６ ６ — ０ ５
是 针 对 表 位 而 不 是 针 对 完 整 的抗 原 分 子 。 表 位 一 般
只 占５ ～ ７个 氨基 酸 残 基 或单 糖 残 基 的大 小 ， 最 多 不 超过２ Ｏ 个氨基 酸残 基 ］ 。 根据 表位 对机 体 的影 响 ， 可分 为保护性 表位 、 致 病 性表位 、 自身抗原 交叉 反应 表位及 异 嗜性表 位 ； 根 据 表 位特 异 性免 疫应 答 的程度 ， 可将 抗原 中的表 位 分 为免疫 优势 表位 、 亚优 势表位 和 隐性表 位 ； 根 据与 抗 原受体 细胞 结合 的不 同 ， 分 为 Ｂ细胞抗 原表 位和 Ｔ
综
述
Ｂ细 胞 抗 原 表 位 的 研 究 进 展 及 其 应 用
郭春 艳 ， 赵 向绒 ， 胡军
１ ．陕 西 省 人 民 医 院 ；２ ．西安 交通 大 学 医 学 院 第三 附属 医院 ；陕 西 西 安 ７ １ ０ ０ ６ ８
［ 摘要 ］ 抗 原 表位 是抗 原 分 子 中决 定 抗 原 特 异 性 的特 殊化 学基 团 ， 其 对 于 研 究特 异 性 免 疫 应答 有着 重要 意 义 。 简 要
抗原表位鉴定方法的研究进展
抗原表位鉴定方法的研究进展孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民【摘要】抗原决定簇又称为抗原表位,是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团,也是蛋白质抗原性的基础.抗原抗体的特异性结合反应是针对特定的抗原表位而并非是完整的抗原,因此明确蛋白质的抗原表位对多肽和新型疫苗分子的设计及诊断试剂的发展具有重要意义.随着科技的发展,出现了一些新的鉴定单克隆抗体抗原表位的方法.本文在传统表位鉴定方法基础上简要综述了多技术结合鉴定抗原表位新方法.【期刊名称】《国外医学（医学地理分册）》【年(卷),期】2017(038)003【总页数】5页(P291-295)【关键词】抗原表位;多技术;鉴定方法【作者】孙娟;王愉涵;刘艳;郭进露;武丽涛;李冬民【作者单位】西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学2013级临床医学五年制,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安 710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061;西安交通大学医学部基础医学院生物化学与分子生物学系,陕西西安710061;西安交通大学环境与疾病相关基因教育部重点实验室,陕西西安 710061【正文语种】中文【中图分类】R751抗体一般仅与大分子抗原的某一部位反应，这一特异的部位称为抗原决定簇，也称为抗原表位，它是抗原分子中决定抗原特异性的化学基团。
抗原表位鉴定方法
抗原表位鉴定方法抗原表位鉴定啊，就像是在找宝藏一样有趣又神秘呢。
1. 基于实验的鉴定方法肽扫描技术。
这就像是拿着一把小梳子，在抗原这个大海洋里，一小段一小段地梳理，看看哪段能被抗体给逮住。
我们把抗原切成很多小肽段，然后分别去测试它们和抗体的结合能力。
要是哪个肽段和抗体亲亲热热地结合上了，那这个肽段就很可能是抗原表位啦。
比如说在研究某种病毒抗原的时候，就可以用这个方法，一点一点地找出能被免疫细胞识别的关键部分。
丙氨酸扫描。
这就像是给抗原做个小整容。
我们把抗原表位上的氨基酸一个一个换成丙氨酸，就像给原来的氨基酸小伙伴换个位置，然后看看抗体还认不认识这个换了装的抗原。
如果换了某个氨基酸之后，抗体就不怎么搭理这个抗原了，那这个被换掉的氨基酸在抗原表位里可就是个重要角色呢。
噬菌体展示技术。
这个可就更酷了。
我们把编码抗原的基因片段插到噬菌体的基因里，让噬菌体表面展示出抗原的一部分。
然后就像在一群小噬菌体里挑选模特一样，看看哪个噬菌体展示的抗原部分能被抗体选中。
这就像一场选秀比赛，噬菌体们都在展示自己的抗原片段，抗体就是评委，选出最有吸引力的那个。
2. 基于计算机的鉴定方法序列分析。
就像玩拼图一样，我们分析抗原的氨基酸序列。
看看有没有一些特定的序列模式，就像拼图里那些有独特形状的小块。
比如说，有些氨基酸序列在很多已知的抗原表位里都出现过，那这个序列在我们要研究的抗原里可能也是个表位呢。
我们可以把我们的抗原序列和数据库里的那些已知抗原序列做对比，找找相似之处。
结构预测。
这就像是给抗原做个3D建模。
我们根据抗原的氨基酸序列，用计算机软件来预测它的三维结构。
