基因工程实验考试试题(答案)
基因工程试题及答案.doc
基因工程试题一、名词解释(4 ‘*10)1.基因工程技术：按照人们的愿望，进行严密的设计，通过体外DNA 重组和转移等技术，有目的地改造生物种性，使现有物种在较短的时间内趋于完善，创造出新的生物类型。
2.感受态细胞：受体细胞经一些特殊方法(如CaC12、RbCl (KC1) 等化学试剂)处理后，细胞膜的通透性发生了暂时性改变，成为能允许外源DNA 分子进入的细胞状态。
3.cDNA文库：从组织细胞中分离得到纯化的mRNA,然后以mRNA为模板，利用逆转录酶合成其互补DNA,再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后导入受体菌内，扩增，构建cDNA文库。
4.鸟枪法：指将某种生物体的全基因组或单一染色体切成大小适宜的 DNA 片段，分别连接到载体DNA上，转化受体细胞，形成一套重组兑隆，从中筛选出含有目的基因的期望重组子。
5.SD序列(Shine-Dalgarno):位于翻译起始密码了•上游的6-8个核苷酸序列(5’ UAAGGAGG 3’)，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译。
6.包涵体：胞内高效表达时，工程菌因大景合成异源蛋白质所形成的水不溶性积聚物。
7.复合转座子：是由两个重复序列夹着一个或多个结构基因如某些抗药性基因和其它基因组成。
存在于R因子及其它质粒中。
复合转座子两端的组件由IS和类IS组成。
8.菌落原位杂交：是将菌落或噬菌斑转到固相膜上，原位裂解细胞后使核酸固定在膜上，然后与探针杂交。
用标记的核酸探针，经放射自显影或非放射检测体系，在组织细胞间期染色体上对核酸进行定位和相对定量研究的一种手段。
9.RACE：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA 为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3, 或5，端之间未知序列的方法。
10.连续式发酵：即在连续发酵反应器中，细胞的总数和培养液总体积同时维持恒定，前提是由培养液流出所造成的细胞损失正好为细菌分裂所产生的新细胞弥补。
基因工程练习试题带答案
1．在基因工程中，切割载体和含有目的基因的 DNA 片段中，普通需使用A. 同种限制酶B.两种限制酶C. 同种连接酶D.两种连接酶2．基因工程常用的受体有①大肠杆菌②枯草杆菌③结核杆菌④动植物细胞A. ①②③④B. ①②③C. ②③④D.①②④3．有关基因工程的表达正确的选项是A.限制酶只在获得目的基因时才用B.重组质粒的形成是在细胞完成的C.质粒都可作为载体D.蛋白质的构造成份为合成目的基因提供资料4．以下哪项不是基因工程中时常使用的用来运载目的基因的载体 A.细菌质粒 B.噬菌体 C.动植物病毒 D.细菌核区的 DNA5．基因工程是在 DNA 份子水平上发展设计施工的。
在基因操作的根本步骤中，不发展碱基互补配对的是A.人工合成目的基因B. 目的基因与运载体结合C.将目的基因导入受体细胞D. 目的基因的检测表达6．不是基因工程法生产的药物是A.干扰素B.白细胞介素C.青霉素D. 乙肝疫苗7．在基因工程中用来修饰改造基因的工具是A.限制酶和连接酶B.限制酶和水解酶C.限制酶和运载酶D.连接酶和运载酶8．以下哪项表达不是运载体必须具备的条件A.具有某些标记基因B.决定宿主细胞的生存C.能够在宿主细胞中复制D.有一个或者多个限制酶切点9．水母发光蛋白由 236 个氨基酸构成，其中有三种氨基酸构成发光环，现已将这种蛋白质的基因作为生物转基因的标记。
在转基因技术中，这种蛋白质的作用A.促使目的基因导入宿主细胞中B.促使目的基因在宿主细胞中复制C.使目的基因容易被检测和选择D.使目的基因容易成功表达 10．应用基因工程技术诊断疾病的过程中必须使用基因探针才干到达检测疾病的目的。
这里的基因探针是指A.用于检测疾病的医疗器械B.用放射性同位素或者荧光份子等标记的 DNA 份子C.合成β—球蛋白的 . DNA .D.合成苯丙氨酸羟化酶的 DNA 片段11．基因工程第一步的一种法是把所需的基因从供体细胞别离出来，这要利用限制性切酶。
基因工程试题及答案解析
