ABO血型反定型操作步骤
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程 (2)
红细胞ABO 血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO 血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO 血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支，10ml/支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表红细胞凝集反应描述凝集强度镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散混合凝集外观分布溶血，上清液中有游离血红蛋白溶血红细胞凝集成一大块，血清清晰透明4+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰3+红细胞凝块分散成许多小块，周围可见到游离红细胞2+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞1+镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细±胞镜下未见凝集，红细胞均匀分布阴性4、ABO 血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制 1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
ABO和RH血型鉴定操作规程4
ABO和RH（D）血型鉴定操作规程一、目的：规范ABO和RH(D)血型鉴定操作，保证临床用血的安全性及有效性。
二、适用范围：适用于血库ABO和RH（D)血型鉴定三、所需材料和设备:1、材料：抗—A、抗—B、抗—D试剂、A、B、O型反定型试剂红细胞,生理盐水，滴管，患者标本。
2、设备：离心机，显微镜.四、操作规程1、试管法:（1）取洁净试管3支，分别标明抗A、抗B及抗D,分别加入抗A、抗B及IgM抗D 单克隆血清各1滴于试管底部，再用滴管分别加入受检者5％红细胞生理盐水悬液1滴,轻摇混匀。
（2）另取洁净试管3支，分别标明A、B和O，用滴管分别加入受检者血浆1滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液1滴,轻摇混匀。
（3）立即以1000r/min离心1分钟后将试管轻轻摇动,使沉于管底的红细胞浮起,先以肉眼观察有无凝集(溶血）现象。
如肉眼不见凝集,应将反应物取置于玻片上，再以低倍显微镜检查。
（4）观察结果时既要看有无凝集,更要注意凝集强度，有助于A、B亚型,类B或嵌合体血型的发现。
2、玻片法：(1) 取血型鉴定专用玻璃板一块，在凹孔旁分别标明抗A、抗B及抗D，分别加入抗A、抗B及抗D单克隆血清1滴，再各加受检者5%红细胞悬液1滴,混匀。
(2）标明A、B及O细胞，分别加入受检者血浆1滴,再各加入A、B及O型试剂红细胞悬液1滴，混匀.（3）轻轻转动玻板，使血清与红细胞充分混匀,连续15分钟以肉眼观察有无凝集(溶血)反应。
有需要时也可用低倍显微镜观察结果.(4) Rh（D）血型鉴定时应作阳性对照及阴性对照。
3、结果判断:4、凝集强度判断:4+ 红细胞凝集成一大块，背景清晰透明；3+ 红细胞凝集成数小块，背景尚清晰;2+ 红细胞凝块分散成许多小块,背景可见到游离红细胞；1+ 肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞；+—镜下可见数个红细胞凝集在一块，周围有许多游离红细胞；混合外观凝集是指镜下可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍分散分布；-阴性镜下未见凝集，红细胞均匀分布.5、报告实验结果，并保存受检标本：一般保存一周以上6、注意事项6。
新编O血型鉴定正反定型试验方法
新编O血型鉴定正反定型试验方法集团公司文件内部编码：（TTT-UUTT-MMYB-URTTY-ITTLTY-A B O血型鉴定正反定型试验方法一、试剂和材料：（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）（二）显微镜、载玻片（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血（五）竹签二、方法（玻片法）：（一）正定型：1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
（二）反定型：1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。
分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；3.混匀（同正定型）；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。
