大鼠血管平滑肌细胞的讲义培养-课件(PPT·精·选)
血管平滑肌亚群与动脉粥样硬化ppt课件
血管壁中VSMC亚群的分类(一)
种 属 大鼠 来 源 大动脉
在血管中的位臵 新生内膜
新生内膜的内腔 新生内膜的外腔
生物学形态
上皮形或纺锤形 偶有鹅卵石状
上皮形 纺锤形 上皮形 上皮形或纺锤 形 纺锤形 纺锤形
大动脉
大动脉 大动脉 大动脉 冠状动脉 冠状动脉
损伤15天后的内膜
损伤60天后的内膜 新生内膜 损伤15天后
型有以下特征：
(1)对细胞因子或者炎症因子的反应性不同; (2)蛋白水解活性提高; (3)由收缩蛋白和细胞骨架蛋白的表达所定义的分化程度 较低;
(4) 对凋亡刺激更敏感;
(5) 脂质代谢和基因表达产物不同； （6）增殖能力和迁移能力更强； （7）能在无血清环境中生长； （8）对胰岛素样因子、碱性成纤维细胞因子、PDGF-BB 更高的增殖反应性 。
在体内,CRBP-1在老年和成年大鼠动脉中膜VSMC中表达量非
常少,而在新生大鼠的动脉中则不表达。当内皮细胞损伤后 ,CRBP-1在动脉中膜靠近血管腔面处的VSMC中快速活化,在动脉 增生的内膜中高表达，然而在再内皮化后它却消失。增生动脉 内膜的重构与VSMC的凋亡有关，CRBP-1在增生动脉内膜最初阶
和的 细形 胞成 的过 共程 同中 作相 用关 因 子
上皮形和纺锤形VSMC表型的标志物
采用二维聚丙烯凝胶电泳技术,已经发现了几
个能够区分上皮形VSMC和纺锤形VSMC的蛋白标志 物。其中三种蛋白质已被测序而作为体外上皮形 VSMC的表型标志物:CRBP-1(细胞维甲酸结合蛋白 ，一种与维甲酸代谢有关的蛋白质)、 cytokeratins 8 及cytokeratins 18(后两者均为 中间丝蛋白)。
血管平滑肌细胞亚群 与动脉粥样硬化
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定
大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养与鉴定徐索文肖平喜陈健文乐康沈晓燕黄河清刘培庆【摘要】目的建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型，为体外研究动脉粥样硬化的发病机制提供重要的实验手段。
方法采用改良的植块贴壁法，成功建立大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞的培养模型;分别用倒置显微镜和SABC试剂盒对培养细胞进行形态学观察、免疫组织化学和免疫荧光鉴定(平滑肌细胞特异性的α- SM - actin)。
结果原代培养的血管平滑肌细胞在接种后3天开始从组织块周围游出，光镜下培养细胞呈梭形，放射状生长和典型的“峰谷”状生长;免疫组化和荧光染色显示胞浆内α平滑肌肌动蛋白阳性表达，证实培养的细胞为血管平滑肌细胞。
结论本法简便、可靠、经济、短期内可获大量高纯度、功能良好的血管平滑肌细胞，可作为研究动脉粥样硬化和移植血管再狭窄机制的有效模型。
【关键词】大鼠;胸主动脉;植块法;血管平滑肌细胞[Abstract]ObjectiveTo establish the culture model of rat aorta vascular smooth muscle cells (VSMCs) to provide important experimental method for the pathogenesis research of atherosclerosis in vitro. MethodsEmploying the explants technique, the primary and sub-culture were completed bymodified tissue-piece inoculation and trypsin digestion respectively. The cultured cells were identified by phase contrast microscopy and immunohistochemical and immunofluorescent staining.ResultsAfter 3 days of inoculation of tissue-pieces, VSMCs migrated from the vessel pieces. The cultured cells showed the typical “hills and valleys”morphological features under the microscope. Immunohistochemical and immunofluorescent staining with monoclonal antibody against mouse α-SM- actin demonstrated these cells were positive. ConculsionIt is a simple and reliable method for obtaining highly purified and satisfactory VSMCs in short term, providing a favorable experimental platform for research into the mechanism of vascular proliferous diseases such as atherosclerosis and restenosis.[Key words]rat;thoracic aorta;explants method;vascular smooth muscle cells血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells, VSMCs)的异常增殖、迁移、泡沫化及凋亡与冠状动脉旁路移植术(CABG)和经皮冠脉腔内血管成形术(PTCA)术后血管再狭窄、颈动脉球囊损伤术致新生内膜形成(neointima formation)及动脉粥样硬化(atherosclerosis)密切相关[1~4]。
组胚平滑肌PPT课件
目录
• 平滑肌的概述 • 平滑肌的发育和生长 • 平滑肌的生理功能 • 平滑肌的病理学 • 平滑肌与临床医学
01
平滑肌的概述
Chapter
平滑肌的定义
总结词
平滑肌是一种非横纹肌，主要分布在人体内脏器官，如消化道、呼吸道、生殖 道等。
详细描述
平滑肌是一种特殊的肌肉类型，与骨骼肌和心肌不同，它没有横纹，因此被称 为非横纹肌。平滑肌主要分布在人体内脏器官中，如消化道、呼吸道、生殖道 等，负责维持这些器官的正常生理功能。
