ABO血型反定型试剂红细胞配制 SOP
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程 (2)
红细胞ABO 血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO 血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO 血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml/支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散混合凝集外观分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细±胞镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性4、ABO 血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
正反定型卡使用SOP(1)
长春博迅生物技术有限责任公司ABO.RhD血型定型试剂卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
（二）检测标本的准备：1．红细胞悬液的制备：取被检者压积红细胞10微升，加入1.0－1.2毫升红细胞稀释液，外观应为均匀淡红色，无絮状物和血块。
2．血清标本的制备：采集被检对象静脉血，放入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置 12小时，或37℃放置2小时后离心，2000r/min,10分钟，取上清（该上清不得有絮状物或沉淀）。
二、操作步骤1. 将准备好的ABO.RhD血型定型试剂卡做好标记。
2. 将待检者红细胞悬液分别加入第1至第4管中，每管50ul。
3. 将待检者血清分别加入第5和第6管中，每管50ul。
4. 将已知的A型和B型红细胞0.8%浓度悬液或0.8%浓度ABO血型反定型红细胞试剂，每管50ul分别加入第5和第6管。
5. 即刻使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟），取出肉眼判定结果。
结果判定：阳性结果：红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶中形成的特异性抗原抗体复合物浮在凝胶表面或胶中，为阳性反应。
阴性结果：被检红细胞抗原无相应的抗体结合，不出现特异性抗原抗体复合物，红细胞沉于微柱凝胶的尖底部。
血型判定：三、注意事项1. 检测标本必须为抗凝血。
2. 红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。
尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。
如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。
3. 血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。
4. 如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论。
ABO及RH(D)血型鉴定SOP
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH（D）血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D）血型鉴定三、所需材料和设备：1、材料：抗-A、抗-B、抗-D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞，生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜。
四、操作规程1、试管法：（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B 及IgM抗D单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴，轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴，轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以肉眼观察有无凝集（溶血）现象。
如肉眼不见凝集，应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，有助于A、B亚型，类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5％红细胞悬液1滴，混匀。
(2) 标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴，再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀。
编制人王渊审核人钟剑版本号第二版颁布日期2018年1月1日编制人 王渊 审核人 钟剑版本号 第二版颁布日期 2018年1月1日 (3) 轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀，连续15分钟以肉眼观察有无凝集（溶血）反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果。
