各类微生物生化实验方式原理
生理性生化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解细菌生理生化反应原理；2. 掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 了解生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理通过测定微生物校内某些酶类的有无、对某些糖的利用能力、代谢产物的类型等来研究微生物的多样性。
某些细菌产生色氨酸酶，能分解培养基蛋白胨中的色氨酸，产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛发生反应，形成红色的玫瑰吲哚，为吲哚反应阳性。
微生物发酵葡萄糖成丙酮酸，2分子丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下与肌酸类物质反应，生成红色物质，为甲基红反应阳性。
三、实验方法1. 吲哚试验：将细菌接种于含有色氨酸的培养基中，加入吲哚试剂，观察颜色变化。
2. 甲基红试验：将细菌接种于含有葡萄糖的培养基中，加入甲基红试剂，观察颜色变化。
四、实验结果1. 吲哚试验：接种了大肠杆菌的试管在加入乙醚和吲哚试剂后，能在乙醚和液体培养基的交界面上产生红色环状物质，大肠杆菌的吲哚试验显阳性。
2. 甲基红试验：大肠杆菌甲基红试验阳性，即大肠杆菌在培养期仍维持酸性pH。
五、实验分析1. 吲哚试验失败原因分析：可能是因为乙醚加量太少，影响实验现象的观察；另一个可能的原因是大肠杆菌菌种有问题。
2. 甲基红试验结果分析：大肠杆菌在培养后仍能维持酸性，而产气杆菌则转化为非酸性末端产物。
六、实验结论1. 通过本实验，我们了解了细菌生理生化反应原理；2. 掌握了细菌鉴定中常见的生理生化反应方法；3. 认识到生理生化反应在鉴别细菌中的意义。
七、实验注意事项1. 实验过程中要严格按照操作规程进行，避免污染；2. 注意观察实验现象，记录实验数据；3. 分析实验结果，找出实验失败的原因。
第2篇一、实验目的1. 了解生理性生化实验的基本原理和方法。
2. 掌握常用的生理性生化指标及其检测方法。
3. 通过实验，学会使用生理性生化检测仪器，提高实验技能。
二、实验原理生理性生化实验是研究生物体内各种生化反应及其代谢过程的重要手段。
肠道细菌生化实验报告
一、实验目的1. 了解肠道细菌的生理生化特性。
2. 掌握肠道细菌生化实验的基本原理和方法。
3. 通过实验，鉴别肠道细菌的种类。
二、实验原理肠道细菌生化实验是通过观察细菌对特定底物的代谢反应，如糖类、蛋白质、脂肪等的分解能力，以及产生某些特定代谢产物的能力，来鉴别细菌种类的一种方法。
实验中常用的生化反应包括糖发酵实验、吲哚试验、甲基红试验、V-P试验等。
三、实验材料1. 菌种：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌等。
2. 培养基：葡萄糖蛋白胨水培养基、蛋白胨水培养基、糖发酵培养基（葡萄糖、乳糖或蔗糖）、吲哚试剂、甲基红试剂、V-P试剂等。
3. 仪器：酒精灯、接种环、超净工作台、恒温培养箱、高压灭菌锅、试管、移液枪、滴管等。
四、实验方法1. 糖发酵实验：将待测菌接种于糖发酵培养基中，37℃恒温培养24小时，观察菌落周围是否出现红色圈，红色圈表示该菌能够发酵该糖类。
2. 吲哚试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入吲哚试剂，观察是否产生红色沉淀。
3. 甲基红试验：将待测菌接种于蛋白胨水培养基中，37℃恒温培养24小时，加入甲基红试剂，观察培养基颜色变化。
4. V-P试验：将待测菌接种于V-P试剂中，37℃恒温培养24小时，观察是否产生红色沉淀。
五、实验结果与分析1. 糖发酵实验：大肠杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；产气肠杆菌发酵乳糖，产酸产气；普通变形杆菌发酵葡萄糖，产酸产气；枯草芽孢杆菌不发酵葡萄糖。
2. 吲哚试验：大肠杆菌产生吲哚，呈阳性；产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌不产生吲哚，呈阴性。
3. 甲基红试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