6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1表1ABO血型正反定型试验结果判定三、附注：（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验是通过将被测血清与已知的A和B抗原的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在两个离心管中加入等量的稀释液，使血液与稀释液比例为1：2，充分混合。
3.在一个离心管中加入已知含有A抗原的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B抗原的红细胞悬液。
充分混合。
4.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
5.如果被试者的血清与含有A抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B抗原的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A 血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
反定型试验是通过将被测血清与已知的A和B型抗体的红细胞混合反应来确定被测血型。
具体步骤如下：1.准备供试者的血液样本。
采集一个血液样本，可以是静脉血或者指尖血。
2.分别将供试者的血液样本分为两个离心管中。
在一个离心管中加入已知含有A型抗体的红细胞悬液，同时在另一个离心管中加入已知含有B 型抗体的红细胞悬液。
充分混合。
3.将两个离心管分别离心，离心后可观察到两个离心管中红细胞的沉淀情况。
4.如果被试者的血清与含有A型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有B血型。
如果与含有B型抗体的红细胞混合后沉淀，说明被试者具有A血型。
如果与两者都沉淀，说明被试者具有AB血型。
如果与两者都未发生沉淀，说明被试者具有O血型。
在正定型试验和反定型试验中，如果在任意一次实验中发生了沉淀反应，就能确定被试者的血型。
如果在正定型试验和反定型试验中都未发生沉淀反应，则需要重新进行试验或者采用其他额外的手段来鉴定个体的血型。
需要注意的是，血型鉴定是一种简单、安全、快速且可靠的方法，但在特殊情况下，如婴儿出生后的一段时间内，由于母婴免疫传递可以导致血型存在变化。
S006红细胞ABO血型(反定型)鉴定标准化操作规程
红细胞ABO血型（反定型）鉴定标准化操作规程一、目的为保证血液及血液成分的红细胞ABO血型在临床上同型输注，确保临床输血安全、有效，根据《临床输血技术规范》第十五条特制定本标准化操作规程。
二、方法采用试管法检测红细胞ABO血型（反定型）。
三、原理用已知的A1、B、O标准红细胞测定被检者血清中有无相应的抗A或抗B抗体，结合正定型结果判断ABO血型。
四、适用范围适用于输血前患者与献血者红细胞ABO血型(反定型)确认。
五、仪器设备普通离心机；血型专用离心机；六、试剂1、试剂名称：人ABO血型反定型用红细胞试剂盒；2、试剂生产厂家：上海血液生物医药有限公司；3、批准文号：国药准字S2*******；4、包装规格：A1、B、O试剂各1支， 10ml /支；5、贮藏条件；2-8℃保存，不能冰冻。
6、有效期：自检定合格之日起2个月；7、试剂性能：外观、溶血率%、特异性、抗原性均符合检定规程要求。
七、检测样本要求1、标本类型：静脉血(EDTA抗凝剂:血液=1:10)。
2、标本采集：见输血科标本管理标准化操作规程。
3、标本储存和运输：新鲜血2～8℃贮存时间不超过72小时。
4、标本拒收状态：标识不准确、标本稀释、细菌污染，严重溶血等不能测定。
八、操作步骤1、取10mmx60mm洁净小试管3支，分别标明A1型细胞、B型细胞、O型细胞，用滴管分别加入受检者血清1滴于试管，再分别用滴管加入A1、B、O型试剂红细胞悬液1滴。
2、，摇动试管，立即以1000rpm离心1min或3400rpm离心15s。
3．先观察是否有溶血，溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染；将试管轻轻摇晃，使沉于管底的红细胞浮起，观察细胞扣情况，并判断凝集强度（见下表）。
如肉眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。
红细胞ABO血型（反定型）结果凝集强度判断对照表4、ABO血型（反定型）表现型反应格局表九、质量控制1、对新进批号的试剂应作亲和力与效价验定。
ABO血型鉴定正反定型试验方法
ABO血型鉴定正反定型试验方法正定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型血浆，还原血红蛋白（RBCs），生理盐水（PBS）和试管。
2.在试管中加入一定量的PBS。
3.取一滴A型血浆滴在PBS中的一根试管中，取另一滴B型血浆滴在PBS中的另一根试管中，取一滴O型血浆滴在PBS中的另一根试管中。
