酰肼类化合物电化学发光
【国家自然科学基金】_流动注射化学发光_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140802
2011年 科研热词 推荐指数 化学发光 12 流动注射 8 鲁米诺 3 高锰酸钾 2 抗坏血酸 2 阿洛西林 1 铬离子 1 铜(ⅱ) 1 钼 1 钢铁 1 金纳米颗粒 1 金属离子 1 过氧亚硝酸根 1 负载型催化剂 1 色氨酸 1 离子印迹聚合物 1 白藜芦醇 1 电致化学发光 1 电化学 1 环金属铱配合物 1 热电极 1 滴眼液 1 流动注射化学发光法 1 氨基硫脲 1 抗生素 1 抑制化学发光法 1 抑制 1 恒电位电解 1 快速检测 1 微芯片 1 循环伏安 1 山奈酚 1 在线分离 1 叶绿素铜钠 1 发光机理 1 双氧水 1 半胱氨酸 1 利福平 1 分子印迹 1 克百威 1 催化 1 传感器 1 乙二醛 1 h2o2 1 3-对硝基苯基-5-(2'-磺酸基苯偶氮)若丹宁 1 1o2 1 1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚 1
2012年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52
推荐指数 12 9 3 2 2 2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47
免疫分析技术和相关仪器
免疫分析技术和相关仪器4.1．酶免疫分析仪4.1.1酶免疫分析技术的分类酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前临床应用最多的一类免疫分析技术，可分为非均相(或异相)酶免疫测定和均相酶免疫测定两种方法。
均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI）均相酶免疫分析主要有酶扩大免疫测定技术和克隆酶供体免疫测定两种方法。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay）常用的酶免疫分析法多为非均相法，又可分为液相酶免疫法和固相酶免疫法两种，以后者最常用，称为酶联免疫吸附测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。
ELISA是临床上最常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析仪都是基于ELISA技术，称为酶免疫分析仪。
4.1.2酶免疫分析仪的类型、工作原理及基本结构根据仪器结构和自动化程度, 针对固相支持物的不同（如微孔板、试管、小珠、磁微粒等）作为吸附免疫试剂的载体，因而设计成不同的酶免疫分析仪，其基本工作原理就是分光光度法，在光电比色计或分光光度计的基础上根据ELISA技术的特点而设计。
包括：微孔板固相酶免疫测定仪器国际上微孔板式ELISA使用的载体为96孔板，采用直接对微板孔测定吸光度（A）的比色计。
(1) 酶标仪酶标仪也称为ELISA测读仪（ELISA reader）,有单通道和多通道两种类型。
自动型多通道酶标仪有多个光束和多个光电检测器，检测速度快。
如8通道的仪器，设有8条光束（或8个光源）、8个检测器和8个放大器。
多通道酶标仪的检测速度较快。
酶标仪的工作原理与主要结构和光电比色计几乎完全相同（见图16-1）。
既可以使用和分光光度计相同的单色器，也可以使用干涉滤光片来获单色光，此时将滤光片置于微孔板的前、后的效果是一样的。
图16-1 酶标仪工作原理酶标仪的工作原理和光路与普通光电比色计的不同之处在于（见图16-2）：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶标仪以垂直光束通过微孔板中的待测液；酶标仪通常使用光密度OD来表示吸光度。
全自动化学发光免疫分析仪运行原理
Assay processing for One step 25 (i System)
1. At position 1 the sample pipettor dispenses the sample into the RV (reaction vessel). 2. At position 2 the R1 pipettor dispenses the microparticles and acridinium-labeled conjugate. NOTE: For a delayed one-step assay the R2 pipettor adds the acridinium-labeled conjugate at position 71 and the vortexer mixes the reaction mixture at position 72. 3. At position 3 the vortexer mixes the sample, microparticles, and conjugate. 4. At positions 4 - 86 the reaction mixture incubates for 25 minutes.