4. V-P试验：大肠杆菌、产气肠杆菌、普通变形杆菌、枯草芽孢杆菌均呈阴性。
根据实验结果，可以初步判断待测菌为大肠杆菌。
六、实验结论通过肠道细菌生化实验，我们掌握了肠道细菌生化实验的基本原理和方法，成功鉴别了待测菌为大肠杆菌。
实验六、细菌分解代谢系列实验
3、明胶液化试验
明胶是一种动物蛋白。明胶培养基本身低于 20℃时凝固，高于25℃则自行液化。某些细 菌能够产生蛋白酶将明胶水解成小分子物质， 因此培养后的培养基即使在低于20℃的温度 下，明胶也不再凝固，而由原来的固体状态 转化为液体状态。
三、操作步骤：
（一）淀粉水解试验：
(1)准备淀粉培养基平板：将熔化后冷却至50℃左右的淀粉培养基 倒入无菌平皿中，待凝固后制成平板。
（二）油脂水解试验：
（1）将装有油脂培养基的三角瓶置于沸水浴中 熔化，取出并充分振荡（使油脂均匀分布）， 再倾入无菌平皿中，待凝固制成平板。
（2）划线接种于同一平皿的两边(其中一种是 金黄色葡萄球菌作为对照菌)。置于37℃恒温箱 培养24h，取出后观察平板底层长菌的地方， 如出现红色斑点，即说明脂肪被水解了，此反 应为正反应。
（三）明胶液化试验：
（1）接种：用穿刺接种法接种大肠杆菌或产气肠杆菌 于明胶培养基中。
（2）培养：放20℃恒温箱中培养48h。若细菌在20℃下 不长，则应放在最适温度下培养。 （3）观察结果：观察培养基有无液化情况及液化后的 形状。 因明胶在低于20℃时凝固，高于25℃时自行液化，若 是在高于20℃下培养的细菌，观察时应放在冰浴中观 察，若明被被细菌液化，即使在低温下明胶也不会再 凝固。
二、实验原理
1、乙酰甲基甲醇试验 a、实验目的：检测细菌分解葡萄糖的代谢产物 b、原理：某些细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖 产生丙酮酸，丙酮酸脱羧通过缩合和脱羧后转变 成乙酰甲基甲醇，然后被还原成2，3—丁二醇。 乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被空气中的氧气氧 化成为二乙酰，二乙酰再与蛋白胨中的精氨酸的 胍基作用生成红色化合物，此为乙酰甲级甲醇反 应。在试管中加入α—萘酚时，可促进反应出现。
细菌的生化试验—硝酸盐还原实验(微生物检验课件)
有助于鉴别肠杆菌科、嗜血杆菌属、奈瑟菌属、布兰汉菌属、假单胞菌属等。
硝酸盐还原试验结果
-+
红色为阳性 无色为阴性
硝酸盐还原试验结果
+
-
无色+锌粉→无色：阳性 无色+锌粉→红色：阴性
硝酸盐ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ原试验
原理：
使硝酸盐还原的细菌能从硝酸盐中获得氧，使其成为亚硝酸盐或其它还原物。 培养基中的亚硝酸基能与α-萘氨和苯磺酸形成红色的N-α-萘氨偶氮苯磺酸。 若出现红色现象则说明该菌还原硝酸盐。
硝酸盐还原试验方法
方法：
取一环待检菌接种到硝酸盐琼脂斜面上，35℃培养18~24小时，然后依次加入含α萘氨和对氨基苯磺酸的试剂各1mL，30s后观察结果。
实验八 微生物生理生化特性检测(糖发酵、氨化作用、IMVC、硫化氢试验等)
杆菌，第三支不接做对照；
取乳糖发酵培养基试管3支，分别接种大肠杆菌、枯草 杆 菌，第三支不接做对照。 将接种的和做对照的9支试管放置28~30℃培养2~3天。
表1 糖发酵试验结果
试验菌种 发酵特性 葡萄糖 大肠杆菌 枯草杆菌 对照 产酸 产气 产酸 产气 产酸、产气 供试糖 蔗糖 乳糖
1 目的要求
2 基本原理
3 试验材料
4 操作步骤
1 目的要求
学习掌握IMVIC试验原理。 学习硫化氢试验检测细菌产生硫化氢的原理和方法。 学习掌握IMVIC试验及H2S试验在肠道菌鉴定中的方法及意 义。
2 基本原理
IMVC是吲哚（indol）、甲基红（methyl red test）、 伏—普（Voges-Prokauer test）和柠檬酸盐 （citrate test）四个实验的缩写，主要用于快速鉴 别大肠杆菌和产气肠杆菌，多用于水细菌学检查。H2S
刺线有无细菌生长和是否变色。黑色为阳 性，没有黑色产生为阴性。
试验结果记录
见书P58。
实验报告
按实验内容分别书写。要求每个实验写出：
1 实验目的
2 实验原理
3 实验结果。
实验结果用表格形式给出，并对实验结果进行分析。 4 讨论
三 IMVC试验