基因工程试题及答案解析一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶是：A. 蛋白酶B. DNA聚合酶C. 核糖核酸酶D. 限制性核酸内切酶答案：D2. 基因工程中，用于将目的基因导入植物细胞的方法是：A. 电穿孔法B. 显微注射法C. 农杆菌转化法D. 脂质体介导法答案：C3. 下列哪项不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的获取B. 基因表达载体的构建C. 目的基因的扩增D. 目的基因的检测与鉴定答案：C二、填空题1. 基因工程中，常用的运载体有____、____和____。
答案：质粒、噬菌体、动植物病毒2. 基因工程中，常用的筛选标记基因有____、____和____。
答案：抗性基因、荧光蛋白基因、酶基因三、简答题1. 简述基因工程的应用领域。
答案：基因工程的应用领域包括农业、医学、工业、环境保护等。
在农业中，基因工程可以用于培育抗病、抗虫、抗旱等性状的作物；在医学领域，基因工程可以用于生产重组蛋白药物、基因治疗等；在工业上，基因工程可以用于生产酶、疫苗等；在环境保护方面，基因工程可以用于生物修复、污染物降解等。
2. 基因工程中，如何确保目的基因在宿主细胞中正确表达？答案：确保目的基因在宿主细胞中正确表达需要考虑以下几个方面：首先，目的基因需要有合适的启动子和终止子，以确保其在宿主细胞中得到正确转录和终止；其次，需要考虑目的基因的密码子偏好性，以确保其在宿主细胞中能被高效翻译；再次，需要考虑目的基因的稳定性，避免其在宿主细胞中被降解；最后，还需要考虑目的基因产物的后翻译修饰和定位。
四、论述题1. 论述基因工程在医学领域的应用及其可能带来的伦理问题。
答案：基因工程在医学领域的应用主要包括生产重组蛋白药物、基因治疗、疾病诊断和基因疫苗等。
重组蛋白药物可以用于治疗糖尿病、侏儒症等疾病；基因治疗可以用于治疗遗传性疾病；疾病诊断可以通过基因检测来实现；基因疫苗可以用于预防某些遗传性疾病。
然而，基因工程的应用也带来了伦理问题，如基因隐私权、基因歧视、基因治疗的安全性和有效性等。
基因工程试题与答案
基因工程试题与答案1、转基因动物的安全性问题正面观点：（1）转基因工程是不可阻挡的. 基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等. 保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
（2) 转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食品——食品疫苗。
（3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。
反面观点：转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括：（1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少，影响了生物多样性；（2）生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡；（3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染。
（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
（5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”；食品安全性：（1）转基因毒性. 如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境；（2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
（3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实质同等性，便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。
【HUNAU】基因工程试题 (附答案)
名词解释1.Restriction Endonuclease限制性内切核酸酶。
一类能够识别双链DNA分子中某种特定核苷酸序列，并由此切割DNA双链结构的核酸水解酶。
特异性识别序列上的位点，并对其进行切割。
第一个核酸内切酶，Boyer实验室在1972年发现，它能特异性识别GAATTC序列，水解双链DNA分子。
2.EcoR Ⅰ（酶切位点）限制性内切酶的一种，酶切识别位点为G/AATTC。
