(完整word版)武生院基因工程期末试题
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2013-2014年度第二学期基因工程期末考试
卷型:A 考试时间:90分钟满分:100分
一、名词解释(3×5)
限制性内切酶(或其它工具酶):能在特异位点上催化双联DNA分子断裂,产生相应的限制性DNA片段
荧光定量PCR:所谓实时荧光定量PCR技术,是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法(半定量PCR:是近年来常用的一种简捷、特异的定量RNA测定方法,通过mRNA反转录成cDNA,再进行PCR扩增,并测定PCR产物的数量,可以推测样品中特异mRNA的相对数量)星活性:非标准条件下切割相似序列,产生非特异性片段
同裂酶(或同尾酶):来源不同但具有相同识别序列,产生相同或不同末端
转基因技术(或转基因动植物等):就是将人工分离和修饰过的基因导入到目的生物体的基因组中,从而达到改造生物的目的。
二、填空(1×15)
1.Cosmid 实际上是由cos 位点和质粒构成的杂合载体,也可以说是带有cos序列的质粒。
2.超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA 在琼脂糖凝胶电泳的特点是:电泳的泳动速度由大到小分别是:超螺旋质粒>线状质粒>开环质粒。
3.质粒DNA的提取方法有碱裂解法、煮沸法、去污法。
4.基因工程中常用载体是质粒、噬菌体、动植物病毒。
5.设计引物是一般要求C+G的比例在 40%-60%,长度在17-30bp 。
6.BAC载体与常规载体的区别在于复制单元的特殊性。
三、选择题(2×15,实卷应是1×35)
1.基因工程创始人(D)
A A. Kornberg
B W. Gilbert
C P. Berg
D S. Cohen
2.迄今为止所发现的限制性内切核酸酶可以作用于(C)
A. 既可以作用于双链 DNA ,又可以作用于单链 DNA
B.只能作用于单链 DNA
C. 只能作用于双链 DNA
D.只能作用于 RNA
3.氨苄青霉素的工作原理为(A )
A.可以抑制细胞壁肽聚糖的合成
B.可以抑制核糖体的转位
C.可以与核糖体 50S 亚基结合并抑制蛋白质合成
D.可以与核糖体 30S 亚基结合并抑制蛋白质合成
4.反转录酶是一种( C )
A. 依赖DNA的DNA聚合酶
B. 依赖DNA的RNA聚合酶
C. 依赖RNA的DNA聚合酶
D. 依赖RNA的RNA聚合酶
5.II 类限制性内切核酸酶( A )
A.仅有内切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
B.限制性识别非甲基化的核苷酸序列
C.有外切核酸酶和甲基化酶活性
D.仅有外切核酸酶活性,甲基化酶活性由另外一种酶提供
6.下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是II 类酶的识别序列 (C)
A.GAATCG
B.AACCTT
C.GATATC
D.ACGGCA
7、(多选)在基因工程中,可用碱性磷酸酶( AB )。
A.止DNA 的自身环化
B.同多核苷酸激酶一起进行DNA 的5’端标记
C.制备突出的3’端
D.上述说法都正确
8.K1enow 酶与DNA 聚合酶相比,前者丧失了( C )的活性。
A.5’→3’合成酶 B.3’→5’外切酶
C.5’→3’外切酶 D .转移酶
9.自然界中存在的植物植物基因工程载体是(D)
A.YAC
B.根癌农杆菌
C. Puc18
D.Ti质粒
10.质粒具备下列特征,因此适合作为克隆载体,除了(B)。
A.赋予宿主细胞某种可检测的特性
B.甲基化防止宿主的限制性内切核酸酶对其降解
C.独立复制的能力
