红细胞悬液的配制
实验一红细胞计数
实验一红细胞计数一、实验目的：掌握红细胞计数原理及技术。
二、实验原理：用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数，经过换算示得每升血液内的红细胞数。
三、实验器材及试剂：显微镜、血红蛋白吸管、计数板、盖玻片、生理盐水。
四、实验操作：1、取试管1支，加稀释液3.98ml或1.99ml。
2、用清洁干燥的微量吸管准确吸取末梢血10微升。
3、擦去管尖外部余血、轻轻注入红细胞稀释液底部，再吸取上层稀释液清洗吸管2-3次，立即摇匀。
4、将计数池与盖玻片用软布料擦净，将盖玻片覆盖于计数池上。
5、用吸管吸取混匀的红细胞悬液，充入计数池中。
6、静止2-3分钟，待经红细胞下沉后，用高倍镜或低倍镜计数中央大方格内四角和正中五个中方格内的红细胞数。
五、计算N(五个中方格内RBC数)×5×10×106×200=N×1012个/升×5：表示5个中方格内RBC数换算为1个大方格内RBC数× 10：1个大方格容积、0.1ul、换算为1ul内RBC数× 106：1ul换算为1升内红细胞数× 200：稀释倍数六、正常参考值正常参考值：成年男性：4.00-5.50×1012/升成年女性：3.50-5.00×1012/升新生儿： 6.00-7.00×1012/升实验二血红蛋白测定一、实验目的：掌握氰化高铁血红蛋白比色法原理及技术。
二、实验原理：血液在血红蛋白转化液中溶血后，除SHb外各种血红蛋白可被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，再与CNˉ结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋（HicN）。
HicN最大吸收峰540nm，最小吸收波谷504nm，在特定的条件下，毫摩尔消光系数为44L.mmol-1 .cm-1 ，因此根据标本的吸光度，即求得血红蛋白浓度。
三、实验操作：1、取指血20ul，加到5ml血红蛋白转化液中，混匀，静止5分钟。
红细胞凝集抑制试验影响因素的分析
鸡红细胞凝集抑制试验影响因素的分析红细胞凝集试验和红细胞凝集抑制试验是兽医界相关实验室最为常用的实验之一。
由于其具有便于操作、快捷、成本较低的特点，是畜禽疫病诊断及免疫状态监测特别是禽流感、新城疫等重大动物疫病免疫监测最为重要的方法之一。
影响血凝抑制试验的因素：1、对于试验器材及试验环境的要求实验时应选用数字式单道和多道移液器，平时要做到移液器的效验及保养工作，这对保证移液器的准确性非常重要。
每次使用完毕，要将移液器量程调至最大刻度，以保证移液器内弹簧的最好灵敏性。
实验时所用的抗原应选用国家指定单位生产的标准抗原，这对于保证实验结果的准确性和各单位所做的实验结果的可对照性非常重要。
实验时的室内温度不宜过高或过低，应配备有温度控制设备或恒温箱。
96孔v型微量血凝板如不具备较好的洗涤设施时，建议使用一次性96孔v型微量血凝板。
2、1%红细胞悬液的配置配置血凝抑制试验用的红细胞最好选用成年SPF公鸡，抗凝剂不要保存时间时间过长。
红细胞的浓度要尽量准确，一免不同实验室读出结果有较大差距。
如果红细胞配置浓度偏低，血凝价可能偏高，血凝抑制价可能偏低。
如果红细胞配置浓度偏高，血凝价可能偏低，血凝抑制价可能偏高。
红细胞离心洗涤结束后，要将洗头放入离心管的最底部来吸取红细胞进行稀释配制，如随意从红细胞液体上层吸取血细胞进行稀释配制，将会造成配置的血细胞浓度偏低，因洗涤红细胞后弃去的PBS液或生理盐水会有一些残留在红细胞上层。
