ABO血型正 反定型
实验一ABO正反定型及Rh定型、唾液血型物质检测
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唾液中HAB血型物质测定
【目的】
了解唾液HAB血型物质测定的原理、方法。
【原理】
HAB血型物质也存在于某些人的分泌液中。唾液中 HAB血型物质为半抗原，能特异性地与相应抗体结 合，从而抑制抗体与相应红细胞发生凝集。所以利
用凝集抑制试验，可测定唾液中HAB血型物质，它 有助于ABO亚型的分类及其特殊情况下血型的鉴定
(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板) ，使血清与细胞充
分混匀连续约2min，肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片
试验时可用低倍镜观察结果。
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表l ABO血型正反定型结果
试剂血清+受检红细胞 （正定型）
-A -B 受检血型
受检血清+试剂红细胞 （反定型）
Ac Bc Oc
＋－
A
－＋
B
－－
O
＋＋
AB
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【器材】 小试管、滴管、试管架、记号笔、离心机
【试剂】 1. ５％A、B和O型红细胞盐水悬液。 2. 最适稀释度抗血清的制备（标化血清）
【标本】受检者唾液
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1.被检者漱口后留取自然流出的唾液2ml，将留取 的唾液1000g离心，取上清液置于大试管中，煮 沸10min，再离心10min，留取上清液备用。
－＋ － ＋－ － ＋＋ － －－－
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注意事项 1.试剂 2.悬红 3.蛋白 4.溶血 5.冷抗体 6.老年、儿童 7.污染
作业 简述ABO血型鉴定正反不一致的原因
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红细胞凝集强度判断标准 4+ 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。 3+ 红细胞凝集成大小块，血清清晰。 2+ 红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。 l+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。 ± 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离
abo血型系统定型原则和实验方法
abo血型系统定型原则和实验方法
ABO血型系统定型原则是利用凝集试验技术，通过正定型（红细胞定型）和反定型（血清定型）两组试验来准确鉴定ABO血型。
具体步骤如下：
1. 正定型：取75×12mm干净小试管2支，分别标记抗A、抗B。
按标记滴加抗A、抗B试剂血清1滴。
再各滴加3-5%待检者红细胞悬液1滴，混匀。
2. 反定型：取75×12mm干净小试管3支，分别标记A细胞、B细胞、O 细胞。
3管各滴加待检者血清1滴。
按标记分别滴加混匀的A型、B型、O 型试剂红细胞1滴，混匀。
5管同时2档（3400转/分-15秒）离心。
3. 轻轻摇动试管，观察反应结果。
对于结果解释，如果被检红细胞膜上有与该试剂血清抗体相对应的抗原，或者被检血清中有与该试剂红细胞抗原相对应的抗体，则为阳性，即凝集为阳性。
如果不凝集，则为阴性。
以上是ABO血型系统定型原则和实验方法，仅供参考，建议查阅专业书籍或咨询专业人士获取更准确的信息。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验是通过将被测血清与已知的A和B抗原的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在两个离心管中加入等量的稀释液，使血液与稀释液比例为1：2，充分混合。
3.在一个离心管中加入已知含有A抗原的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B抗原的红细胞悬液。
充分混合。
4.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
5.如果被试者的血清与含有A抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A 血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