然后在这个三维结构里，找找那些可能暴露在外面，容易被抗体接触到的部分。
就像在一个立体的城堡里，找那些没有被城墙挡住，外面的人能看到的地方，这些地方可能就是抗原表位啦。
分子对接。
这就像是给抗原和抗体安排一场相亲。
我们把预测出来的抗原结构和已知的抗体结构放到计算机里，让它们试着对接一下。
抗原表位
研究方法
2.2 基因工程法（噬菌体随机肽筛选法）
该法先利用基因克隆技术将合成的 一组寡核苷酸混合物（小肽基因混 合物）克隆至线性噬菌体基因组中 ，使之以融合蛋白的形式在噬菌体 的外壳蛋白的氨基端表达。再利用 生物素或酶标记的抗体筛出特异的 噬菌体，并进行扩增，再筛选，从 结合特异抗体的噬菌体DNA序列推 断出氨基酸序列，并合成相应的短 肽，验证筛选结果。
从软件预测出的抗原表位须用实验来进一步验证。
以往合成的序列肽仅模拟蛋白质的线性表位，这无疑会遗漏众 多的构象性表位信息。近些年来,随着生物信息学和分子生物 学技术的飞速发展，采用计算机预测和试验相结合的方法进行 构象性表位分析和定位得到了迅速发展，一些可用的基于Web 的预测软件已经公布，如 CEP软件、DiscTope 软件和 MEPS软 件。
缺点是其所用的数据库有限，并且连续位点内的残基被认为 是同等重要的。显然那些不重要的残基归入计算会明显降低 相关性。
(4)可塑性方案(Flexibility)
指蛋白抗原构象不是刚性不变的，其多肽链骨架有一定程度 的活动性，活动性强的氨基酸残基即可塑性大的位点，易形 成抗原表位。Karplas 和Schulz基于已知结构的31个蛋白 质，发展了一种预测蛋白质片段活动性的方法。
可预测蛋白质β转角的有Chou-Fasman，Garnier，Cohen 等方法。其中各种方法预测的成功率均不超过65%。一般认 为Cohen方法对转角的预测正确率很高，对于已知折叠类型 的蛋白质(αα类，ββ类，α/β类)正确率高达95%，对于未知 结构类型的蛋白质，可用3种类型分别预测，3类预测一致 的转角对预测表位有帮助。
詹韦免疫生物学读书札记
《詹韦免疫生物学》读书札记目录一、免疫学基础 (2)1. 免疫系统概述 (3)2. 免疫细胞分类与功能 (3)3. 免疫应答过程 (5)二、抗体与抗原 (6)1. 抗体的结构与功能 (7)2. 抗原的特性与分类 (8)3. 免疫反应中的抗原表位 (9)三、免疫检测技术与应用 (10)1. 免疫荧光技术 (12)2. 酶联免疫吸附试验 (13)3. 流式细胞术在免疫学中的应用 (14)四、免疫治疗 (15)1. 免疫抑制剂 (16)2. 免疫调节剂 (17)3. 基因工程在免疫治疗中的应用 (19)五、免疫学研究新技术与新方法 (21)1. 蛋白质组学在免疫学中的应用 (22)2. 细胞成像技术在免疫学中的应用 (23)3. 系统生物学在免疫学研究中的应用 (25)六、免疫学与临床疾病 (26)1. 自身免疫性疾病 (27)2. 慢性感染性疾病 (29)3. 癌症免疫 (30)七、免疫学研究发展趋势与挑战 (31)1. 免疫记忆与免疫调节 (32)2. 免疫治疗的新靶点 (33)3. 免疫学与其他学科的交叉融合 (35)八、结论与展望 (36)1. 免疫学研究的总结与展望 (38)2. 对未来免疫学发展的思考与建议 (39)一、免疫学基础免疫学是研究生物体免疫系统与生物体健康之间关系的科学，它主要关注免疫系统的结构、功能以及与生物体内外环境的相互作用。
免疫系统由多个免疫器官和系统组成，包括骨髓、胸腺、脾脏、淋巴结等。
这些器官在免疫应答过程中发挥着重要的作用，骨髓是免疫细胞的发源地，而胸腺则影响T细胞的分化和发育。
免疫细胞是免疫系统的基本单位，包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。
这些细胞通过识别和清除病原体、异常细胞等来维护生物体的健康。
免疫分子是免疫系统的重要组成部分，包括抗体、细胞因子、趋化因子等。
这些分子在免疫应答过程中发挥着关键的调控作用，如抗体可以特异性地结合病原体，细胞因子可以调节免疫细胞的活性等。
抗原表位
B细胞表位
BCR
无需
天然的多肽、多糖、脂 多糖、有机化合物 5-15个氨基酸，5-7个 单糖或5-7个核苷酸 构象、线性表位
表位位置
抗原分子任意部位
抗原分子表面
表位是蛋白质抗原性的基础 ，研究蛋白质抗原表位 ， 对于设计具有免疫原性和中和活性的多肽、新型 疫苗分子及新型诊断试剂具有较大意义。
应用：多在诊断与疫苗的研究中,尤其是在制作良好 的特异性诊断试剂盒中更为重要。
构象50-200个 氨基酸 线状
10-20个氨基酸