3、标准抗原对试验结果的影响四单位标准抗原配置的准确与否是血凝抑制试验中非常重要的一环。
标准抗原血凝单位的高低对实验结果有很大影响，如果标准抗原血凝价偏高，测定的血清抗体效价将偏低，反之则待测定的血清的抗体效价偏高。
所以标准抗原配置及检测的准确性对实验结果将产生较大的影响。
使用过的标准抗原再次使用时，应重新进行检测。
未检测抗原血凝效价，即按前一次检测抗原的血凝单位进行配制标准抗原，这样的血凝抑制试验结果是不准确的。
吸收试验标准操作规程(sop)
吸收试验标准操作规程一、目的为规范红细胞吸收试验的技术操作，保证结果的准确性，从而辅助血型的鉴定以及保证交叉配血的正确进行。
二、适用范围输血科负责进行红细胞吸收试验来检测血型弱表达抗原等试验的技术人员。
三、原理红细胞血型抗原（包括亚型等弱表达抗原）与相应抗体在一定条件下反应，抗体可逆性结合在红细胞血型抗原上，相应抗体效价下降或者检不出，进一步对吸收后红细胞做放散试验，可以从放散液中检出相应的抗体。
四、步骤和方法（1）检测红细胞弱抗原1、将受检红细胞用生理盐水充分洗涤3次，末次将盐水倒尽，制备成洗涤压积红细胞。
2、在压积红细胞中加入2倍容量含于检测目标抗原相对应的人源抗体血清，密封混匀。
3、根据目标抗原—抗体反应的特性分别放在不同条件下吸收：ABO血型系统弱抗原4℃至少1h，Rh血型系统弱抗原应放在37℃吸收30—60min，每10min混匀1次。
4、吸收后以1300g离心3min，取上层血清即为吸收液。
测定人源抗体血清吸收前、后抗体效价。
5、结果判读：<1>如吸收后血清抗体效价比吸收前降低2个稀释倍数以上或者检不出抗体，则表明红细胞表达目标抗原。
<2>若效价无下降则表明红细胞不表达目标抗原。
<3>若效价下降未达到2个稀释倍数则不能确定红细胞是否表达目标抗原，需要对吸收后红细胞进行放散试验来决定受检红细胞是否表达目标抗原。
（2）冷自身抗体吸收1、采集受检者2份标本：一份抗凝血约10ml，尽快置入37℃浴箱孵育30—60min，离心分离血浆和红细胞；另一份不抗凝血至少3ml，放置4℃自然凝固，使红细胞充分吸收冷抗体后，离心分离血清和红细胞。
2、用预温的37℃生理盐水充分洗涤从抗凝血标本中分离出的压积红细胞3—4次，取50微升加生理盐水1ml配成5%红细胞悬液，取1滴该悬液与2滴红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应，120g离心１min后观察结果。
根据是否凝集来确定冷抗体是否已洗涤干净。
简述交叉配血试验的方法和判断原则
简述交叉配血试验的方法和判断原则交叉配血试验是一种用于判断血型的方法，通过将被测血液与已知血型的血液混合，观察凝集反应来确定被测血液的血型。
本文将详细介绍交叉配血试验的步骤和判断原则。
一、交叉配血试验的步骤1. 准备工作在进行交叉配血试验前，需要准备好以下物品：- 被测者和供者的全血样本- 已知ABO和RhD类型的标准红细胞悬液- 0.9%生理盐水或其他适当稀释液- 洁净无菌玻璃器皿、移液管、离心管等实验室器材2. 样本处理取被测者和供者的全血样本，分别离心使其分离成红细胞和血清。
收集红细胞，加入适量生理盐水或其他适当稀释液制成10%红细胞悬液。
将制备好的悬液进行标记并编号。
3. 试剂加入将已知ABO和RhD类型的标准红细胞悬液加入到各个标记好的被测血样中。
每种标记的被测血样中加入不同的标准红细胞悬液，使其与被测血样混合。
4. 凝集反应观察将混合好的血液在室温下静置10-15分钟，观察是否出现凝集反应。