化学发光现象的发现
最早发现的化学发光现象发生在生物体内，即荧火虫，现在 称之为生物发光(Bioluminescence). 到了十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产 生化学发光. 1877年，发现洛汾碱(2，4，5-三苯基咪唑)在碱性介质中被 过氧化氢等试剂氧化时发出绿色的光. 1928年，观察到鲁米诺(3-氨基苯二甲酰肼)在碱性介质中的 化学发光行为. 1935年，第一个报告了光泽精(N,N-二甲基二吖啶硝酸盐)与 过氧化氢反应产生化学发光. 到现在的吖啶酯、三联吡啶钌等发光标记物应用技术的成熟。
发光免疫分析技术
发光现象
• 一种物质由电子激发 态回复到基态时，释 放出的能量表现为光 的发射，称为发光 。
6
发光类型
光照发光 化学发光 生物发光
7
生物发光类型
8
化学发光 (chemiluminescence)
• 化学发光酶免疫分析 – chemiluminescence enzyme immunoassay
• (直接)化学发光免疫分析 – chemiluminescence immunoassay
• 电化学发光免疫分析 – electrochemiluminescence immunoassay
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化学发光免疫技术
发光酶免疫分析
化学发光免疫分析 电化学发光免疫分析
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问题一:
发光酶免疫分析
酶免疫分析的发光底物
➢Virus
➢Capture antibody ➢Solid support
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技术类型
发光免疫分析技术
临床免疫学教研室
李会强 教授
发光免疫分析
• 将发光分析和免疫反应相结合而建立的一种新 的免疫分析技术。方法不仅具有发光分析的高 灵敏度和抗原抗体反应的高度特异性,而且还具 有分离简便,可以实现自动化分析特点,使之成 为生物学研究领域中一种新的重要分析手段。
2
标记免疫分析
• 发展历史： – 放射免疫分析（60年代） – 酶免疫分析（70年代） – 发光免疫分析（80年代）
• 吖啶酯发光的氧化反应简单快速： • 具备较低背景，确保敏感度； • 吖啶酯容易标记，稳定也保存： • 瞬间发光，持续时间短，对仪器性能要求较高；
28
问题三:
电化学发光免疫分析
发光剂
三联吡啶钌作为发光剂
化学发光与荧光免疫技术及仪器与分析
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
18
3．过碘酸盐氧化法
直接偶联
标记物可用发光剂或催化剂，适用于芳香伯胺或脂肪 伯胺发光剂，标记方法稳定标记物不易脱落，但此法不 适用于无糖基的蛋白质和含有糖基但氧化后会影响免疫 学活性的蛋白质。
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
19
4．戊二醛法
间接偶联
氨基 芳香伯胺基
2．眯唑类化合物 较常用的是2，4，6-三苯基咪唑，即洛粉碱 (lophine)。
3．吖啶酯类 典型代表是N，N-二甲基二吖啶硝酸酯，即光泽精 (1ucigenin)。
4．苯酚类化合物 其中主要有邻苯三酚，即焦性没食子酸。 5．芳香草酸酯类 主要有双-(2，4，6，-三氯苯基)-草酸酯(TCPO)和 双-(2，4-二硝基苯基)-草酸酯(DNPO)。 6．(金刚烷)-1，2-二氧乙烷及其衍生物
熟悉电化学发光免疫分析的基本原理和标记物， 时间分辨荧光免疫分析法的基本原理及其标记物和螯 合物。
了解荧光偏振免疫分析法的基本原理和技术特点， 化学发光免疫分析的临床应用
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
3
第一节 化学发光免疫分析技术
基本原理 反应的底物 标记方法 反应类型 相关仪器
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
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化学发光和荧光免疫技术及仪器和分析
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三、标记方法
按照标记物的应用:
化学标记 生物标记
化学标记: 用于化学发光(酶)免疫测定
➢直接用发光物质(如鲁米诺、吖啶酯类等)标记抗体或抗原
➢以催化剂(如HRP、GOD等)和／或协同因子(如ATP、 NAD等)标记抗体或抗原
反应速度
异烟肼常见含量测定方法综述