D.可复制自身DNA 以及插入的外源DNA
11.用碱法分离质粒DNA时,染色体DNA之所以可以被除去,是因为(C)。A.染色体DNA断成了碎片
B.染色体DNA分子质量大,而不能释放
C.染色体变性后来不及复性
D.染色体未同蛋白质分开而沉淀
12.DNA提取过程中,异戊醇的作用是(D)。
A.使蛋白质脱水 B.使DNA脱水
C.帮助DNA进入水相 D.减少气泡,促进分相
13.PCR反应的必备条件是(B)。
A.至少有100个起始DNA分子 B.拟扩增的目的DNA片段的部分序列信息
C.扩增需要cDNA模板
D.至少100kb长度的模板
14.你打算扩增下面所示的两段序列之间的DNA,
5’-GACCTGTGGAAGC----------------------CATACGGGATTG-3’ 3’
-CTGGACACCTTCG-----------------------GTATGCCCTAAC-5’最适合的引物序列是( B )。
A.引物1,5’-CTGGACACCTTCG 引物2,5’-GTATGCCCTAAC
B.引物1,5’-GACCTGTGGAAGC 引物2,5’-CAATCCCGTATG
C.引物1,5’-CGAAGGTGTCCAG 引物2,5’-GTTAGGGCATAC
D.引物1,5’-GCTTCCACAGGTC 引物2,5’-CATACGGGATTG
15、Southern 印迹是用DNA 探针检测DNA 片段,而Northern 印迹则是 ( C )。A.用RNA 探针检测DNA 片段B.用RNA 探针检测RNA 片段C.用DNA 探针检测RNA 片段 D.用DNA 探针检测蛋白质片段
四、简答题(5题×6)
1、基因工程的操作步骤是什么?制备目的基因方法有哪些?(或CTAB、SDS原理?)答:1.获取目的基因 2.从大肠杆菌中分离质粒 3.酶切目的基因与质粒4.DNA连接酶连接目的基因与质粒5.导入受体细胞表达6.筛选与鉴定
获取目的基因方法:(1)以氨基酸序列为基础的功能克隆法(2)以核苷酸序列为基础的同源序列克隆法(3)基因组DNA文库(4)cDNA文库(5)图位克隆法(6)转座子标签法(7)T-DNA插入法(8)mRNA差异显示法(9)化学合成法(10)直接分离法(11)PCR分离法
2、何为载体?一个理想的载体应具备那些特点?
答:将外源 DNA 或目的基因携带入宿主细胞的工具称为载体。载体应具备:①在宿主细胞内必须能够自主复制(具备复制原点);②必须具备合适的酶切位点,供外源 DNA 片段插入,同时不影响其复制;③有一定的选择标记,用于筛选;④其它:有一定的拷贝数,便于制备。⑤遗传稳定
3、影响限制性内切酶的活性因素?
答:①DNA的纯度②DNA甲基化程度③DNA的分子结构④限制性核酸内切酶的缓冲液⑤酶切消化反应的时间和温度⑥反应体积和甘油浓度
4、简述cDNA文库的构建过程。
答:⑴细胞总RNA的提取和mRNA的分离
⑵第一链合成:由mRNA到cDNA的过程为反转录,由反转录酶催化。
⑶第二链合成:①自身引物合成法②置换合成法③引导合成法④引物—衔接头合成法
⑷双链cDNA里连接到质粒或噬菌体载体并导入大肠杆菌中繁殖
5、常用的工具酶有哪些?其主要用途是什么?(备选)
答:限制性内切核酸酶,DNA聚合酶和Klenow大片段,DNA连接酶,
碱性磷酸酶,末端脱氧核苷酸转移酶.
限制性内切核酸酶:能够识别特异的DNA碱基序列, DNA碱基序列往往呈回文对称结构;
DNA 聚合酶 a 位于细胞核内,也许是复合物,有催化细胞增生的作用; Klenow 大片段:它也可以通过基因工程得到,分子量为 76kDa 。
DNA连接酶:负责双链DNA中相邻3`-OH与5`-磷酸基团之间的磷酸二酯键的形成。
碱性磷酸酯酶:从DNA或RNA的三磷酸核苷酸上除去5`磷酸根残基。末端转移酶的作用是将脱氧核糖核苷酸通过磷酸二酯键加到DNA分子的3`-OH末端。