如果出现凝集反应，则说明被测血液与加入的标准红细胞悬液不相容，即被测血液与加入的标准红细胞悬液存在抗原抗体反应，从而判断被测者的血型。
二、交叉配血试验的判断原则1. ABO系统在ABO系统中，A型和B型红细胞表面分别有A抗原和B抗原，O型红细胞没有A或B抗原。
同时，在人体内产生了相应的抗体：A型人体内产生B抗体，B型人体内产生A抗体，O型人体内产生AB两种抗体。
因此，在交叉配血试验中，如果被测者为A型，则其血清中会含有B抗体；如果为B型，则其血清中会含有A抗体；如果为AB型，则其血清中不含有A或B抗体；如果为O型，则其血清中同时含有A和B 两种抗体。
2. RhD系统RhD系统是另一种重要的血型系统，正常人群中约有85%为Rh阳性，15%为Rh阴性。
在交叉配血试验中，如果被测者为Rh阳性，则其血清中不含有抗RhD抗体；如果为Rh阴性，则其血清中会含有抗RhD 抗体。
3. 判断结果根据交叉配血试验的结果，可以判断被测者的ABO和RhD类型。
输血科ABO型试剂红细胞制备标准操作规程
输血科ABO型试剂红细胞制备标准操作规程1 .目的为规范A、B、0型试剂红细胞制备的技术操作，保证血型血清学实验的准确性，依据《输血实验室管理程序》4.1,9(6)条款的要求制定本规程。
2 .适用范围适用于医疗机构输血科制备A、B、0型试剂红细胞。
3 .职责医疗机构输血科技术人员负责A、B、0型试剂红细胞的制备。
4 .原理将已知A、B、0型的红细胞洗涤并配成试验所需浓度，用单克隆抗-A、抗-B试剂验证红细胞血型抗原特异性、直接抗球蛋白实验(DAT)证实没有被抗体致敏后用于血型血清学试验。
5 .所需设备和材料5.1设备普通离心机，血型血清学专用离心机，微量移液器，普通显微镜。
5.2材料已知A、B、0型健康献血者抗凝血，红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清，单克隆抗-A、抗-B试剂，抗球蛋白试剂。
6 .环境条件室温应保持在18~27C,湿度应保持30%~70‰7 .步骤与方法7. 1取3支试管，分别标记为Ac、Be、Oco7.2选取已知ABo血型的A、B、。
型健康献血者抗凝血各3份,每份ImL7.3将A、B、0型献血者各3份抗凝血分别加入对应标记的Ac、Be、Oc试管中。
7.4将3支试管离心去血浆，将压积红细胞用生理盐水洗涤3次，去除最后一次洗液后分别用生理盐水配成10%的红细胞悬液，4C保存，7天内使用，使用时根据试验要求再用生理盐水配成需要的浓度。
8.质量控制8.1质量控制操作步骤8.1.1观察配制的A、B、。
型试剂红细胞悬液有无凝块，离心观察悬浮红细胞上层生理盐水颜色，判断有无溶血。
8. 1.2取试管9支，使配制的A、B、O型试剂红细胞（浓度3%,每管50UI）分别与单克隆抗-A、抗-B及红细胞不规则抗体筛选阴性的AB型血清反应（每管加相应试剂或血清100 Ul）,鉴定红细胞的抗原特异性。
8. 1.3取试管3支，分别加配制的A、B、O型试剂红细胞（浓度3%,每管50u1）,生理盐水洗涤3次后做DATo8.2A、B、。
去白细胞悬浮红细胞和全血的区别
去白细胞悬浮红细胞和全血的区别在医学领域，常常需要对血液样本进行处理和分离，以研究、诊断或治疗目的。
其中，去白细胞悬浮红细胞和全血是两种常见的处理方式。
本文将重点介绍这两种处理方式的区别。
去白细胞悬浮红细胞去白细胞悬浮红细胞（Leukoreduced Red Blood Cells，简称L-RBCs）是指通过去除血液中的白细胞，得到的红细胞悬液。