异烟肼常见含量测定方法综述崔超;陈平;赵新静【摘要】异烟肼对结核杆菌有高度选择性，有较强的抑制和杀灭作用，因其具有疗效高、毒性小、口服方便、价格低廉等优点，是目前临床治疗结核病的首选药物。
药物中异烟肼的含量测定方法很多，进行系统的报道尚未见到。
在此，笔者将国内常见的方法作一综述。
%Isoniazid is highly selective and have strong inhibitory and killing effect for the tuberculosis.Because of its high efficacy , low toxicity,convenient and inexpensive, it is the first choice for the clinical treatment of tuberculosis.There are many ways for the determination of isoniazid,but we can not find the review for it.This article provides an review of the common technologies in our country.【期刊名称】《北方药学》【年(卷),期】2014(000)001【总页数】3页(P3-4,5)【关键词】异烟肼;含量测定;综述【作者】崔超;陈平;赵新静【作者单位】山东省济宁市药品检验所济宁 272000;天津大学药物科学与技术学院济宁 272000;山东省济宁市药品检验所济宁 272000【正文语种】中文【中图分类】R927.2结核病又称为痨病和“白色瘟疫”，是一种古老的传染病。
在历史上，结核病曾在全世界广泛流行，成为危害人类的主要杀手，夺去了数亿人的生命。
1882年科霍发现了结核病的病原菌为结核杆菌，但由于没有有效的治疗药物，结核病仍然在全球广泛流行。
新型含β-二酮取代基的恶二唑衍生物的合成与电化学性质
蒸 去溶剂 ， 却 ， 滤得 淡 黄 色 固体 ， 甲 醇 重 结 晶得 ４乙 酰 基 苯 甲酰 肼 （ 合 物 １ １５ ， 率 为 冷 抽 用 一 化 Ｉ） ．１ｇ 产
８ ８％ 。ｍｐ １ ４． ７１～１ ４ ℃ ， Ｈ ７ ‘ ＮＭＲ
究报道 采用 有机 高碘化 合 物氧化 醛 Ⅳ 酰 基 腙 合 成 此类 化 合 物 。本 文 通 过 二 酰肼 脱 水 反 应合 成 了含 一 嘿二唑 基 团的 一 二酮化 合 物 ， 并对 其进 行 了紫外 一 见 光谱 及 电化 学 性 质 的研 究 ， 可 同时 估测 了 其最 高 占
有 分子 轨道 （ Ｏ Ｈ ＭＯ） 最低 空分 子轨道 （ Ｕ 和 Ｌ ＭＯ） 的能量 大小 ． 这对 于优 化选 择 合成 材 料 ， 提高 和 完善 器 件 的性 能 以及 设计 多层 结构 的 电致发 光器件 等 具有重 要意 义 ＿ 。 ６ Ｊ
１ 实 验 部 分
１ １ 仪器 和试 剂 ．
Ｂｕｅ ｅｔ２ ｒｋｒ ｃ ｒ２型红 外光谱 仪 （ 国 Ｂｕ ｅ 仪器 公 司） Ｂ ｅ Ｐ ４ ０ Ｈｚ Ｖ ０ 德 ｒｋｒ ；ｍｋｒ Ｘ－０ Ｍ 型超 导核磁 共振 仪 （ Ｄ 德
国 Ｂｕ ｅ 仪器公 司 ） Ｘ ５显 微熔点 测 定仪 （ ｒｋｒ ；Ｔ 北京 科 仪 电光仪 器 厂 ） Ｕ ｉ Ｔ Ｕ 一 １２ Ｐ ； ｎｃ Ｍ Ｖ ２ ０ Ｃ型紫 外 可 见分 ｏ 光光度 计 （ 上海 Ｕ ｉ ｎｃ ｏ仪器 公 司 ） Ｃ Ｉ ５ Ａ 型 电化 学工 作 站 （ 国 Ｃ ｎｔ ｍｅｔ 公 司 ） 工 作 电极 为 ； Ｈ ０ ６ 美 Ｈ Ｉｓ ｕ ｎｓ ｒ ； 玻 碳 电极 （ Ｃ） 参 比电极为饱 和 甘汞 电极 （ Ｃ ， Ｇ ， Ｓ Ｅ） 辅助 电极 为 Ｐ 丝 电极 。 ｔ 高氯酸 四丁基铵 （ Ｂ Ｐ 参 照 文献 ［ ］ ＴＡ） ７ 方法 合成 ； 实验 所用 其他试 剂 均为 分析纯 。
酶促化学发光免疫检测技术总结
酶促化学发光免疫检测技术总结本人在酶促化学发光免疫检测领域工作已经有4个年头了，期间不仅学习并从事了酶促化学发光免疫诊断试剂的开发，同时很幸运地受聘于天众达公司，学习了化学发光免疫检测仪器的开发、生产全过程。
这意味着本人经过了多年的努力，对酶促化学发光免疫检测技术有了较高层次的了解和掌握。
虽然酶促化学发光免疫检测技术应用于临床检验约有10年的历史，但是遗憾的是，目前国内缺乏专门针对这一技术领域的学术专著。
大多数用户对酶促化学发光免疫检测技术的原理、特点、影响因素等缺乏全面系统的了解。
再加上某些不负责任的厂家的不专业的技术支持，造成了许多模糊和错误的认识，导致了酶促化学发光免疫检测技术在国内临床的实际应用情况非常糟糕。
使得酶促化学发光免疫检测技术的优越性无法在临床检验中得到充分发挥。
经过多年的实践，本人深深体会到，只有真正做好技术支持工作，一个新检测技术才能普及推广，才能完全发挥其优越性，造福国民。