反定型试验是通过将被测血清与已知的A和B型抗体的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在一个离心管中加入已知含有A型抗体的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B 型抗体的红细胞悬液。
充分混合。
3.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
4.如果被试者的血清与含有A型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
在正定型试验和反定型试验中，如果在任意一次实验中发生了沉淀反应，就能确定被试者的血型。
如果在正定型试验和反定型试验中都未发生沉淀反应，则需要重新进行试验或者采用其他额外的手段来鉴定个体的血型。
需要注意的是，血型鉴定是一种简单、安全、快速且可靠的方法，但在特殊情况下，如婴儿出生后的一段时间内，由于母婴免疫传递可以导致血型存在变化。
ABO疑难血型鉴定
ABO正、反定型不合疑难血型三步分析法”ABO正反定型不符定义：①ABO正反定型不符，即正定型与反定型提示的血型结果不一致②ABO正反定型相符，但为弱反应，正定型反应强度＜3+，或反定型反应强度＜2+③正定型为O型，反定型与A细胞、B细胞凝集强度差别≥2+凡是遇到ABO正、反定型不合的病人第一步: 排除人为因素／操作失误１，重新采集血样⑴分抗凝，不抗凝两管⑵排除采错人，输血/输液处采样……２，核对试剂，器材仔细阅读试剂效期，说明书，操作方法，注意事项３，规范化操作复检复检ABO 血型仍然正、反定型不合，就确定为疑难血型进入三步法第二步第二步：凡是ABO正、反定型不合的病例按下面方法，分析病人的抗原、抗体是“变多？还是变少？”正、反定型结果判断1，正定型AB, (两种抗原) 抗原变多正定型O, (无抗原) 抗原变少2，反定型O, (两种抗体) 抗体变多反定型AB, (无抗体) 抗体变少3，正定型A, 或B (一种抗原) ①抗原变多;②抗原变少反定型A, 或B (一种抗体) ①抗体变多;②抗体变少★不要过问“真滴变多变少没有”，你依样画葫芦就是了规律很好记，不管是抗原/抗体：两种→肯定是变多没有→肯定是变少；一种→可能是变多，也可能是变少归纳ABO正,反定型不合的“五大类30种原因”知道有个“五大类30种原因”就可以了不要记，书上有这些表，现用现翻书★用排除法（1）红细胞抗原变少7种（2）红细胞抗原变多7种①＜6月,老年（临床）□①自身凝集素（临床诊断）□②白血病（临床诊断）□②红细胞粘附大量蛋白（RBC未洗）□③输异型血（输血史）□③样本含试剂反应物（RBC未洗）□④造血干细胞移植（病史）□④造血干细胞移植（病史）□⑤血型物质↑□⑤获得性B抗原（类B）（临床感染）□⑥急性大失血（临床病史）□⑥B(A)表型□⑦ABO亚型□⑦输异型血（输血史）□注意：每条的临床提示（3）血清抗体变少6种（4）血清抗体变多7种①<6个月/老年（临床）□①自身抗体（临床诊断AIHA）□②ABO亚型□②同种抗体（抗筛）□③低丙种球蛋白血症（化验）□③对试剂反应的物质□④造血干细胞移植（病史）□④血清蛋白异常（化验）□⑤先天性ABO抗体缺失□⑤输异型血浆（输血史）□⑥大量输液（输血史）□⑥造血干细胞移植（病史）□⑦输含血型抗体Ig（输血史）□注意：每条的临床提示5）混合凝集（mf）3种①3个月内输异型血（输血史）□②造血干细胞移植（病史）□③双精子受精/嵌合体（问家系）□注意：每条的临床提示归纳剩下不能排除的原因：第三步: 实验验证针对剩下几种不能排除的原因, 选择针对性实验验证，如何选择针对性实验呢?翻看书本:《输血免疫血液学实验技术》人民卫生出版社,2011 .1; P131。
ABO正反定型不符原因分析及对策
红细胞凝集强度判断标准【《输血免疫血液学实验技术》】ABO正反定型不符常见情况有：一、弱反应或缺失抗原。
二、多余的抗原反应。
三、混合视野反应。
患者正定型结果均为阴性，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强度的凝集，不属于抗体水平减弱的现象，依据反定型结（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A 缺乏凝集反应提示为A亚型。
（2）附加试验：吸收放散试验及唾液血型物质试验可以证明患者红细胞上具有A抗原。
患者正定型结果与抗A出现1+混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱。