(4) Rh （D ）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断：单克隆血清＋受检者红细胞受检者血型受检者血浆＋试剂红细胞抗A 抗B 抗D A 细胞 B 细胞 O 细胞 ＋ — ＋/－ A 型 Rh （D ）＋/－－ ＋ － － ＋ ＋/－ B 型 Rh （D ）＋/－ ＋ － － － － ＋/－O 型Rh （D ）＋/－ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋/－ AB 型 Rh （D ）＋/－ － － －4、凝集强度判断：4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明； 3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰；2+ 红细胞凝块分散成许多小块，背景可见到游离红细胞； 1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+- 镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞； 混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；- 阴性 镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
abo反定型红细胞悬液的配制方法
ABO反定型红细胞悬液的配制方法1. 简介ABO血型系统是根据人体红细胞膜表面的抗原而划分的，主要有A型、B型、AB型和O型四种血型。
在输血过程中，正确选择合适的血型是非常重要的，以避免发生血型不相容的严重反应。
ABO反定型红细胞悬液是一种用于血型鉴定、抗体筛查以及输血前交叉试验的实验试剂。
2. 材料准备为了制备ABO反定型红细胞悬液，我们需要准备以下材料：•柱层离心管•离心机•A型血液样本•B型血液样本•AB型血液样本•O型血液样本•生理盐水3. 配制步骤3.1. 血型鉴定试验步骤血型鉴定是确定一个人的血型的过程，在配制ABO反定型红细胞悬液之前，我们需要进行该测试。
1.将柱层离心管标记为A、B、AB、O，分别代表后续实验中不同血型。
2.取一定量的A型血液样本，加入一个标记为A的柱层离心管中。
3.取一定量的B型血液样本，加入一个标记为B的柱层离心管中。
4.取一定量的AB型血液样本，加入一个标记为AB的柱层离心管中。
5.取一定量的O型血液样本，加入一个标记为O的柱层离心管中。
6.将加入血液样本的柱层离心管放入离心机中，以1500 rpm离心10分钟，分离红细胞。
3.2. ABO反定型红细胞悬液配制步骤完成血型鉴定步骤后，我们可以开始配制ABO反定型红细胞悬液了。
1.取出离心机中的柱层离心管，将上清液倒入不同的干净离心管中。
2.分别向每个离心管中加入适量的生理盐水，用于稀释上清液。
3.轻轻摇匀离心管，确保红细胞充分分散在生理盐水中。
4.将离心管放入离心机中，以1500 rpm离心10分钟。
5.丢弃上清液，保留红细胞沉淀。
6.向红细胞沉淀中加入适量的生理盐水，用于洗涤红细胞。
7.轻轻摇匀离心管，离心3分钟，丢弃上清液。
8.重复步骤7，洗涤至少3次，以去除多余的血浆成分。
9.最后一次洗涤后，加入适量的生理盐水，使红细胞悬浮。
10.将悬浮的红细胞转移至一个干净的离心管中。
4. 结论通过以上配制步骤，我们成功制备了ABO反定型红细胞悬液。
输血技术操作规范(SOP)
输血科技术操作规范第一节 ABO血型鉴定操作规程【目的】正确鉴定血型，保障患者的输血安全。
【范围】所有送检需要鉴定ABO和RhD血型的标本。
【职责】输血科负责临床患者的血型鉴定。
【程序】ABO血型鉴定（1）原理：根据ABO血型分类原则，即红细胞上带有什么抗原就称什么血型、同一个体内抗原与抗体互补。
根据含某抗原的红细胞与含相应抗体的血清混合可使红细胞发生凝集，反之不发生凝集的原理，利用分型血清或分型红细胞鉴别血型，前者称为正定型（又称红细胞定型），后者称为反定型（又称血清定型）。
通过正反定型可准确鉴别ABO 血型。
（2）试管法a)取洁净小试管（内径10mm×60mm）5支，分别标明抗-A，抗-B，A细胞、B细胞和O细胞。
b)抗-A,抗-B管中分别按标记加入相应抗体血清2滴，并加入受检者3%～5%红细胞悬液1滴，混匀。
c)A、B和O细胞管分别按标记加入相应3%～5%标准红细胞盐水悬液1滴，并加入受检者血清2滴，混匀。
d)以1500r/min离心1min。
e)轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，必要时须用低倍镜检查。
（3）微柱凝胶法（卡式血型鉴定）a)将代待检标本配成（0.5%～0.8%）红细胞生理盐水悬液。
b)将微柱凝胶卡标号。
c)正定型：将待检红细胞标本分别加入第一至第三支微管中，或第四至第六支微管中，每管50ul；d)带反定型的微柱卡：将待检红细胞标本分别加入第一至第三支微管中，第四至第六支微管中分别依次加入O型、A型、B型（0.5%～0.8%）标准红细胞生理盐水悬液后再加入待检血清，每次加50ul。
d)即刻使用专用离心机离心5min，2min900rpm,3min1500rpm,取出后判定结果。
(4)结果判定a)试管法正定型（细胞定型）反定型（血清定型）_____________________________________________ 受检者血型抗-A 抗-B A细胞 B细胞 O细胞+ O O + O AO + + O O BO O + + O O+ + O O O ABb)微柱凝胶法正定型（细胞定型）反定型（血清定型）_________________________________________________________ 受检者血型抗-A 抗-B DVI Ctl A细胞 B细胞+ O + O O + A,RhD+ O + + O + O B,RhD+O O + O + + O,RhD++ + + O O O AB,RhD+规格：抗A效价≥128；抗B效价≥128;抗D效价≥64【注意事项】1.严格按操作规程操作操作，认真核对标本并做好标记。
MEK―6318K稀释液配制ABO反定型试剂红细胞精品文档4页
