生物中常见显色反应审批稿

生物中常见显色反应 YKK standardization office【 YKK5AB- YKK08- YKK2C- YKK18】

物质鉴定出现的显色反应

（1）淀粉

直链淀粉由a-1，4-糖苷键连接的葡萄糖分子组成，呈线状链；支链淀粉在分支处有a-1，6-糖苷键连接，其直链部分也有a-1，4-糖苷键连接。一般的淀粉为直链及支链淀粉的混合物。通常我们说的淀粉遇碘变蓝指的是可溶性直链淀粉，而支链淀粉遇碘呈紫或红紫色。

(2)还原糖的鉴定

还原性糖：指分子结构中含有还原性基团(游离醛基或a-碳原子上连有羟基的酮基)的糖（葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、半乳糖等）蔗糖、淀粉、纤维素等不是。能与醛基发生特定颜色的指示剂斐林试剂、班氏试剂进行鉴定。实验时，应选择含糖量较高，颜色为白色或近白色的植物组织

①斐林试剂：斐林试剂是NaOH溶液，乙液CuSO4溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2：在加热条件下与醛基反应，被还原成砖红色的Cu20沉淀，醛基则被氧化为羧基。此过程溶液的颜色变化为：浅蓝色一棕色一砖红色(沉淀)。

②利用班氏试剂：班氏试剂由硫酸铜溶液，柠檬酸钠和碳酸溶液配制而成。将A溶液倾注入B液中，边加边搅拌，如有沉淀可过滤。（柠檬酸作为Cu2+的络合物）班氏试剂可长期使用蓝色溶液-红黄色沉淀

化学上常用银氨溶液来鉴定还原性糖。

(3)脂肪的鉴定

苏丹Ⅲ染液和苏丹Ⅳ染液都是用于鉴定脂肪

(4)蛋白质的鉴定

双缩脲试剂分子中含有许多与双缩脲结构相似的肽键的物质如蛋白质、多肽等都可以与双缩脲试剂发生颜色反应。

(5)DNA的鉴定

在DNA的粗提取与鉴定实验中用二苯胺试剂进行鉴定。现配现用。原理：DNA 分子中的脱氧核糖在酸性环境下生成叫-羟基-7-酮基戊醛，再与二苯胺试剂结合显蓝色，颜色的深浅与溶液中的DNA含量成正比。实验时将二苯胺试剂与DNA混匀后，置于沸水中加热5min，冷却后即呈蓝色。二苯胺有毒

常温下DNA还有遇甲基绿溶液呈蓝绿色的特性。甲基绿是碱性染料，细胞学上常用来染染色质，将它跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。

(6)DNA和RNA的染色鉴定

甲基绿使DNA呈现绿色，吡罗红使RNA呈现红色

(7)酒精的鉴定

橙色的重铬酸钾(K2Cr2O7)溶液，在酸性条件下与酒精发生化学反应，变成灰绿色

(8)二氧化碳的鉴定

溴代麝香草酚蓝溶液(BTB)，是一种酸碱指示剂，pH值为6．8～7．6。由蓝色变为黄绿色。

(9)亚硝酸盐的鉴定

在盐酸酸化的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯黄酸发生重氮化反应后，与N-1奈基乙二氨盐酸盐结合生成玫瑰红染料。

（10）台盼蓝使死细胞染成蓝色

原理：正常的活细胞，细胞膜结构完整具有选择透过性能够排斥台盼蓝，使之不能够进入胞内;死细胞或细胞膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。

应用：区分活细胞和死细胞;检测细胞膜的完整性。

（11）吲哚酚试剂与维生素C溶液呈褪色反应

原理：吲哚酚即2，6-二氯酚靛酚钠，其水溶液为蓝紫色，维生素C具有还原性，能将其褪色。

应用：可用于检测食品营养成分中是否含有维生素C。

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2．结构鉴定呈现的显色反应

(1)检测线粒体

健那绿染液（詹姆斯绿B）是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色

(2)检测染色体

染色体(质)是细胞核内容易被碱性染料染成深色的物质。常用龙胆紫溶液使染色体染成紫色，但也使用醋酸洋红溶液使染色体着红色。

(3)花粉粒鉴定

用做花药离体培养的花粉粒选发育时期为单核局中期向单核靠边期移动的时期。确定花粉发育时期的最常用的方法有醋酸洋红法，细胞核被染成红色。但是，某些植物的花粉细胞核不易着色，需采用焙花青铬钒法，这种方法能将花粉细胞核染成蓝黑色。

3．鉴别培养基显现的颜色反应

(1)鉴定纤维素分解菌

加入刚果红指示剂后，它可以与纤维素形成红色复合物。

（2）脲酶的检测

原理：细菌合成的脲酶可以将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强，使PH升高，从而使酚红指示剂变红。

应用：在以尿素为唯一氮源的培养基加入酚红指示剂，培养某种细菌后，看指示剂变红与否可以鉴定这种细菌能否分解尿素。

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（3）伊红美蓝检测大肠杆菌

原理：在伊红美蓝培养基上，大肠杆菌的代谢产物(有机酸)与伊红美蓝结合使菌落呈现黑色。

应用：用滤膜法测定水中大肠杆菌的含量。