依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗A、抗AB的弱（1）患者正定型结果与正常的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有A抗原，正定型患者红细胞与抗AB的弱反应且与抗A患者正定型结果与抗B出现混合视野反应，与正常的4+反应强度明显减弱，但在反定型试验中，与B细胞不反应，而与A1型红细胞出现正常反应强度的（1）患者正定型结果与正常抗B的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型结果，应该可以预见患者具有B抗原，正定型患者红细胞与抗B、抗AB的弱患者正定型结果与抗A出现4+混合视野反应，与正常的4+反应强度出现减弱，但在反定型试验中，与A1细胞不反应，而与B型红细胞出现正常反应强（1）患者正定型结果与正常抗A的凝集强度反应出现明显减弱，依据反定型解决方法:1.洗涤RBC且延长孵育时间进行试验，如果使用洗涤红细胞后反应加强，则考虑是型物质的抑制；2.酶处理红细胞再次试验(检测是否疾病导致抗原水平减弱)；3.吸收放散确定是否是亚型；解决方案:在37℃定型,去除自身冷抗体(红细胞用DTT处理血浆用白身红细胞多凝集是在正定型试验中使用人血清来源的定型血清时出现,现在定型试剂使用鼠单克隆来源的定型血清不存在此问题。
实验十五 ABO血型鉴定
实验十五 ABO血型鉴定一、正定型法【目的】掌握用盐水介质法进行ABO血型系统(ABO group)正定型(direct typing)的原理、操作方法和结果判断。
【原理】用已知的IgM类特异抗体（标准血清）与被检红细胞在室温条件下、盐水介质中反应，根据红细胞是否出现凝集现象来测定被检红细胞膜上有无与血型抗体相对应的抗原，从而判断和鉴定被检者的血型。
【器材】1. 1.小试管、记号笔、蜡笔、试管架。
2. 2.尖滴管、胶吸头。
3. 3.吸管、吸耳球。
4. 4.载玻片或有凹槽的玻璃板或白瓷板。
5. 5.离心机。
6. 6.显微镜。
【试剂】1．标准抗A、抗B血清（商品）分为人血清ABO血型抗体和人ABO血型单克隆抗体，要求如下：（1）人血清ABO血型抗体：①特异性高。
②凝集效价：抗A不低于1∶128 ，抗B不低于1∶64。
③亲和力：反应开始15s内即出现凝集，3min时明显凝集，血凝块大于1mm2。
④稳定性高。
⑤已灭活补体。
（2）人ABO血型单克隆抗体：①特异性：抗A抗体特异凝集具有A型红细胞抗原的A1、A2、A1B、A2B；抗B抗体只凝集含B抗原的B和AB型红细胞。
②亲和力：以开始反应到出现凝集的时间表示抗血清的亲和力，国家标准是抗A对A1、A2、A2B分别为15s、30s、45s；抗B对B型红细胞为15s。
③凝集效价：国家标准是抗A1、抗B均大于1∶128。
④稳定性：较人血清抗体的稳定性低。
2．生理盐水。
【标本】抗凝静脉血或末梢血。
【操作】制备被检者5％红细胞生理盐水悬液：抗凝血离心或红细胞自然沉降后取试管下层的红细胞2滴于小试管中，加入生理盐水2ml，用尖滴管将红细胞与生理盐水充分混匀。
2 500r/min离心3 min 后弃去上清液，重复洗涤3次。
自管底吸取1滴压积红细胞加入19滴生理盐水中混匀，此即为5％的红细胞生理盐水悬液。
操作示意见图4-1。
图4-15％红细胞生理盐水悬液制备操作示意图1．玻片法（1）标记玻片或白瓷板：取洁净的载玻片或白瓷板1块，用蜡笔画出小格，标明抗A、抗B。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型血浆，还原血红蛋白（RBCs），生理盐水（PBS）和试管。
2.在试管中加入一定量的PBS。
3.取一滴A型血浆滴在PBS中的一根试管中，取另一滴B型血浆滴在PBS中的另一根试管中，取一滴O型血浆滴在PBS中的另一根试管中。
4.在每个试管中分别加入一滴RBCs。
5.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血浆的反应。
反定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型RBCs，A和B型血浆，抗人类血球定向凝集试验（AHG试剂），患者的血清和试管。
2.在试管中加入一定量的患者血清。
3.取一滴A型RBCs滴在血清中的一根试管中，取另一滴B型RBCs滴在血清中的另一根试管中，取一滴O型RBCs滴在血清中的另一根试管中。
4.分别制备三个试管，将A、B和O型RBCs与患者的血清混合。
5.将三个试管分别加入AHG试剂。
6.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血清的反应。
分析结果：正定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与血浆的反应来确定的。