MEK―6318K稀释液配制ABO反定型试剂红细胞很多医院在做ABO反定型试验时，常因ABO反定型试剂红细胞悬液有效期短，不能购买太多，从而导致试剂暂时短缺；另外红细胞悬液在保存或使用不当时也很容易失效，给临床工作带来诸多不便。
如果能用血细胞分析仪使用的稀释液来配成红细胞悬液来进行ABO反定型的检测，会给临床带来很大的便利。
现就其可行性进行研究。
1 资料与方法1.1主要试剂与仪器标准抗-A，抗-B血清，由长春博德生物技术有限责任公司提供；MEK-6318K稀释液（日本光电）、MEK-6318K血细胞分析仪（日本光电）、奥林巴斯医学显微镜（日本）。
血液混匀器（江苏康建）1.2反定型试剂红细胞的制备①分别取5人份健康同型新鲜Rh阳性的A、B、O型红细胞各0.5ml混合；②用无菌等渗生理盐水洗涤红细胞，3000r/min离心3min，共3次；③再用MEK-6318K稀释液洗涤2次，以充分置换红细胞中的生理盐水；④用三种稀释液配成4ml/dl的A、B、O三种血型试剂红细胞；⑤将三种试剂红细胞悬液混合分装在八只压灭菌的试管中，加上胶塞，置4±2℃保存。
每隔2d取一只样品进行检测。
1.3检测项目1.3.1细胞形态观察并计数在显微镜下观察红细胞的形态并用MEK-6318K血细胞分析仪测定红细胞的数量。
1.3.2溶血情况观察和上清液游离Hb（血红蛋白）测定肉眼观察A、B、O三种血型试剂上清液的颜色，初步判断试剂的溶血情况。
然后用MEK-6318K血细胞分析仪测定游离Hb含量。
1.3.3细菌生长情况观察将A、B、O三种血型试剂红细胞摇匀，取一接种环接种于血琼脂培养基上，置37℃温箱培养24h后观察是否有细菌生长。
1.3.4试剂的抗原性和特异性检测分别向含有100ulA、B、O三种血型试剂红细胞的试管中加入同一批号的标准抗-A，抗-B血清各100ul，混合均匀，1000r/min离心1min，轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，观察凝集强度的变化。
ABO血型反定型标准操作规程(SOP)
ABO血型反定型标准操作规程（SOP）一．【检验原理】用已知的AI,B,0细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体,结合正定型结果判断ABO血型二．【样本要求】被检者血清或血浆三．【检验方法】（1）试管法1.取被检者血清(或血浆)各1滴(50ul)分别加于3支标记好的小试管中2.分别各加1滴(50ul)Al,B.0试剂红细胞3.摇动试管,离心,速度和时间可选以下二种之一：a)转速1000rpm,时间1分b)转速3400rpm,时间15秒4.先观察是否溶血(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染),然后轻轻摇晃,使细胞再悬浮起来。
5.观察凝集状况,并立即记录结果(2)微量板法1.在U型板三个孔内分别加入25-30u1的被检者血清(或血浆)2.每孔内分别加入与血清的等量的A1、B、0试剂红细胞3.混匀(手工振动混匀或机器混匀)4,离心,转速2000m,时间30秒(650G)注:不同的离心机、不同的微量板所需要的离心条件有所区别,正确实验的结果需要适当的离心,反应板应产生清晰的细胞扣及透亮的上清液5.检测溶血情况(溶血可能是阳性结果,或者是细菌污染)6.用震荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，而若是阴性结果反应很快则细胞扣消除7.记录结果：亦可使用酶标读数仪，与电脑连接可实现自动化检测。
四．【检验结果的解释】ABO血型表现型反应格局表．【检验方法的局限性】本实验必须与正定型一起进行,正反定型不一致须做进一步研究。
单独反定型结果不能作为判断血型的依据。
六．【注意事项】1.如果在反定型试验中,受检者的血清或血浆与0型红细胞试剂产生阳性反应,则需要添加自身对照试验。
如果自身对照为阳性,表明是自身冷凝集素导致。
如果自身对服为阴性,则表明被检者血清或血浆中可能存在AB0系统以外的其他系统的抗体干扰定型。
请按照相关试验方法解决上述定型。
2.本品如出现红细胞颜色变成暗紫色或红细胞发生凝集,出现菌落或溶血严重,则不能使用。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
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ABO血型反定型试剂红细胞配制（SOP）
1．目的
规范ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作，以保证该实验在工作中能够正常进行，确保检测结果的准确性。
2．职责
2.1操作者负责试验操作，并作好相关记录及留样。
2.2科主任监督该规程的执行。
3．适用范围
本规程适用于中心血库检验室ABO血型反定型检测试剂红细胞配制的操作工作。
4.材料与设备
5.1 注射器
5.2 试管
5.3 离心机
注：ISO2000不允许从血袋的小辫上留取红细胞样本。
6.检测环境
6.1 温度：23-27℃
6.2相对湿度：30-70%
7．方法步骤
7.1 选取的样本分别定型并且准确无误。
7.2 选取每型至少10人份的同型细胞等量混合，越多越好。
7.3 用足量的生理盐水至少洗三遍，最后一遍压积必须扣干。
7.4 经多批次定型试剂鉴定确认血型无误方可使用，并作好明显标记。
7.5 悬浮在含有葡萄糖等保存液的抗凝剂中。
9．注意事项
9.1 特异性鉴定，阴性必须在显微镜下观察，包括红细胞形态。
9.2 每次使用前必须观察溶血现象，并配制成5％左右的红细胞悬液。
9.3 不使用时必须4℃保存。
9.4 配制必须符合《实验室质量管理规范》和《生物安全守则》的规定。
操作时必须戴手套、穿工作衣，严格执行消毒隔离制度。
所有样品、废液、废弃物都应按污物处理程序进行。
9.2应严格按照以上操作步骤进行。
11质量记录
11.1 《检验室污物处理记录》
11.2 《试剂配制记录》。