一 糖发酵试验
1 目的要求 2 基本原理 3 试验材料 4 操作步骤
1 目的要求
了解糖发酵的原理。 掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 巩固微生物接种技术
2 基本原理
不同细菌对糖的分解利用能力存在较大 差异，且产物不同，是常用的鉴别微生物的 生化方法。有些细菌能分解某种糖产生有机 酸和气体；有些细菌只产酸不产气。若产酸，
实验五-细菌鉴定中常见的生理生化反应
实验五细菌鉴定中常见的生理生化反应一、实验目的。
1)了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常见的生理生化反应方法。
2)了解不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况。
3)了解细菌在不同培养基的不同生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
二、实验原理。
各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。
以此用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。
1.糖（醇）类发酵试验不同的细菌含有发酵不同的糖（醇）的酶，因而发酵糖（醇）的能力各不相同，产生的代谢产物也不同：有的产酸产气，有的产酸不产气。
指示剂溴甲酚紫，pH5.2黄色—pH6.8紫色，当发酵产酸时，培养基将由紫变黄。
产气可由杜氏小管中有无气泡来证明。
2.甲基红试验（M.R试验）甲基红试验，pH4.4红色～pH6.2黄色，是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。
有些细菌在培养的早期产生有机酸，但在后期将有有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。
3.Voges-Proskauer试验（伏-普试验，V.P. 试验）伏-普试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
某些细菌分解葡萄糖成丙酮酸，再将丙酮酸缩合脱羧成乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性条件下，被氧化为二乙酰，二乙酰与培养基中所含的胍基作用，生成红色化合物为V.P.反应阳性。
4.靛基质试验某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质，靛基质与对二甲基氨基苯甲酸结合，形成玫瑰色靛基质。
5.硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。
6.明胶液化实验明胶在25度以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25度以上时明胶就会液化。
细菌生化实验的原理
细菌生化实验的原理
细菌生化实验是一种常见的研究细菌代谢途径和生物化学反应的实验方法。
它通常包括三个主要步骤：选取适宜的细菌菌种、培养细菌、并分析其代谢产物。
在细菌选择方面，考虑到细菌生物化学反应复杂的特性，需要根据实验需求选择目标菌株，例如肠道杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌或者链球菌等常见菌株。
同时，不同菌株对不同的培养条件和适应性也存在较大差异，因此需要在实验设计时结合不同菌株的生长要求和代谢途径进行选择。
在菌株选择完成后，需进行细菌培养。
培养细菌的前提是提供足够的营养物质和一定的生长环境。
其中，菌株的生长速度和代谢途径的研究一般基于培养基和菌落两种形态进行。
培养基通常是由营养物质和生长环境组成的液体或固体培养基。
根据实验的具体目的，可以选择不同的培养基并进行改良，以达到优化细菌生长的效果。
菌落形态则通常是通过在无菌平板上点滴菌液，或通过接种环把菌液在无菌培养基上擦抹而形成的。
菌落的变化与菌株的性质、菌落反应的变化、菌落形态、菌株的特殊代谢等与菌种代谢相关的因素有关。
最后，通过检测菌株代谢产物来进行代谢分析。
这通常涉及使用各种质谱、色谱、电泳等方法来鉴定和定量化细菌代谢产物，以了解细菌生长和代谢途径的基本特