3.PCR 聚合酶链式反应。
通过变性、延伸和退火三个步骤的循环。
扩增DNA片段。
4.Vector载体可以运载外源DNA或者基因进入宿主细胞进行自主复制，上有抗性基因以及多克隆位点，可用于制备载体。
5.Plasmid质粒存在于多种宿主细胞中独立于染色体外的可自主复制的闭合环状DNA分子。
一种环形分子，可以不依靠宿主细胞自主复制，上有抗性基因以及多克隆位点，可用于制备载体。
6.Agarose gel electrophoresis琼脂糖凝胶电泳。
以琼脂糖凝胶为支持介质的电泳方式，可分离DNA片段，且通过DNA Marker判断出其分子量大小，7.Transgenic bio-reactor转基因生物反应器。
将基因转入细胞或动植物体，利用细胞增殖或者动植物代谢制备外源基因的表达产物的技术叫转基因技术。
转入外源基因的动植物或细胞称为转基因生物反应器。
8.pBR322 一种质粒载体9.Genomic library基因组文库。
把某种生物的基因组DNA切成适当大小，分别与载体组合，导入微生物细胞，形成克隆、汇集包含基因组中所有DNA序列的克隆，这样的克隆片段的总汇，称为基因组文库。
将某一种生物基因组DNA片段化并全部克隆后所获得的重组子群体的总称。
10.T-DNA Ti-质粒上的可以转移至植物细胞内的一个片段。
11.PUC18 质粒载体的一种，由PBR322改造而来，其上有多克隆位点，lac Z基因。
12.Cosmid黏粒载体，可用氯霉素扩增。
基因工程实验(答案)
——凯1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程（实验题目的总结）答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器（自己写的）答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么答：loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
（题目有歧义）答：①取琼脂粉置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响（实验书P75）答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么（实验书P31）答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。
大学基因工程试题及答案
大学基因工程试题及答案一、选择题1. 基因工程中常用的限制酶属于哪一类酶？A. 核酸酶B. 蛋白酶C. 脂肪酶D. 淀粉酶答案：A2. 以下哪个不是基因工程的基本步骤？A. 目的基因的克隆B. 目的基因的表达C. 目的基因的检测D. 目的基因的复制答案：D3. 基因工程中常用的运载体有哪些？A. 质粒B. 噬菌体C. 动植物病毒D. 所有以上答案：D二、填空题1. 基因工程中常用的_________技术可以用于目的基因的检测。
答案：PCR2. 基因工程中，_________是将目的基因导入受体细胞的关键步骤。
答案：转化3. 在基因工程中，_________是将目的基因插入到运载体中形成重组DNA分子的过程。
答案：克隆三、简答题1. 简述基因工程在医学领域的应用。
答案：基因工程在医学领域的应用包括生产重组药物、基因治疗、疾病诊断和疫苗开发等。
2. 描述基因工程中目的基因的克隆过程。
答案：目的基因的克隆过程包括提取目的基因、构建基因文库、筛选含有目的基因的克隆、目的基因的扩增和纯化等步骤。
四、论述题1. 论述基因工程技术在农业中的应用及其可能带来的问题。
答案：基因工程技术在农业中的应用包括改良作物品质、提高作物产量、增强作物抗病虫害能力等。
可能带来的问题包括生态平衡的破坏、基因污染、食品安全问题等。
2. 分析基因工程中目的基因表达调控的重要性及其策略。
答案：目的基因表达调控在基因工程中至关重要，它决定了基因工程产品的功能和产量。
调控策略包括启动子的选择、增强子的应用、转录后调控等。
基因工程试题与答案
1、转基因动物的安全性问题正面观点：（1）转基因工程是不可阻挡的.基因工程将影响当代重大的环境问题:人口过剩/污染/生物多样性急剧减退等等.保护土壤/水/能源成为发展可持续农业的目标。
（2)转基因食品的功效: 改良植物的食用品质；增加果蔬贮藏、保鲜性能；生产特殊食品——食品疫苗。