必须建立肽库 完全绘制3-15
5 抗原表位的预测法
从80年代Hopp和Woods提出亲水性参数对抗原表位预测的 方法以来，已有许多参数、算法发表，对B细胞蛋白抗原表 位研究起到巨大的推动作用。现已被大众认可并具有较好预 测效果的方法，主要有以下6种：
(1)亲水性方案(Hydrophilicity)
Nozaki-Tanford scale，Eisenberg scale，KyteDoolittle scale，HPLC scale，Hopp-Woods scale
Hopp-Woods 方案认为：蛋白质抗原的氨基酸残基可分为 疏水性和亲水性两类。在机体内，疏水性残基一般埋在蛋白 内部，而亲水性残基位于表面，因此蛋白的亲水部位与蛋白 抗原表位有密切的联系。
在研究构象性表位时的minotopes方法即采用类似的方法，通常从二肽 开始合成并逐渐增加肽链长度及置换氨基酸种类，直至达到与抗体的最 大结合为止。
研究方法
2.2 基因工程法（噬菌体随机肽筛选法）
该法先利用基因克隆技术将合成的 一组寡核苷酸混合物（小肽基因混 合物）克隆至线性噬菌体基因组中 ，使之以融合蛋白的形式在噬菌体 的外壳蛋白的氨基端表达。再利用 生物素或酶标记的抗体筛出特异的 噬菌体，并进行扩增，再筛选，从 结合特异抗体的噬菌体DNA序列推 断出氨基酸序列，并合成相应的短 肽，验证筛选结果。
甲状腺自身抗体抗原表位的应用研究进展
CJCM 中医临床研究 2014年第6卷 第24期 -141-DOI:10.3969/j.issn.1674-7860.2014.24.061 甲状腺自身抗体抗原表位的应用研究进展Research on application development of thyroid autoantibody epitope牟宗平 殷美琦（苏州市中医医院，江苏 苏州，215000） 中图分类号：R581 文献标识码：A 文章编号：1674-7860（2014）24-0141-03【摘 要】甲状腺自身抗体主要包括抗甲状腺球蛋白、抗甲状腺过氧化物酶及抗促甲状腺素受体的自身抗体，长期以来被当作自身免疫性甲状腺病的血清学标志。
近年来的研究显示甲状腺自身抗体抗原表位可影响其功能。
对于甲状腺自身抗体抗原表位及功能的研究，有助于获得其功能性分子，用于自身抗体的检测，未来更有望用于AITD、甲状腺癌等疾病的诊断、治疗，以及对疾病预后的预测。
【关键词】甲状腺自身抗体；TPOAb；TgAb；TRAb；抗原表位【Abstract】Thyroid autoantibodies mainly including anti-thyroglobulin, anti-thyroid peroxidase, and Anti-thyroid stimulating hormone (TSH) receptor antibodies, have been taken as serological markers of autoimmune thyroid disease for a long time. Studies in recent years have shown that epitopes of thyroid autoantibody can affect its function. Research on these epitopes and their functions can help obtain functional molecules, which can be used to detect the autoantibodies. In the future they are even expected to be used for the diagnosis and treatment of AITD, thyroid cancer and other diseases, as well as the prediction of the prognosis.【Keywords】Thyroid autoantibodies; TPOAb; TgAb; TRAb; Epitope甲状腺自身抗体主要包括甲状腺球蛋白（thyroglobulin，Tg）、甲状腺过氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO）、促甲状腺素受体（thyroid stimulating hormone receptor，TSHR）的自身抗体，长期以来被当作自身免疫性甲状腺病（autoimmune thyroid disease，AITD）的血清学标志。