4.在每个试管中分别加入一滴RBCs。
5.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血浆的反应。
反定型试验方法：1.准备试验所需材料：A、B和O型RBCs，A和B型血浆，抗人类血球定向凝集试验（AHG试剂），患者的血清和试管。
2.在试管中加入一定量的患者血清。
3.取一滴A型RBCs滴在血清中的一根试管中，取另一滴B型RBCs滴在血清中的另一根试管中，取一滴O型RBCs滴在血清中的另一根试管中。
4.分别制备三个试管，将A、B和O型RBCs与患者的血清混合。
5.将三个试管分别加入AHG试剂。
6.轻轻摇晃每个试管，观察RBCs和血清的反应。
分析结果：正定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与血浆的反应来确定的。
如果A型血浆与A型RBCs在试验中凝集，B型血浆与B型RBCs在试验中凝集，而O型血浆不与任何RBCs发生凝集，则可以初步断定该患者的血型是A型、B型或O型。
反定型试验的结果是通过观察每个试管中RBCs与患者血清和AHG试剂的反应来确定的。
如果A型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，B型RBCs与患者血清和AHG试剂在试验中凝集，而O型RBCs与患者血清和AHG试剂不发生凝集，则可以最终确定该患者的血型。
总结：。
ABO血型反定型操作步骤
ABO血型反定型操作步骤
【检验方法】
一试管法：
1 取被检查者血清（或血浆）各1滴（50ul ）分别加入3支标记好的小试管中；
2 分别各加1滴(50ul )A1,B,O试剂红细胞；
3 摇动试管，离心，速度和时间可选以下二种之一；
A）转速1000rpm, 时间1分钟；
B）转速3400rpm, 时间15秒；
4 先观察是否溶血（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染），然后轻轻摇晃，使细胞再悬浮起来；
5 观察凝集状况，并立即记录结果。
二微量板法
1在U型板三个孔内分别加入25--30ul的被检查血清（血浆）；
2 每孔内分别加入与血清的等量的A1，B,O试剂红细胞；
3 混匀（手工振动混匀或机器混匀）；
4 离心，转速2000rpm，时间30秒（650G）
注：不同的离心机，不同的微量板所需要的离心条件有所区别，正确实验的结果需要适当的离心，反应板应产生清晰的细胞扣及透亮的上清液。
5 检测溶血情况（溶血可能是阳性结果，或者是细菌污染）；
6 用振荡仪振动微量板，振动能使阳性反应出现凝集的细胞扣，而若是阴性反应很快则细胞扣消除；
7 记录结果，亦可使用酶标读数仪，与电脑连接可实现自动化检测。
【检验结果的解释】
ABO血型表现型反应格局表
正定型反定型血型
抗A试剂抗B试
剂A 细胞 B 细
胞
O 细
胞
+ - - + - A - + + - - B - - + + - O + + - - - AB。
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程
ABO-Rh正反定型血型定型操作规程一、项目名称、检验方法名称1．项目名称：ABO-Rh正反定型血型定型2．检验方法名称：柱凝集二、方法学原理该试剂卡是基于柱凝集的原理而设计。
正常具有抗原的人红细胞将与相应的抗体发生凝集反应，BioVue血型诊断试剂卡的微柱中含有玻璃珠介质和试剂。
加入红细胞并将试剂卡离心后，发生凝集的红细胞会被阻挡在玻璃珠的上面，而未凝集的游离红细胞则会在离心力的作用下通过玻璃珠之间的间隙到达微柱的底部。
三、试剂卡品牌、代号、包装规格、内含物1．试剂卡品牌：美国强生奥索(Ortho-Clinical Diagnostica,Inc)2．代号：BioVue -ABO/Rh-Reverse3．包装规格：400卡/箱试剂卡（707100）；100卡/箱试剂卡（707155）4．试剂成分：BioVue ABO-Rh正反定型血型诊断试剂卡有6根微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白，大分子增强剂以及0.1％叠氮钠，0.01M的EDTA.成分描述第一柱：抗－A试剂抗－A鼠单克隆(lgM)抗体混和；蓝色染料第二柱：抗－B试剂抗－B鼠单克隆(lgM)抗体混和；黄色染料第三柱：抗－D试剂（抗RH）抗－D人单克隆(lgM)抗体第四柱：质控优化增强剂，用于血型检测的质控对照第五，第六柱：反定型稀释液优化增强剂，用于反定型血型检测5．试剂的储存与效期：储存条件： 2～25℃环境中保存。
请勿将试剂存放在自动除霜的冰箱中，也不要冷冻保存。
并且不要放在离热源（如孵育箱、辐射器、大型设备、冰箱、冰柜等）很近或阳光直射的地方。
效期：试剂盒上有记载四、仪器品牌、型号BioVue专用离心机；BioVue专用孵育器五、样本的采集与准备：在采集标本前对病人/献血者无特殊要求，血液采集应符合相关的技术标准及管理规范。
含有或不含有抗凝剂的标本均可使用。
标本采集后应尽快进行检测。
如果实验不能立即进行，应将标本置于2－8℃保存。