（3）迄今为止并没有发现转基因食品危害人体健康和环境的确切证据。
如果转基因生物技术得不到社会支持，这一研究将被扼杀。
反面观点：转基因的潜在危害：转基因动植物安全性评价主要集中在环境安全性，食品安全性以及对人动物健康的影响三方面。
环境安全性分析包括：（1）生存竞争性：转基因植物在生存竞争方面具有的优势可能导致生物多样性的减少，影响了生物多样性；（2）生殖隔离距离:基因不可控制的水平转移的可能性；与近缘野生种的可交配性：外源基因是否会漂流扩散至亲缘野生种中，从而破坏自然生态平衡；（3）对非靶生物的影响：转基因植物花粉通过风，雨，鸟，昆虫，真菌，细菌以至整个生物链传播使外源基因逃逸，从而造成基因污染。
（4）病毒发生异缘重组或异缘包装的可能性：自然界中存在着植物病毒之间的异缘重组。
（5）对农业和生态环境的影响，生态平衡. 如产生超级杂草的可能性；种植抗虫转基因作物后可能使害虫产生免疫并遗传、从而产生更加难以消灭的“超级害虫”；食品安全性：（1）转基因毒性.如英国发现转基因马铃薯会减弱老鼠免疫系统功能，美国发现转基因玉米会危害蝴蝶幼虫及其相关生态环境；（2）人的毒理反应或过敏反应. 大肠杆菌细胞膜间隙中含有大量的内毒素，痕量的内毒素即可导致人体热原反应。
（3）实质等同性的原则，即某一种生物技术产品或其成分能够与市场上现有的对应产品进行比较。
如果一种转基因产品能够与现存的一种产品进行比较，并且发现具有实质同等性，便能用现产品安全性同种方法对待它。
转基因植物所引入的蛋白对人体可能是异性蛋白质，在部分人中可能发生食物过敏，特别是幼儿和某些过敏体质的人。
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1.简述本学期从基因组DNA提取到重组质粒鉴定的实验流程？
答：①基因组DNA的提取；②PCR扩增目的基因；③凝胶电泳分离纯化PCR扩增的DNA片段以及DNA的体外连接；④重组质粒的转化及转化子的筛选；⑤重组质粒的抽提；⑥重组质粒的酶切鉴定。
2.如何正确使用微量移液器？
答：①选取合适量程的移液器；②根据取液量设定量程；③安装（吸液）枪头；④按至第一档，将枪头垂直伸入液面下适当位置吸液；⑤按至第二档将液体打入容器；⑥弃掉枪头；⑦将量程调至最大，放回原处。
3.在琼脂糖凝胶电泳点样时，DNA通常和什么试剂混匀，其主要成分和作用是什么？
答：loading Buffer。
主要成分为溴酚蓝，二甲苯青和甘油。
溴酚蓝和二甲苯青起指示作用；甘油加大样品密度，从而沉降于点样孔中，以免浮出。
4.简述制作1%的琼脂糖凝胶电泳的操作步骤。
答：①取0.5g琼脂糖置于锥形瓶，量取50ml 1×TBE溶液于瓶中，微波炉加热至琼脂糖溶解；②将移胶板放入胶室中，选取合适梳子垂直安插在移胶板上方，待琼脂降温至55℃下后，缓慢导入该胶室里；③量取合适量1×TBE溶液导入洗净的电泳槽，并正确插好电泳线；
④等凝胶凝固后，将梳子垂直拔出；⑤点样；⑥轻放移胶板至电泳槽的合适位置；⑦打开电泳仪的开关，调好参数，开始电泳；⑧一定时间后，停止电泳，取出凝胶板，然后经BE染色放入成像系统显色、观察。
5.琼脂糖凝胶电泳中DNA分子迁移率受哪些因素的影响？（实验书P75）
答：①样品DNA的大小和构象；②琼脂糖浓度；③电泳电场；④温度；⑤缓冲液；⑥嵌入染料的存在与否；
6.在使用苯酚进行DNA抽提时应注意什么？（实验书P31）
答：注意不要吸取中间的变性蛋白质层。
7.在基因组DNA提取过程中常用酚、氯仿、异戊醇试剂，它们各有什么作用？
答：酚——是蛋白质变性，抑制DNA酶的降解作用；氯仿——除去脂类，同时加速有机相与水相的分层；异戊醇——降低表面张力，从而减少气泡的产生。
8.提取DNA实验中，通常可选用哪些试剂沉淀DNA？
答：冷的无水乙醇、冷的异丙醇、终浓度为0.1～0.25mol/L 的NaCl
9.简述在DNA提取实验中个试剂的作用（SDS，EDTA，酚/氯仿/异戊醇、无水乙醇，70%乙醇）。
答：SDS——破坏细胞膜，解聚核蛋白；EDTA——整合金属离子，抑制DNase活性；酚/氯仿/异戊醇——见第7题；无水乙醇——沉淀DNA；70%乙醇——洗涤DNA沉淀。
10.简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg2+，dNTP，引物，DNA，缓冲液，Taq DNA聚合酶）。
答:(1)利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，通过一系列酶在体外引物介导下，