如果A型血浆与A型RBCs在试验中凝集，B型血浆与B型RBCs在试验中凝集，而O型血浆不与任何RBCs发生凝集，则可以初步断定该患者的血型是A型、B型或O型。
反定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与患者血清和AHG试剂的反应来确定的。
如果A型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，B型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，而O型RBCs与患者血清和AHG试剂不发生凝集，则可以最终确定该患者的血型。
总结：。
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析
ABO血型鉴定正反向定型不符的原因与分析【摘要】目的分析ABO血型正反向定型不符的原因及防治措施。
方法应用正反向定型、唾液血型物质测定试验及吸收放散试验，检测16例ABO血型正反定型不符标本。
分析其原因，并正确分型。
结果本组16例出现正反向定型不符。
其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
结论对ABO血型正反向定型不符，无法定型的血液样本，可针对原因，采取多种方法，正确鉴定ABO血型。
【关键词】ABO血型鉴定；正反定型不符；原因；解决方法正确的血型鉴定，是保证临床输血安全和抢救生命的重要工作。
输血前必须检查血型，选择血型相同的供血者，进行交叉配血，结果完全相合才能输血［1］。
但在临床血型鉴定时，也会遇到正反向定型不符等情况，给临床输血带来隐患，2008年8月至2010年10月，我院共接受各科申请血型鉴定2380例，其中ABO 血型正反定型不符16例，现分析如下。
1 资料与方法1.1 一般资料血型鉴定对象：2380例血型鉴定者，均为我院2008年8月至2010年10月间住院患者；其中男1630例，女750例；年龄1.6~86岁，平均58.6岁；正反向定型不符16例。
1.2 方法1.2.1 试剂来源正定型单克隆抗A、抗B、抗AB试剂由长春生物制品有限公司提供。
反定型标准红细胞A、B、O有上海血液研究所提供。
1.2.2 鉴定方法①血型正反定型：玻片法和试管法；②唾液血型物质的检测：检测分泌型者唾液中的血型物质，并结合临床病史、用药史、输血史等为血型鉴定提供依据；③ABO亚型鉴定及抗人球蛋白试验、抗体鉴定试验等均按照文献操作［2］。
2 结果本组血型鉴定者2380例，其中16例出现正反向定型不符。
经过对16例血液样本各种方法的综合检查，其中冷抗体6例，血浆异常3例，ABO亚型3例，抗原或抗体减弱2例，人为操作因素和试剂因素2例。
3 讨论3.1 血型鉴定的意义随着现代工业、交通的发达，很多肿瘤、创伤的发病率呈上升趋势；而外科手术，器官移植，创伤急救等均需要进行治疗性输血。
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ABO血型正、反定型操作规程[目的]保证ABO血型鉴定准确，确保临床输血安全。
[适用范围]XXX医院输血科[职责]具有专业技术的工作人员主要负责本院输血（或备血）标本的ABO血型鉴定（但只对该单份标本负责）。
[相关文件]试剂采购、保存和使用管理程序设备采购、使用管理程序消毒与清洁管理程序标本采集、运输、保存和报废管理程序紧急用血管理程序[相关记录]仪器设备的采购、使用和维护记录仪器的温度记录恒温水温箱的换水和消毒记录消毒液的配置记录清洁消毒记录试剂采购、使用记录标本交接和报废记录紧急用血记录[实验原理]ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。
存在A凝集原的称为A型，存在B凝集原的称为B型。
而血清中还存在凝集素。
当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。
一般A型血清中含有抗B凝集素，B型血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者的红细胞反应（称为正定型），用标准红细胞与被测者血清中的凝集素反应（称为反定型），以确定其ABO血型。
[仪器器械]玻璃试管、玻片、记号笔、一次性塑料滴管、显微镜、普通离心机、试管架、恒温水温箱、试剂保存冰箱、标本保存冰箱。
[试剂]抗A标准血清、抗B标准血清、A型标准红细胞、B型标准红细胞、O型标准红细胞、生理盐水。
以上试剂均为有合格证件的正品。
[标本收集与处理]1．受检者血清：采集受检者静脉血2~3ml，经1000r/min离心1分钟或室温静置1小时后取上清。
2．2~5%的受检者红细胞：采集受检者静脉血或末梢血，用生理盐水制成2~5％红细胞盐水悬液备用，制备方法见本节质量控制和注意事项。
3．标本出现中度以上溶血者，为不合格标本，不能用于检测。