良性肿瘤，由平滑肌和脂肪组织 混合构成，多见于腹腔和盆腔等 部位。
平滑肌瘤 平滑肌肉瘤 平滑肌母细胞瘤 平滑肌脂肪瘤
良性肿瘤，多见于子宫、消化道 等部位，生长缓慢，但有可能恶 变。
罕见肿瘤，多见于儿童，具有低 度恶性潜能。
05
平滑肌与临床医学
Chapter
平滑肌在常见疾病中的作用
消化系统疾病
平滑肌广泛分布于消化道，如胃 、肠等器官。在消化性溃疡、炎 症性肠病等消化系统疾病中，平 滑肌的异常收缩或松弛可影响消
平滑肌的分布和功能
总结词
平滑肌广泛分布于人体内脏器官，主要功能是维持 器官的正常生理功能，如调节消化道运动、控制呼 吸道口径等。
详细描述
平滑肌在人体内脏器官中发挥着重要的作用，如调 节消化道运动、控制呼吸道口径、维持生殖道正常 功能等。平滑肌的收缩和舒张可以调节器官的运动 和功能，保持人体正常的生理状态。
化功能。
心血管疾病
心肌和平滑肌在结构和功能上有 相似之处。心肌病、冠心病等心 血管疾病中，平滑肌的病变也可
能参与其中，影响血液循环。
泌尿系统疾病
膀胱、尿道等泌尿系统器官中的 平滑肌对于排尿功能至关重要。 在膀胱炎、尿道狭窄等疾病中， 平滑肌的功能障碍可能导致排尿
骨骼肌心肌和平滑肌细胞生理 ppt课件
两相反的力
肌肉收缩表现为长度的缩短和张力的增加。
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（一） 骨骼肌的收缩形式与特点
1、等长收缩：肌肉收缩时,只有张力增加而长度不变 的收缩,称为等长收缩。特点是：参与收缩的肌纤维 长度发生改变、数量不变最终使张力改变。
2、等张收缩：肌肉收缩时,只有长度缩短而张力不变 的收缩,称为等张收缩。特点是：参与收缩的肌纤维 数量发生改变、长度不变最终使张力改变。
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2）横桥的循环摆动，细肌丝向肌节中央(粗肌丝内) 滑行，滑行中由于肌肉的负荷而受阻，便产生张力。
3）横桥的循环摆动在肌肉中是非同步的，从而肌 肉产生恒定的张力和连续的缩短。
4）横桥循环摆动的参入数目及摆动速率，是决定 肌肉缩短程度、速度和肌张力的关键因素。
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光学显微镜下观察 1）明带（I带）和暗带（A带） 2）H带，M线，Z线 3）肌节
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电子显微镜下观察 ➢ 粗肌丝
肌凝蛋白(肌球蛋白) 组成，呈端部膨大(横 桥)的长杆状。 ➢ 细肌丝
肌动蛋白 原肌球蛋白
亚单位C 肌钙蛋白 亚单位I
肌钙蛋白的构型 原肌球蛋白位移，暴露
细肌丝上的结合位点 横桥与结合位点结合，
分解ATP释放能量 横桥摆动
20肌20/1节1/13缩短=肌细胞收缩
按任意键 飞入横桥摆动动画
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横桥周期：
解 离
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结 合
摆 动
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肌丝滑行几点说明: 1）肌细胞收缩时肌原纤维的缩短,并不是肌丝本身 缩短,而是细肌丝向肌节中央(粗肌丝内)滑行。因①相 邻Z线靠近,即肌节缩短；②暗带长度不变,即粗肌丝 长度不变；③从Z线到H带边缘的距离不变,即细肌丝 长度不变; ④明带和H带变窄。
大鼠血管壁中膜平滑肌细胞的原代培养及鉴定
大鼠血管壁中膜平滑肌细胞的原代培养及鉴定敖锋;张自力;宋健【摘要】Objective To investigate the primary culture and identification of the smooth muscle cel s (SMC)from the medial of vascu-lar wal inrats.Methods SMC from the medial of vascular wal were cultured by modified tissue culture.The cel ular morphology was observed under inverted phase contrast microscope.SMC were isolated and identified with immunofluorescence.Results SMC were isolated successful y and cultured.The cel s had a typical peak val ey like growth,and showed fusiform.The positive rate of cel s i-dentified with immunofluorescence were more than 95%.Conclusion The modified tissue culture can isolateand cultivate SMC with high purity and good activity under in vitro conditions with simple,reliable method.%目的：探讨一种方便、快捷、大量原代培养大鼠血管壁中膜平滑肌细胞的方法,为心血管疾病的体外研究提供可靠的实验材料。
方法利用改良的组织贴块法进行血管壁中膜平滑肌细胞原代培养,使用倒置相差显微镜观察细胞形态,并用免疫荧光染色鉴定分离培养的细胞。
guan动物细胞培养PPT课件
2 发展历史
• 动物细胞（组织）培养技术起源于19世纪所应用的某些 胚胎学技术。
• 动物细胞（组织）培养的奠基人是美国生物学家 Harrison。在1907年采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬滴培 养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，保持存活了几 周时间，并观察到细胞突起的生长过程。
• Harrison - - isolated pieces of frog embryonic tissue known to give rise to nerve fibres - grew them in frog lymph - observed outgrowth of axons over period of weeks in 1907.
