微生物实验室工作方案

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篇一：标准微生物实验室建立参考方案

标准微生物实验室建立参考方案

依照生物安全管理基本准则及严格的无菌操作的要求，现提出针对我医院建立微生物实验室的参考方案供各位领

导参考之用。微生物学实验室的布局应本着符合保护工作人员的健康，防止交叉感染，有利于样品送检和保证工作质量的要求，因此实验室应划分为3大区域，包括清洁区、操作区和无菌区，现初步统计建立微生物实验室共需要6间房间（不包括将来可能要开展其他项目所需要的房间），一侧为挨着的4间，其中1间用于标本接收、验收及报告单存放处；1间用于标本接种、培养、涂片染色及作各类实验之用；1

间用于上机鉴定、药敏实验、存放培养基以及相关试剂和报告打印之用；最后1间为缓冲区域同时可兼作更换实验室专用工作服之用。另一侧为挨着的2间，其中1间可分隔开，

半间作为处理实验完毕后标本等污染品的高压灭菌区；另半间用于日后作为艾滋病实验室，另1间则作为独立的办公休息区（为了避免发生院内感染及其他危险因素的产生，微生物的办公休息区域应与检验科的分开）。

下面提出具体的室内布局要求，标本接收、验收及报告单存放室内需在相对侧摆放两组桌子（一组用于接收标本、另一组放报告单），并且与隔壁培养室相邻的墙上要有专门的标本传送窗口。标本接种、培养室和鉴定、试剂存放室不独立开门，须与鉴定、试剂存放室和缓冲间相通（相通的房间相当于两道缓冲区，要在相通处设门），缓冲间独立开门。标本接种、培养室内需布置1~2组洁净工作台（台面要求由无化学、无生物毒性、易消毒、易清洗、抗腐蚀、抗吸污、防水的光滑材料制成）且工作台应装台灯或固定于桌面的白炽灯管，用于显微镜使用、肉眼观看细菌溶血现象、玻片凝集反应、测量纸片法药敏试验的抑菌环等，其次因季

节变化等其他因素的影响有时可能会使室内温度偏差从而

造成不必要的试验的失败，建议在培养室内安装空调一部用于平衡室内温度，微生物学实验室要求至少应有2个洗手水池，最后就是要在工作台的一侧安装一个洗手水池作为染色和工作之用（该洗手池应采用感应式或脚踏控制的龙头，在水池上方安装干手器一台）。上机鉴定、药敏试验、存放培养基以及相关试剂和报告打印室需要冷藏箱一台存放各类

培养基及试验试剂，为了能够更好的开展实验室的工作（血液、脑脊液、胸腹水、关节液等无菌体液的细菌培养），需要添加一台全自动血液培养仪和配套的血培养瓶用于各类

无菌体液的增菌培养，其可与鉴定仪一并摆放于本室，本室也须安装空调一部。缓冲间同时也可作为换衣间，来到缓冲间可在此更换实验室要求的专用防护服、一次性的帽子、口罩、手套、鞋套等，所以室内需要衣橱或者衣柜一个用来放无菌、干净的工作服等，其次是要在靠近门口附近的位置安装一个洗手水池作为操作人员离开实验室前洗手之用（该洗手池应采用感应式或脚踏控制的龙头，在水池上方安装干手器一台）。如果条件允许的话此房间可分开占用2个房间，如不能分开的话就请把此房间分隔开，半间作为处理实验完毕后标本等污染品的高压灭菌室，室内需配备高压灭菌器或医用手提式高压蒸气锅一台，而且要保证室内的通风良好；另半间则可留于日后作为艾滋病实验室。

以上所述的5间房间最后有个统一要求：微生物学实验室的每一个工作区都应安装紫外灯，由于紫外线的消毒仅限于物体直射表面，所以合理的高度应距离桌面1m且要求选择紫外线波长在250~265nm的灯管；实验室内应少灰尘所以不能铺设地毯，地面材料应具有耐清洗、耐消毒、防滑的性能；墙面也应符

合便于清洗、消毒、不易吸附、光洁的原则；实验室的

入口处应张贴生物安全防护级别的标志用于警告和提醒。

微生物实验室由于其的特殊性及危害性，为了避免发生院内感染及其他危险因素的产生，故提出要求有自己独立的办公、休息区域（希望能够与检验科的分开）。

注：附有参考图

走

廊

篇二：微生物实验方案

实验器材

原料：醪糟：

1.2主要培养基

pDA（马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基）培养基；YpD培养基（酵母膏胨葡萄糖琼脂培养基）；高盐察氏培养基；普通营养琼脂，Lb琼脂培养基

1.3仪器

超净工作台、恒温干燥箱、恒温培养箱、光学显微镜，培养皿，三角瓶，无菌枪头，平板，接种环，无菌生理盐水试管

2试验方法

2.1培养基配制及培养条件

2.2菌种的分离纯化

2.2.1菌种的分离方法

无菌操作称取样品1g，放入盛有99mL无菌水的三角瓶中，振摇1-2min，浸泡数分钟后再振摇1-2min，使样品与水分充分混合，将菌分散。使用无菌枪从原菌液中吸取1mL 样液注入盛有9mL的无菌水的试管中，以此类推，制成10-3、10-4和10-5稀释度的样品溶液。用无菌枪分别从中稀释度的试管中吸取1mL放入pDA、YpD、Lb琼脂培养皿中，在培养基未凝固前（37℃）快速将样品液摇匀，同时制作空白，每个稀释度制作三个平板，将平板倒置后放入28℃培养箱中培养。

2.2.2菌种的纯化方法

培养3d后观察平板内菌落，按其形态进行初步分类，挑选典型菌种的单菌落2-3个，酵母菌采用划线法接种于琼脂平板，霉菌采用点种法接种于pDA平板，经过多次分离后菌种得到纯化。

革兰氏染色实验步骤

1、取载玻片用纱布擦干，载玻片的一面用marker笔画一个小圈（用来大致确定菌液滴的位置）。涂菌的部位在火焰上烤一下，除去油脂。

2、涂片：

液体培养基：左手持菌液试管，在酒精灯火焰附近5cm 左右打开管盖；右手持接种环在火焰中烧灼灭菌，等冷却后从试管中沾取菌液一环，在洁净无脂的载玻片上涂直径2mm

左右的涂膜，最后将接种环在火焰上烧灼灭菌。

固体培养基：1.先在载玻片上滴一滴无菌水，再用接种环取少量菌体，涂在载玻片上，使其薄而均匀。

3、晾干：让涂片在空气中自然干燥。

4、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。

5、染色：将固定过的涂片放报纸上，滴加草酸铵结晶紫液，染1min。

6、水洗：用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。简单染色结束可观察细胞形态。

7、媒染：滴加1滴碘液，染1min，水洗。

8、脱色：吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色20-30s 至流出液无紫色，立即水洗。

9、复染：滴加蕃红复染3-5min，水洗。至此，革兰氏染色结束

2.2.3菌种的保藏

经分离纯化后的优势纯培养菌种，为了做菌种鉴定及后期的产品试验，必须进行有效保藏，防止菌种退化或变异。霉菌的保藏方法；用点种法接种于pDA平板上，48h后观察，看到菌丝生长并在平板上延伸时，用接种环挑取菌丝接种于pDA斜面试管中，在28℃培养箱中培养3-4d，待产生孢子后用牛皮纸扎好存储于4℃冰箱中待用。