经高温变性，低温退火，适温延伸三个步骤合成特异DNA片段。
（2）Mg2+：TaqDNA聚合酶的活性需要；dNTP：作为底物；引物：作为延伸的出发点；DNA：模板；缓冲液：维持反应环境的pH值；TaqDNA聚合酶：催化DNA的合成。
11.PCR循环次数是否越多越好，为什么？
答：否。
因为PCR产物的积累存在平台效应。
12.降低退火温度，延长变性时间对PCR结果有什么影响？
答：前者会使非特异性产物增多；后者会导致酶的活性降低。
13.如果检测的PCR结果中出现很多非特异性条带，可能有哪些原因导致？
答：①引物特异性不强；②Mg2+浓度过高；③引物二聚体形成；④退火温度过低；⑤循环次数过多。
14.简述DNA片段回收纯化的原理。
（？）
答：各DNA片段的大小不同，则经琼脂糖凝胶电泳后得到了分离，从而收集含有DNA的凝胶部位，通过溶解凝胶、使DNA与硅胶柱结合、再通过洗涤杂质、最后DNA洗脱，通过新的EP管收集等，最终得到纯化的目的。
15.为什么DNA体外连接反应反应要设在16℃？
答：因为此温度下能最大限度的发挥连接酶的活性，同时有助于维持短暂配对结构的稳定。
16.简述TA克隆试剂盒进行体外连接的原理。
（实验书P149）
答：经DNA聚合酶得到的PCR产物——双链DNA片段的末端具有一个突出“A”碱基，而T载体每条链的3’端带有一个突出“T”碱基，则其两端可以与PCR产物的两端进行正确的T--A配对，再在连接酶的催化下，即可将目的片段连接到载体上，形成重组载体。
17.简述氯化钙制备感受态细胞的原理。
（实验书P153）
答：将受体细胞置于低温预处理的低渗CaCl2溶液中，则可是细胞的通透性增大，这样的细胞在转化的时候，极易与外源DNA相黏附并在细胞表面形成复合物，然后经42℃短暂热击，外源DNA则可进入细胞内。
18.重组质粒的转化方法有哪些？
答：CaCl2法，电击法，农杆菌转染法；花粉管通道法，基因枪法等。
19.当质粒加入宿主细胞进行转化，再涂布在含有Amp的LB培养基平板前，为什么要在LB 培养基上培养1h？
答：使感受态细胞复苏，同时让重组质粒在感受态细胞中适应并复制，以便于表达产物，使受体细胞具抗性能力。
20.什么情况下转化平板上会出现卫星菌落，为什么会出现卫星菌落？
答：涂布后的培养基培养时间过长。
因为载体上的抗性基因的表达产物由于培养时间过长而得到积累，使加入的抗生素失效，从而让不含质粒的空菌落的一大量生长，故出现卫星菌落。
21.碱裂解细胞抽提质粒的基本原理是什么？
答：当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解后，DNA和蛋白都发生变性。
当加入中和液后，由于构象上的区别，质粒DNA能较快的复性呈溶解状态，离心时留在上清液中，而染色体DNA不能较好的复性，从而形成缠绕的网状结构并与蛋白凝聚，因离心沉淀。
22.电泳检测提取的质粒是会看到三条带，这三条带分别代表了什么？
答：碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，得到的三条带是以电泳速度的快慢排序的，分别是超螺旋、开环和复制中间体（即没有复制完全的两个质粒连在了一起）。
如果你不小心在溶液II加入后过度振荡，会有第四条带，这条带泳动得较慢，远离这三条带，是20-100kb 的大肠杆菌基因组DNA的片断。
23.质粒抽提中溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的作用是什么？
答：溶液Ⅰ——使沉淀重新悬浮；溶液Ⅱ——让染色体DNA和质粒DNA变性；溶液Ⅲ——中和碱，使质粒DNA复性。
24.什么是限制性内切酶的星号活性？
答：在某些条件下，一种特异性识别序列的限制酶在酶切同一种DNA片段时会产生新的酶切位点而得到不同的酶解片段的酶活性。
25.细菌产生的限制性内切酶，为什么不对自己的DNA进行切割？
答：因为细菌能通过甲基化酶的甲基化作用保护自身的DNA不被相应的限制酶降解。
26.影响限制性内切酶的因素有哪些？使用工具酶时应注意什么？
答：（1）DNA样品中的污染物，如有机溶剂等；缓冲体系；温度；样品量。
（2）①酶量使用少，确认样品是否加入反应体系；②吸取各试剂时使用不同枪头，避免交叉污染；③控制反应体系中甘油量在10%以下，以防止星号活性；④保证取酶的操作在冰浴条件下进行。
操作考试：
１.制胶
２.点样电泳
３.依照给定的ＰＣＲ参数，在ＰＣＲ仪上设置程序。
４.切胶
５.超净工作台接种（切记：最后封膜）。