• explant - an excised fragment of an organ which usually retains some degree of tissue architecture
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• 原代培养 （primary culture）：即细胞或组织离开机体后的首次培养。
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培养条件
Temperature
pH
Dissolved gas
Nutrients
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•
20世纪40年代以后，从事动物组织培养的各国科学家把研究的重点集中在培养基的改造上。
培养基
• 1951年， Earle等人开发了供动物细胞体外培养的培养基。
• 皮肤的表皮细胞、消化
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（三）游走型细胞 wandering
分散生长，一般不连接成片形成群 落；细胞胞质常伸出伪足和突起； 在培养器皿壁上生长位置不固定， 呈活跃的游走和变形运动，速度快 且方向不规则。
大鼠血管平滑肌培养
SD大鼠平滑肌的分离
1、300g左右大鼠戊巴比妥钠1ml注射麻醉（用20 mg/L的戊巴比妥钠按照50 mg/kg腹腔注射麻醉）。
10分钟后固定于解剖板上，酒精消毒，剪开腹部，挑开内脏，寻找腹主动脉，用静脉留置针尽量抽血。
2、抽干血液，剪开胸腔，翻开肺脏，寻找与心腔相连的胸主动脉（连接处有3个开口），沿着脊柱一直向下延伸（注意与食道区别，食道与胃连接），钝性分离周围脂肪组织，剪断后放入生理盐水中，冲洗干净血液，用镊子夹住一段，另一镊子从上至下用力刮脱，分离掉血管周围的脂肪组织。
3、转入超净台中，用PBS（或生理盐水）清洗，滴入少许胎牛血清至血管，在血清中剪碎血管组织，置入培养箱中2h。
4、随后加入20%胎牛血清低糖DMEM培液（最好加抗生素），继续培养。
组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定
结论 组织块贴壁法培养 大鼠平滑肌细胞操作 简单、 结果稳定、 纯度较 高、 存活率高。
关键词 ： 平滑肌 细பைடு நூலகம் ； 织块贴壁法； 组 原代 培养 中图分类号 ： ４ １ Ｃ ． ＿ ３ ￣２ 文献标识码 ： Ｂ 文章编号 ：６ ｌ １４ （ ００）３－ ９ — ２ １ ７一 ２６ ２ １ ０ － ０ ７ ０ ０
清均购 自 Ｈ Ｃｏｅ 司。小 鼠抗大 鼠 Ｓ ａｔ 单克隆抗体 、 ｙ ｌｎ 公 Ｍ— ｃ ｎ ｉ 即
滑肌细胞生长、 增殖有关 的疾病发病机理及药物作用机制 的研
究 ， 动脉 粥样硬化 、 如 经皮 腔 内血 管成 形术 （ Ｔ Ａ） Ｐ Ｃ 术后 再狭 窄、 药物的钙通道开放（ 拮抗 ） 作用 、 血管损伤 引起 钙稳态失衡
在病原生物学实验中接触到的大多是致病菌或条件5开展与生活和人体健康相关的实验致病菌有感染人体的危险故要求学生在实验过程中除按规在课外时间引导学生做一些病原生物学与生活和人体健范严格操作外还要在实验前后用消毒液洗手实验室内不乱康相关的实验增强学生对实验的兴趣
组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定
用型 Ｓ Ｂ Ａ Ｃ免疫组化染色试剂盒 、 Ａ Ｄ Ｂ显色试剂盒均购 自武汉
博士德生物工程有限公 司（ 中国） 。青霉素钠 、 硫酸链霉素（ 华北
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等。本研究在参照国内外经验ＩＩ １的基础上 ， 建立了一种简便、 易
我校注重学生技 能的培养 ， 在病原生物学考核 中 ， 大了 加