其主要目的是减少输血时潜在的不良反应。
处理方法通常，去白细胞悬浮红细胞的制备方法主要包括以下几个步骤：1.采集血液样本：从供血者采集的全血中获取。
2.红细胞分离：通过离心等方法将红细胞与其他血液组分分离。
3.去除白细胞：利用滤器或离心等技术去除血液中的白细胞。
4.悬浮红细胞复滤：再次将悬浮红细胞进行滤过，以确保去除残留的白细胞。
优点与应用去白细胞悬浮红细胞相比于全血，具有以下优点：1.减少过敏反应：白细胞是引发输血不良反应的主要原因之一。
通过去除白细胞，可以大大降低输血过程中患者的过敏反应风险。
2.减少感染风险：白细胞是血液中的免疫细胞，在输血过程中可能引发感染。
去除白细胞可以减少感染风险。
3.提高质量：去白细胞悬浮红细胞相比于全血，红细胞浓度更高，红细胞活性更好。
去白细胞悬浮红细胞主要应用于以下方面：•输血：去白细胞悬浮红细胞可以减少输血反应的风险，提高输血效果。
•科研：去白细胞悬浮红细胞在实验室研究中被广泛应用，例如细胞培养、体外实验等。
全血全血是指从供血者采集到的未经处理的血液样本。
全血包含了血浆、红细胞、白细胞和血小板等各种成分。
应用全血在临床诊断和输血中有广泛的应用。
全血可用于以下方面：•血常规检测：全血可用于进行血细胞计数、血红蛋白测定等基本的血液检查。
•输血：全血可直接用于输血给患者，包含了各种血细胞和血浆组分，适用于各种血液疾病患者。
优点与注意事项全血相比于去白细胞悬浮红细胞，存在以下特点和注意事项：1.保存时间有限：全血的保存时间相对较短，通常在采集后的几个小时内进行处理或使用。
机能实验学 7溶血实验(罗肖)
实验目的
熟悉ABO血型鉴定的方法，充分认识输血 时血型不合所造成的严重后果。
材料
对象 人。 试剂和药品 抗A抗体，抗B抗体，生理盐水 装置和器材 采血针，玻片，牙签，75％酒
精棉球，干棉球，碘酒棉球。
准确无误。
试管中加入红细胞悬液后混匀时，不可用力 ﹑快速振荡，以免人为造成红细胞破裂。
观察实验结果时勿将试管从试管架上拿出， 应水平端起试管架进行观察。
溶血与药物溶血反应
前言
溶血是指红细胞破裂、溶解的一种现象，某些 药物，尤其是注射剂的毒副作用之一是引起红 细胞膜破裂、造成溶血反应;
在新药研发或药品生产中，都需要对注射剂药 品进行药物溶血实验测定。
实验方法
在玻片的两端分别滴抗A抗体、抗B抗体各 一滴，并进行标记。
用碘酒棉球消毒指端或耳垂,再用酒精棉球 消毒后,用采血针刺破皮肤,轻挤少量血液。
用洁净竹签两端各蘸取少量血液，分别加入 两种抗体中，并用牙签轻轻搅动片刻或摇动 混匀，静置35分钟以上观察。用消毒干棉 球置于伤口，并按压23分钟。
红细胞渗透脆性观察
前言
红细胞膜允许一些脂溶性物质，如O2和CO2，及 水分子自由通透。
正常红细胞置于不同浓度NaCl溶液中时，在等渗 溶液中红细胞形态与大小不变；在渗透压递减的 一系列溶液中，红细胞逐渐膨大以至破裂溶解。
前言
对低渗盐溶液抵抗力最小的红细胞，最早出现 溶血，被认为其具有最大渗透脆性。反之，渗 透脆性最小的红细胞，对低渗盐溶液有最大抵 抗力，最后出现溶血。
）、20ml试管（2个）、试管架6个，小试管 10支，三角瓶、硅胶刷、滴管、离心机、 50ml量桶、吸耳球。
酸化甘油溶血-试验
注意事项：
1. 应同时作正常对照； 2. 控制试验温度为25±2℃，所用试剂最好预温； 3. 低温、低渗、试剂被污染致浊度增高均可引起
假阳性； 4. 制备红细胞悬液时应除去乳糜状血浆，其浓度
以起始吸光度0.40~0.60为宜。
参考值：AGLT50>290s