征。
综上所述，细菌生化实验的设计和执行需要涉及基础的生物化学知识和实验技能。
其电影目的是为了深入了解不同菌株之间的代谢差异，进而为生物工程、食品安全和医学研究等方面的应用提供更充分的科学依据。
微生物鉴定中常用的生理生化试验
微生物鉴定中常用的生理生化试验一、实验目的1.证明不同微生物对各种有极大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。
2.掌握微生物大分子物质水解实验的原理和方法。
3.了解糖发酵的原理和在肠细菌鉴定中重要作用。
4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5.了解IMViC的原理。
二、实验原理由于各种微生物具有不同的酶系统，所以它们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。
具体的原理如下：1.淀粉水解试验：在淀粉固体培养基上接种四种细菌（枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌），培养两天以后，再往培养基中加碘液染色，若该细菌能分泌胞外淀粉酶，则能利用其周围的淀粉，淡然在染色后，其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈。
2.糖发酵试验：不同的细菌分解糖的能力不同，有些细菌能利用糖发酵产酸和产气，有些则不能。
酸在加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。
若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。
3.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。
（1）吲哚试验：在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。
本次不做该试验。
（2）甲基红试验（MR）：某些细菌在糖代谢过程中分解葡萄糖生成丙酮酸，后者进而被分解产生甲酸，乙酸和乳酸等多种有机酸，是培养液PH值降至4.2以下，加入甲基红后溶液呈红色。
三、实验材料1.菌种大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球(Staphyloccocus aureus Rosenbach)，铜绿假单胞菌（P.Aeruginosa），枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis Cohn），产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)，普通变形杆菌（Proteus.vulgaris)。
生物生化实验报告
一、实验目的1. 探究不同微生物对有机大分子物质的水解能力，分析其酶系统的差异。
2. 掌握微生物大分子物质水解试验的原理和方法。
3. 了解糖发酵的原理及其在肠道细菌鉴定中的重要作用。
4. 学习通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。
5. 理解吲哚和甲基红试验的原理及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。
二、实验原理微生物的生理生化反应是微生物生命活动的重要组成部分。
微生物通过酶促反应将有机大分子物质分解为小分子物质，以获取能量和营养。
不同微生物具有不同的酶系统，对底物的水解能力存在差异。
糖发酵试验和吲哚、甲基红试验是常用的微生物鉴定方法。
三、实验仪器与试剂菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：- 固体淀粉培养基- 固体油脂培养基- 葡萄糖发酵培养基- 乳糖发酵培养基- 蛋白胨水培养基- 葡萄糖蛋白胨水培养基试剂：- 卢戈氏碘液- 乙醚- 吲哚试剂- 甲基红试剂- 蒸馏水仪器：- 酒精灯- 接种针- 培养皿- 试管- 试管架- 烧杯- 量筒- 德汉氏小管四、实验方法1. 菌种接种：将待测菌种接种于相应的培养基上，置于适宜的条件下培养。
2. 糖发酵试验：将培养好的菌液接种于葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基中，观察培养基颜色变化。