因此，就有了下面本人多年来的总结试剂篇酶促化学发光免疫检测技术属于体外免疫分析检测技术范畴常用体外免疫分析技术有:免疫比浊分析放射免疫分析酶联免疫分析化学发光免疫分析时间分辨荧光免疫分析金标免疫分析化学发光免疫分析检测技术包括:直接化学发光免疫分析检测技术酶促化学发光免疫分析检测技术电化学发光免疫分析检测技术化学发光(chemiluminescence)是指某些化学反应中发出可见光的现象。
通常是氧化反应产生电子能级处于激发态的物质，后者通过跃迁释放能量产生光子，从而导致的发光现象，其特点为消耗发光剂，同时量子效率相对较底，通常，可以用于分析化学的化学发光系统的量子产率值在0.01~0.20之间。
一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下三个条件:第一，反应中可提供足够的激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而不能发光;第二，有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并生成激发态;第三，激发态分子具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。
分析化学-分子发光分析法
3. 流式细胞术（FCM） 对悬液中的单细胞或其他生物粒子,通过检测
标记的荧光信号，实现高速、逐一的细胞定量 分析和分选的技术。
§4 化学发光分析法
Chemiluminescence Analysis
基本原理 化学发光反应类型 化学发光测量仪器 化学发光分析法的应用
一、基本原理
化学发光是由于化学反应而导致的光发射。 发生于生命体系的化学发光称为生物发光。 生物发光均有酶（荧光素酶）参加。
最大化学发光强度与发光物质浓度成正 比： Icl max = Kc
化学发光的积分值与发光物质浓度成正 比： Icl = Kc
二、化学发光反应的类型
直接化学发光
A 十 B C＊ ， C＊ C 十 hν
间接（敏化）化学发光 A 十 B C＊ + D ， C＊+ F C 十 F＊
F＊ F 十 hν
三、New technique of fluorescence analysis
1. 激光荧光分析 F 与 I0 成正比，激光的强度大，可提高
荧光法的灵敏度。
2.时间分辨荧光分析
由于不同分子的荧光寿命不同，在激发 和检测之间延缓一段时间，使不同荧光寿命 的物质达到分别检测的目的。
时间分辨荧光免疫法 将稀土元素的螯合物标记抗体，与体液中 的抗原结合。当加入一种增效剂时，稀土 元素被释放出来，形成新的螯合物，能产生 长寿命的 荧光（10 ~1000 μs)。待样品中 蛋白质等物质所发荧光完全衰减后进行测定， 可有效消除背景干扰。 已用于测定甲胎蛋白、促性腺绒毛激素、 皮质醇等体内微量物质的测定。
2.化学发光免疫分析仪
化学发光免疫分析是将化学发光分析和 免疫分析相结合而建立的一种超微量分析 技术。兼具发光分析的高灵敏性和抗原抗 体反应的高特异性的特点。
鲁米诺化学发光体系在药物分析中的应用
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在线电生试剂$鲁米诺 %& 体系 在鲁米诺化学发光反应体系中，常用的氧化
剂如过氧化氢、 溴、 次氯酸盐、 %#+以及酸性高锰酸 钾等均不稳定， 使其应用受到一定限制。章竹君等 利用恒电流电解 产 生 试 剂 （ 如 ?4% + 、 与 B>/ " 0 等 ） 流动注射化学发光分析方法结合，提出电生不稳 试剂化学发光分析法，很好地解决了化学发光反 应中某些试剂不稳定的问题。他们利用在线电生 多 ?4% ++;<2=>34 化 学 发 光 体 系 测 定 了 酚 磺 乙 胺 、 巴胺、 肾上腺素、 喘息定 / 异丙基肾上腺素 0 、 儿茶酚 + 胺等。基于异烟肼增强电生 ?4% +;<2=>34 化学发 光， ;+ 多 巴 胺 和 抗 肿 瘤 药 盐 酸 阿 糖 胞 苷 8#9 抑 制 对这几种药物进行 ;<2=>34+ 电 生 ?4% + 化 学 发 光 ， 了测定， 检 出 限 分 别 为 & C *$ +- @ A 24 / 异 烟 肼 0、 ,’$ C *$+*$ @ A 24/;+ 多巴胺 0 和 , C *$+- @ A 24/ 盐酸阿 糖胞苷0 。 郑行望等利用潘生丁抑制在线电 生 次 ?4% ++ 建立了心绞痛药潘生 ;<2=>34 化学发光这一性质， 同时， 还基于异烟肼增强在线电 丁的 ?4 测定方法。 + 生 DE% +;<2=>34 化学发光， 测定了异烟肼的含量， +检出限达 "’$ C *$ @ A 24 。 偶合反应 !"’ 所谓偶合反应就是将பைடு நூலகம்产生或消耗化学发光 反应物的一个 / 或一系列 0 反应与一个化学发光反 应结合起来， 实现某些物质的间接化学发光测定。