临床意义：遗传性球形细胞增多症AGLT50显著
酸化甘油溶血试验 （acidified glycerol lysis test,AGLT）
实验要求：
1. 掌握酸化甘油溶血试验的原理、结果判断 和临床意义；
2. 熟悉该实验的操作方法、注意事项及评价。
原理：
当红细胞存在于甘油低渗缓冲液中， 红细胞膜脂质与甘油亲合，表面积减少, 红细胞发生缓慢溶血。通过吸光度的变 化测定其溶血率ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ50%的时间(AGLT50)， 可反映红细胞的膜蛋白是否有缺陷。
缩短(多为25～150s)；自身免疫性溶 贫、肾衰、妊娠等AGLT50也可缩短。
评价：本试验对诊断遗传性球形红细胞增多症是
较特异和敏感实验，也是进行家系调查 较理想方法。
操作方法：
1. 取抗凝血20uL，加5mL PBS，配成RBC悬液； 2. 分光光度计以3mL PBS调零(波长625nm); 3. 取甘油液2.0mL 放入1.0cm比色皿，再取RBC悬液
1.0ml吹入其中并计时，快速混合两次, 以10s 吸光度为起始吸光度，每隔20s 读取吸光度并记录 直至290s，并以时间为横轴，吸光度为纵轴，绘 制曲线; 4. 从曲线上求得吸光度下降到起始吸光度一半值的 时间，作为AGLT50 。
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红细胞悬液的配制
1目的配制合格的红细胞悬液。
2使用范围适用于ABO 血型鉴定、Rh 血型鉴定、交叉配血试验及抗A 和抗B 血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验等。
3职责血库专业人员及本科值班人员。
4试剂及仪器
4.1.1生理盐水
4.1.2离心机
5操作规程
5.1取红细胞加入已标记的洁净小试管（内径lOmm X60mm）中，3000r/min离心5min。
5.2弃上清，加入适量生理盐水，用吸管轻轻吹散管底红细胞，3000r/min 离心5min。
5.3重复5.1.2操作2次以充分洗涤红细胞。
5.4用吸管小心吸取上层生理盐水并弃去，取底部压实红细胞按下表1 配成不同浓度的红
细胞悬液。
表1红细胞悬液配制
悬液浓度（%）压实红细胞（滴）生理盐水（滴）
2 1 2.0ml (40)
4 1 1.0ml (20)
3-5 1 0.8ml-1.3ml (16-26)
5 1 0.8ml (16)
10 1 0.4 (8)
6.质量控制
6.1配制A型和B型5%试剂红细胞悬液时需随机选用经血液中心鉴定血型的3个以上健康成人同型标准红细胞，无溶血及脂血。
配制前需按[ABO血型手工鉴定]进行正反定型。
6.2离心时严格按照转速要求，吹散管底红细胞时动作需轻柔，防止溶血。
6.3试管和滴管必须清洁干燥，防止溶血。
6.4A型和B型5%试剂红细胞悬液使用前需按［ABO血型手工鉴定］进行正定型。
7红细胞悬液的保存
7.1配制好的5%的试剂红细胞悬液应在试管上注明红细胞血型及配制时间，并在［配制5%试剂红细胞悬液记录表］中按要求记录，加盖后2-8C避光保存，有效期3天。
7.2用于血型鉴定的受检者3-5%红细胞悬液可不保存。
7.3抗A和抗B血型定型试剂效价测定及稳定性和亲和力评价试验所需红细胞悬液需现用
现配，使用后勿需保存。
8参考文献
叶应妩，王毓三，申子瑜主编.全国临床检验操作规程.中华人民共和国卫生部医政司.南京.
第二版.
附表:
文件修改记录
配制5%试剂红细胞悬液记录表。