3. 吲哚试验：将培养好的菌液加入吲哚试剂，观察颜色变化。
4. 甲基红试验：将培养好的菌液加入甲基红试剂，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 糖发酵试验：- 枯草芽孢杆菌：葡萄糖发酵培养基变黄，乳糖发酵培养基不变色。
- 大肠杆菌：葡萄糖发酵培养基变黄，乳糖发酵培养基变红。
- 金黄色葡萄球菌：葡萄糖发酵培养基不变色，乳糖发酵培养基变红。
- 铜绿假单胞菌：葡萄糖发酵培养基不变色，乳糖发酵培养基变红。
- 普通变形杆菌：葡萄糖发酵培养基变黄，乳糖发酵培养基变红。
- 产气肠杆菌：葡萄糖发酵培养基变黄，乳糖发酵培养基变红。
2. 吲哚试验：- 枯草芽孢杆菌：呈阳性反应。
微生物检验原理
微生物检验原理
微生物检验原理是通过对样品中的微生物进行分离、培养和鉴定，以了解其数量、种类和活性水平的方法。
微生物检验的原理主要包括以下几个方面：
1. 分离：首先将样品进行适当的稀释，然后将其接种在含有适宜营养物质的培养基上，利用适当的条件（如温度、气氛等）创造出有利于微生物生长的环境。
通过分离技术，可以把样品中的微生物分离成单个菌落，从而获得单一的纯培养物。
2. 培养：将分离得到的纯培养物进行连续传代培养，使微生物得到充分繁殖。
培养条件要根据被测微生物的特性进行调整，包括温度、氧气浓度、pH值等。
培养时间的选择要根据被测
微生物的生长速度来确定，以确保微生物能够达到足够的数量。
3. 鉴定：对培养得到的微生物进行鉴定，确定其种类和数量。
鉴定方法包括形态学观察、生理生化特性测试、分子生物学方法等。
通过对微生物的形态、代谢和遗传特征的分析，可以准确地鉴定微生物的种类，并评估其在样品中的相对数量。
4. 计数：根据鉴定得到的微生物种类和数量，采用传统的培养计数法或现代的快速测定方法，如流式细胞仪、聚合酶链反应等，对微生物进行数量测定。
微生物检验的原理基于微生物的生物学特性，通过合适的实验方法和技术手段，可以对样品中的微生物进行准确的分析和鉴
定。
这些原理和方法的有效应用，能够帮助我们及时了解样品中微生物的情况，并评估其对环境和健康的影响。
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各类微生物生化实验方式原理通常利用生化实验的方式，检测细菌对各类物质的代谢作用及其代谢产物，称为细菌的生化反映，经常使用于细菌的辨别。
一、糖类分解产物（1）糖发酵实验（carbohydrate fermentation test）不同种类的细菌对糖的分解利用能力不同，一样以可否分解某种糖，是不是产酸产气等现象来辨别。
例如大肠杆菌能分解葡萄糖和乳糖，产酸且产气；而伤寒杆菌只分解葡萄糖产酸不产气，且不分解乳糖。
这是因为大肠杆菌分解葡萄糖等产生甲酸，经甲酸解氢酶的作用生成H2和CO2。
而伤寒杆菌无此酶，故分解葡萄糖只产酸不产气。
（2）VP实验（Voges-Proskauer test）产气杆菌将分解葡萄糖产生的两分子丙酮酸脱羧，生成一分子乙酰甲基甲醇。
乙酰甲基甲醇在碱性溶液中被空气中氧气氧化，生成二乙酰，二乙酰可与培育液中含胍基的化合物（如蛋白胨中的精氨酸）反映，生成红色的化合物，此为VP实验阳性。
大肠杆菌分解葡萄糖不生成乙酰甲基甲醇，故VP实验阴性。
（3）甲基红实验（methyl red test）大肠杆菌和产气杆菌均属G-短杆菌，且都能分解葡萄糖、乳糖产酸产气，二者不易区别。
但二者所产生的酸类和总酸量不一：大肠杆菌可产生甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸等，而产气杆菌只产生甲酸、乙醇及乙酰甲基甲醇。
故大肠杆菌培育液PH在以下，加入甲基红指示剂呈红色，为甲基红实验阳性；产气杆菌培育液PH在以上，加入甲基红后呈桔黄色，为甲基红实验阴性。
（4）枸橼酸盐利用实验(citrate utilization test）产气杆菌在以枸橼酸盐为唯一碳源的培育基上生长，分解枸橼酸盐产生CO2，并转变成碳酸盐，使培育基由中性变成碱性，含溴麝香草酚蓝（BTB）指示剂的培育基由淡绿色变成深兰色，此为枸橼酸盐利用实验阳性。
大肠杆菌不能利用枸橼酸盐，故在此培育基上不能生长，培育基仍为绿色。