[实验方法与步骤]血型的正定型（试管法）：⑴、取2支试管，分别标上抗A 和抗B ；⑵、制备待测标本2~5%的红细胞悬液（取1支试管，加入2ml 生理盐水，再加入1滴待测标本红细胞，混匀备用）；⑶、在抗A 管中加入2滴抗A 标准血清，在抗B 管中加入2滴抗B 标准血清；⑷、在抗A 和抗B 管中分别加入1滴已制备好的待测标本2~5%红细胞悬液； ⑸、混匀后，立即对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟，或室温静置1小时，再轻轻摇动试管，使沉于管底的红细胞浮起，先肉眼观察有无凝集现象，如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
⑹根据有无凝集现象判定结果如下。
注意凝集强度，此有助于A 、B 亚型、类B 或cisAB 的发现。
⑺凝集强度判断标准4十 红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。
3十 红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。
2十 红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。
1十 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。
土 镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。
MF 混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。
一 表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。
血型的反定型（试管法）：⑴、取3支试管，分别标上A 、B 和O ；⑵、在3支试管中分别加入2滴待测标本的血清；⑶、将ABO 标准红细胞轻轻地充分混匀后，在A 管中加入1滴A 型标准红细胞，在B 管中加入1滴B 型标准红细胞，在O 管中加入1滴O 型标准红细胞；⑷、混匀后，对称放入离心机中进行1000r/min 离心1分钟（或3400 r/min 离心15秒）；⑸、取出后，先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），再轻轻摇动试管，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察；⑹根据有无凝集现象判定结果如下。
注意凝集强度，此有助于A 、B 亚型、类B 或ABO 血型 A 型标准红细胞 B 型标准红细胞 O 型标准红细胞A 型 － ＋ －B 型 ＋ － －O 型 ＋ ＋ －AB 型 － － －ABO 血型 抗A 标准血清 抗B 标准血清 A 型 ＋ － B 型 － ＋ O 型 － － AB 型 ＋ ＋⑺凝集强度判断标准（同ABO血型的试管法正定型）[质量控制和注意事项]1、分型标准血清试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用。
试剂开封后必须贴上注有开封日期和开封人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。
试剂开封后有效期为一周。
2、商用分型标准红细胞试剂必须为三证齐全的合格产品，质量性能符合要求，且在有效期内使用；自制分型标准红细胞试剂必须以3个健康者同型新鲜红细胞混和，用生理盐水洗涤 1~3次，以除却存在于血清中的抗体及可溶性抗原，再制成2~5%的红细胞悬液备用。
试剂开封或制备后必须贴上注有开封或制备日期和开封人或制备人的标签，使用后应及时置于2~8℃专用冰箱中保存，以免细菌污染和变质而影响试验结果。
试剂开封或制备后有效期为一周。
3、生理盐水启用后，有效期为二周。
4、所有试剂在使用时，必须检查是否有浑浊、变色、凝集等变质现象；凡可疑者，必须更换新的试剂进行检测。
若分型标准血清使用时间较长后，最好用已知的ABO标准红细胞检查结果是否与已知的血型相符；若分型标准红细胞使用时间较长后，最好用已知的分型标准血清检查结果是否与已知的血型相符，以防标准血清或红细胞制品污染、变质失效而造成鉴定错误。
5、试管、滴管和玻片必须清洁干燥，防止溶血。
6、操作方法应按规定进行，一般应先加血清，后加红细胞悬液，以便容易核实是否漏加血清。
7、IgM抗-A和抗-B与相应红细胞的反应温度以4℃为最强，但为了防止冷凝集现象的干扰，一般仍在室温(20~24℃)内进行试验，37℃可使反应减弱。
8、离心时间不宜过长或过短，速度不宜过快或过慢，以防假阳性或假阴性结果。
用试管法进行ABO血型的正定型时不能测出亚型（如A X），需延长作用时间。