抗原表位
抗原表位的预测法
(6)二级结构预测方案(Secondary structure) 认为β转角结构为凸出结构，多出现在蛋白质抗原表面，利 于与抗体嵌合，较可能成为抗原表位。而α螺旋、β片层结构 规则不易形变，较难嵌和抗体，一般不作为抗原表位。 可预测蛋白质β转角的有Chou-Fasman，Garnier，Cohen等 方法。其中各种方法预测的成功率均不超过65%。一般认为 Cohen方法对转角的预测正确率很高，对于已知折叠类型的 蛋白质(αα类，ββ类，α/β类)正确率高达95%，对于未知结 构类型的蛋白质，可用3种类型分别预测，3类预测一致的转 角对预测表位有帮助。
水解后采用各种分离方法如SDS-PAGE、凝胶过滤、离子交换将水解片 段分开，然后用Western blot，ELISA等各种检测手段来检测。结果可通 过理论肽段分子量的推断或相应的氨基酸序列分析来判断。
利用该法分析抗原表位的有肌醇激酶、肌细胞增强蛋白、乙酰胆碱酯酶、 玻璃体结合蛋白、磷脂酶基质蛋白等。
分类
按表位结构不同，分为连续性抗原表位和不连续性抗原表位。
连续性表位又称线性表位，是由肽链上顺序连续的氨基酸组成 通常这种结合比较弱，因为小肽并不含完整天然蛋白的构象，
在多数情况下这种表位可能只代表了复杂表位的一部分。对其
研究依赖于多肽固相化学合成技术。 后者又称构象型抗原表位，是由那些空间邻近但顺序上不连续 的氨基酸组成。
研究方法
1.2 水解抗原-抗体复合物
这是一个直接的确定线性及构象性抗原表位的方法，又称为Protein footprinting。其理论依据为抗原--抗体复合物的结合部位能抵抗蛋白酶的水 解。 根据蛋白质抗原性质的不同常采用3种方法。 对于蛋白酶水解位点较少的抗原，一般先将抗原与等摩尔抗体在PBS中反 应，然后酶解，SDS-PAGE分离水解产物，分析结果。 对于蛋白酶水解位点较多的抗原，采用HPLC法，将抗原--抗体复合物的酶 解片段和同样条件下的抗原酶解片段分别用HPLC分析。两者图谱对应峰峰 高比大于平均数值的片段则推测为抗原表位。 对于能确定为线性表位的抗原可先将抗体连接于固相载体上，并将此固相 载体装柱，然后让过量的抗原溶液通过此柱，使抗原-抗体形成复合物。一 定条件下，酶溶液过柱，酶解此抗原-抗体复合物，PBS洗去酶解下的不结 合片段，再用1.0mol/L的乙酸洗下与抗体结合的肽段。HPLC分析这些片段 以确定结果。 近来，质谱技术在这类结果分析中得到了广泛的应用。采用该法已成功地 确定了细胞色素C，胃泌素释放肽(GRP)，脂碱性磷酸酶(PLAP)等的抗原 表位。
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抗原表位研究的金指标方法
抗原表位研究的金指标方法是一种重要的发现抗原表位的技术，它用于确定蛋白质表位，特别是抗原表位。
金指标方法的基本思想是，将待测的抗原蛋白与具有不同反应性的一组抗原抗体复合，通过检测抗原抗体在相应抗原条件下的共结合能力，以及抗原与抗原抗体之间的亲和力，来确定抗原蛋白的抗原表位。
金指标方法的工作原理是，先将待测的抗原蛋白与一组具有不同反应性的抗原抗体复合，然后将抗原抗体测试在不同条件下的共结合能力，以及抗原与抗原抗体之间的亲和力，并将这些信息整合成一个“金指标”，以此来确定抗原蛋白的抗原表位。
金指标方法是基于一组抗原抗体的反应性和抗原蛋白的反应性，根据这些信息来确定抗原蛋白的抗原表位的，因此，在使用金指标方法之前必须对抗原抗体的反应性和抗原蛋白的反应性进行有效的评估，以便确定抗原蛋白的抗原表位。
首先，需要准备一组具有不同反应性的抗原抗体，它们必须与待测抗原蛋白的抗原表位有关，以及能够形成有效的共结合物。
然后，需要通过实验测量抗原抗体与抗原蛋白的共结合能力，以及抗原与抗原抗体之间的亲和力，
并将这些信息整合成一个“金指标”，以此来确定抗原蛋白的抗原表位。
金指标方法可以用于确定抗原表位，也可以用于比较不同抗原蛋白的抗原表位，以及研究多个抗原表位如何影响抗原蛋白的生物特性。
此外，它还可以揭示抗原表位的结构和功能，以及抗原蛋白的免疫学功能，为开发新的免疫诊断试剂以及疫苗研发提供重要的基础信息。
金指标方法的灵敏度很高，它可以检测抗原表位的位置和结构，以及抗原蛋白与其他蛋白的相互作用，可以用于研究抗原蛋白的抗原表位。
然而，金指标方法也有一些局限性，比如抗原抗体的选择和准备，抗原抗体的反应性，抗原表位的结构等。
因此，在使用金指标方法之前必须仔细评估抗原抗体的反应性，以及抗原蛋白的反应性，以便确定抗原蛋白的抗原表位。