二、蛋白质及氨基酸的分解产物（1）硫化氢实验（hydrogen sulfide test）有些细菌能分解培育基中的含硫氨基酸（如胱氨酸、甲硫氨酸等）产生H2S，如遇醋酸铅或硫酸亚铁，能生成黑色的硫化物，为硫化氢实验阳性。
本实验经常使用于区别肠道杆菌的种类。
沙门氏菌属一样为阳性;大肠杆菌、产气杆菌、志贺氏菌为阴性。
（2）明胶液化实验（gelatin liguefaction test）有些细菌具有明胶酶，能分解明胶使其失去凝固能力而液化。
变形杆菌、霍乱弧菌、绿脓杆菌、枯草杆菌等能液化明胶；大肠杆菌、沙门氏菌那么不能。
（3）吲哚实验（indole test）有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成无色吲哚，加入对-二甲基氨基苯甲醛，无色吲哚生成红色玫瑰吲哚，为吲哚实验阳性。
大肠杆菌、霍乱弧菌等吲哚实验阳性；产气杆菌、伤寒沙门氏菌为吲哚实验阴性。
吲哚对二甲基氨基苯甲醛玫瑰吲哚细菌的生化反映是辨别细菌的重要手腕：其中吲哚实验（I）、甲基红实验（M）、VP实验(V)和枸橼酸盐利用实验（C），简称为IMVIC实验，经常使用于大肠杆菌与产气杆菌的辨别。
典型的大肠杆菌的IMViC实验结果为“++--”，而产气杆菌是“--++”。
0票票数实验四、微生物的快速鉴定和自动化分析技术如何使微生物学技术方式快速、准确、简易和自动化，一直是微生物学工作者研究的热点，尤其是临床医学方面，对微生物的快速准确鉴定，更是"时刻确实是生命"。
近20连年来，随着微电子、运算机、分子生物学、物理、化学等先进技术向微生物学的渗透和多学科的交叉，这方面已取得了冲破性进展，许多快速、准确、灵敏、简易、自动化的方式技术，不仅在微生物鉴定中广为利用，而且在微生物学的其它方面也被采纳，推动了微生物学的迅速进展。
一、微量多项实验鉴定系统该系统的全然原理是依照微生物生理生化特点鉴定的结果，而进行的数码分类鉴定。
这种技术也称为简易诊检技术，或数码分类鉴定法。
它是针对微生物的生理生化特点，配制各类培育基、反映底物、试剂等，别离微量（约）加入各个分隔室中（或用小圆纸片吸收），冷冻干燥脱水或不干燥脱水，各分隔室在同一塑料条或板上组成检测卡。
实验时加入待检测的某一种菌液，培育2~48小时，观看鉴定卡上各项反映，按判定表判定实验结果，用此结果编码，查检索表(依照数码分类鉴定的原理编制成)，取得鉴定结果，或将编码输入运算机，用依照数码分类鉴定原理编制的软件鉴定，打印出结果。
微量多项实验鉴定系统已普遍用于动、植物检疫、临床查验、食物卫生、药品检查、环境监测、发酵操纵、生态研究等方面，尤其是临床查验中深受欢迎，迅猛进展。
国际上此技术的产品，或称系统，种类繁多，国内有河南开封医学生物研究所的肠杆菌科细菌鉴定卡E-15；上海市卫生防疫站的发酵性革兰氏阴性杆菌鉴定系统SWF-A；中国人民解放军一八一医院的厌氧菌快速生化鉴定系列ARB-ID；深圳华士达生物科技的肠杆菌科的细菌生化鉴定卡ENT等。
国外的产品已标准化、系统化和商品化，要紧有法国生物-梅里埃集团的API/ATB；瑞士罗氏公司的Micro-ID，Enterotube,Minitek；美国的Biolog全自动和手动细菌鉴定系统：日本的微孔滤膜块等，其中API/ATB包括众多的鉴定系统，共计有750种反映，可鉴定几乎所有常见的细菌。
微量多项鉴测技术优势突出，不仅能快速、灵敏、准确、重复性好地鉴检微生物，而且简易，节省人力、物力、时刻和空间，缺点是各系统不同较大，有的价钱贵，有的个别反映不准，难判定，但毫无疑问，它是微生物技术方式向快速、简易和自动化进展的重要方向之一。
API20E系统是API/ATB中最先和最重要的产品，也是国际上应用最多的系统。
该系统的鉴定卡是一块有20个分隔室的塑料条，分隔室由相连通的小管和小环组成，各小管中含不同的脱水培育基、试剂，或底物等，每一分隔室可进行一种生化反映，个别的分隔室可进行两种反映，要紧用来鉴定肠杆菌科细菌，如图1所示。
图1 API 20E鉴定卡示用意鉴定未知细菌的要紧进程：将菌液加入每一个分隔室；培育后，有的分隔室的小杯中需要添加试剂，观看鉴定卡上20个分隔室中的反映变色情形，依照反映判定表（表1），判定各项反映是阳性仍是阴性反映；按鉴定卡上反映项目从左到右的顺序，每三个反映项目编为一组，共编为七组，每组中每一个反映项目定为一个数值，依次是一、二、4，各组中实验结果判定的反映是阳性者记"＋"，那么写下其所定的数值，反映阴性者记"－"，那么写为0，每组中的数值相加，即是该组的编码数，如此便形成了7位数字的编码，表2为举例说明；用7位数字的编码查API20E系统的检索表，或输入运算机检索，那么能将查验的细菌鉴定出是什么菌种或生物型。