9、在反定型试验中，如果受检者的血清或血浆与O型标准红细胞产生阳性反应，则需要添加自身对照试验。
如果自身对照试验为阳性，表明是自身冷凝集素导致。
如果自身对照试验为阴性，则表明被检者血清或血浆中可能存在ABO系统以外其它系统的抗体干扰，此时需做其它相关试验加以解决上述定型问题。
10、对含有较多自身冷凝集素的受检者，在使用标准血清进行正定型时往往被误定为AB型，遇到此种情况，需用37℃生理盐水洗涤受检者的红细胞2~3次，以去除吸附在红细胞上的冷凝集素，然后再鉴定血型。
11、观察时应注意红细胞呈特异性凝集、继发性凝固以及缗钱状排列的区别。
对于可疑结果，必须更换所用的试剂，重新检测。
12、对于可能存在不完全抗原的时候，应在各反应中加入凝聚胺试剂，以检验不完全抗原的存在。
13、判断结果后应仔细核对、记录，避免笔误。
14、2~5%红细胞悬液的配制：先用生理盐水洗涤红细胞3次，再根据下表进行红[临床应用用于检验人的ABO血型归属。
[血型鉴定的影响因素及解决方法]准确的血型鉴定是临床安全、有效输血的重要保证之一，但影响血型鉴定结果的因素很多。
如发现ABO正反定型结果不一致，应先重复做1次试验。
重复做试验时，应严格执行操作规程，使用质量合格的试剂，并细心观察和解释试验结果，就可解决明显的问题。
对一些疑难问题必须做如下进一步研究：1、标本①血标本的采集错误、稀释和溶血。
另从受检者采集l份新鲜血液标本，这样可以纠正因污染或搞错样本造成的不合。
标本一般要求离体后尽快实验，最长不能超过3天，每次输血后受血者和供血者的血标本应在2～8℃保存7天。
②患者的药物使用有时也对实验有一定影响，当受血者使用肝素治疗时，应使用硫酸鱼精蛋白对抗使标本凝集；如果受血者使用右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）等治疗，应注意将红细胞洗涤。
③受检者红细胞上抗原位点过少(如亚型)或抗原性减弱(见于白血病或恶性肿瘤)，以及类B或cisAB等。
●如疑为A抗原或B抗原减弱，则可将受检红细胞与抗—A或抗—B血清做吸收及放散试验，以及用受检者唾液作A、B、H血型物质测定（只对80％HAB分泌型的人有用）。
●如受检者为A型血而疑为有类B抗原时，可用下列方法进行鉴别：(1) 观察细胞与抗—A及抗—B的凝集强度，与抗—A的反应要比与抗—B的反应强，这种区别用玻片法作试验更为明显；(2) 用受检者红细胞与自身血清作试验，血清中的抗—B不凝集自身红细胞上的类B抗原；(3) 检查唾液中是否有A、B物质，如果是分泌型，可检出A物质而无B物质；(4) 核对患者的诊断，类B抗原的形成与结肠癌、直肠癌、革兰阴性杆菌感染有关。
④受检者血清中蛋白紊乱(高球蛋白血症)，或实验时温度过高，常引起红胞呈缗钱状排列。
如试验结果红细胞呈缗钱状排列，加等渗盐水l滴。
混和，往往可使缗钱现象消失。
注意不应先加盐水l滴于受检者血清中而后和红细胞做试验，以免使血清中抗体被稀释。
⑤细菌污染或遗传因素引起多凝集或全凝集往往是正反定型不符的原因。
如发现多凝集现象，应考虑由遗传产生的Cad抗原活性；被细菌酶激活的T或TK受体；或产生机制不太明了的Tn受体所引起。
多凝集红细胞具有以下特点：(1)能被人和许多家兔的血清凝集；(2)能与大多数成年人的血清凝集，不管有无相应的同种抗体。
(3)不被脐带血清凝集。
(4)通常不与自身的血清凝集。
(5)如有条件可用外源凝集素加以鉴别。
⑥检者血清中缺乏应有的抗-A及或抗—B抗体，如丙种球蛋白缺乏症，老年人血清中抗体水平大幅度下降等。
如果试验结果未见凝集，应将细胞及血清试验至少在室温和4℃放置30min，用显微镜检查核实。
⑦血清中有意外抗体，如自身抗—I，常引起干扰。
用A1、A2、B、O红细胞及自身红细胞检查受检者血清。
如果怀疑是抗—I，用O型(或ABO相合的)脐血红细胞检查。
⑧各种原因引起的红细胞溶解，误判为不凝集。
部分溶血时，可溶性血型物质中和了相应的抗体。
将红细胞洗涤数次，配成2~5%生理盐水细胞悬液，用抗—A、抗—B、抗—Al，抗—A十B及抗H做试验可以得到其它有用的信息。
对受检红细胞作直接抗球蛋白试验，如结果呈阳性，表示红细胞已被抗体致敏。
2、试剂①运输、贮存等条件不适可导致试剂变质失效，造成配血错误。
实验前进行试剂外观、效价等项目质量控制。
②不同抗凝剂制备的标准红细胞质量也不同；另外，红细胞悬液过浓或过淡，抗原抗体比例不适当，使反应不明显，易误判为阴性反应。
应依据要求正确配制红细胞浓度。
③分型血清效价太低、亲和力不强，如抗—A血清效价不高，可将A亚型误定为O型、AB型误定为B型。
实验前应进行试剂效价等项目质量控制。
3、冷凝集素在ABO血型鉴定和交叉配血的过程中，冷凝集素是影响ABO血型正反不符和交叉配血不合的常见原因，尤其是在冬天气温较低时，某些病人血清中含有冷凝集素而导致出现假阳性。
正常人血清中冷凝集素效价一般不高，且在4℃以下时才有活性。