表1 API20E反映判定表鉴定卡上的反应项目反应结果代号项目名称阴性阳性ONPN β-半乳糖苷酶无色黄ADH 精氨酸水解黄绿红，橘红LDC 赖氨酸脱羧黄绿红，橘红ODC 鸟氨酸脱羧黄绿红，橘红CIT 枸椽酸盐利用黄绿绿蓝H2S表2 API20E举例说明实验五、抗微生物药物灵敏性实验一、实验目的抗微生物药物灵敏性实验（药敏实验）的要紧目的检出细菌的耐药性，预测抗微生物药物的临床医治成效，并为临床医生针对某一特定的临床感染选用药物提供依据。
对所有临床分离的可疑致病菌，如不能从该菌的种属特点靠得住地推知其对抗菌药物的灵敏性，就需要进行药敏实验。
纸片扩散法二、实验原理此法是临床和实验室标准化研究所（CLSI/NCCLS）所推荐的临床微生物理学室常规开展的药敏实验方式。
将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部位。
药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂中的药物浓度慢慢减少的梯度浓度。
其纸片周围必然区域琼脂内的药物浓度高于抑制待检菌所需浓度时，那么该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。
抑菌圈的大小能够反映待检对测定药物的灵敏程度，并与该药对待检菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。
三、实验器材和试剂1．菌种金黄色葡萄球菌ATCC25923、大肠埃希菌ATCC2592二、铜绿假单胞菌ATCC27853或临床分离的菌株。
2．培育基MH（Mueller-Hintion）琼脂。
3．试剂无菌生理盐水，麦氏标准比浊管（McFarlandstandard，相当于×108CFU/ml），抗菌药物纸片：选用直径吸水量20μl的专用药敏纸片，包括阿米卡星（AMK）、青霉素（PEN）、氨苄西林（AMP）、哌拉西林（PIP）、头孢唑啉（FZN）、头孢呋辛（FRX）、头孢他啶（CAZ）、头孢他啶/棒酸（CD03）、氨曲南（ATM）、亚胺培南（IMP）、环丙沙星（CIP）、万古霉素（VAN）、克林霉素（CLI）、复方新诺明（SXT）。
4．其他无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。
四、方式步骤1．菌液制备（1）对数生长法：从琼脂平板上选取至少3-5个形态特点一致的菌落，用接种环转移至含4~5ml的肉汤培育管（如胰酶消化大豆肉汤）中，35℃孵育2-6h。
用无菌盐水或肉汤调整菌液浊度相当于麦氏标准。
（2）直接菌落法：从孵育18-24h的非选择性培育基（如血琼脂）平板上，挑取单个菌落，直接用肉汤或无菌盐水制成麦氏标准浊度的悬液。
2．接种细菌悬液制备后15min内接种至MH琼脂平板。
用无菌棉拭醮取菌悬液，在管内壁液面上方旋转紧压，将多余菌液挤去，最后沿平板内缘涂抹一周。
3．贴药敏纸片涂布后的平板在室温下干燥3-5min，用纸片分派器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。
各纸片中心相距应大于24mm，纸片贴上后就不能再移动位置。
4．孵育将平板倒置放入35℃孵箱（苛养菌敏平板应放置于5%-10%CO2环境中），16-18h读取结果，葡萄球菌和肠球菌必需孵育24h以检测对苯唑西林和万古霉素的耐药性。
五、结果判定抑菌圈的直径（包括纸片的直径），以毫米数报告（取整数）。
依照CLSI判定标准测量抑菌圈直径大小能够判定细菌对该抗生素是灵敏、中介仍是耐药。
灵敏（S）：表示常规剂量的测定药物在体内所达到的浓度能抑制或杀灭待测菌。
中介（I）：不是灵敏性的气宇，而是一个“缓冲区”，用以避免因微小的技术因素失控致使的结果误差，因此其临床意义是不确信的，故不该作临床报告。
耐药（R）：表示常规剂量的测定药物在体内达到有效浓度时不能抑制待测菌生长。
六、药敏实验结果判定注意事项（1）药敏实验的结果容易受培育基、抗菌药物、孵育条件等多种因素阻碍，实验室开展药敏实验时应按期用标准菌株对上述因素进行质量操纵。
（2）变形杆菌属的菌株可扩散到某些抗菌药物的抑菌圈内，因此在明显的抑菌圈内有薄膜样爬行生长能够忽略。